專利名稱：一種淋巴細胞分離液的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，特別是指一種淋巴細胞分離液的制備方法
背景技術(shù)：
國內(nèi)的淋巴細胞分離液已有二十多年的歷史，主要以葡聚糖(右旋糖酐)和泛影葡胺(Ficoll-Hypaque)為主要原料進行配制，其分離原理是利用各類細胞本身的密度區(qū)另IJ，在具有一定密度的分離液中經(jīng)過離心，使各類細胞分離開來。但由于葡聚糖是由葡萄糖經(jīng)過菌種發(fā)酵而得，因此其內(nèi)毒素水平較高，會影響淋巴細胞的表面蛋白活性，且分離液中含不通透的離子diatrizoate (泛影葡胺),會影響離子通透膜的Gibbs-Donnan平衡(吉布斯一道南膜平衡)。所以，傳統(tǒng)的淋巴細胞分離液對細胞有毒性，分得細胞狀態(tài)不好，影響細胞活性，不利于所提取細胞的后續(xù)培養(yǎng)及臨床治療的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提出一種淋巴細胞分離液的制備方法，解決了現(xiàn)有技術(shù)中淋巴細胞分離液對細胞有毒性，分得細胞狀態(tài)不好，影響細胞活性，不利于所提取細胞的后續(xù)培養(yǎng)及臨床治療的應(yīng)用的問題。本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實現(xiàn)的一種淋巴細胞分離液的制備方法，包括如下步驟使用羥乙基淀粉配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%的羥乙基淀粉550料液；使用泛影葡胺配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60 %的泛影葡胺料液；使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%的羥乙基淀粉550料液和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%的泛影葡胺料液制取動物淋巴細胞分離液粗制品；通過過濾動物淋巴細胞分離液粗制品制取動物淋巴細胞分離液成品。進一步地，使用羥乙基淀粉配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%的羥乙基淀粉550料液的具體步驟為稱取羥乙基淀粉加熱溶解于蒸餾水中，以雙蒸水定容，制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%的羥乙基淀粉550料液。優(yōu)選地，羥乙基淀粉的平均分子量為550萬。進一步地，使用泛影葡胺配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%的泛影葡胺料液的具體步驟為稱取泛影葡胺溶于雙蒸水中，用氫氧化鈉溶液調(diào)整PH至pH = 8. 0，制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%的泛影匍胺料液。優(yōu)選地，氫氧化鈉溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%。進一步地，使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%的羥乙基淀粉550料液和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%的泛影葡胺料液制取動物淋巴細胞分離液粗制品的具體步驟為取質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40 %的羥乙基淀粉550料液加入蒸餾水制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為9 %的羥乙基淀粉550溶液，備用；取質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60 %的泛影葡胺料液，加入蒸餾水制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為34%的泛影葡胺溶液，備用；將質(zhì)量分?jǐn)?shù)為34 %的泛影葡胺溶液和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為9 %的羥乙基淀粉550溶液混和均勻并將其降溫至20°C ；用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60 %的泛影葡胺料液調(diào)整質(zhì)量分?jǐn)?shù)為34%的泛影葡胺溶液和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為9%的羥乙基淀粉550溶液的混合液，使其在20°C下比重為I. 065 I. 090g/ml,即得動物淋巴細胞分離液粗制品。進一步地，通過過濾動物淋巴細胞分離液粗制品制取動物淋巴細胞分離液成品的具體步驟為用漏斗、親水性微孔濾器裝置以及隔膜真空泵過濾動物淋巴細胞分離液粗制品，將濾液灌裝于棕色玻璃瓶中，高壓滅菌后即得動物淋巴細胞分離液成品。 進一步地，用漏斗、親水性微孔濾器裝置以及隔膜真空泵過濾動物淋巴細胞分離液粗制品，將濾液灌裝于棕色玻璃瓶中，高壓滅菌后即得動物淋巴細胞分離液成品的具體步驟為用G3漏斗、含IOOnm親水性濾芯的親水性微孔濾器裝置以及隔膜真空泵以(O. 06MPa的負壓過濾動物淋巴細胞分離液粗制品，將濾液于百級工作臺內(nèi)灌裝于棕色玻璃瓶中，120°C高壓滅菌20分鐘，即得動物淋巴細胞分離液成品。本發(fā)明的有益效果為I、本發(fā)明的淋巴細胞分離液所用的主要原料之一為羥乙基淀粉，替代了右旋糖酐，生物安全性高，無細胞毒性，其內(nèi)毒素含量低，使得分離的淋巴細胞狀態(tài)好，活力高，除應(yīng)用于科學(xué)研究外還可廣泛應(yīng)用于臨床診斷，具有良好的市場前景。2、本發(fā)明的淋巴細胞分離液在制備過程中不產(chǎn)生任何廢料和污染物，也不產(chǎn)生噪音等，對環(huán)境沒有影響。


為了更清楚地說明本發(fā)明實施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對實施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實施例，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動性的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。圖I為本發(fā)明一種淋巴細胞分離液的制備方法的步驟流程圖。
具體實施例方式下面將結(jié)合本發(fā)明實施例中的附圖，對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發(fā)明中的實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。如圖I所示，一種淋巴細胞分離液的制備方法，包括如下步驟I、使用羥乙基淀粉使用羥乙基淀粉配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%的羥乙基淀粉550料液，該步驟具體為稱取40g羥乙基淀粉加熱溶解于蒸餾水中，以雙蒸水定容至100ml，制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40 %的羥乙基淀粉550料液。其中，優(yōu)先選擇平均分子量為550萬的羥乙基淀粉。
2、使用泛影葡胺使用泛影葡胺配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%的泛影葡胺料液，該步驟具體為稱取60g泛影葡胺溶于雙蒸水中，用氫氧化鈉溶液調(diào)整pH，用pH計測定pH，將pH調(diào)整至pH = 8. 0，制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%的泛影葡胺料液。其中，氫氧化鈉溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)優(yōu)先選擇為10%。3、使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%的羥乙基淀粉550料液和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%的泛影葡胺料液制取動物淋巴細胞分離液粗制品，該步驟具體為3. I、取76. 8ml質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%的羥乙基淀粉550料液加入261. 96ml蒸餾水制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為9 %的羥乙基淀粉550溶液，備用；3. 2、取80ml質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60 %的泛影葡胺料液，加入61. 16ml蒸餾水制成質(zhì)量分?jǐn)?shù) 為34%的泛影葡胺溶液，備用；3. 3、將質(zhì)量分?jǐn)?shù)為34%的泛影葡胺溶液和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為9%的羥乙基淀粉550溶液混和均勻并將其降溫至20°C ；3. 4、用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%的泛影葡胺料液調(diào)整質(zhì)量分?jǐn)?shù)為34%的泛影葡胺溶液和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為9%的羥乙基淀粉550溶液的混合液，加入60%泛影葡胺料液過程中使用比重計在20°C下監(jiān)測比重，使該混合液在20°C下比重為I. 065 I. 090g/ml,即得動物淋巴細胞分離液粗制品。4、通過過濾動物淋巴細胞分離液粗制品制取動物淋巴細胞分離液成品，該步驟具體為用漏斗、親水性微孔濾器裝置以及隔膜真空泵過濾動物淋巴細胞分離液粗制品，將濾液灌裝于棕色玻璃瓶中，高壓滅菌后即得動物淋巴細胞分離液成品。具體地，用G3漏斗、含IOOnm親水性濾芯的親水性微孔濾器裝置以及隔膜真空泵以彡O. 06MPa的負壓過濾動物淋巴細胞分離液粗制品，將濾液于百級工作臺內(nèi)灌裝于250ml規(guī)格的棕色玻璃瓶中，每瓶內(nèi)濾液為200ml，120°C高壓滅菌20分鐘，即得動物淋巴細胞分離液成品。以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種淋巴細胞分離液的制備方法，其特征在于，包括如下步驟 使用羥乙基淀粉配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%的羥乙基淀粉550料液； 使用泛影葡胺配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%的泛影葡胺料液； 使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%的羥乙基淀粉550料液和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%的泛影葡胺料液制取動物淋巴細胞分離液粗制品； 通過過濾動物淋巴細胞分離液粗制品制取動物淋巴細胞分離液成品。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種淋巴細胞分離液的制備方法，其特征在于，使用羥乙基淀粉配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%的羥乙基淀粉550料液的具體步驟為稱取羥乙基淀粉加熱溶解于蒸餾水中，以雙蒸水定容，制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%的羥乙基淀粉550料液。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種淋巴細胞分離液的制備方法，其特征在于，羥乙基淀粉的平均分子量為550萬。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種淋巴細胞分離液的制備方法，其特征在于，使用泛影葡胺配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%的泛影葡胺料液的具體步驟為稱取泛影葡胺溶于雙蒸水中，用氫氧化鈉溶液調(diào)整pH至pH = 8. 0，制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%的泛影葡胺料液。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種淋巴細胞分離液的制備方法，其特征在于，氫氧化鈉溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種淋巴細胞分離液的制備方法，其特征在于，使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%的羥乙基淀粉550料液和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%的泛影葡胺料液制取動物淋巴細胞分離液粗制品的具體步驟為 取質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40 %的羥乙基淀粉550料液加入蒸餾水制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為9 %的羥乙基淀粉550溶液，備用； 取質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%的泛影葡胺料液，加入蒸餾水制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為34%的泛影葡胺溶液，備用； 將質(zhì)量分?jǐn)?shù)為34%的泛影葡胺溶液和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為9%的羥乙基淀粉550溶液混和均勻并將其降溫至20°C ； 用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%的泛影葡胺料液調(diào)整質(zhì)量分?jǐn)?shù)為34%的泛影葡胺溶液和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為9%的羥乙基淀粉550溶液的混合液，使其在20°C下比重為I. 065 I. 090g/ml,即得動物淋巴細胞分離液粗制品。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種淋巴細胞分離液的制備方法，其特征在于，通過過濾動物淋巴細胞分離液粗制品制取動物淋巴細胞分離液成品的具體步驟為用漏斗、親水性微孔濾器裝置以及隔膜真空泵過濾動物淋巴細胞分離液粗制品，將濾液灌裝于棕色玻璃瓶中，高壓滅菌后即得動物淋巴細胞分離液成品。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種淋巴細胞分離液的制備方法，其特征在于，用漏斗、親水性微孔濾器裝置以及隔膜真空泵過濾動物淋巴細胞分離液粗制品，將濾液灌裝于棕色玻璃瓶中，高壓滅菌后即得動物淋巴細胞分離液成品的具體步驟為用G3漏斗、含IOOnm親水性濾芯的親水性微孔濾器裝置以及隔膜真空泵以彡0. 06MPa的負壓過濾動物淋巴細胞分離液粗制品，將濾液于百級工作臺內(nèi)灌裝于棕色玻璃瓶中，120°C高壓滅菌20分鐘，即得動物淋巴細胞分離液成品。
全文摘要
本發(fā)明提出了一種淋巴細胞分離液的制備方法，包括如下步驟使用羥乙基淀粉配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40％的羥乙基淀粉550料液；使用泛影葡胺配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60％的泛影葡胺料液；使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40％的羥乙基淀粉550料液和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60％的泛影葡胺料液制取動物淋巴細胞分離液粗制品；通過過濾動物淋巴細胞分離液粗制品制取動物淋巴細胞分離液成品。本發(fā)明的淋巴細胞分離液的制備方法所用主要原料之一為羥乙基淀粉，替代右旋糖酐，生物安全性高，無細胞毒性，其內(nèi)毒素含量低，使得分離的淋巴細胞狀態(tài)好，活力高，除應(yīng)用于科學(xué)研究外還可應(yīng)用于臨床診斷，具有良好市場前景；制備過程中不產(chǎn)生任何廢料和污染物，也不產(chǎn)生噪音等，對環(huán)境沒有影響。
文檔編號C12N5/078GK102660504SQ20121011408
公開日2012年9月12日 申請日期2012年4月18日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月18日
發(fā)明者高旭 申請人:高旭