單方或復(fù)方殼寡糖制劑及其在防治番茄病毒病中的應(yīng)用
【專利說明】
[0001]
技術(shù)領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明設(shè)及農(nóng)業(yè)技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種單方或復(fù)方殼寡糖制劑及其在防治番茄 病毒病中的應(yīng)用。
[0003]
【背景技術(shù)】 植物病毒病在植物病害中所占比例僅次于真菌病害，隨著設(shè)施農(nóng)業(yè)的發(fā)展，病毒病在 經(jīng)濟作物上的危害愈來愈重。番茄病毒病一般發(fā)病率10%-30%，嚴重的50%-70%，產(chǎn)量損失 大，對番茄生產(chǎn)造成了嚴重威脅。番茄病毒病是由煙草花葉病毒、黃瓜花葉病毒、首猜花葉 病毒或其他病毒侵染引起，是番茄的重要病害之一，其病害癥狀主要表現(xiàn)為花葉型、藤葉 型、條紋型、叢生型、卷葉型和黃頂型。近年來由于反季節(jié)蔬菜栽培面積擴大，加上種子帶菌 傳染和氣候條件適宜，W花葉病毒為主病毒引起的番茄病毒病上升迅速，危害嚴重。目前生 產(chǎn)上防治病毒病的藥劑難W有效控制病毒病的危害。因此，為保證我國現(xiàn)代化農(nóng)業(yè)可持續(xù) 發(fā)展、保障居民健康安全W及生態(tài)環(huán)境的保護，發(fā)展新型安全高效的生物農(nóng)藥產(chǎn)業(yè)具有重 要意義。
[0004] 殼寡糖是水溶性的殼聚糖降解產(chǎn)物，殼聚糖(cMtosan)是由甲殼素衍生而來的。 甲殼素（cMtin)又叫甲殼質(zhì)或者幾下質(zhì)，它廣泛存在于微生物、酵母、磨茹的細胞壁中，昆 蟲的表皮中，烏賊、貝殼等軟體動物的骨骼內(nèi)。尤其是郵、膀蟹等甲殼類的水生動物的甲殼 中含有豐富的甲殼素。甲殼素在自然界的合成量僅次于纖維素，是地球上第二大再生資源。 [000引殼寡糖(oligocMtosan)是由2-10個氨基葡萄糖Κβ-1，4-糖巧鍵連接而成，它對 植物的調(diào)控作用不同于傳統(tǒng)的生物農(nóng)藥和化學(xué)農(nóng)藥，不但可W促進作物的生長，提高作物 的品質(zhì)，殼寡糖可誘導(dǎo)植物的抗病性，對多種真菌、細菌和病毒產(chǎn)生免疫和殺滅作用。
[0006] 且殼寡糖在農(nóng)業(yè)上應(yīng)用具有微量(PPM級）、高效、低成本、無公害等特點，對我國農(nóng) 業(yè)可持續(xù)性發(fā)展具有重要意義。
[0007]

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明的目的就是為了克服現(xiàn)有技術(shù)不足，提供了一種單方或復(fù)方殼寡糖制劑及 其在防治番茄病毒病中的應(yīng)用，現(xiàn)有番茄病毒病防治所用化學(xué)農(nóng)藥帶有的病毒防治率低， 病情會反復(fù)，有農(nóng)藥殘留的問題。
[0009 ]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明通過下述技術(shù)方案得W解決： 一種殼寡糖制劑，所述殼寡糖是經(jīng)殼聚糖酶酶解制得，該殼寡糖的聚合度為3~30，平均 分子量為3kDa。
[0010]所述殼寡糖的制備方法如下： 1)殼聚糖酶解溶液的制備： 采用生產(chǎn)殼聚糖酶菌種JT-KI，通過菌體富集方法獲得殼聚糖酶解溶液;該生產(chǎn)殼聚糖 酶菌種JT-K1，購于華中農(nóng)業(yè)大學(xué)。
[0011] 培養(yǎng)條件:2.5%葡萄糖、1%蛋白腺、0.15%憐酸氨二鐘、0.05%憐酸二氨鐘、0.3%屯水 合硫酸儀，180轉(zhuǎn)數(shù)/分、發(fā)酵溫度30°C，進行40 L發(fā)酵罐的高細胞密度發(fā)酵，發(fā)酵液離屯、取 上清液，即為殼聚糖酶解溶液。
[0012] 2)3%殼聚糖膠體溶液的制備： 稱取殼聚糖粉末15g，加入150 mL蒸饋水，溶脹30 min,加入1 mol/L的HAc 135mL，持 續(xù)攬拌2 h，使殼聚糖粉末充分溶解，用1 mol/L的化Ac緩慢調(diào)pH為5.0，用相同PH的0.2 mol/L的HAc/NaAc緩沖液定容至500 mL。
[001引3)殼聚糖酶解： 3%殼聚糖膠體加酶量為7 u/g，55 °C水浴12 h，待酶解完全后沸水浴10 min來滅酶活， 冷卻后加化0H調(diào)抑為8,除去大分子的殼聚糖，6000轉(zhuǎn)/分離屯、15 min,取上清液抽濾后，濃 縮得到高濃度的殼寡糖，再用3kDa孔徑的濾膜過濾得到分子量為3kD的殼寡糖。
[0014] 所述殼寡糖制劑是殼寡糖水溶液，濃度為0.014%~0.1%，優(yōu)選0.02%~0.03%。
[0015] 所述殼寡糖制劑還包括生防菌、潤濕劑和填料。
[0016] 殼寡糖的含量為殼寡糖制劑總重量的3%~5%;所述生防菌為多粘芽抱桿菌、側(cè)抱芽 抱桿菌、解淀粉芽抱桿菌中一種或多種;所述潤濕劑為月桂醇聚氧乙締酸或十二烷基苯橫 酸鋼;所述填料為高嶺±或娃藻±。
[0017] 殼寡糖制劑還包括有機肥、無機肥、無機復(fù)合肥中一種或多種。
[0018] 所述殼寡糖的添加量為殼寡糖制劑總重量的0.1%~0.3%。
[0019] 所述殼寡糖制劑為固體制劑，優(yōu)選可濕性粉劑。
[0020] 本發(fā)明還提供了一種殼寡糖制劑在預(yù)防或治療番茄病毒病中的應(yīng)用。
[0021] 所述的番茄病毒為煙草花葉病毒、黃瓜花葉病毒、首猜花葉病毒。
[0022] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，帶來的意料不到的技術(shù)效果如下： 1、常用的是化學(xué)農(nóng)藥植病靈、病毒A、病毒速殺、殺毒抓等溶液，病毒防治率低，病情會 反復(fù)，有農(nóng)藥殘留;殼寡糖來源豐富，且在農(nóng)業(yè)上應(yīng)用具有微量(PPM級）、高效、低成本、無公 害等特點，它對植物的調(diào)控作用不同于傳統(tǒng)的生物農(nóng)藥和化學(xué)農(nóng)藥，不但可W促進作物的 生長，提高作物的品質(zhì)，殼寡糖可誘導(dǎo)植物的抗病性，對多種真菌、細菌和病毒產(chǎn)生免疫和 殺滅作用。
[0023] 2、殼寡糖組合物菌劑加入不同的生防菌內(nèi)，既能防治病毒病，又能根據(jù)生防菌的 不同功能使所得兼有其它作用。
【具體實施方式】
[0024] 本領(lǐng)域技術(shù)人員可W借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進工藝參數(shù)實現(xiàn)。特別需要指出的是， 所有類似的替換和改動對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā) 明。
[0025] 下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。殼聚糖:脫乙酷度為 92%，粉末狀，購于國藥集團。殼寡糖標(biāo)樣[(GlcN)2-(GlcN)6 ]:大連中科格萊克生物科技有 限公司 為了進一步理解本發(fā)明，下面結(jié)合實施例對本發(fā)明進行詳細說明。
[0026] -種殼寡糖制劑，所述殼寡糖是經(jīng)殼聚糖酶酶解制得，該殼寡糖的聚合度為 3~30，平均分子量為3kDa。
[0027] 該殼寡糖的制備方法如下： 1)殼聚糖酶解溶液的制備： 采用生產(chǎn)殼聚糖酶菌種JT-K1，通過菌體富集方法獲得殼聚糖酶解溶液;該 生產(chǎn)殼聚糖酶菌種JT-K1，購于華中農(nóng)業(yè)大學(xué)。
[002引培養(yǎng)條件:2.5%葡萄糖、1%蛋白腺、0.15%憐酸氨二鐘、0.05%憐酸二氨鐘、0.3%屯水 合硫酸儀，180轉(zhuǎn)/分、發(fā)酵溫度30°C，進行40 L發(fā)酵罐的高細胞密度發(fā)酵，發(fā)酵液離屯、取上 清液，即為殼聚糖酶解溶液，4 °C冷藏備用。
[0029] 2)3%殼聚糖膠體溶液的制備： 稱取殼聚糖粉末15g，加入150 mL蒸饋水，溶脹30 min,加入1 mol/L的HAc 135mL，持 續(xù)攬拌2 h，使殼聚糖粉末充分溶解，用1 mol/L的化Ac緩慢調(diào)pH為5.0，用相同PH的0.2 mol/L的HAc/NaAc緩沖液定容至500 mL，4 °C冷藏備用。
[0030] 3)殼聚糖酶解： 3%殼聚糖膠體加酶量為7 u/g，55 °C水浴12 h，待酶解完全后沸水浴10 min來滅酶活， 冷卻后加 NaOH調(diào)抑為8，除去大分子的殼聚糖，6000轉(zhuǎn)/分離屯、15 min，取上清液用砂忍漏斗 抽濾后，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮得到高濃度的殼寡糖，再用3W)a孔徑的濾膜過濾得到分子量為 3kD的殼寡糖，收集殼寡糖放入真空冷凍干燥機制備成固體狀，于4 °C冰箱儲存?zhèn)溆谩?br>[0031] 殼寡糖作為活性成分能制備如下制劑:具體為： 1、殼寡糖水溶液，室溫配置成濃度為0.03%。