專利名稱：一種谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶基因多態(tài)性檢測試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實用新型涉及ー種檢測試劑盒，尤其是涉及一種谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶基因多態(tài)性檢測試劑盒。
技術(shù)背景
研究發(fā)現(xiàn)95%以上的致癌物進(jìn)入體內(nèi)需經(jīng)代謝途徑激活后才能與DNA等生物大分子結(jié)合，引起早期生物學(xué)反應(yīng)，最終導(dǎo)致癌變。在這種激活反應(yīng)過程中涉及兩種主要酶系即細(xì)胞色素 P450 (Cytochrome CYP450)和谷胱甘妝轉(zhuǎn)硫酶(Glutathione s-transferaseGST)。CYP450是體內(nèi)重要的激活酶(又稱I相酶)，GST是體內(nèi)重要的滅活酶(又稱II相酶)。所以致癌物能否引起靶細(xì)胞的癌變很大程度取決于這兩類酶的活性及彼此的平衡。GSTs即谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶蛋白，是ー類多功能的ニ聚蛋白家族，主要催化還原性谷胱甘肽(GSH)與親電子物質(zhì)間的結(jié)合反應(yīng)，使其失去DNA結(jié)合活性，此即通常意義上的I相代謝酶的解毒功能，GSTs可分為GSTA、GSTM、GSTP和GSTT四類。GSTMl和GSTTl都能催化CYP類代謝活化的產(chǎn)物或由于氧化應(yīng)激所造成的脂質(zhì)或DNA過氧化物的解毒過程，提示二者之間可能存在協(xié)同作用，而且人群中都存在其編碼基因完全缺失的多態(tài)性現(xiàn)象。有研究指出有GSTMl和GSTTl缺失的個體更易患化學(xué)致癌物所致的癌癥。GSTs可催化GSH與多種化療藥物結(jié)合，促進(jìn)其降解，使腫瘤對化療藥物的敏感性減低，化療失敗。GSTMl基因的純合缺失導(dǎo)致了機GST-μ同エ酶的缺乏，從而降低化療藥物的失活，提高療效，増加患者存活幾率。因此，化學(xué)致癌物代謝酶，即藥物代謝酶基因多態(tài)性檢測尤其是GSTs基因多態(tài)性的檢查對于臨床腫瘤病人的個體化用藥及腫瘤發(fā)病機制研究至關(guān)重要。但目前臨床檢測GSTs基因多態(tài)性的檢測試劑原料需多方配備，實驗過程分步進(jìn)行，耗時較長，容易污染，所以探索一種檢測GSTs基因多態(tài)性快速可靠的方法已經(jīng)成為臨床實驗研究的熱點問題。

實用新型內(nèi)容為了解決上述技術(shù)問題，本實用新型提供一種谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶基因多態(tài)性檢測試劑盒，包括盒體I、盒蓋2、固定座3、裝引物的試劑瓶4、裝酶混合物的試劑瓶5，固定座3上設(shè)置有離心管6、加樣器吸頭7。進(jìn)ー步地，所述固定座3還設(shè)置有孔8?？?設(shè)置用來分別將離心管6、加樣器吸頭7固定，以防止遺撒?？?的形狀依據(jù)不同離心管、加樣器吸頭的形狀和大小而設(shè)置。所述引物包括擴增引物和白蛋白內(nèi)參。其中，擴增引物為特異性擴增GST區(qū)域的引物，包括GSTMl、GSTTl ;所述GSTMl的上游引物序列為gaactccctgaaaagctaaagc所述GSTMl的下游引物序列為gttgggctcaaatatacggtgg ;所述GSTTl的上游引物序列為ttccttactggtcctcacatctc ;所述GSTTl 的下游引物序列為 tcaccggatcatggccagca ;所述白蛋白內(nèi)參的上游引物序列為gccctctgctaacaagtcctac ;所述白蛋白內(nèi)參的下游引物序列為gccctaaaaagaaaatcgccaatc,引物濃度為 100pmol/L。[0009]所述酶混合物包括濃度為O. 4mmol/L 的 dNTPs, 3mmol/L 的 Mg2+, 2xBuffer,I. 25U/25 μ I 的 rTaq。本實用新型與現(xiàn)有產(chǎn)品相比，具有如下積極有益的效果本試劑盒結(jié)構(gòu)簡單、設(shè)計合理、使用方便、制造容易、檢測過程不易受污染；本試劑盒在檢測谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶基因多態(tài)性時具有敏感性高、特異性強、耗時短等優(yōu)點。

圖I為本實用新型的整體結(jié)構(gòu)示意圖。
具體實施方式
以下結(jié)合附圖和實施例對本實用新型進(jìn)行進(jìn)ー步說明。 表I為本實用新型PCR反應(yīng)體系。如圖I所示，本實用新型的一個實施例為谷胱甘肽琉轉(zhuǎn)移酶基因多態(tài)性檢測試劑盒，包括盒體I、盒蓋2、固定座3、裝引物的試劑瓶4、裝酶混合物的試劑瓶5，固定座3上設(shè)置有離心管6、加樣器吸頭7、孔8。離心管6和加樣器吸頭7放置在孔8內(nèi)?？?的形狀依據(jù)不同離心管、加樣器吸頭的形狀和大小而設(shè)置。所述引物包括擴增引物和白蛋白內(nèi)參。其中，擴增引物為特異性擴增GST區(qū)域的引物，包括GSTMl、GSTTl ;所述GSTMl的上游引物序列為gaactccctgaaaagctaaagc所述GSTMl的下游引物序列為gttgggctcaaatatacggtgg ;所述GSTTl的上游引物序列為ttccttactggtcctcacatctc ;所述GSTTl 的下游引物序列為 tcaccggatcatggccagca ;所述白蛋白內(nèi)參的上游引物序列為gccctctgctaacaagtcctac ;所述白蛋白內(nèi)參的下游引物序列為gccctaaaaagaaaatcgccaatc,引物濃度為 100pmol/L。所述酶混合物包括濃度為O. 4mmol/L 的 dNTPs, 3mmol/L 的 Mg2+, 2xBuffer,
I.25U/25 μ I 的 rTaq ο操作方法I)取模板 DNA取病人全血1ml，常規(guī)提取DNA，取IulDNA作為模板。2)反應(yīng)體系將各反應(yīng)物質(zhì)按照如下表I中反應(yīng)體系進(jìn)行配比表I[0024]
權(quán)利要求1.一種谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶基因多態(tài)性檢測試劑盒，其特征在于，包括盒體(I)、盒蓋(2)、固定座(3)、裝引物的試劑瓶(4)、裝酶混合物的試劑瓶(5)，固定座(3)上設(shè)置有離心管(6)、加樣器吸頭(7) ο
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶基因多態(tài)性檢測試劑盒，其特征在于，所述固定座⑶還設(shè)置有孔(8)。
專利摘要本實用新型公開一種谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶基因多態(tài)性檢測試劑盒，包括盒體1、盒蓋2、固定座3、裝引物的試劑瓶4、裝酶混合物的試劑瓶5，固定座3上設(shè)置有離心管6、加樣器吸頭7、孔8。本試劑盒結(jié)構(gòu)簡單、設(shè)計合理、使用方便、制造容易、檢測過程不易受污染；本試劑盒在檢測谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶基因多態(tài)性時具有敏感性高、特異性強、耗時短等優(yōu)點。
文檔編號C12Q1/68GK202440522SQ20122007569
公開日2012年9月19日 申請日期2012年3月2日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月2日
發(fā)明者馮繼鋒, 吳建中, 唐金海, 曹海霞, 馬蓉 申請人:馮繼鋒, 吳建中, 唐金海, 曹海霞, 馬蓉