編碼具有人獨(dú)特型的嚙齒動(dòng)物抗體的多核苷酸以及包含所述多核苷酸的動(dòng)物的制作方法
【專利說(shuō)明】編碼具有人獨(dú)特型的嚙齒動(dòng)物抗體的多核苷酸以及包含所 述多核苷酸的動(dòng)物
[0001] 相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用
[0002] 本申請(qǐng)要求2012年12月14日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)U.S.S.N. 61/737,371的 優(yōu)先權(quán)。本申請(qǐng)明確地以全文引用的方式并入本文中。 發(fā)明領(lǐng)域
[0003] 本發(fā)明涉及可用于在嚙齒動(dòng)物中產(chǎn)生具有人獨(dú)特型的免疫球蛋白的多核苷酸，尤 其是嵌合多核苷酸。本發(fā)明還涉及包含此類多核苷酸的嚙齒動(dòng)物細(xì)胞。
[0004] 參考序列表
[0005] 在此專利文件中，以在2012年12月12日創(chuàng)建（大小3MB)并且命名為 "189314-US_ST25. txt"的txt文件提供序列表。此文件的內(nèi)容以全文引用的方式并入本文 中。
[0006] 發(fā)明背景
[0007] 已證明人單克隆抗體在治療應(yīng)用中作為常規(guī)大小的IgG、單鏈或者結(jié)構(gòu)域模塊是 無(wú)價(jià)的 1A盡管成功，但在它們的產(chǎn)生中仍然存在著主要缺點(diǎn)，其依賴于可獲得的人材料的 特異性選擇以及個(gè)體產(chǎn)物的后續(xù)修飾，或者轉(zhuǎn)基因動(dòng)物（主要是小鼠）的有限可用性的免 疫 3。靶抗原限制對(duì)轉(zhuǎn)基因小鼠以及大的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物（例如牛）的使用而言普遍是適當(dāng)?shù)模?而新的特異性的開(kāi)發(fā)是受公司控制的 4_7。
[0008] 在20多年前，通過(guò)在種系構(gòu)型中穩(wěn)定地插入重鏈基因，開(kāi)創(chuàng)了在轉(zhuǎn)基因小鼠中人 免疫球蛋白（Ig)基因的DNA重排和表達(dá) 8。雖然在這些早期動(dòng)物中獲得了人抗體庫(kù)，但是 導(dǎo)致人Ig的較高表達(dá)水平和專一產(chǎn)生的主要改進(jìn)結(jié)合了兩種新策略：在胚胎干（ES)細(xì)胞 中基因敲除 9以及在人工染色體上基因座延伸1Q。
[0009] 通過(guò)在ES細(xì)胞中基因靶向，內(nèi)源性Ig基因的沉默產(chǎn)生若干失活小鼠系，其沒(méi)有重 排它們的IgH和Ig κ基因座的能力或者不產(chǎn)生完全功能性的IgH、Ig κ或Ig λ產(chǎn)物（總 結(jié)于3)。近來(lái)設(shè)計(jì)鋅指核酸酶（ZFN)用以在Ig基因中產(chǎn)生位點(diǎn)特異性雙鏈斷裂，其通過(guò)缺 失和非同源的DNA修復(fù)使得基因破壞。將ZFN質(zhì)粒注入受精卵產(chǎn)生Ig沉默的大鼠和具有 IgH和IgL破壞的兔1η3。
[0010] 抗體的有效表達(dá)需要免疫球蛋白基因座中在各種位置處的功能性調(diào)節(jié)元件。通 過(guò)核酸酶消化和對(duì)降解的超敏性，已經(jīng)在多個(gè)活性基因附近鑒定增強(qiáng)子序列。超敏位點(diǎn) 可以在啟動(dòng)子序列之前，并且它們的活性強(qiáng)度與該DNA序列相關(guān)。如果增強(qiáng)子功能存在， 則與報(bào)告基因的連鎖顯現(xiàn)出升高的轉(zhuǎn)錄（Mundt等人，J. Immunol.，，166, 3315[2001]。 在IgH基因座中，已經(jīng)鑒定出兩個(gè)重要的轉(zhuǎn)錄或表達(dá)調(diào)節(jié)子，即在基因座末端的E μ 和3'E (Pettersson等人，Nature，344,165 [1990])。在小鼠中，整個(gè)3'調(diào)節(jié)區(qū)（包含 hs3a、hsl，2、hs3b和hs4)的去除容許正常的早期B細(xì)胞發(fā)育但是消除了類別轉(zhuǎn)換重 組（Vincent-Fabert等人，Blood, 116, 1895[2010])并且可能防止體細(xì)胞超突變的優(yōu)化 (Pruzina 等人，Protein Engineering, Design and Selection, I, [2011]) 〇
[0011] 當(dāng)使用轉(zhuǎn)基因的人IgH基因時(shí)，實(shí)現(xiàn)最佳的同種型表達(dá)的調(diào)節(jié)性功能是特別適合 的。然而，在許多實(shí)驗(yàn)室中，通常僅僅提供hsl，2元件的具有不完全3'E區(qū)的轉(zhuǎn)基因構(gòu)建體， 即使在內(nèi)源性IgH基因座被敲除時(shí)，也導(dǎo)致在轉(zhuǎn)基因小鼠中令人失望的表達(dá)水平。這可能是 為什么迄今為止從基因工程小鼠產(chǎn)生抗原特異性完全人IgG效率低的一個(gè)原因 。（Lonberg 等人，Nature 368, 856 [1994] ;Nicholson 等人，J. Immunol. ,163, 6898 [1999] ;Davis 等人， Cancer Metastasis Rev. 18, 421 [1999] ;Pruzina等人，Protein Engineering, Design and Selection,1， [2011]。
[0012] 在大鼠中，僅對(duì)3' E區(qū)進(jìn)行了欠佳地分析。小鼠和大鼠序列的比較不容許鑒定 hs4, hs4為更下游的具有附加重要調(diào)節(jié)序列的關(guān)鍵第4E元件（Chatterjee等人，J. Biol. Chem.，286, 29303[2011])。這可能意味著大鼠中并不存在該區(qū)，并且也許不如在小鼠中重 要，或者在所分析的大鼠基因組序列中可能并不存在該區(qū)。
[0013] 仍然需要使用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物優(yōu)化產(chǎn)生具有人獨(dú)特型的免疫球蛋白或抗體的方法和 材料，其可用于在范圍廣泛的疾病領(lǐng)域?qū)θ诉M(jìn)行治療。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0014] 本文公開(kāi)新型多核苷酸，其包含編碼嵌合免疫球蛋白鏈特別是用于產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因動(dòng) 物的嵌合重鏈的核酸序列。因?yàn)槿狈?'增強(qiáng)子的轉(zhuǎn)基因座導(dǎo)致受損的同種型轉(zhuǎn)換和低IgG 表達(dá)，所以本發(fā)明的多核苷酸至少部分地由于包含了此3'增強(qiáng)子而有利地提供優(yōu)化的表 達(dá)。因此，在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含大鼠3'增強(qiáng)子序列、Ig恒定區(qū)基因和至 少一個(gè)人免疫球蛋白（Ig)連接（J)區(qū)基因的嵌合多核苷酸。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，大 鼠3'增強(qiáng)子序列包括如SEQ ID NO: 1所示的序列，或其部分。
[0015] 本文所述的嵌合多核苷酸還可以包含至少一個(gè)人可變（V)基因、至少一個(gè)多樣性 (D)基因，或其組合。在一個(gè)實(shí)施方案中，嵌合多核苷酸的恒定區(qū)基因選自由人恒定區(qū)基因 和大鼠恒定區(qū)基因組成的組。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，恒定區(qū)基因是大鼠恒定區(qū)基因。在 另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，恒定區(qū)基因選自由Cy和Cy組成的組。
[0016] 在一個(gè)實(shí)施方案中，嵌合多核苷酸包含與本文公開(kāi)的細(xì)菌人工染色體（BAC) Annabel (例如SEQ ID NO: 10)或其部分基本同源的核酸序列，并且還可以任選地包含至少 一個(gè)可從BAC6-VH3-11和BAC3分離的人可變Ig基因。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本文涵 蓋的嵌合多核苷酸以5'至3'的順序包含核酸序列（a)和（b) : (a)人Ig可變區(qū)，其包含可 從BAC6-VH3-11和/或BAC3分離的呈天然構(gòu)型的人V基因，和（b)人Ig連接區(qū)，其包含可 從BAC Annabel分離的呈天然構(gòu)型的人J基因。在另一個(gè)實(shí)施方案中，如本文公開(kāi)的嵌合 多核苷酸的人Ig可變區(qū)、人Ig多樣性區(qū)、人Ig連接區(qū)、Ig恒定區(qū)和大鼠3'增強(qiáng)子區(qū)中的 每一個(gè)處于如圖Ia中所示的相對(duì)位置。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所公開(kāi)的嵌合多核苷酸具有 包括如SEQ ID N0:2所示的序列或其部分或與其基本同源的序列。在另一個(gè)實(shí)施方案中， 所公開(kāi)的嵌合多核苷酸具有包括如SEQ ID NO: 11所示的序列或其部分或與其基本同源的 序列。在另一個(gè)實(shí)施方案中，如本文公開(kāi)的嵌合多核苷酸包含重排的V-D-J區(qū)，其中所述重 排的V-D-J區(qū)編碼重鏈可變結(jié)構(gòu)域外顯子。
[0017] 本文還公開(kāi)編碼人κ輕鏈基因的多核苷酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，如本文公開(kāi)的 多核苷酸具有這樣的核酸序列，其包括選自由RP11_1156D9(如SEQ ID N0:3所示）和 RP11-1134E24(如SEQ ID N0:4所示）組成的組的核酸序列或者與其基本同源。在另一個(gè) 實(shí)施方案中，分離的多核苷酸以5'至3'的順序包含核酸序列（a)和（b) : (a)人Ig可變 區(qū)，其包含可從細(xì)菌人工染色體（BAC)RP11-156D9和/或RP11-1134E24分離的呈天然構(gòu) 型的人V基因；(b)人Ig連接區(qū)，其包含可從細(xì)菌人工染色體（BAC) RPl 1-1134E24和/或 RP11-344F17(如SEQ ID N0:5所示）分離的呈天然構(gòu)型的人J基因。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施 方案中，人Ig可變區(qū)、人Ig連接區(qū)和人Ig恒定區(qū)中的每一個(gè)處于如圖Ib中所示的相對(duì)位 置。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所公開(kāi)的嵌合多核苷酸具有包括如SEQ ID N0:6所示的序列或 其部分或與其基本同源的序列。
[0018] 本文還提供嚙齒動(dòng)物細(xì)胞，其包含本發(fā)明的一種或多種多核苷酸。例如，本文提供 嚙齒動(dòng)物細(xì)胞，其包含如本文公開(kāi)的多核苷酸，優(yōu)選包含編碼嵌合重鏈的核酸序列，例如， 編碼大鼠3'增強(qiáng)子序列、Ig恒定區(qū)基因和至少一個(gè)人J區(qū)基因的核酸序列，并任選地包 含與選自由RP11-1156D9、RP11-1134E24及其部分組成的組的核酸序列基本同源的核酸序 列。本文涵蓋的嚙齒動(dòng)物細(xì)胞還可以包含編碼功能性輕鏈的多核苷酸，例如，具有如下核酸 序列的多核苷酸，該核酸序列包括選自由圖Ib所示的序列（如SEQ ID N0:6所示）、圖Ic 所示的序列（如SEQ ID NO:7所示）及其部分組成的組的核酸序列或者與其基本同源。在 一個(gè)實(shí)施方案中，將所述多核苷酸中的一個(gè)或多個(gè)整合在嚙齒動(dòng)物細(xì)胞基因組中。
[0019] 附圖簡(jiǎn)述
[0020] 圖1 :整合的人Ig基因座。（a)嵌合人-大鼠 IgH區(qū)含有與22個(gè)不同且潛在功能 性的人Vh區(qū)段的3個(gè)重疊 BAC。BAC6-3已經(jīng)用VH3-11延伸以提供與BAC3的10. 6kb重疊， 其通過(guò)VH6-1與C區(qū)BAC Hu-大鼠 Annabel重疊11. 3kb。后者是嵌合的，并且含有所有的 人D和Jh區(qū)段，隨后的具有完全增強(qiáng)子序列的大鼠 C區(qū)。（b)具有12個(gè)Vk和所有Jk的人 Igk BAC提供在該Vk區(qū)中的約14kb重疊和在Ck中的約40kb以包括KDE。（c)具有17個(gè) Vl和所有J-Cl的包括3'增強(qiáng)子的人Igl區(qū)，是來(lái)自YAC33。
[0021] 圖2 :來(lái)自3月齡大鼠的淋巴細(xì)胞門(mén)控的骨髓和脾細(xì)胞的流式細(xì)胞術(shù)分析。對(duì) IgM和CD45R(B220)表面染色揭示在HC14和wt大鼠的骨髓和脾中相似數(shù)量的未成熟的和 成熟的B細(xì)胞，而JKO/JKO動(dòng)物表現(xiàn)出沒(méi)有B細(xì)胞發(fā)育。以前向（FSC)對(duì)位點(diǎn)（SSC)散布 (scatter)作圖顯示就尺寸和形狀而論可比數(shù)量的淋巴細(xì)胞（門(mén)控性）群。將用抗IgG(Gl、 G2a、G2b、G2c同種型）對(duì)脾細(xì)胞的表面染色對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)（xl02)作圖，揭示與wt相比在 HC14大鼠中接近正常數(shù)量的IgG+表達(dá)子（expresser)。在骨髓中，A是指前（pro/pre) B細(xì)胞（CD45R+IgM_)，B是指未成熟的B細(xì)胞（CD45R+IgM+)。在脾中，A是指過(guò)渡型B細(xì)胞 (⑶45R+IgM_)，B是指濾泡性B細(xì)胞（⑶45R+IgM +)，并且C是指邊緣區(qū)B細(xì)胞（⑶45RlQWIgM+)。
[0022] 圖3 :來(lái)自PBL的IgH和IgL轉(zhuǎn)錄體的突變變化。單一的（VHDJH)和VL是來(lái)自用 乂組特異性引物：16!^1、2、3、4和6與通用丫012反向引物、161^2、3和4及反向（^引物 的組合；以及IGKV1、3、4和5與反向Ck引物（補(bǔ)充表1)的擴(kuò)增。鑒定突變的順式轉(zhuǎn)換 (trans-switch)產(chǎn)物的人 VH-大鼠 Cy 2a(4)和人 VH-大鼠 Cy 2c (2)。
[0023] 圖4:具有人獨(dú)特型的大鼠 Ig的純化以及與人和正常大鼠 Ig水平的比較。將 OmniRat血清和人或大鼠 wt對(duì)照血清，各100 μ 1，用于IgM/G純化。（a)用抗IgM基質(zhì)捕 獲IgM，在wt大鼠中鑒定出14yg，在0mniRat[HC14(a)和HC14(c)]中鑒定出30yg和 10 μ g。（b)將IgG在蛋白A和蛋白G柱上純化，其中對(duì)于OmniRat產(chǎn)率高達(dá)約3mg/ml (蛋白 A :HC14 (a) 1000 μ g/ml ;HC14 (b) 350 μ g/ml ;wt 大鼠 350 μ g/ml ;蛋白 G :HC14 (a) 2970 μ g/ ml ;HC14(b) 280 μ g/ml ;wt 大鼠 1010 μ g/ml)。（c)人 Ig K 和（d)人 Ig λ 分別在抗 Ig K 和抗Ig λ基質(zhì)上純化。使用wt大鼠血清，沒(méi)有獲得純化產(chǎn)物（未示出）。將純化的Ig，約 3 μ g(通過(guò)nano drop測(cè)定的濃度），在4-15% SDS-PAGE上在還原條件下進(jìn)行分離。將個(gè) 體OmniRat (8531、8322、8199、8486、8055)、人和被大鼠血清中的（6)人181〇和出人18入 水平通過(guò)ELISA滴定進(jìn)行比較。將血清稀釋度（1:10、1:100、1:1，000、1:10, 000)對(duì)通過(guò)在 492nm下的吸收測(cè)得的結(jié)合進(jìn)行作圖。匹配的名稱/數(shù)量是指來(lái)自相同大鼠的樣本。
[0024] 詳述
[0025] 本文提供編碼重組或人工免疫球蛋白鏈或基因座的嵌合多核苷酸。如上所述，本 文公開(kāi)的嵌合多核苷酸用于轉(zhuǎn)化嚙齒動(dòng)物以包括人Ig基因，并用于利用此類嚙齒動(dòng)物產(chǎn) 生具有人獨(dú)特型的免疫球蛋白或抗體。
[0026] 多核苷酸
[0027] 免疫球蛋白是指由一個(gè)或多個(gè)基本上由免疫球蛋白基因編碼的多肽組成的蛋白 質(zhì)。已公認(rèn)的人免疫球蛋白基因包括κ、λ、α (IgAl和IgA2)、y (IgGl、IgG2、IgG3、IgG4)、 δ、ε和μ恒定區(qū)基因，以及大量的免疫球蛋白可變區(qū)基因。全長(zhǎng)免疫球蛋白"輕鏈"（約 25Kd，或者214個(gè)氨基酸）通常包含：由包含一個(gè)或多個(gè)可變區(qū)基因和在NH 2-末端的一個(gè) 或多個(gè)連接區(qū)基因的外顯子編碼的可變結(jié)構(gòu)域（約110個(gè)氨基酸），以及由在COOH-末端的 κ或λ恒定區(qū)基因編碼的恒定結(jié)構(gòu)域。全長(zhǎng)免疫球蛋白"重鏈"（約50Kd，或者446個(gè)氨 基酸），相似地包含（1)由包含一個(gè)或多個(gè)可變區(qū)基因、一個(gè)或多個(gè)多樣性區(qū)基因和一個(gè)或 多個(gè)連接區(qū)基因的外顯子編碼的可變結(jié)構(gòu)域（約116個(gè)氨基酸），以及（2)上述恒定結(jié)構(gòu) 域之一，其包含一個(gè)或多個(gè)恒定區(qū)基因，例如，α、γ、δ、ε或μ (編碼約330個(gè)氨基酸）。 免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)基因編碼抗體類別即同種型（例如，IgM或IgGl)。
[0028] 如本文使用的，術(shù)語(yǔ)"抗體"是指包含至少一個(gè)且優(yōu)選為兩個(gè)重（H)鏈可變結(jié)構(gòu)域 (在此縮寫(xiě)為VH)和至少一個(gè)且優(yōu)選為兩個(gè)輕（L)鏈可變結(jié)構(gòu)域（在此縮寫(xiě)為VL)的蛋白 質(zhì)。普通技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到免疫鏈的可變結(jié)構(gòu)域在基因區(qū)段中被編碼，該基因區(qū)段必須首 先進(jìn)行體細(xì)胞重組以形成編碼該可變結(jié)構(gòu)域的完整外顯子。進(jìn)行重排以形成可變結(jié)構(gòu)域的 區(qū)或基因區(qū)段有三種類型：包含可變基因的可變區(qū)、包含多樣性基因的多樣性區(qū)（在免疫 球蛋白重鏈的情況中），以及包含連接基因的連接區(qū)?？梢詫H和VL結(jié)構(gòu)域進(jìn)一步細(xì)分為 被稱為"互補(bǔ)決定區(qū)"（"CDR"）的高變區(qū)，其中穿插有被稱為"骨架區(qū)"（"FR"）的更保守 區(qū)。已經(jīng)精確確定FR和CDR的范圍（參見(jiàn)，Kabat等人（1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest,第 5 版，U. S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242 ;和 Chothia 等人（1987) J. Mol. Biol. 196:901-17,所述文獻(xiàn)在此 以引用的方式并入）。每個(gè)VH和VL結(jié)構(gòu)域通常由按以下順序從氨基末端至羧基末端排列 的三個(gè)CDR和四個(gè)FR構(gòu)成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。如本文使用的，抗體的 抗原結(jié)合片段（或者簡(jiǎn)單地說(shuō)，"抗體部分"或"片段"）是指全長(zhǎng)抗體的保留特異性結(jié)合抗 原的能力的一個(gè)或多個(gè)片段（例如，CD3)。
[0029] 涵蓋在術(shù)語(yǔ)抗體的"抗原結(jié)合片段"內(nèi)的結(jié)合片段的實(shí)例包括（i)Fab片段，其為 由VL、VH、CL和CHl結(jié)構(gòu)域組成的單價(jià)片段；（ii)F(ab'） 2片段，其為包含在鉸鏈區(qū)通過(guò) 二硫橋連接的兩個(gè)Fab片段的二價(jià)片段；（iii) Fd片段，其由VH和CHl結(jié)構(gòu)域組成；（iv) Fv片段，其由抗體的單臂的VL和VH結(jié)構(gòu)域組成；（v)dAb片段（Ward等人（1989)Nature 341:544-46)，其由VH結(jié)構(gòu)域組成；和（vi)分離的互補(bǔ)決定區(qū)（⑶R)。此外，雖然Fv片段 的兩個(gè)結(jié)構(gòu)域VL和VH是由分開(kāi)的基因編碼，但是可以利用重組方法通過(guò)使它們得以制成 單個(gè)蛋白鏈的合成連接子將它們連接，其中VL和VH區(qū)配對(duì)以形成單價(jià)分子（稱為單鏈 Fv(scFv);參見(jiàn)，例如，Bird 等人（1988) Science 242:423-26 ;和 Huston 等人（1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-83)。此類單鏈抗體也旨在涵蓋在術(shù)語(yǔ)抗體的"抗原結(jié)合片 段"內(nèi)。利用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)技術(shù)獲得這些抗體片段，并且以與完整抗體相同的 方式對(duì)片段進(jìn)行實(shí)用性篩選。
[0030] 抗體還可以包括重和/或輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域，從而分別形成重和輕免疫球蛋白鏈。 在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體是兩條重免疫球蛋白鏈和兩條輕免疫球蛋白鏈的四聚體，其中該 重和輕免疫球蛋白鏈通過(guò)例如二硫鍵互相連接。重鏈恒定結(jié)構(gòu)域由三個(gè)基因區(qū)段CH1、CH2 和CH3組成。輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域由一個(gè)基因 CL組成。重鏈和/或輕鏈的可變結(jié)構(gòu)域含有與 抗原相互作用的結(jié)合結(jié)構(gòu)域。該抗體的恒定結(jié)構(gòu)域通常介導(dǎo)抗體與包括免疫系統(tǒng)的各種細(xì) 胞（例如，效應(yīng)細(xì)胞）和經(jīng)典補(bǔ)體系統(tǒng)的第一組分（Clq)在內(nèi)的宿主組織或因子的結(jié)合。
[0031] 所謂編碼人工免疫球蛋白基因座或人工免疫球蛋白鏈的多核苷酸是指重組多核 苷酸，其包含多個(gè)免疫球蛋白區(qū)，例如，包含V基因的可變（V)區(qū)或基因區(qū)段、包含J基因的 連接（J)基因區(qū)或基因區(qū)段、在重鏈基因座的情況中包含D基因的多樣性（D)區(qū)或基因區(qū) 段，和/或包含至少一個(gè)C基因的至少一個(gè)恒定（C)區(qū)。優(yōu)選地，可變結(jié)構(gòu)域的每個(gè)區(qū)，例 如，V、D或J區(qū)，包含或跨越至少兩個(gè)相同類型的基因。例如，如本文使用的可變區(qū)包含至少 兩個(gè)可變基因，連接區(qū)包含至少兩個(gè)連接基因，并且多樣性區(qū)包含兩個(gè)多樣性基因。恒定區(qū) 可以包含僅僅一個(gè)恒定基因，例如κ基因或λ基因，或者多個(gè)基因，例如，CHl、CH2和CH3。
[0032] 如本文使用的，"增強(qiáng)子序列"或"增強(qiáng)子"是指通過(guò)核酸酶消化和對(duì)降解的超敏 性，已經(jīng)在多個(gè)活性基因附近鑒定的序列。超敏位點(diǎn)可以在啟動(dòng)子序列之前，并且它們的活 性強(qiáng)度與該DNA序列相關(guān)。如果增強(qiáng)子功能存在，則與報(bào)告基因的連鎖顯現(xiàn)出升高的轉(zhuǎn)錄 (Mundt等人，J. Immunol.，166, 3315[2001])。在IgH基因座中，已經(jīng)鑒定出兩個(gè)重要的轉(zhuǎn)錄 或表達(dá)調(diào)