一種百香果脫毒苗的培養(yǎng)方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于植物脫毒苗培養(yǎng)領域，具體涉及一種百香果脫毒苗的培養(yǎng)方法。
【背景技術】
[0002]百香果(Passif 1ra edulis Sims)，學名西番蓮，西番蓮科，西番蓮屬，為熱帶、亞熱帶多年生常綠藤本漿果類果樹。因其果汁散發(fā)出番桃、草莓、檸檬、芒果、菠蘿、香蕉、石榴、酸梅等百余種水果的香味而得名百香果。當前種植百香果病蟲害嚴重，即百香果種植后根部腐爛;成活的百香果植株病蟲害爆發(fā)嚴重，導致大量使用農(nóng)藥進行防治;百香果植株果實落果嚴重，產(chǎn)量下降。百香果植株的幼苗自身攜帶病毒，導致百香果種植障礙產(chǎn)生的現(xiàn)象亟待解決。因此，建立一種有效的百香果脫毒苗培養(yǎng)方法對于百香果產(chǎn)業(yè)的發(fā)展具有重要的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于提供一種百香果脫毒苗的培養(yǎng)方法，通過前處理、基礎培養(yǎng)、脫毒培養(yǎng)、增殖組培快繁培養(yǎng)、生根培養(yǎng)等5個步驟獲得百香果脫毒苗，有效解決百香果組培苗攜帶病毒而無法有效種植的難題，與常規(guī)無脫毒的百香果苗種相比，本發(fā)明的百香果脫毒苗種植后發(fā)病率僅為2%，提高了百香果的經(jīng)濟效益。
[0004]為了達成上述目的，本發(fā)明采用的主要技術方案如下:
一種百香果脫毒苗的培養(yǎng)方法，按照植株外植體前處理、基礎培養(yǎng)、脫毒培養(yǎng)、增殖組培快繁培養(yǎng)和生根培養(yǎng)5個步驟進行培養(yǎng)，所述的步驟具體如下:
(1)植株外植體前處理:
選取健康百香果植株莖尖，采用無菌水清洗植株莖尖表面3-5次，將植株莖尖置于消毒液中浸泡消毒15min-20min，去除植株莖尖表面的部分微生物，再將植株莖尖置于42 °C?45°C水中浸泡處理45min?60min后，植株莖尖再次置于消毒液中浸泡消毒1min?15min;
所述的消毒液中各組分的比例為:按質(zhì)量百分數(shù)計，抗生素0.002%?0.004%、惡霉靈0.005%?0.015%、烏洛托品0.02%?0.04%、霜霉威鹽酸鹽0.06%?0.08%、甲酚磺酸0.01%?0.02%，余量為水；
(2)基礎培養(yǎng):
將經(jīng)前處理后的植株莖尖接種至基礎培養(yǎng)基上進行常規(guī)培養(yǎng)15d-20d，將新生腋芽取出再次接種至基礎培養(yǎng)基上進行常規(guī)培養(yǎng)15d-20d;
所述的基礎培養(yǎng)基配方為:按質(zhì)量百分數(shù)計，蔗糖2%?3%、瓊脂0.8%?1.0%、抗生素0.002%?0.004%、惡霉靈0.005%?0.015%、烏洛托品0.02%?0.04%、霜霉威鹽酸鹽0.06%?0.08%、甲酚磺酸0.01%?0.02%、氯化鋅0.01%?0.02%、MS+6_BA 0.3%?0.4%^NAA 0.06%?0.08%^IAA 0.05%?0.07 %，余量為水；
(3)脫毒培養(yǎng):
取上述基礎培養(yǎng)后的新生芽，進行脫毒培養(yǎng)，得到的組培苗在40 0C?45 0C下進行熱處理3d-6d后，新生芽剝?nèi)?.5011的莖尖，將莖尖置于消毒液中浸泡消毒151^11~201^11，用無菌水清洗莖尖3-5次，再將莖尖接種至脫毒培養(yǎng)基上進行常規(guī)培養(yǎng)15d-20d;將得到的組培苗在40 0C?450C下進行熱處理3d-6d后，新生腋芽剝?nèi)?.2cm的莖尖，將莖尖置于消毒液中浸泡消毒5min?1min，用無菌水清洗莖尖3-5次，再將莖尖接種至脫毒培養(yǎng)基上進行常規(guī)培養(yǎng)15d-20d；
所述的脫毒培養(yǎng)基配方為:按質(zhì)量百分數(shù)計，蔗糖3%?4%、瓊脂0.8%?1.0%、抗生素0.001%?0.002%、惡霉靈0.002%?0.004%、烏洛托品0.005%?0.007%、霜霉威鹽酸鹽0.004%?0.006%、MS+6-BA 0.06%?0.08%、NAA 0.06%?0.08%、IAA 0.02%?0.04%、維生素Bi0.02%?0.04%、維生素B2 0.02%?0.04%、維生素B6 0.03%?0.05%、維生素B9 0.02%?0.04%，余量為水；
(4)增殖組培快繁培養(yǎng):
將脫毒培養(yǎng)后的百香果脫毒苗接種至增殖組培快繁培養(yǎng)基中，按照常規(guī)的組培方法進行增殖組培快繁培養(yǎng)20d-25d;
所述的增殖組培快繁培養(yǎng)基配方為:按質(zhì)量百分數(shù)計，蔗糖2%?3%、瓊脂0.8%?1.0%、MS+6-BA 0.08%?0.12%、NAA 0.06%?0.08%、IAA 0.05%?0.07%、維生素Bi 0.04%?0.06%、維生素B2 0.03%?0.05%、維生素B6 0.03%?0.05%、維生素B9 0.02%?0.04%，余量為水；
(5)生根培養(yǎng):
將增殖組培快繁培養(yǎng)后的百香果脫毒苗接種至生根培養(yǎng)基中，按照常規(guī)的組培方法進行生根培養(yǎng)30d-40d;
所述的生根培養(yǎng)基配方為:按質(zhì)量百分數(shù)計，蔗糖2%?3%、瓊脂0.8%?1.0%、MS+6-BA0.08%?0.12%、NAA 0.06%?0.08%、IAA 0.05%?0.07%、CCC 0.3%?0.4%、維生素Bi 0.04%?0.06%、維生素B2 0.03%?0.05%、維生素B6 0.03%?0.05%、維生素B9 0.02%?0.04%，余量為水。
[0005]按照上述步驟對百香果進行培養(yǎng)即可獲得百香果脫毒苗。
[0006]本發(fā)明的有益效果在于:本發(fā)明涉及的一種百香果脫毒苗的培養(yǎng)方法操作簡單，可用于大批量的百香果脫毒苗的工業(yè)化生產(chǎn)，同時脫毒苗種植后，有效降低百香果植株的病害率，與常規(guī)無脫毒的百香果苗種相比，本發(fā)明的百香果脫毒苗種植后發(fā)病率僅為2%，大大提高了百香果的經(jīng)濟效益。
【具體實施方式】
[0007]為充分公開本發(fā)明的一種百香果脫毒苗的培養(yǎng)方法，以下結合實施實例加以說明。
[0008]實施例1
一種百香果脫毒苗的培養(yǎng)方法，按照植株外植體前處理、基礎培養(yǎng)、脫毒培養(yǎng)、增殖組培快繁培養(yǎng)和生根培養(yǎng)5個步驟進行培養(yǎng)，所述的步驟具體如下:
(I)植株外植體前處理:
選取健康百香果植株莖尖，采用無菌水清洗植株莖尖表面3次，將植株莖尖置于消毒液中浸泡消毒20min，去除植株莖尖表面的部分微生物，再將植株莖尖置于45°C水中浸泡處理45min后，植株莖尖再次置于消毒液中浸泡消毒15min; 所述的消毒液中各組分的比例為:按質(zhì)量百分數(shù)計，抗生素0.004%、惡霉靈0.015%、烏洛托品0.04%、霜霉威鹽酸鹽0.08%、甲酚磺酸0.02%，余量為水；
(2)基礎培養(yǎng):
將經(jīng)前處理后的植株莖尖接種至基礎培養(yǎng)基上進行常規(guī)培養(yǎng)20d，將新生腋芽取出再次接種至基礎培養(yǎng)基上進行常規(guī)培養(yǎng)20d;
所述的基礎培養(yǎng)基配方為:按質(zhì)量百分數(shù)計，蔗糖2%、瓊脂0.8%、抗生素0.004%、惡霉靈0.015%、烏洛托品0.04%、霜霉威鹽酸鹽0.08%、甲酚磺酸0.02%、氯化鋅0.02%、MS+6_BA0.3%、ΝΑΑ 0.06%^IAA 0.05%，余量為水;
(3)脫毒培養(yǎng):
取上述基礎培養(yǎng)后的新生芽，進行脫毒培養(yǎng)，得到的組培苗在40 °C下進行熱處理6d后，新生芽剝?nèi)?.5cm的莖尖，將莖尖置于消毒液中浸泡消毒20min，用無菌水清洗莖尖5次，再將莖尖接種至脫毒培養(yǎng)基上進行常規(guī)培養(yǎng)15d;將得到的組培苗在40°C下進行熱處理6d后，新生腋芽剝?nèi)?.2cm的莖尖，將莖尖置于消毒液中浸泡消毒5min，用無菌水清洗莖尖3次，再將莖尖接種至脫毒培養(yǎng)基上進行常規(guī)培養(yǎng)15d;
所述的脫毒培養(yǎng)基配方為:按質(zhì)量百分數(shù)計，蔗糖3%、瓊脂0.8%、抗生素0.001%、惡霉靈0.002%、烏洛托品0.005%、霜霉威鹽酸鹽0.004%、]\^+6-8八 0.06%、ΝΑΑ 0.06%^IAA 0.02%、維生素B1 0.02%、維生素B2 0.02%、維生素B6 0.03%、維生素B9 0.02%，余量為水;
(4)增殖組培快繁培養(yǎng):
將脫毒培養(yǎng)后的百香果脫毒苗接種至增殖組培快繁培養(yǎng)基中，按照常規(guī)的組培方法進行增殖組培快繁培養(yǎng)20d;
所述的增殖組培快繁培養(yǎng)基配方為:按質(zhì)量百分數(shù)計，蔗糖2%、瓊脂0.8%、MS+6-BA0.08%^NAA 0.06%^IAA 0.05%、維生素Bi 0.04%、維生素B2 0.03%、維生素B6 0.03%、維生素B9 0.02%，余量為水;
(5)生根培養(yǎng):
將增殖組培快繁培養(yǎng)后的百香果脫毒苗接種至生根培養(yǎng)基中，按照常規(guī)的組培方法進行生根培養(yǎng)30d;
所述的生根培養(yǎng)基配方為:按質(zhì)量百分數(shù)計，蔗糖3%、瓊脂1.0%、MS+6-BA 0.12%,NAA0.08%、IAA 0.07%^CCC 0.4%、維生素B1 0.06%、維生素B2 0.05%、維生素B6 0.05%、維生素B90.04%，余量為水；
按照上述步驟對百香果進行培養(yǎng)即可獲得百香果脫毒苗。
[0009]取100株本發(fā)明的百香果脫毒苗進行種植I年，與100株常規(guī)無脫毒的百香果苗種植后相比，本發(fā)明的百香果脫毒苗種植后發(fā)病率為3%，常規(guī)無脫毒的百香果苗種植后發(fā)病率為37%。
[0010]實施例2
一種百香果脫毒苗的培養(yǎng)方法，按照植株外植體前處理、基礎培養(yǎng)、脫毒培養(yǎng)、增殖組培快繁培養(yǎng)和生根培養(yǎng)5個步驟進行培養(yǎng)，所述的步驟具體如下:
(I)植株外植體前處理:
選取健康百香果植株莖尖，采用無菌水清洗植株莖尖表面4次，將植株莖尖置于消毒液中浸泡消毒18min，去除植株莖尖表面的部分微生物，再將植株莖尖置于43°C水中浸泡處理53min后，植株莖尖再次置于消毒液中浸泡消毒12min;
所述的消毒液中各組分的比例為:按質(zhì)量百分數(shù)計，抗生素0.003%、惡霉靈0.010%、烏洛托品的0.03%、霜霉威鹽酸鹽0.07%、甲酚磺酸0.015%，余量為水；
(2)基礎培養(yǎng):
將經(jīng)前處理后的植株莖尖接種至基礎培養(yǎng)基上進行常規(guī)培養(yǎng)18d，將新生腋芽取出再次接種至基礎培養(yǎng)基上進行常規(guī)培養(yǎng)17d;
所述的基礎培養(yǎng)基配方為:按質(zhì)量百分數(shù)計，蔗糖2.5%、瓊脂0.9%、抗生素0.003%、惡霉靈0.010%、烏洛托品0.03%、霜霉威鹽酸鹽0.07%、甲酚磺酸0.015%、氯化鋅0.015%、MS+6_BA0.35%、ΝΑΑ 0.07%、ΙΑΑ 0.06 %，余量為水；
(3)脫毒培養(yǎng):
取上述基礎培養(yǎng)后的新生芽，進行脫毒培養(yǎng)，得到的組培苗在42 °C下進行熱處理5d后，新生