專利名稱：固定化多酚氧化酶催化高純度茶多酚生產(chǎn)高純度茶黃素的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及茶萃出物處理生產(chǎn)茶黃素的方法。
背景技術(shù)：
現(xiàn)有高活性茶黃素及其生產(chǎn)技術(shù)中，檢索到“高活性茶色素及其生產(chǎn)方法”，專利申請(qǐng)?zhí)枮?0112536，它用鮮茶葉本身的酶系，在較佳的氧化聚合條件下，使外加的茶葉提取物——茶多酚或鮮茶葉本身榨出的渣漿汁中的茶多酚氧化聚合成以茶黃素、茶紅素為主的茶色素。其中酶為多種酶的復(fù)合物，主要起作用的酶不明確，且酶未加以固定化，并且生產(chǎn)原料以鮮葉酚類氧化為主，得到的產(chǎn)物中茶黃素為8-53％，其它以氧化的茶紅素和茶褐素為主，另外在茶黃素的純化過(guò)程中需要反復(fù)使用酸和堿，造成一定環(huán)境污染。另外專利85103794和97102362公開(kāi)的紅茶色素的生產(chǎn)制備方法其原理均為化學(xué)法，并且產(chǎn)品的茶黃素含量很低，茶黃素純度為約30％。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種采用生物化學(xué)方法，用固定化多酚氧化酶催化高純度茶多酚生產(chǎn)高純度茶黃素的方法。
本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下1)多酚氧化酶的固定化用殼聚糖、瓊脂或海藻酸鹽包埋材料將多酚氧化酶進(jìn)行包埋，并且用戊二醛、無(wú)水丁烯二酸-乙烯交聯(lián)，冷藏于4℃條件下備用；2)制備茶多酚溶液將80％以上純度的茶多酚配制成0.5％～6％的溶液；3)酶促反應(yīng)按照1克固定化多酚氧化酶加入到1-10克茶多酚溶液中的比例將固定化多酚氧化酶加入到茶多酚溶液中，在50～60℃下攪拌反應(yīng)60～80分鐘，得到茶黃素溶液；4)分離將茶黃素溶液中的固定化酶從溶液中分離回收，回收到的固定化酶可反復(fù)使用；5)茶黃素的萃取茶黃素溶液用純化劑萃取，萃取體積比為茶黃素溶液∶純化劑＝1∶1～10，收集純化劑，純化劑為乙酸乙酯或乙醇；6)濃縮將上述純化劑濃縮到膏狀；7)干燥將膏狀物置于真空干燥箱干燥到粉狀，干燥條件為45～60℃，真空度大于0.05Mpa。
本發(fā)明具有的有益的效果是本發(fā)明工藝步驟簡(jiǎn)單、設(shè)備投入少，既可以降低生產(chǎn)成本，由于多酚氧化酶得到固定化，因此酶促反應(yīng)又可以連續(xù)化，可根據(jù)需要控制茶多酚的氧化程度和產(chǎn)品質(zhì)量，尤其避免使用多種酸和堿等化學(xué)試劑，是一種較環(huán)境的生產(chǎn)方法。此方法所得茶黃素含量純度高達(dá)75％以上，并且殘留物以未氧化的茶多酚為主，因?yàn)樵卺t(yī)藥、食品和化工上茶多酚的功能已經(jīng)非常明確，而茶褐素的用途還沒(méi)有報(bào)道；茶黃素的得率達(dá)到25％～35％。本發(fā)明的茶黃素產(chǎn)品包括75～85％的茶黃素，10～15％的茶多酚，5～10％的茶褐素和茶紅素。外形為橘黃色粉末，易溶于50度左右的溫水，水溶液呈亮黃色。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1取純化的多酚氧化酶酶液包埋在殼聚糖中用戊二醛交聯(lián)成形，測(cè)定其活力50U/mg，取一定量固定化多酚氧化酶與10倍的6％的茶多酚溶液進(jìn)行混合，在50℃下攪拌反應(yīng)60分鐘，得到的茶黃素溶液用離心法回收固定化酶，茶黃素溶液用乙醇萃取，萃取比為茶黃素溶液∶純化劑＝1∶8，收集純化劑，將純化劑濃縮到膏狀，將膏狀物置于真空干燥箱干燥，條件為55℃，真空度大于0.05Mpa，干燥到粉末狀態(tài)，得到的茶黃素的含量為78.3％。
實(shí)施例2取純化的多酚氧化酶酶液包埋在海藻酸鹽材料中用無(wú)水丁烯二酸-乙烯交聯(lián)成形，測(cè)定其活力約在35U/mg，取一定量固定化多酚氧化酶與8倍的6％的茶多酚溶液進(jìn)行混合，在50℃下攪拌反應(yīng)80分鐘，得到的茶黃素溶液用離心法回收固定化酶，茶黃素溶液用乙醇萃取，萃取比為茶黃素溶液∶純化劑＝1∶8，收集純化劑，將純化劑濃縮到膏狀，將膏狀物置于真空干燥箱干燥，條件為50℃，真空度大于0.05Mpa，干燥到粉末狀態(tài)，得到的茶黃素的含量為83.1％。
實(shí)施例3取純化的多酚氧化酶酶液包埋在海藻酸鹽材料中用戊二醛交聯(lián)成形，測(cè)定其活力45U/mg，取一定量固定化多酚氧化酶與10倍的3.5％的茶多酚溶液進(jìn)行混合，在50℃下攪拌反應(yīng)45分鐘，得到的茶黃素溶液用離心法回收固定化酶，茶黃素溶液用乙醇萃取，萃取比為茶黃素溶液∶純化劑＝1∶8，收集純化劑，將純化劑濃縮到膏狀，將膏狀物置于真空干燥箱干燥，條件為55℃，真空度大于0.05Mpa，干燥到粉末狀態(tài)，得到的茶黃素的含量為81.3％。
權(quán)利要求
1.固定化多酚氧化酶催化高純度茶多酚生產(chǎn)高純度茶黃素的方法，其特征在于1)多酚氧化酶的固定化選擇殼聚糖、瓊脂、海藻酸鹽包埋材料將多酚氧化酶進(jìn)行包埋，并且用戊二醛、無(wú)水丁烯二酸-乙烯交聯(lián)，冷藏于4℃條件下備用；2)制備茶多酚溶液將80％以上純度的茶多酚配制成0.5％-6％的溶液；3)酶促反應(yīng)按照1克固定化多酚氧化酶加入到1-10克茶多酚溶液中的比例將固定化多酚氧化酶加入到茶多酚溶液中，在50～60℃下攪拌反應(yīng)60～80分鐘，得到茶黃素溶液；4)分離將茶黃素溶液中的固定化酶從溶液中分離回收，回收到的固定化酶可反復(fù)使用；5)茶黃素的萃取茶黃素溶液用純化劑萃取，萃取體積比為茶黃素溶液∶純化劑＝1∶1～10，收集純化劑，純化劑1為乙酸乙脂或乙醇；6)濃縮將上述純化劑濃縮到膏狀；7)干燥將膏狀物置于真空干燥箱干燥到粉狀，干燥條件為45～60℃，真空度大于0.05Mpa。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種固定化多酚氧化酶催化高純度茶多酚生產(chǎn)高純度茶黃素的方法。包括將多酚氧化酶用包埋材料進(jìn)行固定化，固定化的多酚氧化酶在一定的反應(yīng)條件下，使高純度的茶多酚氧化聚合生成高純度的茶黃素，然后將茶黃素溶液用溶劑萃取，濃縮干燥，得到茶黃素含量75％以上的高純度茶黃素產(chǎn)品。本發(fā)明工藝步驟簡(jiǎn)單，設(shè)備投入少，既可以降低生產(chǎn)成本，由于多酚氧化酶得到固定化，因此酶促反應(yīng)又可以連續(xù)化，可根據(jù)需要控制茶多酚的氧化程度和產(chǎn)品質(zhì)量，尤其避免使用多種酸和堿等化學(xué)試劑，是一種較環(huán)境的生產(chǎn)方法。
文檔編號(hào)C12P17/02GK1403580SQ0213698
公開(kāi)日2003年3月19日 申請(qǐng)日期2002年9月10日 優(yōu)先權(quán)日2002年9月10日
發(fā)明者屠幼英, 夏會(huì)龍 申請(qǐng)人:浙江大學(xué)