一種東北巖高蘭種子催芽方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
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[0001]本發(fā)明涉及植物種子發(fā)芽領(lǐng)域，具體涉及一種東北巖高蘭種子催芽方法。
【背景技術(shù)】
[0002]東北巖高蘭為巖高蘭科巖高蘭屬植物，生于我國(guó)東北大興安嶺海拔775-1460米的石山或林中。在我國(guó)僅東北巖高蘭1變種，為珍稀植物，是我國(guó)二級(jí)瀕危保護(hù)植物，對(duì)于研究植物區(qū)系，植物地理都具有一定的科學(xué)價(jià)值。當(dāng)?shù)囟鯗乜司用駥|北巖高蘭作為治療保肝護(hù)肝的民間藥“肝復(fù)靈”使用。然而東北巖高蘭種子具有很強(qiáng)的休眠性，未經(jīng)解除休眠的種子發(fā)芽率極低，東北巖高蘭種子的深休眠特性給東北巖高蘭的物種保護(hù)工作帶來(lái)了很大困難。隨著東北巖高蘭藥學(xué)研究的逐步加深，東北巖高蘭大規(guī)模種植勢(shì)在必行，這更使東北巖高蘭育種保護(hù)工作迫在眉睫。因此，尋找到東北巖高蘭種子的催芽方法成為當(dāng)前急待解決的問(wèn)題?，F(xiàn)有關(guān)東北巖高蘭催芽的具體有效方法甚少。本發(fā)明將提出一種東北巖高蘭種子催芽方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是提供一種東北巖高蘭種子催芽的方法。
[0004]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的東北巖高蘭種子催芽方法，包括以下步驟:
[0005](1)取東北巖高蘭種子100粒，浸泡于98%濃硫酸中，侵泡時(shí)間1分鐘；
[0006](2)搓去氧化后的種皮，將種子取出浸泡于500ppm的赤霉素中，浸泡12個(gè)小時(shí)；
[0007](3)用75%酒精和2%次氯酸鈉對(duì)浸泡后的種子進(jìn)行浸泡消毒，先用75%酒精浸泡30秒，用蒸餾水洗凈種子表面殘留酒精后，將種子瀝干置于2%次氯酸鈉中浸泡20分鐘；
[0008](4)將消毒后種子平鋪于置有1厘米厚細(xì)沙的培養(yǎng)皿中，再覆蓋一層0.5厘米厚的細(xì)沙，將培養(yǎng)皿置于18°C光照培養(yǎng)箱6周進(jìn)行溫層積處理，期間保持細(xì)沙濕潤(rùn)；
[0009](5)取經(jīng)過(guò)溫層積處理的培養(yǎng)皿，置于5°C低溫冰箱6周進(jìn)行低溫層積處理，期間持續(xù)保持細(xì)沙濕潤(rùn)；
[0010](6)取出培養(yǎng)皿，置于室溫培養(yǎng)箱下培養(yǎng)并記錄發(fā)芽數(shù)。
[0011]上述方法中:
[0012]本發(fā)明使用濃硫酸浸泡種子，在操作過(guò)程中需要注意種子浸泡于濃硫酸前必須保證干燥，所用濃硫酸沒(méi)過(guò)全部種子即可。清洗5次種子，并搓去氧化后的種皮。由于濃硫酸遇水放熱，所以第一次清洗應(yīng)是將種子倒入大量水中。一方面，濃硫酸屬于強(qiáng)酸，不沖洗的話，容易腐蝕容器，引起安全問(wèn)題，另一方面，種子表面殘留酸溶液易導(dǎo)致種子內(nèi)部受到傷害，進(jìn)而使種子受到傷害，影響發(fā)芽。本發(fā)明使用酒精浸泡，穿透細(xì)菌孢子的能力強(qiáng)，殺菌效果好。次氯酸再進(jìn)一步分解形成新生態(tài)氧，新生態(tài)氧的極強(qiáng)氧化性使菌體和病毒上的蛋白質(zhì)等物質(zhì)變性，從而使病源微生物致死。采用酒精結(jié)合次氯酸鈉對(duì)東北巖高蘭種子消毒，不僅可以對(duì)種子外表面等進(jìn)行消毒處理，而且還能對(duì)種子表皮內(nèi)部進(jìn)行消毒，最大可能的殺死寄存在種子中的細(xì)菌等有害物質(zhì)，消毒效果突出，同時(shí)安全性高。實(shí)驗(yàn)中所涉及的沙，應(yīng)經(jīng)20目篩選后經(jīng)濕式滅菌法20分鐘除雜種子、蟲(chóng)卵的細(xì)沙，在層積過(guò)程中保證沙床保持濕潤(rùn)。
【具體實(shí)施方式】
[0013]以下實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明，
[0014]本發(fā)明所用化學(xué)試劑均為可以從市場(chǎng)上購(gòu)得的常規(guī)試劑。
[0015]本發(fā)明中出現(xiàn)的百分號(hào)％均指體積百分?jǐn)?shù)。
[0016]實(shí)施例1
[0017](1)選擇完整的東北巖高蘭種子，用98%的濃硫酸浸泡1分鐘；之后用蒸餾水沖洗5次，沖洗干凈種子表面殘留的酸溶液，并搓去氧化種皮。
[0018](2)將種子平鋪在干燥濾紙上，置于鼓風(fēng)烘箱中，28°C下烘1小時(shí)，進(jìn)行干燥處理。
[0019](3)將干燥種子浸泡于lOOppm赤霉素溶液12小時(shí)。
[0020](4)將浸泡后的種子用75%的酒精中浸泡30秒，取出后用無(wú)菌水沖洗3-5次，洗掉種子表面的酒精。
[0021 ] (5)將酒精浸泡過(guò)的種子轉(zhuǎn)移到2 %的次氯酸鈉溶液中，浸泡20分鐘，浸泡結(jié)束后用無(wú)菌水清洗5次。
[0022](6)將消毒后種子平鋪于置有1厘米厚細(xì)沙的培養(yǎng)皿中，再覆蓋一層0.5厘米厚的細(xì)沙，將培養(yǎng)皿置于18°C光照培養(yǎng)箱6周進(jìn)行溫層積處理，期間保持細(xì)沙濕潤(rùn)。
[0023](7)取出培養(yǎng)皿，置于室溫培養(yǎng)箱下培養(yǎng)并記錄發(fā)芽數(shù)。
[0024]實(shí)施例2
[0025](1)選擇完整的東北巖高蘭種子，用98%的濃硫酸浸泡1分鐘；之后用蒸餾水沖洗5次，沖洗干凈種子表面殘留的酸溶液，并搓去氧化種皮。
[0026](2)將種子平鋪在干燥濾紙上，置于鼓風(fēng)烘箱中，28°C下烘1小時(shí)，進(jìn)行干燥處理。
[0027](3)將干燥種子浸泡于200ppm赤霉素溶液12小時(shí)。
[0028](4)將浸泡后的種子用75%的酒精中浸泡30秒，取出后用無(wú)菌水沖洗3-5次，洗掉種子表面的酒精。
[0029](5)將酒精浸泡過(guò)的種子轉(zhuǎn)移到2 %的次氯酸鈉溶液中，浸泡20分鐘，浸泡結(jié)束后用無(wú)菌水清洗5次。
[0030](6)將消毒后種子平鋪于置有1厘米厚細(xì)沙的培養(yǎng)皿中，再覆蓋一層0.5厘米厚的細(xì)沙，將培養(yǎng)皿置于18°C光照培養(yǎng)箱6周進(jìn)行溫層積處理，期間保持細(xì)沙濕潤(rùn)。
[0031](7)取出培養(yǎng)皿，置于室溫培養(yǎng)箱下培養(yǎng)并記錄發(fā)芽數(shù)。
[0032]實(shí)施例3
[0033](1)選擇完整的東北巖高蘭種子，用98%的濃硫酸浸泡1分鐘；之后用蒸餾水沖洗5次，沖洗干凈種子表面殘留的酸溶液，并搓去氧化種皮。
[0034](2)將種子平鋪在干燥濾紙上，置于鼓風(fēng)烘箱中，28°C下烘1小時(shí)，進(jìn)行干燥處理。
[0035](3)將干燥種子浸泡于500ppm赤霉素溶液12小時(shí)。
[0036](4)將浸泡后的種子用75%的酒精中浸泡30秒，取出后用無(wú)菌水沖洗3_5次，洗掉種子表面的酒精。
[0037](5)將酒精浸泡過(guò)的種子轉(zhuǎn)移到2 %的次氯酸鈉溶液中，浸泡20分鐘，浸泡結(jié)束后用無(wú)菌水清洗5次。
[0038](6)將消毒后種子平鋪于置有1厘米厚細(xì)沙的培養(yǎng)皿中，再覆蓋一層0.5厘米厚的細(xì)沙，將培養(yǎng)皿置于18°C光照培養(yǎng)箱6周進(jìn)行溫層積處理，期間保持細(xì)沙濕潤(rùn)。
[0039](7)取出培養(yǎng)皿，置于室溫培養(yǎng)箱下培養(yǎng)并記錄發(fā)芽數(shù)。
[0040]實(shí)施例4
[0041](1)選擇完整的東北巖高蘭種子，用98%的濃硫酸浸泡1分鐘；之后用蒸餾水沖洗5次，沖洗干凈種子表面殘留的酸溶液，并搓去氧化種皮。
[0042](2)將種子平鋪在干燥濾紙上，置于鼓風(fēng)烘箱中，28°C下烘1小時(shí)，進(jìn)行干燥處理。
[0043](3)將干燥種子浸泡于lOOppm赤霉素溶液12小時(shí)。
[0044](4)將浸泡后的種子用75%的酒精中浸泡30秒，取出后用無(wú)菌水沖洗3_5次，洗掉種子表面的酒精。
[0045](5)將酒精浸泡過(guò)的種子轉(zhuǎn)移到2 %的次氯酸鈉溶液中，浸泡20分鐘，浸泡結(jié)束后用無(wú)菌水清洗5次。
[0046](6)將消毒后種子平鋪于置有1厘米厚細(xì)沙的培養(yǎng)皿中，再覆蓋一層0.5厘水厚的細(xì)沙，將培養(yǎng)皿置于18°C光照培養(yǎng)箱6周進(jìn)行溫層積處理，期間保持細(xì)沙濕潤(rùn)。
[0047](7)取出培養(yǎng)皿，置于5°C冷藏箱中，冷藏6周進(jìn)行低溫層積處理，期間保持細(xì)沙濕潤(rùn)。
[0048](8)取出培養(yǎng)皿，置于室溫培養(yǎng)箱下培養(yǎng)并記錄發(fā)芽數(shù)。
[0049]實(shí)施例5
[0050](1)選擇完整的東北巖高蘭種子，用98%的濃硫酸浸泡1分鐘；之后用蒸餾水沖洗5次，沖洗干凈種子表面殘留的酸溶液，并搓去氧化種皮。
[0051](2)將種子平鋪在干燥濾紙上，置于鼓風(fēng)烘箱中，28°C下烘1小時(shí)，進(jìn)行干燥處理。
[0052](3)將干燥種子浸泡于200ppm赤霉素溶液12小時(shí)。
[0053](4)將浸泡后的種子用75%的酒精中浸泡30秒，取出后用無(wú)菌水沖洗3_5次，洗掉種子表面的酒精。
[0054](5)將酒精浸泡過(guò)的種子轉(zhuǎn)移到2 %的次氯酸鈉溶液中，浸泡20分鐘，浸泡結(jié)束后用無(wú)菌水清洗5次。
[0055](6)將消毒后種子平鋪于置有1厘米厚細(xì)沙的培養(yǎng)皿中，再覆蓋一層0.5厘米厚的細(xì)沙，將培養(yǎng)皿置于18°C光照培養(yǎng)箱6周進(jìn)行溫層積處理，期間保持細(xì)沙濕潤(rùn)。
[0056](7)取出培養(yǎng)皿，置于5°C冷藏箱中，冷藏6周進(jìn)行低溫層積處理，期間保持細(xì)沙濕潤(rùn)。
[0057](8)取出培養(yǎng)皿，置于室溫培養(yǎng)箱下培養(yǎng)并記錄發(fā)芽數(shù)。
[0058]實(shí)施例6
[0059](1)選擇完整的東北巖高蘭種子，用98%的濃硫酸浸泡1分鐘；之后用蒸餾水沖洗5次，沖洗干凈種子表面殘留的酸溶液，并搓去氧化種皮。
[0060](2)將種子平鋪在干燥濾紙上，置于鼓風(fēng)烘箱中，28°C下烘1小時(shí)，進(jìn)行干燥處理。
[0061](3)將干燥種子浸泡于500ppm赤霉素溶液12小時(shí)。
[0062](4)將浸泡后的種子用75%的酒精中浸泡30秒，取出后用無(wú)菌水沖洗3_5次，洗掉種子表面的酒精。