高效誘導肉蓯蓉種子萌發(fā)的方法
【專利說明】
[0001]
技術領域 本發(fā)明屬于藥用植物領域，具體涉及一種高效誘導肉蓯蓉種子萌發(fā)的方法。
[0002]
【背景技術】 [0003]
[0004] 肉灰蓉（Cistanche deserticolaY. C. Ma)為列當科肉灰蓉屬（Cistanche)的多年 生專性根寄生植物，其寄主為藜科植物梭梭（Haloxylon ammodendron)，是我國西北荒漠半 荒漠地區(qū)珍貴的植物資源，為國家二級保護植物，被列入《中國植物紅皮書》。它具有補腎 陽、益精血、潤燥通腸等功效，是使用頻率最高的補腎中藥。
[0005] 自然條件下肉蓯蓉的萌發(fā)率很低，不足1%。。萌發(fā)率低下是導致其野生資源日漸稀 少的原因之一，也是阻礙其人工種植發(fā)展的主要因素之一。目前，提高肉蓯蓉種子萌發(fā)的方法 主要有：（1)物理處理法：即利用機械去種皮、低溫、沙藏等物理方法處理肉蓯蓉種子，促進其 萌發(fā)；⑵化學處理法：即利用植物激素或者其他化學物質浸泡肉蓯蓉種子，促進其萌發(fā)；⑶ 專利《荒漠肉蓯蓉種子處理方法》（申請?zhí)枮椋?01210160914.5)公開了荒漠肉蓯蓉種子處理 方法，主要是利用植物表達誘導劑、1-氯甲基氮雜硅三環(huán)、V e、赤霉素組合處理誘導種子萌發(fā)。 但以上這些方法不僅對種子質量要求較高，處理時間較長、而且處理肉蓯蓉種子萌發(fā)率還是 不夠理想。因此，需要找到一種處理時間較短、誘導肉蓯蓉萌發(fā)率較高的方法。

【發(fā)明內容】

[0006] 本發(fā)明目的是提供一種高效誘導肉蓯蓉種子萌發(fā)的方法，本方法在適宜的培養(yǎng)條 件下，利用化學物質氟草敏[化學名稱為1- (3-三氟甲基苯基）-4-甲氨基-5-氯-6-噠嗪 酮]處理肉蓯蓉種子促進其萌發(fā)，用此方法可有效的提高肉蓯蓉種子萌發(fā)率，適宜于肉蓯 蓉人工種植過程中的種子萌發(fā)處理。
[0007] 實現本發(fā)明的方案是：
[0008] 高效誘導肉蓯蓉種子萌發(fā)的方法，包括如下步驟：
[0009] (1)肉蓯蓉種子消毒處理：將大小為0. 4~0. 8mm的肉蓯蓉種子用20~25°C的蒸 饋水浸泡12~24小時,再用70%乙醇消毒30~60秒,然后用無菌水清洗3~5次,再用 0. 1 %次氯酸鈉消毒10~15分鐘，然后用無菌水清洗3~5次。
[0010] (2)氟草敏誘導處理：將經過步驟（1)處理后肉蓯蓉種子放在90mm的無菌玻璃培 養(yǎng)皿中，用IX 10 9~IX 10 5m〇l · L 1濃度范圍內的氟草敏水溶液對種子進行浸泡處理,處 理時間為3~5小時。
[0011] (3)萌發(fā)培養(yǎng)：將經過步驟（2)處理后肉蓯蓉種子擺放在鋪有玻璃纖維濾紙（規(guī) 格為90mm)的90mm無菌玻璃培養(yǎng)皿中，向皿中加入3~4mL無菌蒸餾水，皿四周用PARAFILM 封口膜封口。然后置于溫度為20~25°C、濕度60~80%、無光照條件下培養(yǎng)8~15天。
[0012] 上述步驟（2)中氟草敏水溶液可通過將3. 037mg的氟草敏溶于IL無菌水中，得到 濃度為IX 10 5Hiol · L 1的溶液，然后按照通常的稀釋方法得到其他濃度的溶液。
[0013] 上述步驟（1)中所述的大小為0. 4~0. 8mm的種子，可以通過將肉蓯蓉種子先過 篩孔直徑為0. 8mm種子篩，然后將所得的種子過篩孔直徑為0. 4mm的種子篩而得到。
[0014] 本發(fā)明的優(yōu)點和有益效果為：（1)操作簡單、處理時間短；(2)種子萌發(fā)率高，可達 90% ; (3)縮短萌發(fā)所需時間；（4)適宜于肉蓯蓉人工種植過程中的種子萌發(fā)處理。
【附圖說明】 圖1是未經誘導劑處理的對照組肉蓯蓉種子不能萌發(fā)圖；圖2是誘導劑處理后的肉蓯 蓉種子萌發(fā)圖。
【具體實施方式】
[0015] 實施例1
[0016] 本試驗2011年在寧夏農林科學院農業(yè)生物技術研究中心實驗室內進行，包括以 下步驟：
[0017] (1)肉蓯蓉種子消毒處理：2011年5月8日取4°C低溫保存的2009年采自于內 蒙古阿拉善左旗蘇海圖人工種植的荒漠肉蓯蓉種子，將種子先通過篩孔直徑為〇. 8_種子 篩，然后將所得的種子再通過篩孔直徑為〇. 4_的種子篩。取所得到的種子IOg用25°C的 蒸餾水浸泡18小時。蒸餾水浸泡后的種子用70%乙醇消毒40秒，然后用無菌水清洗5次， 再用0. 1 %次氯酸鈉消毒15分鐘，然后用無菌水清洗5次。
[0018] (2)氟草敏誘導處理：2011年5月9日取消毒處理的肉蓯蓉種子放在90mm的無 菌玻璃培養(yǎng)皿中，每皿放入100粒肉蓯蓉種子，再向皿中分別加入IX10 5UXlO 6UXlO 7、 I X 10 8、I X 10 9mol. L 1的氟草敏水溶液2mL，對肉蓯蓉種子進行浸泡處理，處理時間為5小 時，以蒸餾水處理的肉蓯蓉種子作為對照，每個處理重復3次。
[0019] (3)萌發(fā)培養(yǎng)：將各濃度氟草敏溶液誘導處理后肉蓯蓉種子擺放在鋪有玻璃纖維 濾紙（規(guī)格為90mm)的90mm無菌玻璃培養(yǎng)皿中，再向皿中加入4mL無菌蒸饋7jC，皿四周用 PARAFILM封口膜封口，然后置于溫度為24°C、濕度80 %、黑暗條件下培養(yǎng)。
[0020] (4)萌發(fā)情況觀察：每天利用Leica體式顯微鏡觀察肉蓯蓉種子萌發(fā)情況，記錄初 始萌發(fā)時間，待各處理萌發(fā)的種子數不再增加時（15d后），視萌發(fā)完全，統(tǒng)計萌發(fā)率。
[0021] 試驗結果（見表1)表明，經氟草敏處理后的肉蓯蓉種子萌發(fā)率最高達90%，而對 照的肉蓯蓉種子未見萌發(fā)；氟草敏處理后的肉蓯蓉種子萌發(fā)間為7天。
[0022] 表1氟草敏對肉蓯蓉種子萌發(fā)的影響
[0023]
[0024] 注：萌發(fā)率=萌發(fā)種子數/供試種子總數X 100%
[0025] 實施例2
[0026] 本試驗2012年在寧夏農林科學院農業(yè)生物技術研究中心實驗室內進行，包括以 下步驟：
[0027] (1)肉蓯蓉種子消毒處理：2012年7月11日取4°C低溫保存的2009年采自于內 蒙古阿拉善左旗蘇海圖人工種植的肉蓯蓉種子，將種子先通過篩孔直徑為〇. 8_種子篩， 然后將所得的種子再通過篩孔直徑為〇. 4_的種子篩。取所得到的種子5g用25°C的蒸餾 水浸泡24小時。蒸餾水浸泡后的種子用70%乙醇消毒40秒，然后用無菌水清洗5次，再用 0. 1 %次氯酸鈉消毒15分鐘，然后用無菌水清洗5次。
[0028] (2)氟草敏誘導處理：2011年7月12日取消毒處理的肉蓯蓉種子放在90mm的無 菌玻璃培養(yǎng)皿中，每皿放入〇. Ig肉蓯蓉種子，再向皿中分別加入IX 10 5m〇l. L 1的氟草敏水 溶液2mL，對肉蓯蓉種子進行浸泡處理，處理時間為4小時。
[0029] (3)不同溫度條件下萌發(fā)培養(yǎng)：將氟草敏溶液誘導處理后肉蓯蓉種子擺放在鋪有 玻璃纖維濾紙（規(guī)格為90mm)的90mm無菌玻璃培養(yǎng)皿中，每皿放入100粒肉蓯蓉種子，再 向皿中加入4mL無菌蒸餾水，皿四周用PARAFILM封口膜封口，然后分別置于溫度為15、18、 21、24、27、30、331：，濕度80%、黑暗條件下培養(yǎng)，每個處理重復3次。
[0030] (4)萌發(fā)情況觀察：每天利用Leica體式顯微鏡觀察肉蓯蓉種子萌發(fā)情況，記錄初 始萌發(fā)時間，待各處理萌發(fā)的種子數不再增加時（15d后），視萌發(fā)完全，統(tǒng)計萌發(fā)率。
[0031] 試驗結果（見表2)表明，經氟草敏處理后的肉蓯蓉種子萌發(fā)率最高達90%，而對 照的肉蓯蓉種子未見萌發(fā)；氟草敏處理后的肉蓯蓉種子萌發(fā)間為7天。
[0032] 表2不同溫度條件下氟草敏對肉蓯蓉種子萌發(fā)的影響
[0033]
[0034] 注：萌發(fā)率=萌發(fā)種子數/供試種子總數X 100%。
【主權項】
1. 高效誘導肉蓯蓉種子萌發(fā)的方法，其特征在于：誘導萌發(fā)的物質為氟草敏水溶液。2. 根據權利要求1所述高效誘導肉蓯蓉種子萌發(fā)的方法，其特征在于：按下列步驟進 行： (1) 肉蓯蓉種子消毒處理：將大小為〇. 4~0. 8mm的肉蓯蓉種子用20~25°C的蒸餾水 浸泡12~24小時,再用70%乙醇消毒30~60秒,然后用無菌水清洗3~5次,再用0. 1% 次氯酸鈉消毒10~15分鐘，然后用無菌水清洗3~5次。 (2) 氟草敏誘導處理：將經過步驟（1)處理后肉蓯蓉種子放在90mm的無菌玻璃培養(yǎng)皿 中，用I X 10 9~I X 10 5m〇l ? L 1濃度范圍內的氟草敏水溶液對種子進行浸泡處理，處理時 間為3~5小時。 (3) 萌發(fā)培養(yǎng)：將經過步驟（2)處理后肉蓯蓉種子擺放在鋪有玻璃纖維濾紙（規(guī)格為 90mm)的90mm無菌玻璃培養(yǎng)皿中，向皿中加入3~4mL無菌蒸餾水，皿四周用PARAFIIi^f 口膜封口。然后置于溫度為20~25°C、濕度60~80%、無光照條件下培養(yǎng)8~15天。
【專利摘要】本發(fā)明屬于藥用植物領域，公開一種高效誘導肉蓯蓉種子萌發(fā)的方法。其特征在于：誘導萌發(fā)的物質為氟草敏水溶液。其有效作用在于：肉蓯蓉種子用該誘導物質浸泡處理后，萌發(fā)率得到極大提高，有效的解決了肉蓯蓉種子萌發(fā)率低下的問題。該技術適用于寧夏等西北省份沙漠地區(qū)肉蓯蓉人工種植過程中的肉蓯蓉種子萌發(fā)處理。
【IPC分類】A01C1/00, A01H4/00
【公開號】CN105010132
【申請?zhí)枴緾N201410156142
【發(fā)明人】宋玉霞, 陳虞超, 李苗, 石磊, 甘曉燕, 張麗, 鞏檑, 聶峰杰
【申請人】寧夏農林科學院
【公開日】2015年11月4日
【申請日】2014年4月18日