一種羅漢果外植體生芽培養(yǎng)技術(shù)的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供的一種羅漢果外植體生芽培養(yǎng)技術(shù)，屬于組織培養(yǎng)技術(shù)，包括制作羅漢果組培苗、外植體扦插在濾紙。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的技術(shù)能夠快速誘導(dǎo)羅漢果組織塊徑的形成，同時(shí)芽苞長至0.5～1cm，根系初步冒出，該方法可以實(shí)現(xiàn)95％的成功率，整個(gè)方法簡單易操作，并且可實(shí)現(xiàn)大批量生產(chǎn)。
【專利說明】
一種羅漢果外植體生芽培養(yǎng)技術(shù)
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬于組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種羅漢果外植體生芽培養(yǎng)技術(shù)。【背景技術(shù)】
[0002]羅漢果(學(xué)名:Siraitiagrosvenorii)是萌蘆科多年生藤本植物。其葉心形，雌雄異株，夏季開花，秋天結(jié)果。中醫(yī)以其果實(shí)入藥，含有羅漢果甜苷、多種氨基酸和維生素等藥用成分，主治肺熱痰火咳嗽、咽喉炎、扁桃體炎、急性胃炎、便秘等。因?yàn)榱_漢果是雌雄異株， 又花期不遇，加之花粉粘重且著生于花藥不易被昆蟲觸及的地方，所以很難像普通的風(fēng)媒花或蟲媒花那樣傳粉，因此自然條件下，結(jié)果的機(jī)率極低(目前人工栽培仍然必須人工授粉)。同時(shí)，羅漢果種子實(shí)生苗有70%左右為雄株，且要等到2?3年之后，開花時(shí)才能判定， 生產(chǎn)上基本無實(shí)用價(jià)值。但是，羅漢果的習(xí)性是，到了秋季分枝藤蔓會向下垂，并迅速伸長， 一經(jīng)著地就會膨大變作指頭大小的塊莖(俗稱“薯塊”、“薯仔”)，可以頑強(qiáng)地越冬，來年萌發(fā)成為獨(dú)立的新植株。這是羅漢果自然繁殖的重要方式。在人工栽培之后，演化成了人工壓蔓，小“塊莖”依然是羅漢果最重要的種源。然而，這些傳統(tǒng)塊莖容易傳播病毒及其它病蟲害，又難以大批量生產(chǎn)，無法滿足現(xiàn)代規(guī)模化種植的需求。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種羅漢果外植體生芽培養(yǎng)技術(shù)。
[0004]本發(fā)明通過以下技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)。
[0005]本發(fā)明提供的一種羅漢果外植體生芽培養(yǎng)技術(shù)，包括以下步驟:
[0006]1)使用常規(guī)方法制作羅漢果組培苗，并取中間健壯部分，分切成帶腋芽單節(jié)莖段， 并進(jìn)行滅菌處理，得到外植體；
[0007]2)將外植體扦插在在濾紙上，濾紙延伸到培養(yǎng)基溶液中；所述的濾紙到培養(yǎng)基的溶液的高度不超過4cm;先黑暗培養(yǎng)3d，然后在光照長度1000?1200Lx。光照時(shí)間10?12h/ d，培養(yǎng)溫度為23?25 °C;
[0008]所述的培養(yǎng)基溶液包含:MS+BA0 ? 5?0 ? 7mg/L、IAA0 ? 1?0 ? 2mg/L、蔗糖30g/L、硝酸銨1?4g/L、芒果泥5?10g/L。
[0009]進(jìn)一步的，所述的培養(yǎng)基溶液包含:MS+BA0 ? 6mg/L、IAA0 ? 2mg/L、蔗糖30g/L、硝酸銨3g/L、芒果泥8g/L。
[0010]進(jìn)一步的，在將外植體扦插在在濾紙前，對濾紙噴灑以下溶液:MS+BA0.5?0.7mg/ L、IAA0.1?0.2mg/L、鹿糖30g/L、香蕉泥40?50g/L，硝酸銨1?4g/L、芒果泥5?10g/L、灰炭 0?5?lg/L〇[0〇11]進(jìn)一步的，所述的濾紙厚度不小于lcm〇
[0012]本發(fā)明的有益效果在于:與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的技術(shù)能夠快速誘導(dǎo)羅漢果組織塊徑的形成，同時(shí)芽苞長至0.5?lcm，根系初步冒出，該方法可以實(shí)現(xiàn)95%的成功率，整個(gè)方法簡單易操作，并且可實(shí)現(xiàn)大批量生產(chǎn)。【具體實(shí)施方式】
[0013]下面進(jìn)一步描述本發(fā)明的技術(shù)方案，但要求保護(hù)的范圍并不局限于所述。
[0014]實(shí)施例一
[0015]本發(fā)明提供的一種羅漢果外植體生芽培養(yǎng)技術(shù)，包括以下步驟:
[0016]1)使用常規(guī)方法制作羅漢果組培苗，并取中間健壯部分，分切成帶腋芽單節(jié)莖段， 并進(jìn)行滅菌處理，得到外植體；
[0017]2)準(zhǔn)備濾紙，厚度不低于1 cm，然后在濾紙上噴灑以下溶液:MS+BA0.5mg/L、 IAA0.lmg/L、鹿糖30g/L、香蕉泥40g/L，硝酸銨lg/L、芒果泥5g/L、灰炭0.5g/L。
[0018]3)將外植體扦插在在濾紙上，濾紙延伸到培養(yǎng)基溶液中；所述的濾紙到培養(yǎng)基的溶液的高度不超過4cm;先黑暗培養(yǎng)3d，然后在光照長度lOOOLx。光照時(shí)間10h/d，培養(yǎng)溫度為 23。。；[〇〇19] 所述的培養(yǎng)基溶液包含:1^+840.511^/1、1440.11^/1、蔗糖3(^/1、硝酸銨4/1、芒果泥5g/L。
[0020]上述中，滅菌處理處理的具體步驟為:[0021 ]1)使用常規(guī)方法制作羅漢果組培苗，并取中間健壯部分，分切成帶腋芽單節(jié)莖段；[〇〇22]2)用濃度為3%的肥皂水浸泡5min，撈起后使用無菌水沖洗一次；[0〇23]3)再用濃度為0.05%的檸檬酸溶液浸泡5min，撈起后使用無菌水沖洗一次；[〇〇24]4)再用濃度50?60%的酒精溶液浸泡15s，撈起后使用無菌水沖洗一次；[〇〇25]5)再使用濃度為0.1 %的高猛酸鉀溶液浸泡3min，撈起后使用無菌水沖洗一次，得到滅菌的羅漢果外植體。
[0026]6 )得到的滅菌的羅漢果外植體用濾紙包裹，并對濾紙噴灑MS + BA0.6mg/L+IAA0.2mg/L+蔗糖30g/L的溶液噴灑，使得濾紙足夠濕潤。[〇〇27]實(shí)施例二
[0028]本發(fā)明提供的一種羅漢果外植體生芽培養(yǎng)技術(shù)，包括以下步驟:
[0029]1)使用常規(guī)方法制作羅漢果組培苗，并取中間健壯部分，分切成帶腋芽單節(jié)莖段， 并進(jìn)行滅菌處理，得到外植體；[〇〇3〇] 2)準(zhǔn)備濾紙，厚度不低于1 cm，然后在濾紙上噴灑以下溶液:MS+BA0.7mg/L、 IAA0.2mg/L、鹿糖30g/L、香蕉泥40?50g/L，硝酸銨4g/L、芒果泥10g/L、灰炭lg/L。
[0031]3)將外植體扦插在在濾紙上，濾紙延伸到培養(yǎng)基溶液中；所述的濾紙到培養(yǎng)基的溶液的高度不超過4cm;先黑暗培養(yǎng)3d，然后在光照長度1200Lx。光照時(shí)間12h/d，培養(yǎng)溫度為 25°C;[〇〇32] 所述的培養(yǎng)基溶液包含:MS+BA0.7mg/L、IAA0.2mg/L、蔗糖30g/L、硝酸銨4g/L、芒果泥l(xiāng)〇g/L。[〇〇33]上述中，滅菌處理處理的具體步驟為:
[0034]1)使用常規(guī)方法制作羅漢果組培苗，并取中間健壯部分，分切成帶腋芽單節(jié)莖段；[〇〇35]2)用濃度為3%的肥皂水浸泡5min，撈起后使用無菌水沖洗一次；[〇〇36]3)再用濃度為0.05%的梓檬酸溶液浸泡5min，撈起后使用無菌水沖洗一次；[〇〇37]4)再用濃度50?60%的酒精溶液浸泡15s，撈起后使用無菌水沖洗一次；
[0038]5)再使用濃度為0.1 %的高錳酸鉀溶液浸泡3min，撈起后使用無菌水沖洗一次，得到滅菌的羅漢果外植體。[〇〇39]6 )得到的滅菌的羅漢果外植體用濾紙包裹，并對濾紙噴灑MS + BA0.6mg/L+IAA0.2mg/L+蔗糖30g/L的溶液噴灑，使得濾紙足夠濕潤。
[0040]實(shí)施例三
[0041]本發(fā)明提供的一種羅漢果外植體生芽培養(yǎng)技術(shù)，包括以下步驟:
[0042]1)使用常規(guī)方法制作羅漢果組培苗，并取中間健壯部分，分切成帶腋芽單節(jié)莖段， 并進(jìn)行滅菌處理，得到外植體；[〇〇43]2)準(zhǔn)備濾紙，厚度不低于lcm，然后在濾紙上噴灑以下溶液:MS+BA0.5?0.7mg/L、IAA0.1?0 ? 2mg/L、鹿糖30g/L、香蕉泥40?50g/L，硝酸銨1?4g/L、芒果泥5?10g/L、灰炭 0?5?lg/L〇
[0044]3)將外植體扦插在在濾紙上，濾紙延伸到培養(yǎng)基溶液中；所述的濾紙到培養(yǎng)基的溶液的高度不超過4cm;先黑暗培養(yǎng)3d，然后在光照長度1000?1200Lx。光照時(shí)間10?12h/ d，培養(yǎng)溫度為23?25 °C;[〇〇45]所述的培養(yǎng)基溶液包含:MS+BA0.6mg/L、IAA0.2mg/L、蔗糖30g/L、硝酸銨3g/L、芒果泥8g/L。[〇〇46]上述中，滅菌處理處理的具體步驟為:
[0047]1)使用常規(guī)方法制作羅漢果組培苗，并取中間健壯部分，分切成帶腋芽單節(jié)莖段；[〇〇48]2)用濃度為3%的肥皂水浸泡5min，撈起后使用無菌水沖洗一次；[〇〇49]3)再用濃度為0.05%的梓檬酸溶液浸泡5min，撈起后使用無菌水沖洗一次；[〇〇5〇]4)再用濃度50?60%的酒精溶液浸泡15s，撈起后使用無菌水沖洗一次；
[0051]5)再使用濃度為0.1 %的高猛酸鉀溶液浸泡3min，撈起后使用無菌水沖洗一次，得到滅菌的羅漢果外植體。[〇〇52]6 )得到的滅菌的羅漢果外植體用濾紙包裹，并對濾紙噴灑MS + BA0.6mg/L+IAA0.2mg/L+蔗糖30g/L的溶液噴灑，使得濾紙足夠濕潤。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種羅漢果外植體生芽培養(yǎng)技術(shù)，其特征在于包括以下步驟:1)使用常規(guī)方法制作羅漢果組培苗，并取中間健壯部分，分切成帶腋芽單節(jié)莖段，并進(jìn) 行滅菌處理，得到外植體；2)將外植體扦插在在濾紙上，濾紙延伸到培養(yǎng)基溶液中；所述的濾紙到培養(yǎng)基的溶液 的高度不超過4cm;先黑暗培養(yǎng)3d，然后在光照長度1000?1200Lx。光照時(shí)間10?12h/d，培 養(yǎng)溫度為23?25°C;所述的培養(yǎng)基溶液包含:MS+BA0 ? 5?0 ? 7mg/L、IAA0 ? 1?0 ? 2mg/L、蔗糖30g/L、硝酸銨1 ?4g/L、芒果泥5?10g/L。2.如權(quán)利要求1所述的羅漢果外植體生芽培養(yǎng)技術(shù)，其特征在于:所述的培養(yǎng)基溶液包 含:MS+BA0 ? 6mg/L、IAA0 ? 2mg/L、蔗糖 30g/L、硝酸銨 3g/L、芒果泥 8g/L。3.如權(quán)利要求1所述的羅漢果外植體生芽培養(yǎng)技術(shù)，其特征在于:在將外植體扦插在在 濾紙前，對濾紙噴灑以下溶液:15+1^0.5?0.711^凡、]^0.1?0.211^凡、鹿糖3(^凡、香蕉泥 40?50g/L，硝酸銨1?4g/L、芒果泥5?10g/L、灰炭0? 5?lg/L。4.如權(quán)利要求1所述的羅漢果外植體生芽培養(yǎng)技術(shù)，其特征在于:所述的濾紙厚度不小 于 lcm〇
【文檔編號】A01H4/00GK105993949SQ201610362493
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年5月27日
【發(fā)明人】張俊連, 羅小廷, 張俊蛟, 邵先強(qiáng)
【申請人】貴州德江易盛農(nóng)業(yè)科技發(fā)展有限公司