一種松杉類植物種子的萌發(fā)方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種松杉類植物種子的萌發(fā)方法。該萌發(fā)方法包括：將松杉類植物種子進(jìn)行消毒處理，切除遠(yuǎn)離種臍端的部分胚乳，然后進(jìn)行生根培養(yǎng)；生根培養(yǎng)包括：將切除胚乳的種子接種到生根培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，待種子生根后接種共生菌進(jìn)行培養(yǎng)，待長(zhǎng)出須根后接種到煉苗培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)；生根培養(yǎng)基包括KT和NAA。本發(fā)明具有的有益效果為：按照本方法提供的萌發(fā)方法，銀杉的萌發(fā)率從過去的不足10％提高到了60％，萌發(fā)幼苗的成活率從過去的50％提高到了現(xiàn)在的80％以上，對(duì)于實(shí)現(xiàn)銀杉種群的擴(kuò)大和遷地保護(hù)具有非常重要的作用。
【專利說明】
一種松杉類植物種子的萌發(fā)方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種松杉類植物種子的萌發(fā)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]銀杉(Cathaya argyrophylla Chun et Kuang)，是松科銀杉屬中的單屬種，為我國(guó)珍稀瀕危樹種，是第一批進(jìn)入國(guó)家一級(jí)保護(hù)植物名錄中的植物之一。自1955年在我國(guó)被發(fā)現(xiàn)之后，引起國(guó)內(nèi)外植物學(xué)家的極大興趣，先后在我國(guó)的4個(gè)省(自治區(qū))、8個(gè)殘遺分布區(qū)、40多個(gè)分布點(diǎn)上找到了Im以上的植株1688株，川黔之間大婁山東段(金佛山、白馬山、沙河、桐梓)4個(gè)分布區(qū)，湘桂之間越城嶺北部(花坪、沙角洞)兩個(gè)分布區(qū)，南達(dá)大瑤山金秀I個(gè)分布區(qū)，東至羅霄山脈八面山I個(gè)分布區(qū)。
[0003]絕大部分銀杉植株分布在環(huán)境條件惡劣的懸?guī)r絕壁，大樹有枯枝斷梢現(xiàn)象，小樹因干旱或蔭蔽多生長(zhǎng)不良，林地幼苗幼樹極少。目前，銀杉的繁殖手段主要有播種育苗和無性繁殖兩種，前者由于銀杉結(jié)果期遲，坐果率低，大小年明顯，種子多癟粒，萌發(fā)率低，培育困難，幼苗生長(zhǎng)緩慢，對(duì)環(huán)境變化極為敏感，容易死亡。后者無性繁殖分為扦插、嫁接、組培三種方式。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，采用不同濃度的ABT處理銀杉枝條進(jìn)行扦插，發(fā)現(xiàn)僅有1%?2%的插穗長(zhǎng)出愈傷組織，但均不生根，而采用馬尾松、黃山松、黑松、粵松、鐵杉等作為砧木進(jìn)行嫁接，成活率可達(dá)50%以上，但嫁接后生長(zhǎng)不良，逐漸死亡。與濕地松、火炬松嫁接，大部分可成活，但也生長(zhǎng)，但不親和，生長(zhǎng)不同步。和有性繁殖相比，無性繁殖是一種原始而低級(jí)的生殖方式，它是以單個(gè)個(gè)體作為進(jìn)化的單位，而有性繁殖是以群體內(nèi)不同個(gè)體產(chǎn)生雌雄配子的相互結(jié)合，綜合了群體內(nèi)較多的有利形狀，所以在自然選擇中可以立于不敗之地。
[0004]根據(jù)銀杉已趨于衰敗的現(xiàn)象，不宜偏重?zé)o性繁殖，而應(yīng)深入研究其瀕危原因，采用有性繁殖，激發(fā)其特性，使其在多變的環(huán)境中能夠生存、繁衍、壯大、繁榮。因此，急需解決銀杉種子萌發(fā)率低、繁殖困難的問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]有鑒于此，本發(fā)明提供了一種松杉類植物種子的萌發(fā)方法。按照本方法提供的萌發(fā)方法，銀杉的萌發(fā)率從過去的不足10 %提高到了60 %，萌發(fā)幼苗的成活率從過去的50 %提高到了現(xiàn)在的80%以上，對(duì)于實(shí)現(xiàn)銀杉種群的擴(kuò)大和迀地保護(hù)具有非常重要的作用。
[0006]為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案:
[0007]本發(fā)明提供了一種松杉類植物種子的萌發(fā)方法，包括:將松杉類植物種子進(jìn)行消毒處理，切除遠(yuǎn)離種臍端的部分胚乳，然后進(jìn)行生根培養(yǎng)；
[0008]生根培養(yǎng)包括:將切除胚乳的種子接種到生根培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，待種子生根后接種共生菌進(jìn)行培養(yǎng)，待長(zhǎng)出須根后接種到煉苗培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng);生根培養(yǎng)基包括激動(dòng)素(KT)和萘乙酸(NAA)。
[0009]KT是一種非天然的細(xì)胞分裂素，化學(xué)名稱為6-糖基氨基嘌呤(或N6-呋喃甲基腺嘌呤)，分子式c1QH9N5o。不溶于水，溶于強(qiáng)酸、堿及冰醋酸中；除具有促進(jìn)細(xì)胞分裂的作用外，還具有延緩離體葉片和切花衰老，誘導(dǎo)芽分化和發(fā)育及增加氣孔開度的作用。
[0010]NAA,中文名稱1-萘乙酸(1-Naphthaleneacetic acid)，是一種有機(jī)化合物，化學(xué)式:CiqH7CH2CO2H,是一種易溶于有機(jī)溶劑的無色固體。它是一種植物激素生長(zhǎng)素，常用于商用的發(fā)根粉或發(fā)根劑中，在植物使用扦插法繁殖時(shí)使用。它也可用于植物組織培養(yǎng)。
[0011 ]在本發(fā)明提供的實(shí)施例中，松杉類植物為銀杉。
[0012]本發(fā)明采用包含KT和NAA的培養(yǎng)基對(duì)銀杉種子進(jìn)行萌發(fā)培養(yǎng)，同時(shí)進(jìn)行無菌培養(yǎng)，創(chuàng)造一個(gè)適合種子萌發(fā)的無菌環(huán)境，解決了種子萌發(fā)時(shí)被霉菌侵襲的問題，同時(shí)打破種子休眠，克服了銀杉種子萌發(fā)率低的問題。同時(shí)，在幼苗生長(zhǎng)健壯的條件下接種共生的土生空?qǐng)F(tuán)菌，促進(jìn)銀杉幼苗生長(zhǎng)。按照本發(fā)明方法進(jìn)行銀杉的種子育苗，種子萌發(fā)率可達(dá)80%以上。本方法適用于多數(shù)松杉類難萌發(fā)種類。
[0013]作為優(yōu)選，KT的濃度為0.8?1.2mg/L，NAA的濃度為0.10?0.15mg/L。
[0014]優(yōu)選地，KT的濃度為1.0mg/L，NAA的濃度為0.lmg/L。
[0015]作為優(yōu)選，生根培養(yǎng)的條件為:光照時(shí)間為8?12h/d，光照強(qiáng)度為2500?35001x，
培養(yǎng)溫度為24?26 °C，相對(duì)濕度為45%?50 %。
[0016]在本發(fā)明提供的實(shí)施例中，生根培養(yǎng)的條件為:光照時(shí)間為12h/d，光照強(qiáng)度為2500?35001x，培養(yǎng)溫度為24?26°C，相對(duì)濕度為45%?50%。
[0017]作為優(yōu)選，生根培養(yǎng)基為包括KT、NAA、蔗糖和瓊脂的固體培養(yǎng)基，蔗糖的濃度為25?30g/L，瓊脂的濃度為6?7g/L。
[0018]在本發(fā)明提供的實(shí)施例中，生根培養(yǎng)基中蔗糖的濃度為30g/L，瓊脂的濃度為7g/L0
[0019]作為優(yōu)選，煉苗培養(yǎng)基為包括蔗糖和瓊脂的固體培養(yǎng)基，蔗糖的濃度為25?30g/L，瓊脂的濃度為6?7g/L。
[0020]在本發(fā)明提供的實(shí)施例中，固體培養(yǎng)基為MS固體培養(yǎng)基。
[0021 ]在本發(fā)明提供的實(shí)施例中，共生菌為土生空?qǐng)F(tuán)菌。
[0022]在本發(fā)明提供的實(shí)施例中，接種共生菌進(jìn)行培養(yǎng)的條件為:溫度為25°C，時(shí)間為24h，光照強(qiáng)度為35001x。
[0023]作為優(yōu)選，消毒處理為:在次氯酸溶液中浸泡1?2Om i η，然后依次用酒精和氯化汞各消毒5?1min，無菌水沖洗，將外種皮剝離，放入雙氧水中。
[0024]在本發(fā)明提供的實(shí)施例中，消毒處理為:在0.1 %次氯酸溶液中浸泡1min，然后依次用75%酒精和0.1%氯化汞各消毒5min，無菌水沖洗5?6遍，將外種皮剝離，放入I %雙氧水中。
[0025]在消毒處理之前，還包括種子的前處理。種子的前處理包含以下步驟:篩選顆粒飽滿的松杉類植物種子，用加有洗滌劑的清水浸泡清洗，去除種皮上殘留的蟲卵、污漬，再用流水沖洗2h，晾干水份。
[0026]作為優(yōu)選，切除遠(yuǎn)離種臍端的部分胚乳為切除遠(yuǎn)離種臍端的1/4?1/3體積的胚乳。
[0027]作為優(yōu)選，生根培養(yǎng)后還包括煉苗。
[0028]煉苗包含以下步驟:
[0029](I)選取生長(zhǎng)健壯的瓶苗，先開瓶煉苗2d，使幼苗適應(yīng)外界環(huán)境。
[0030](2)將苗小心取出，不要傷到根系，流水沖凈植株上附著培養(yǎng)基，洗不凈則容易導(dǎo)致根系發(fā)霉腐爛最終死亡。
[0031](3)將苗栽到事先準(zhǔn)備好已滅菌的培養(yǎng)土中，培養(yǎng)土采用蛭石:泥炭= 1:1的比例進(jìn)行配制。
[0032](4)栽好后噴灑多菌靈溶液，然后覆薄膜，放置陰涼處。
[0033](5)1個(gè)月左右，待新葉、新根長(zhǎng)出后放置向陽處培養(yǎng)，注意保持濕度，可白天覆膜，夜晚揭膜，溫度保持在15?25°C，逐步加強(qiáng)通風(fēng)。
[0034](6)待幼苗長(zhǎng)勢(shì)健壯再進(jìn)行露天栽植。
[0035]作為優(yōu)選，MS固體培養(yǎng)基的配方為:NH4NO30.42g/L、KN03 0.48g/L、CaCl2.2H20
0.11g/L、MgS04.7H20 0.09g/L、KH2P04 0.04g/L、KI 0.815mg/L、H3B03 3.lmg/L^MnSO4.4H20 11.15mg/L、ZnS04.7H20 4.3mg/L、Na2MoO4.2H20 0.125mg/L、C11SO4.5H20 0.0125mg/UCoCl2.6H200.0125mg/L、FeS04.7H20 27.8mg/L、Na2-EDTA.2H20 37.3mg/L、肌醇10mg/L、IV 13煙酸0.511^凡、鹽酸卩比卩多醇(維生素136)0.511^凡、鹽酸硫胺素(維生素131)0.111^/1、甘氨酸2mg/L。瓊脂質(zhì)量濃度7g/L，蔗糖質(zhì)量濃度30g/L，pH值為6.0，所配培養(yǎng)基經(jīng)過高壓高溫蒸汽滅菌，126攝氏度下5分鐘。
[0036]本發(fā)明提供了一種松杉類植物種子的萌發(fā)方法。該萌發(fā)方法包括:將松杉類植物種子進(jìn)行消毒處理，切除遠(yuǎn)離種臍端的部分胚乳，然后進(jìn)行生根培養(yǎng);生根培養(yǎng)包括:將切除胚乳的種子接種到生根培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，待種子生根后接種共生菌進(jìn)行培養(yǎng)，待長(zhǎng)出須根后接種到煉苗培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng);生根培養(yǎng)基包括KT和NAA。本發(fā)明具有的有益效果為:按照本方法提供的萌發(fā)方法，銀杉的萌發(fā)率從過去的不足10%提高到了 60%，萌發(fā)幼苗的成活率從過去的50%提高到了現(xiàn)在的80%以上，對(duì)于實(shí)現(xiàn)銀杉種群的擴(kuò)大和迀地保護(hù)具有非常重要的作用。
【具體實(shí)施方式】
[0037]本發(fā)明公開了一種松杉類植物種子的萌發(fā)方法，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實(shí)現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動(dòng)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的方法及應(yīng)用已經(jīng)通過較佳實(shí)施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本
【發(fā)明內(nèi)容】
、精神和范圍內(nèi)對(duì)本文所述的方法和應(yīng)用進(jìn)行改動(dòng)或適當(dāng)變更與組合，來實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。
[0038]本發(fā)明實(shí)施例采用固體改良的MS培養(yǎng)基，具體配方為:NH4N030.42g/L、KN03
0.48g/L、CaCl2.2H20 0.Ilg/L、MgS04.7H20 0.09g/L、KH2P04 0.04g/L、KI 0.815mg/L、H3BO3 3.1mg/L、MnS04.4H20 11.15mg/L^ZnSO4.7H20 4.3mg/L、Na2MoO4.2H20 0.125mg/L、CuSO4.5H20 0.0125mg/L、CoCl2.6H2O0.0125mg/L、FeS04.7H20 27.8mg/L、Na2-EDTA.2H2037.3mg/L、肌醇100mg/L、IV B煙酸0.5mg/L、鹽酸卩比卩多醇(維生素B6)0.5mg/L、鹽酸硫胺素(維生素扮)0.11^/1、甘氨酸21^/1。瓊脂質(zhì)量濃度78/1，蔗糖質(zhì)量濃度3(^/1，？!1值為6.0，所配培養(yǎng)基經(jīng)過高壓高溫蒸汽滅菌，126攝氏度下5分鐘。
[0039]組培室條件為:光照時(shí)間12h/d，光照強(qiáng)度2500?35001x，培養(yǎng)溫度為24?26°C，相對(duì)濕度45%?50%，每3d用紫外燈滅菌30min。
[0040]本發(fā)明提供的松杉類植物種子的萌發(fā)方法中所用種子、激素、培養(yǎng)基組分、試劑等均可由市場(chǎng)購得。
[0041 ]下面結(jié)合實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明:
[0042]實(shí)施例1
[0043]1、銀杉種子的篩選、消毒、前處理技術(shù)
[0044]銀杉種子采自四川金佛山，銀杉種子癟粒很多，首先采用浮選法對(duì)種子進(jìn)行篩選，具體辦法是:將500粒種子放入500ml燒杯中，加入350ml清水，震蕩，靜置24h，將漂浮在上層的癟粒棄去，選擇下沉的種子進(jìn)行下一步的消毒處理。
[0045]2、種子的處理
[0046](I)種子篩選后先用加有洗滌劑的清水浸泡清洗，去除種皮上殘留的蟲卵、污漬等，再用流水沖洗2h，晾干水份。
[0047](2)種子清洗完成后放入0.1%HC10中浸泡lOmin。
[0048](4)在超凈工作臺(tái)內(nèi)依次用75%酒精和0.1 %HgCl各消毒5min。注:消毒液中加入數(shù)滴吐溫80，消毒液的使用次數(shù)不超過10次，達(dá)到后倒掉重新配制。其中，酒精使用完畢后要求密封保存，避免揮發(fā)降低消毒效果;氯化汞要求避光保存，以免失效。
[0049](5)消毒完成后，用無菌水沖洗5?6遍，每次浸泡時(shí)間要求長(zhǎng)于3min。
[0050](6)清洗完成后，在超凈工作臺(tái)內(nèi)用手術(shù)刀和鑷子把種子外種皮剝開，取出種子，放入I ^H2O2中待用。
[0051 ] 3、接種及培養(yǎng)
[0052](I)在超凈工作臺(tái)內(nèi)，切除種子遠(yuǎn)離種臍端的胚乳1/4到1/3體積，接種到滅菌后的加有KT 1.0mg/L、NAA 0.lmg/L的MS培養(yǎng)基中。
[0053](2)培養(yǎng)20-30天后種子胚芽開始伸長(zhǎng)，能看到切面有乳黃色胚芽伸出。
[0054](3)30?50天后胚芽向上伸長(zhǎng)，變?yōu)榈G色，基本能看到針葉形態(tài)開始分化。
[0055](4)60?80天后針葉展開，長(zhǎng)大，胚根開始長(zhǎng)出。
[0056]4、菌根培養(yǎng)
[0057](I)將菌株接種在MMN培養(yǎng)基上，暗培養(yǎng)2?3個(gè)月，每40天繼代一次。
[0058](2)從生長(zhǎng)旺盛的土生空?qǐng)F(tuán)菌落邊緣選取直徑約6mm的菌塊轉(zhuǎn)接入銀杉幼苗生長(zhǎng)良好的培養(yǎng)基中，25 °C丨旦溫暗培養(yǎng)24h，后轉(zhuǎn)入正常光照培養(yǎng)。
[0059](2)80?100天后第一輪針葉完全展開，葉片綠色，背面有兩條銀色的氣孔帶，根系長(zhǎng)出，須根開始發(fā)育。
[0060](6)100?120天，根系發(fā)達(dá)，基本布滿整個(gè)培養(yǎng)瓶。在超凈工作臺(tái)內(nèi)，將長(zhǎng)出須根的幼苗轉(zhuǎn)接到不含激素的MS固體培養(yǎng)基中。
[0061 ] (4)繼續(xù)培養(yǎng)45?60天后，幼苗根系發(fā)達(dá)莖干粗壯，葉片發(fā)育正常，可以進(jìn)入煉苗階段。
[0062]5、煉苗
[0063](I)選取生長(zhǎng)健壯的瓶苗，先開瓶煉苗2d，使幼苗適應(yīng)外界環(huán)境。
[0064](2)將苗小心取出，不要傷到根系，流水沖凈植株上附著培養(yǎng)基，洗不凈則容易導(dǎo)致根系發(fā)霉腐爛最終死亡。
[0065](3)將苗栽到事先準(zhǔn)備好已滅菌的培養(yǎng)土中，培養(yǎng)土采用蛭石:泥炭= 1:1的比例進(jìn)行配制。
[0066](4)栽好后噴灑多菌靈溶液，然后覆薄膜，放置陰涼處。
[0067](5)1個(gè)月左右，待新葉、新根長(zhǎng)出后放置向陽處培養(yǎng)，注意保持濕度，可白天覆膜，夜晚揭膜，溫度保持在15?25°C，逐步加強(qiáng)通風(fēng)。
[0068](6)待幼苗長(zhǎng)勢(shì)健壯再進(jìn)行露天栽植。
[0069]6、試驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)
[0070]試驗(yàn)過程中統(tǒng)計(jì)銀杉種子萌發(fā)率，并統(tǒng)計(jì)幼苗成活率。結(jié)果顯示，本實(shí)施例試驗(yàn)條件下銀杉種子的萌發(fā)率為60%，幼苗成活率為95%。
[0071]實(shí)施例2
[0072]1、銀杉種子的篩選、消毒、前處理技術(shù)
[0073]銀杉種子采自四川金佛山，銀杉種子癟粒很多，首先采用浮選法對(duì)種子進(jìn)行篩選，具體辦法是:將500粒種子放入500ml燒杯中，加入350ml清水，震蕩，靜置24h，將漂浮在上層的癟粒棄去，選擇下沉的種子進(jìn)行下一步的消毒處理。
[0074]2、種子的處理
[0075](I)種子篩選后先用加有洗滌劑的清水浸泡清洗，去除種皮上殘留的蟲卵、污漬等，再用流水沖洗2h，晾干水份。
[0076](2)種子清洗完成后放入0.1%HC10中浸泡lOmin。
[0077](4)在超凈工作臺(tái)內(nèi)依次用75%酒精和0.1 %HgCl各消毒5min。注:消毒液中加入數(shù)滴吐溫80，消毒液的使用次數(shù)不超過10次，達(dá)到后倒掉重新配制。其中，酒精使用完畢后要求密封保存，避免揮發(fā)降低消毒效果;氯化汞要求避光保存，以免失效。
[0078](5)消毒完成后，用無菌水沖洗5?6遍，每次浸泡時(shí)間要求長(zhǎng)于3min。
[0079](6)清洗完成后，在超凈工作臺(tái)內(nèi)用手術(shù)刀和鑷子把種子外種皮剝開，取出種子，放入I ^H2O2中待用。
[0080]3、接種及培養(yǎng)
[0081](I)在超凈工作臺(tái)內(nèi)，切除種子遠(yuǎn)離種臍端的胚乳1/4到1/3體積，接種到滅菌后的加有KT 0.8mg/L、NAA 0.15mg/L的MS培養(yǎng)基中。
[0082](2)培養(yǎng)20-30天后種子胚芽開始伸長(zhǎng)，能看到切面有乳黃色胚芽伸出。
[0083](3)30?50天后胚芽向上伸長(zhǎng)，變?yōu)榈G色，基本能看到針葉形態(tài)開始分化。
[0084](4)60?80天后針葉展開，長(zhǎng)大，胚根開始長(zhǎng)出。
[0085]5、菌根培養(yǎng)
[0086](3)將菌株接種在MMN培養(yǎng)基上，暗培養(yǎng)2?3個(gè)月，每40天繼代一次。
[0087](4)從生長(zhǎng)旺盛的土生空?qǐng)F(tuán)菌落邊緣選取直徑約6mm的菌塊轉(zhuǎn)接入銀杉幼苗生長(zhǎng)良好的培養(yǎng)基中，25 °C丨旦溫暗培養(yǎng)24h，后轉(zhuǎn)入正常光照培養(yǎng)。
[0088](2)80?100天后第一輪針葉完全展開，葉片綠色，背面有兩條銀色的氣孔帶，根系長(zhǎng)出，須根開始發(fā)育。
[0089](6)100?120天，根系發(fā)達(dá)，基本布滿整個(gè)培養(yǎng)瓶。在超凈工作臺(tái)內(nèi)，將長(zhǎng)出須根的幼苗轉(zhuǎn)接到不含激素的MS固體培養(yǎng)基中。
[0090](4)繼續(xù)培養(yǎng)45?60天后，幼苗根系發(fā)達(dá)莖干粗壯，葉片發(fā)育正常，可以進(jìn)入煉苗階段。
[0091]5、煉苗
[0092](I)選取生長(zhǎng)健壯的瓶苗，先開瓶煉苗2d，使幼苗適應(yīng)外界環(huán)境。
[0093](2)將苗小心取出，不要傷到根系，流水沖凈植株上附著培養(yǎng)基，洗不凈則容易導(dǎo)致根系發(fā)霉腐爛最終死亡。
[0094](3)將苗栽到事先準(zhǔn)備好已滅菌的培養(yǎng)土中，培養(yǎng)土采用蛭石:泥炭= 1:1的比例進(jìn)行配制。
[0095](4)栽好后噴灑多菌靈溶液，然后覆薄膜，放置陰涼處。
[0096](5)1個(gè)月左右，待新葉、新根長(zhǎng)出后放置向陽處培養(yǎng)，注意保持濕度，可白天覆膜，夜晚揭膜，溫度保持在15?25°C，逐步加強(qiáng)通風(fēng)。
[0097](6)待幼苗長(zhǎng)勢(shì)健壯再進(jìn)行露天栽植。
[0098]6、試驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)
[0099]試驗(yàn)過程中統(tǒng)計(jì)銀杉種子萌發(fā)率，并統(tǒng)計(jì)幼苗成活率。結(jié)果顯示，本實(shí)施例試驗(yàn)條件下銀杉種子的萌發(fā)率為58%，幼苗成活率為85%。
[0100]實(shí)施例3
[0101]1、銀杉種子的篩選、消毒、前處理技術(shù)
[0102]銀杉種子采自四川金佛山，銀杉種子癟粒很多，首先采用浮選法對(duì)種子進(jìn)行篩選，具體辦法是:將500粒種子放入500ml燒杯中，加入350ml清水，震蕩，靜置24h，將漂浮在上層的癟粒棄去，選擇下沉的種子進(jìn)行下一步的消毒處理。
[0103]2、種子的處理
[0104](I)種子篩選后先用加有洗滌劑的清水浸泡清洗，去除種皮上殘留的蟲卵、污漬等，再用流水沖洗2h，晾干水份。
[0105](2)種子清洗完成后放入0.1%HC10中浸泡lOmin。
[0106](4)在超凈工作臺(tái)內(nèi)依次用75%酒精和0.1 %HgCl各消毒5min。注:消毒液中加入數(shù)滴吐溫80，消毒液的使用次數(shù)不超過10次，達(dá)到后倒掉重新配制。其中，酒精使用完畢后要求密封保存，避免揮發(fā)降低消毒效果;氯化汞要求避光保存，以免失效。
[0107](5)消毒完成后，用無菌水沖洗5?6遍，每次浸泡時(shí)間要求長(zhǎng)于3min。
[0108](6)清洗完成后，在超凈工作臺(tái)內(nèi)用手術(shù)刀和鑷子把種子外種皮剝開，取出種子，放入I ^H2O2中待用。
[0109]3、接種及培養(yǎng)
[0110](I)在超凈工作臺(tái)內(nèi)，切除種子遠(yuǎn)離種臍端的胚乳1/4到1/3體積，接種到滅菌后的加有KT 1.2mg/L、NAA 0.lmg/L的MS培養(yǎng)基中。
[0111](2)培養(yǎng)20-30天后種子胚芽開始伸長(zhǎng)，能看到切面有乳黃色胚芽伸出。
[0112](3)30?50天后胚芽向上伸長(zhǎng)，變?yōu)榈G色，基本能看到針葉形態(tài)開始分化。
[0113](4)60?80天后針葉展開，長(zhǎng)大，胚根開始長(zhǎng)出。
[0114]6、菌根培養(yǎng)
[0115](5)將菌株接種在MMN培養(yǎng)基上，暗培養(yǎng)2?3個(gè)月，每40天繼代一次。
[0116](6)從生長(zhǎng)旺盛的土生空?qǐng)F(tuán)菌落邊緣選取直徑約6mm的菌塊轉(zhuǎn)接入銀杉幼苗生長(zhǎng)良好的培養(yǎng)基中，25 °C丨旦溫暗培養(yǎng)24h，后轉(zhuǎn)入正常光照培養(yǎng)。
[0117](2)80?100天后第一輪針葉完全展開，葉片綠色，背面有兩條銀色的氣孔帶，根系長(zhǎng)出，須根開始發(fā)育。
[0118](6)100?120天，根系發(fā)達(dá)，基本布滿整個(gè)培養(yǎng)瓶。在超凈工作臺(tái)內(nèi)，將長(zhǎng)出須根的幼苗轉(zhuǎn)接到不含激素的MS固體培養(yǎng)基中。
[0119](4)繼續(xù)培養(yǎng)45?60天后，幼苗根系發(fā)達(dá)莖干粗壯，葉片發(fā)育正常，可以進(jìn)入煉苗階段。
[0120]5、煉苗
[0121](I)選取生長(zhǎng)健壯的瓶苗，先開瓶煉苗2d，使幼苗適應(yīng)外界環(huán)境。
[0122](2)將苗小心取出，不要傷到根系，流水沖凈植株上附著培養(yǎng)基，洗不凈則容易導(dǎo)致根系發(fā)霉腐爛最終死亡。
[0123](3)將苗栽到事先準(zhǔn)備好已滅菌的培養(yǎng)土中，培養(yǎng)土采用蛭石:泥炭= 1:1的比例進(jìn)行配制。
[0124](4)栽好后噴灑多菌靈溶液，然后覆薄膜，放置陰涼處。
[0125](5)1個(gè)月左右，待新葉、新根長(zhǎng)出后放置向陽處培養(yǎng)，注意保持濕度，可白天覆膜，夜晚揭膜，溫度保持在15?25°C，逐步加強(qiáng)通風(fēng)。
[0126](6)待幼苗長(zhǎng)勢(shì)健壯再進(jìn)行露天栽植。
[0127]6、試驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)
[0128]試驗(yàn)過程中統(tǒng)計(jì)銀杉種子萌發(fā)率，并統(tǒng)計(jì)幼苗成活率。結(jié)果顯示，本實(shí)施例試驗(yàn)條件下銀杉種子的萌發(fā)率為60%，幼苗成活率為89%。
[0129]以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種松杉類植物種子的萌發(fā)方法，其特征在于，包括:將松杉類植物種子進(jìn)行消毒處理，切除遠(yuǎn)離種臍端的部分胚乳，然后進(jìn)行生根培養(yǎng)； 所述生根培養(yǎng)包括:將切除胚乳的種子接種到生根培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，待種子生根后接種共生菌進(jìn)行培養(yǎng)，待長(zhǎng)出須根后接種到煉苗培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng);所述生根培養(yǎng)基包括KT和 NAA O2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的萌發(fā)方法，其特征在于，所述KT的濃度為0.8?1.2mg/L，所述NAA 的濃度為 0.10 ?0.15mg/L。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的萌發(fā)方法，其特征在于，所述生根培養(yǎng)的條件為:光照時(shí)間為8?12h/d，光照強(qiáng)度為2500?35001x，培養(yǎng)溫度為24?26°C，相對(duì)濕度為45%?50%。4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的萌發(fā)方法，其特征在于，所述生根培養(yǎng)基為包括KT、NAA、蔗糖和瓊脂的固體培養(yǎng)基，所述蔗糖的濃度為25?30g/L，所述瓊脂的濃度為6?7g/L05.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的萌發(fā)方法，其特征在于，所述煉苗培養(yǎng)基為包括蔗糖和瓊脂的固體培養(yǎng)基，所述蔗糖的濃度為25?30g/L，所述瓊脂的濃度為6?7g/L。6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的萌發(fā)方法，其特征在于，所述固體培養(yǎng)基為MS固體培養(yǎng)基。7.根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的萌發(fā)方法，其特征在于，所述共生菌為土生空?qǐng)F(tuán)菌。8.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)所述的萌發(fā)方法，其特征在于，所述消毒處理為:在次氯酸溶液中浸泡10?20min，然后依次用酒精和氯化萊各消毒5?1min，無菌水沖洗，將外種皮剝離，放入雙氧水中。9.根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的萌發(fā)方法，其特征在于，所述切除遠(yuǎn)離種臍端的部分胚乳為切除遠(yuǎn)離種臍端的1/4?1/3體積的胚乳。10.根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的萌發(fā)方法，其特征在于，所述生根培養(yǎng)后還包括煉苗。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK105850748SQ201610365550
【公開日】2016年8月17日
【申請(qǐng)日】2016年5月27日
【發(fā)明人】張丹, 張茂, 張家勛, 王東超
【申請(qǐng)人】河南紅楓種苗股份有限公司