專利名稱：噬氨副球菌hpd-2及其在土壤修復(fù)中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及噬氨副球菌，具體涉及一種噬氨副球菌HPD-2及其在多環(huán)芳烴污染土;裏 ^修復(fù)中的應(yīng)用。
二背景技術(shù)：
多環(huán)芳烴(Polycyclic aromatic hydrocarbons, PAHs)是環(huán)境中普遍存在的一類有機(jī)污 染物，由于其在環(huán)境中的半衰期較長(zhǎng)和致癌、致畸、致突變的性質(zhì)而受到人們的重視。美 國(guó)環(huán)保局在20世紀(jì)80年代初把16種未帶分支的PAHs確定為環(huán)境中的優(yōu)先污染物，我 國(guó)也將其列入環(huán)境污染的黑名單中。苯并[a]芘(Benzo[a]pyrene, B[a]P)是由五個(gè)苯環(huán)組 成的一種多環(huán)芳烴化合物，致癌性極強(qiáng)，是閨內(nèi)外環(huán)境監(jiān)測(cè)的重要指標(biāo)之一。芘(Pyrene, PYR)和熒蒽(Fluoranthene， FA)都是四環(huán)的多環(huán)芳烴化合物，也具有一定的致癌作用。 三環(huán)以上的PAHs都屬于高分子量PAHs。通常認(rèn)為，PAHs的環(huán)數(shù)越高，越難被孩i生物降 解利用。
近年來，國(guó)內(nèi)外對(duì)高分子量PAHs的微生物降解研究表明，能夠同時(shí)降解多種高分子 量PAHs (如四環(huán)和五環(huán))的微生物資源還很少。目前有關(guān)副球菌屬對(duì)PAHs的降解研究 較少，主要針對(duì)四環(huán)以下的PAHs，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)能降解萘、蒽、菲、芴、熒蒽、屈、芘等 PAHs的副球菌屬細(xì)菌。然而，至今還未報(bào)道能夠同時(shí)降解B[a]P、芘和熒蒽的副球菌。事 實(shí)上，環(huán)境中PAHs通常以多種組分同時(shí)存在，呈現(xiàn)其復(fù)合污染現(xiàn)象。目前還沒有發(fā)現(xiàn)能 夠同時(shí)降解多種高分子量PAHs的微生物資源。
三
發(fā)明內(nèi)容
技術(shù)問題本發(fā)明的目的在于針對(duì)生產(chǎn)實(shí)踐中的實(shí)際問題和需求，提供了一種能夠 同時(shí)降解多種高分子量PAHs (如四環(huán)和五環(huán))的微生物資源，該微生物為高分子量PAHs
降解菌嗟氨副球菌(戶aracocow fl附/"ovorara) HPD-2 CGMCC No. 2568,該菌可以使溶 液中苯并[a]芘的含量降低89.7。/0,芘和熒蒽也有大幅降低，具有較廣的降解譜；使污染土 壤中9種PAHs總?cè)コ蕿?2.9%，三環(huán)PAHs的降解率為36.1%,四環(huán)PAHs的降解率 為20.9%,五環(huán)PAHs的降解率為26.0%。該菌抹在PAHs污染土壤的生物修復(fù)中具有較 好的應(yīng)用前景。
技術(shù)方案 一種喧氨副球菌(戶flrflcocc船 fir附/wovonms) HPD-2， 該菌抹已在國(guó)家知 識(shí)產(chǎn)權(quán)局指定的保藏單位保藏，保藏日期為2008年7月3日，保藏單位名稱中國(guó)微生 物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)CGMCC No.2568。噬氨副球菌 (尸ar"coccw aw/"ovorara) HPD-2在降解高分子量多環(huán)芳烴污染土壤中的應(yīng)用。噬氨副 球菌(P"racoccw awzwovorara) HPD-2在降解苯并[a]芘、芘或熒蒽污染土;裏中的應(yīng)用。 噬氨副球菌(戶amcoo^s am/wovora似)HPD-2的培養(yǎng)基，組成為K2HP04 6.0 g， KH2P04 5.5 g, Na2S04 2.0 g， KC12.0 g， NH4N03 2.0 g, MgS04.7H20 0.2 g，微量元素溶液1.0 mL， 高分子量多環(huán)芳烴3mg或50mg，該培養(yǎng)基pH 7.0-7.2。上迷高分子量多環(huán)芳烴為苯并[a] 芘、芘或熒蒽。
本發(fā)明提供一種高分子量多環(huán)芳烴的降解菌，其菌抹是一抹革蘭氏陰性菌HPD-2 (2008年07月03日保藏于中國(guó)微生物菌種保存管理委員會(huì)普通微生物中心，菌種保藏 號(hào)為CGMCCNo.2568),經(jīng)鑒定為嗜氨副球菌(尸aracoccMScwi!'"ovoran5)。該菌林在平板 上生長(zhǎng)48 h后呈乳白色凸起菌落，菌落直徑約為l 4mm，表面光滑，邊緣整齊。經(jīng)染 色鏡檢，該菌為革蘭氏陰性，球狀，菌體直徑為0.6~1.0nm (見圖l、圖2)。
該菌具有較高的降解高分子量多環(huán)芳烴的能力。將降解高分子量多環(huán)芳烴的 尸aracocctw fl附!7wvom附HPD-2 CGMCC No.2568菌^K接種于牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基搖瓶中， 振蕩培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期；將上述培養(yǎng)好的菌種按10。/o的接種量接種入500mL三角瓶，培養(yǎng)至 對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。在B[a]P濃度為3.0 mg/L的培養(yǎng)液中生長(zhǎng)5 d后，B[a]P的降解率為89.7%; 濃度為50 mg/L時(shí)，15 d后B[a]P的降解率為46.2% 。該菌抹對(duì)四環(huán)PAHs也有較好降解 能力，7 d后芘和熒蒽的降解率分別為47,2%和84.5% (見

圖1 ~圖6 )。
將尸aracoccm a附/"ovo/ww HPD-2 CGMCC No.2568菌液按20 %的接種量接入多環(huán)芳 烴污染土壤中，28 。C避光培養(yǎng)2周后結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照相比，污染土壤中9種PAHs總 去除率為22.9%,三環(huán)PAHs的降解率為36.1%,四環(huán)PAHs的降解率為20.9%,五環(huán)PAHs 的降解率為26.0% (見圖7 ~圖8 )。該菌林在PAHs污染土壤的生物修復(fù)中具有較好的應(yīng) 用前景。
本發(fā)明提供的CGMCCNo.2568菌能在苯并[a]芘、芘和熒蒽為唯一碳源和能源的無機(jī) 鹽基礎(chǔ)培養(yǎng)基中生長(zhǎng)并降解利用高分子量PAHs，其培養(yǎng)基組成為K2HP04 6.0 g, KH2P04 5.5 g, Na2S04 2.0 g, KC12.0 g， NH4N03 2力g， MgS04-7H20 0.2 g，樣i:量元素溶液1.0 mL， pH為7.0-7.2。 12rC滅菌30min。
有益效果該降解菌具有較廣的底物譜，對(duì)環(huán)境中的PAHs有很好的降解能力。
圖1為菌株HPD-2在固體培養(yǎng)基上菌落形態(tài)(A)
圖2為單菌林在透射電鏡(15000倍)下的形態(tài)(B)
圖3基于16S rRNA序列同源性的菌林HPD-2和相關(guān)細(xì)菌的系統(tǒng)發(fā)育樹
圖4為菌林HPD-2在B[a]P培養(yǎng)液中的生長(zhǎng)曲線(A)
圖5為培養(yǎng)液中B[a]P濃度隨時(shí)間的變化(B )
圖6培養(yǎng)7天后菌林HPD-2對(duì)PYR和FA的降解情況
圖7土壤中各多環(huán)芳烴組分濃度隨時(shí)間的變化
圖8生物修復(fù)后土壤中三環(huán)、四環(huán)、五環(huán)PAHs及總PAHs的降解率(％)
五具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1:虔氨副球菌(i arac< cci fl附/iKnwwis HPD-2 CGMCC No. 2568)的分離、
鑒定及其降解特性 1.1供試土壤
采自長(zhǎng)江三角洲某地多環(huán)芳烴重度污染土:l裏。其基本理化性質(zhì)為pH6.4,有沖幾質(zhì) 19.2g/kg，堿解氮1.0g/kg,全磷0.5g/kg,有效鉀14.2 g/kg,陽離子交換量21.5cmol/kg。 16種EPA定為優(yōu)先污染物的PAHs的總量達(dá)10.3 mg/kg。新鮮土i裏樣品過2mm篩，于 暗處4'C保存。
1.2供試多環(huán)芳烴
B[a]P、 PYR和FA都購(gòu)自Sigma公司(美國(guó))，均為分析純。 1.3培養(yǎng)類型
①牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基；②無機(jī)鹽培養(yǎng)基(MS):每升含K2HPO4 6.0g， KH2P04 5.5 g, Na2S04 2.0 g， KC12.0 g, NH4NCb 2.0 g， MgS04'7H20 0.2 g,樣i量元素溶液1.0 mL (其
組成為1000 mL蒸餾水中溶解lg FeSO7H20， lg MnSO.H20, 0.25gNa2MoO4.2H2O， 0.1gH3BO4， 0.25gCuCl2.2H2O， 0.25gZnCl2， 0.1gNH4VO3， 0.25g Co(N03)2.6H20, O.lg NiS04.6H20)，蒸餾水1000 mL, pH7.0-7.2;③含PAHs的無機(jī)鹽培養(yǎng)基以DMF配制 1000 mg/L的不同PAHs (B[a]P， PYR， FA)溶液，按B[a]P濃度(3.0 mg/L或5.0 mg/L) 及PYR， FA按(50.0mg/L)濃度加入滅菌的上述配方的無機(jī)鹽培養(yǎng)基。 1.4 PAHs降解菌的分離與純化
稱取10 g上述新鮮供試土壤(即采自長(zhǎng)江三角洲某地多環(huán)芳烴重度污染土壤)，加入 裝有l(wèi)OOmL無機(jī)鹽液體培養(yǎng)基(B[a]P濃度為5.0 mg/L )的三角瓶中，28。C下200 r/min 振蕩培養(yǎng)1周。按10%接種量轉(zhuǎn)接到新鮮的B[a]P無機(jī)鹽培養(yǎng)基中，繼續(xù)培養(yǎng)1周，反 復(fù)5次。最后吸取O.l mL培養(yǎng)液稀釋不同梯度涂布于牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基平板上，*沐 單菌落，將平板劃線純化后的單菌落再接種到B[a]P無機(jī)鹽液體培養(yǎng)基中，選取生長(zhǎng)速度 最快的菌林作為研究菌抹。
1.5菌種形態(tài)觀察及鑒定
將已充分活化的菌抹接種到牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中，28。C培養(yǎng)24h,革蘭氏染色 后在光學(xué)顯微鏡下觀察該菌抹在平板上生長(zhǎng)48h后呈乳白色凸起菌落，菌落直徑約為1 ~ 4mm,表面光滑，邊緣整齊(見圖l)。經(jīng)染色鏡檢，該菌為革蘭氏陰性，球狀，菌體直 徑為0.6-1.0 jum。將活化菌種在牛肉膏蛋白胨平皿上劃線接種，28。C培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng) 2d,觀察菌落形態(tài)，并測(cè)量菌落大小。細(xì)菌樣品經(jīng)處理后用日立H-7650透射電子顯微鏡 (TEM)觀察菌體結(jié)構(gòu)。
1.6 16SrDNA的PCR擴(kuò)增、序列分析和系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建
利用Biospin細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒(杭州博日科技有限公司)提取細(xì)菌DNA。 用于16S rDNA PCR反應(yīng)的引物為一對(duì)通用引物。正向引物為BSF8/20: 5-AGAGT1TGATCCTGGCTCAG-3 ; 反向引物為 BSR1541 / 20 : 5'-AAGGAGGTGATCCAGCCGCA-3。 PCR反應(yīng)條件94。C 3 min; 94。C 1 min, 56°C 1 min， 72。C2min,循環(huán)29次；72。C10min。瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。PCR產(chǎn)物的測(cè)序由上海博 亞生物技術(shù)有P艮公司完成。降解菌16S rDNA序列通過Blast程序與GenBank中核酸數(shù)據(jù) 進(jìn)行比對(duì)分析。然后利用MEGA4.0軟件構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，采用Neighbor-Joining法進(jìn)行 系統(tǒng)發(fā)育分析。
1.7菌懸液的制備
在無菌條件下將菌林接種于5.0 mg/L B[a]P無機(jī)鹽液體培養(yǎng)基中，28。C下200 r/min
振蕩培養(yǎng)l周，離心收集菌體，并用磷酸鹽緩沖液反復(fù)洗滌3次，再用磷酸鹽緩沖液將菌 懸液調(diào)至所需濃度備用。
1.8菌林對(duì)苯并[a]芘的降解
將該菌接種量為10%的菌懸液加入50 mL上述液體無機(jī)鹽培養(yǎng)基中，以加滅活菌懸 液的處理作為對(duì)照(CK)，加入B[a]P,使B[a]P的最終濃度約為3.0mg/L,每個(gè)處理設(shè)3 個(gè)重復(fù)。28。C下200r/min避光振蕩培養(yǎng)5天，在不同時(shí)段(O、 6、 12、 24、 48、 72、 96、 120h)取樣，4。C冷凍保存。測(cè)定溶液中B[a]P的濃度和OD6oo的變化。
1.9菌抹對(duì)芘和熒蒽的降解
在50 mL液體無機(jī)鹽培養(yǎng)基中加入該菌接種量為10%的菌懸液，以加滅活菌懸液的 處理作為對(duì)照，PYR和FA的最終濃度為50.0 mg/L,每個(gè)處理設(shè)3個(gè)重復(fù)。28°C下200 r/min 避光振蕩培養(yǎng)7 d后取樣，測(cè)定溶液中PYR和FA的濃度。
1.10溶液中多環(huán)芳烴的提取與分析
將三角瓶中的菌液全部倒入分液漏斗，加入50 mL乙酸乙酯提取3次，合并提取液 后用無水Na2S04去除水分。在水溫為36。C的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中旋轉(zhuǎn)濃縮至干。加2.0 mL乙 腈溶解，用高效液相色譜(HPLC )測(cè)定培養(yǎng)液中多環(huán)芳烴含量。流動(dòng)相為乙腈/水(60: 40), FA、 PYR和B[a]P的保留時(shí)間分別為32.5、 35.1和56.5 min。液相色謙為日本島津 Class-vp高效液相色譜分析系統(tǒng)，配熒光檢測(cè)器RF-10AXL,柱溫箱OTO-10ASVP， 二元 梯度泵LC-10AT,色諳分離柱為美國(guó)Varian公司的ChrottiSpher 5 PAH。
2.1多環(huán)芳鋒降解菌林的菌落形態(tài)、細(xì)胞形態(tài)及生理生化特征及序列分析
該喧氨副球菌(尸aracocc附twH力ovorara) HPD-2 CGMCC No. 2568具有以下特征(1) 菌落形態(tài)特征在牛肉膏蛋白胨平板上培養(yǎng)48h的菌落大小為直徑1~4 mm,菌落呈圓 形，表面光滑，邊緣整齊，凸起，乳白色(見圖1)。 (2)菌體形態(tài)特征該菌為革蘭氏 陰性，球狀，不運(yùn)動(dòng)，菌體直徑為0.6~1.0nm (見圖2)。 (3)生理生化特征好氧生長(zhǎng)， 氧化酶和接觸酶均為陽性，不產(chǎn)色素，能利用曱胺、三曱胺及丙三醇，不能利用曱酸鹽和 曱醇；能利用果糖和廿露醇，不能利用木糖和蔗糖；能利用硝酸銨和硫酸銨，不能利用尿 素。該菌的16S rDNA PCR產(chǎn)物約1.5 kb左右，16S rRNA序列同源性比對(duì)(圖3 )表明， 該菌林16S rRNA序列與尸aracoca^a/m'"ovoram細(xì)菌的16S rRNA序列相似性高達(dá)99。/n 。 結(jié)合上述的形態(tài)鑒定與16SrDNA分析結(jié)果將此菌林鑒定為副球菌屬，其編號(hào)為HPD-2。
2.2 HPD-2在苯并[a]芘培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)曲線
HPD-2在含有B[a]P的無機(jī)鹽液體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)曲線見圖4。該菌林從接種到第6 h
生長(zhǎng)緩慢，處于延滯期；從6h到12h，菌林開始加速生長(zhǎng)，細(xì)胞數(shù)目開始有所增加；從 24h到48 h,細(xì)胞數(shù)目急劇增加，OZ)6w值從0.1快速增加到0.4,處于指數(shù)生長(zhǎng)期；第 48h到96h, 0￡)600值變化不大，細(xì)胞處于穩(wěn)定期；到120 h，細(xì)胞數(shù)目有所減少，進(jìn)入 衰亡期。
2.3 HPD-2對(duì)苯并[a]芘的降解特性分析
無機(jī)鹽液體培養(yǎng)基中B[a]P的濃度隨時(shí)間的變化情況如圖5所示。由圖可知，B[a]P 的濃度從培養(yǎng)初期即開始下降，第24 h至48 h降低得最快，48h后下降的速度減緩，與 該菌的生長(zhǎng)曲線呈現(xiàn)一定的對(duì)應(yīng)關(guān)系。與培養(yǎng)初期相比，第120 h時(shí)加HPD-2的處理中 B[a]P的降解率達(dá)89.7。/0。
2.4 HPD-2對(duì)芘和熒蒽的降解特性
圖6所示的是HPD-2培養(yǎng)7天后對(duì)PYR和FA的降解情況。從圖中可以看出，PYR 和FA的濃度均明顯低于對(duì)照，而且FA比PYR降j氐得更多。表明該菌對(duì)PYR和FA都有 一定的降解能力，且對(duì)FA的降解能力更強(qiáng)，它們降解率分別為47.2%和84.5%。本研究 中利用B[a]P生長(zhǎng)的HPD-2仍然對(duì)PYR和FA表現(xiàn)出了較好的降解能力。
實(shí)施例2:謹(jǐn)氨副球菌(戶amoicc附a附/"owra/is HPD-2 CGMCC No. 2568 )的土壤
修復(fù)效應(yīng)
1.1供試土壤
采自長(zhǎng)江三角洲某地多環(huán)芳烴污染土壤。土壤的基本理化性質(zhì)為pH 6.4, 有機(jī)質(zhì) 19.2g/kg,堿解氮1.0g/kg，全磷0.5g/kg，有效鉀14.2g/kg，陽離子交換量21.5cmol/kg。 9種EPA定為優(yōu)先污染物的PAHs的總量達(dá)10.78 mg/kg。其中，四環(huán)、五環(huán)PAHs的含 量分別占總量的71.8%和23.0%，說明該土壤中的PAHs主要由高分子量PAHs組成。新 鮮土壤樣品過2mm篩后，于暗處4。C保存。
1.2培養(yǎng)類型
①牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基；②無機(jī)鹽培養(yǎng)基(MS):每升含K2HPO4 6.0g， KH2P04 5.5 g， Na2SO42.0g， KC12.0g, NH4N03 2.0 g, MgS04.7H20 0.2 g,微量元素溶液1.0mL, pH7.0-7.2;③含PAHs的無機(jī)鹽培養(yǎng)基以DMF配制1000 mg/L的不同PAHs (B[a]P, PYR, FA)溶液，按適當(dāng)?shù)臐舛燃尤肷鲜雠浞降臏缇鸁o機(jī)鹽培養(yǎng)基。
1.3供試菌抹
喧氨副3求菌尸aracocc^ flrm/"owrara HPD隱2 CGMCC No. 2568。
在無菌條件下將菌林HPD-2接種于含有50.0 mg/L苯并[a]芘的無機(jī)鹽液體培養(yǎng)基中， 28。C下200r/min振蕩培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，離心后收集菌體，并用磷酸鹽緩沖液洗滌3次， 再用磷酸鹽緩沖液將菌液調(diào)節(jié)吸光度(OD60())至適當(dāng)濃度備用，含菌量為6.2x106 CFU/mL
1.5 PAHs污染土i裏的生物i多復(fù)試驗(yàn)
稱取1000gPAHs污染土壤，加入200mLHPD-2菌液，混合均勻。以加入等量滅活 菌液的處理作為對(duì)照(CK),每個(gè)處理設(shè)3個(gè)重復(fù)。將土壤水分保持在田間持水量的60 %,于28。C下避光培養(yǎng)。在第O、 7、 14d取樣，土壤樣品4。C冷凍保存。1.6 土壤中PAHs的分析
稱取2.0g風(fēng)干土樣于索氏管中，向茄形瓶中加入二氯曱烷70mL，索氏抽提24h。 取出后控制水溫為36。C的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中旋轉(zhuǎn)濃縮至干，然后加入2.0 mL環(huán)已烷對(duì)茄形 瓶中物質(zhì)進(jìn)行溶解。另稱1.0 g經(jīng)400。C下處理4 h的干燥硅膠于小燒杯中，加10 mL 正已烷浸泡15min,然后裝硅膠柱。吸取茄形瓶中環(huán)已烷溶解液0.5 mL過柱。用1:1正 已烷和二氯曱烷混合液進(jìn)行洗脫，首次l.OmL洗脫液棄去，再接2mL洗脫液于刻度 試管中，用高純氮?dú)獯蹈?。?.0mL乙腈溶解，用Class-VP5XShimadzuHPLC測(cè)定 (錢薇等，2007 )。流動(dòng)相為乙腈/水(60: 40 )。液相色譜為日本島津Class-vp高效液 相色譜分析系統(tǒng)，配熒光檢測(cè)器RF-10AXL，柱溫箱OTO-10ASVP, 二元梯度泵LC-10AT， 色i普分離柱為美國(guó)Varian公司的ChromSpher 5 PAH。 2.1 土壤中PAHs的動(dòng)態(tài)變化
微生物能夠利用或P條解的污染物越多，在生物修復(fù)中的利用價(jià)值就越大，因此微生物 的降解底物譜是生物修復(fù)時(shí)選擇微生物的重要因素。圖7所示的是在生物修復(fù)過程中土壤 中各PAHs組分含量隨時(shí)間的變化。從中可以看出，截至第14 d，所有加菌的處理中各 PAHs組分的濃度均明顯低于對(duì)照土壤(PO.05 )，降解率均在19.5%~36.2%之間，其中最 高的是菲(36.2% )、蒽(35.4% )和苯并[a]芘(32.2% )。
從多環(huán)芳烴的環(huán)數(shù)看(圖8),加菌處理中三環(huán)PAHs的降解率最高(36.1%),五環(huán) 次之(26.0% )，西環(huán)的最低(20,9% )， PAHs的總?cè)コ蕿?2.9%。
9
權(quán)利要求
1、一種噬氨副球菌(Paracoccus aminovorans)HPD-2，該菌株已在國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局指定的保藏單位保藏，保藏日期為2008年7月3日，保藏單位名稱中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)CGMCC No.2568。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的噬氨副球菌(尸aracoccRsa附i"ovora"s) HPD-2,該菌 林在降解高分子量多環(huán)芳烴污染土壤中的應(yīng)用。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的噬氨副球菌(戶ar"cocci^a附z'"ovora朋)HPD-2,該菌 抹在降解苯并[a]芘、芘或熒蒽污染土壤中的應(yīng)用。
4、 一種權(quán)利要求1所述的噬氨副球菌(戶flracoccM )HPD-2的培養(yǎng) 基，其特征在于組成為K2HPO46.0g， KH2P045.5g， Na2SO42.0g， KC12.0 g, NH4NO32.0g, MgS04.7H20 0.2 g，微量元素溶液1.0mL,高分子量多環(huán) 芳烴3mg或50mg,該培養(yǎng)基pH 7.0-7.2。
5 、 根據(jù)權(quán)利要求4所述的噬氨副球菌(尸aracocciw "附/"ovorara) HPD-2的培養(yǎng) 基，其特征在于所述高分子量多環(huán)芳烴為苯并[a]芘、芘或熒蒽。
全文摘要
一種噬氨副球菌(Paracoccus aminovorans)HPD-2，該菌株已在國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局指定的保藏單位保藏，保藏日期為2008年7月3日，保藏單位名稱中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)CGMCC No.2568。該降解菌具有較廣的底物譜，對(duì)環(huán)境中的PAHs有很好的降解能力。
文檔編號(hào)C12N1/20GK101348773SQ20081002233
公開日2009年1月21日 申請(qǐng)日期2008年7月18日 優(yōu)先權(quán)日2008年7月18日
發(fā)明者李振高, 健 毛, 應(yīng) 滕, 駱永明 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院南京土壤研究所