一種野生靈芝的育種方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種野生靈芝的育種方法，屬于食用菌遺傳選育技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]野生靈芝，又稱仙草、瑞草、靈芝草，屬擔(dān)子菌綱多孔菌科靈芝屬，是一種以孢子進(jìn)行有性繁殖、以木質(zhì)素為主要碳源養(yǎng)分的藥用真菌，自古以來(lái)就被我國(guó)人民當(dāng)做中草藥利用。靈芝，味甘、性平，歸心、肺、肝、腎經(jīng)，具有補(bǔ)氣養(yǎng)血、養(yǎng)心安神、止咳平咳之功效，主治虛勞、咳嗽、氣喘、失眠、消化不良、惡性腫瘤等病癥。
[0003]靈芝的菌絲體、子實(shí)體和孢子都可入藥，以紫靈芝藥效為最好。紫芝主要含麥角甾醇、有機(jī)酸、氨基葡萄糖、多糖類、樹脂、甘露醇和多糖醇等麥角留醇、樹脂、脂肪酸、甘露醇和多糖類，又含生物堿、內(nèi)酯、香豆精、水溶性蛋白質(zhì)和多種酶類。
[0004]現(xiàn)代科學(xué)證明，靈芝具有滋補(bǔ)、健腦強(qiáng)壯、消炎利尿健胃、抗腫瘤、鎮(zhèn)痛、祛痰、保肝解毒、調(diào)節(jié)血糖、控制血壓、輔助腫瘤放化療、保肝護(hù)肝、促進(jìn)睡眠、提高人體免疫力等功能，還能治療慢性支氣管炎、心腦血管疾病、冠心病、神經(jīng)衰弱、失眠、糖尿病、偏頭痛、血細(xì)胞減少癥、心肌炎，以及陽(yáng)瘺遺精、頻繁性感冒、消除皮膚黑斑、青春痘。
[0005]由于野生靈芝極少，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足人們需求。目前，有關(guān)野生靈芝育種方法的報(bào)道也相對(duì)較少。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種野生靈芝的育種方法，該育種方法能解決野生靈芝的培養(yǎng)擴(kuò)大問(wèn)題，且成品率高。
[0007]本發(fā)明解決上述技術(shù)問(wèn)題的技術(shù)方案如下:一種野生靈芝的育種方法，包括如下工藝步驟:
[0008](I)野生靈芝采集:采集在海拔800?1900m高山生長(zhǎng)的野生靈芝；
[0009](2)配制試管斜面培養(yǎng)基:
[0010]①配制母種培養(yǎng)基；
[0011]②制作試管斜面培養(yǎng)基:將步驟①所得母種培養(yǎng)基分裝于試管中，高壓滅菌30?50分鐘，制成試管斜面培養(yǎng)基后，冷卻；
[0012](3)組織分離:取步驟(I)所得野生靈芝的子實(shí)體，用水沖洗干凈，切去菌柄，再消毒并洗凈后吸干水分，將菌蓋切成兩半，在菌蓋和菌柄連接中央處割成3?5_的菌肉組織片，置于無(wú)菌培養(yǎng)皿內(nèi)，再將組織片接種于步驟(2)②得到的試管斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)，上述操作均在無(wú)菌條件下進(jìn)行，即得組織分離的母種；
[0013](4)菌種接種和培養(yǎng):將步驟(3)所得組織分離的母種，在無(wú)菌狀態(tài)下，接種于步驟(2)②得到的的試管斜面培養(yǎng)基上，繼續(xù)培養(yǎng)，待試管上長(zhǎng)滿菌絲，即得二次母種，并于5?6°C保存；將二次母種在無(wú)菌條件下，轉(zhuǎn)移到另一支步驟(2)②得到的試管斜面培養(yǎng)基中，即得栽培母種；
[0014](5)接種與培養(yǎng):將步驟⑷所得栽培母種接種于原種培養(yǎng)基中，培養(yǎng)，即得原種；再將上述原種接種于栽培種培養(yǎng)基，培養(yǎng)，即得栽培種。
[0015]在上述技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，本發(fā)明還可以做如下改進(jìn)。
[0016]進(jìn)一步，步驟(I)所述野生靈芝為紫芝，形狀為蓋圓形或偏半圓形、直徑為25?35cm、柄長(zhǎng)為8?15cm、顏色為紫黑色。
[0017]進(jìn)一步，步驟(2)所述母種培養(yǎng)基為以下三種培養(yǎng)基中的一種或幾種:
[0018]a、糯米培養(yǎng)基:取糯米100g、葡萄糖25g、瓊脂20g、水lOOOmL，將糯米加水，文火煮20?30分鐘，用2層紗布過(guò)濾，取汁液，然后將上述汁液補(bǔ)充到100mL ；
[0019]b、馬鈴薯培養(yǎng)基:去皮馬鈴薯200g、葡萄糖20g、瓊脂20g、水lOOOmL，馬鈴薯切片，加水lOOOmL，文水煮沸15?20分鐘，4層紗布過(guò)濾，取汁液，然后將上述汁液補(bǔ)充到100mL ；
[0020]C、綜合培養(yǎng)基:去皮馬鈴薯200g、葡萄糖20g、磷酸二氫鉀3g、硫酸鎂1.5g、維生素B11mgJl^g 20g。
[0021]進(jìn)一步，步驟(3)所述子實(shí)體的性狀為出菇早、正常、健壯、朵形大、未成熟，所述消毒并洗凈后吸干水分的具體方法為用體積分?jǐn)?shù)為75%的酒精消毒，然后用無(wú)菌水沖洗，用無(wú)菌紗布吸干水分，所述培養(yǎng)的溫度為25?30°C、環(huán)境為黑暗、培養(yǎng)的時(shí)間為10?15天。
[0022]進(jìn)一步，步驟(4)所述繼續(xù)培養(yǎng)的溫度25?30°C、環(huán)境為黑暗、培養(yǎng)的時(shí)間為10?15天。
[0023]進(jìn)一步，步驟(5)中原種培養(yǎng)基包括質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為70%的玉米粒、24%的木肩、
5%的麥麩、I %的石膏，其制作方法為:取質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為24 %的木肩，先預(yù)濕，取質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為70%的玉米粒，用質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為0.3%的多菌靈浸泡15?20小時(shí)，用清水過(guò)濾一次，再取質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為5%的麥麩、I %的石膏，然后將上述木肩、玉米粒、麥麩、石膏拌勻后裝袋，即得原種培養(yǎng)基袋，在< 1h內(nèi)，置于滅菌鍋中，升溫至100°C，開始計(jì)時(shí)，滅菌20?25小時(shí)，然后待上述原種培養(yǎng)基袋完全冷卻后，移至接種箱，將接種箱密封，消毒I?2小時(shí)后，備用。
[0024]進(jìn)一步，步驟(5)所述栽培種培養(yǎng)基為以下兩種培養(yǎng)基中的一種或兩種的混合:
[0025]a、包括質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為50%的玉米粒、42%的木肩、7%的麥麩、I %的石膏，其制作方法為:取質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為42%的木肩，先預(yù)濕，取質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為50%的玉米粒，用質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為0.3%的多菌靈浸泡15?20小時(shí)，用清水過(guò)濾一次，再取質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為7%的麥麩、I %的石膏，然后將上述木肩、玉米粒、麥麩、石膏拌勻后裝袋，即得栽培種培養(yǎng)基菌袋，在
<1h內(nèi)，置于滅菌鍋中，升溫至100°C，開始計(jì)時(shí)，滅菌20?25小時(shí)，然后待上述栽培種培養(yǎng)基菌袋完全冷卻后，移至接種箱，將接種箱密封，消毒I?2小時(shí)后，備用；
[0026]b、包括質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為70 %的玉米粒、24 %的木肩、5 %的麥麩、I %的石膏，其制作方法為:取質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為24%的木肩，先預(yù)濕，取質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為70%的玉米粒，用質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為0.3%的多菌靈浸泡15?20小時(shí)，用清水過(guò)濾一次，再取質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為5%的麥麩、I %的石膏，然后將上述木肩、玉米粒、麥麩、石膏拌勻后裝袋，即得栽培種培養(yǎng)基菌袋，在
<1h內(nèi)，置于滅菌鍋中，升溫至100°C，開始計(jì)時(shí)，滅菌20?25小時(shí)，然后待上述栽培種培養(yǎng)基菌袋完全冷卻后，移至接種箱，將接種箱密封，消毒I?2小時(shí)后，備用。
[0027]進(jìn)一步，步驟(5)所述培養(yǎng)的溫度均為25?30°C，環(huán)境均為黑暗環(huán)境，培養(yǎng)的時(shí)間均至菌絲長(zhǎng)滿菌袋為止。
[0028]本發(fā)明的有益效果:
[0029](I)本發(fā)明的育種方法所分離出的野生靈芝母種朵形大、產(chǎn)量高、抗雜菌能力強(qiáng)。
[0030](2)本發(fā)明采用糯米培養(yǎng)基作為母種培養(yǎng)基，具有菌絲粗壯潔白、不易老化、菌絲生活力強(qiáng)等特點(diǎn)。
[0031](3)本發(fā)明的原種培養(yǎng)基和栽培種培養(yǎng)基均采用玉米粒培養(yǎng)基，得到的菌種菌絲潔白、旺盛、生長(zhǎng)快，萌發(fā)率100%，具有生長(zhǎng)快、產(chǎn)量高的特點(diǎn)，一般Im3的雜木菌筒6?7年產(chǎn)干品40?60kg。
[0032](4)本發(fā)明的育種方法能解決野生靈芝的培養(yǎng)擴(kuò)大問(wèn)題，且成品率高。
【具體實(shí)施方式】
[0033]以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的原理和特征進(jìn)行描述，所舉實(shí)例只用于解釋本發(fā)明，并非用于限定本發(fā)明的范圍。
[0034]實(shí)施例1:
[0035](I)野生靈芝采集:采集在海拔800?1900m高山生長(zhǎng)的野生靈芝，所述野生靈芝為紫芝，形狀為蓋圓形或偏半圓形、直徑為25?35cm、柄長(zhǎng)為8?15cm、顏色為紫黑色；
[0036](2)配制試管斜面培養(yǎng)基:
[0037]①配制母種培養(yǎng)基:選取儒米培養(yǎng)基:取儒米100g、葡萄糖25g、瓊脂20g、水100mL,將糯米加水，文火煮20?30分鐘，用2層紗布過(guò)濾，取汁液，然后將上述汁液補(bǔ)充到 100mL ；
[0038]②制作試管斜面培養(yǎng)基:將步驟①所得母種培養(yǎng)基分裝于試管中，高壓滅菌30?50分鐘，制成試管斜面培養(yǎng)基后，冷卻；
[0039](3)組織分離:取步驟(I)所得野生靈芝的子實(shí)體，所述子實(shí)體的性狀為出菇早、正常、健壯、朵形大、未成熟，用水沖洗干凈，切去菌柄，再用體積分?jǐn)?shù)為75%的酒精消毒，然后用無(wú)菌水沖洗，用無(wú)菌紗布吸干水分，將菌蓋切成兩半，在菌蓋和菌柄連接中央處割成3?5_的菌肉組織片，置于無(wú)菌培養(yǎng)皿內(nèi)，再將組織片接種于步驟(2)②得到的試管斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)，在溫度為25?30°C的黑暗環(huán)境下培養(yǎng)10?15天，上述操作均在無(wú)菌條件下進(jìn)行，即得組織分離的母種；
[0040](4)菌種接種和培養(yǎng):將步驟(3)所得組織分離的母種，在無(wú)菌狀態(tài)下，接種于步驟(2)②得到的的試管斜面培養(yǎng)基上，繼續(xù)在溫度為25?30°C的黑暗環(huán)境下培養(yǎng)10?15天，待試管上長(zhǎng)滿菌絲，即得二次母種，并于5?6°C保存；將二次母種在無(wú)菌條件下，轉(zhuǎn)移到另一支步驟(2)②得到的試管斜面培養(yǎng)基中，即得栽培母種；
[0041](5)接種與培養(yǎng):將步驟⑷所得栽培母種接種于原種培養(yǎng)基中，在溫度為25?30°C的黑暗環(huán)境下培養(yǎng)至菌絲長(zhǎng)滿菌袋為止，即得原種；再將上述原種接種于栽培種培養(yǎng)基，在溫度為25?30°C的黑暗環(huán)境下培養(yǎng)至菌絲長(zhǎng)滿菌袋為止，即得栽培種；
[0042]其中，原種培養(yǎng)基包括質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為70%的玉米粒、24%的木肩、5%的麥麩、I %的石膏，其制作方法為:取質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為24%的木肩，先預(yù)濕，取質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為70%的玉米粒，用質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為0.3%的多菌靈浸泡15?20小時(shí)，用清水過(guò)濾一次，再取質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為5 %的麥麩、I %的石膏，然后將上述木肩、玉米粒、麥麩、石膏拌勻后裝袋，即得原種培養(yǎng)基袋，在< 1h內(nèi)，置于滅菌鍋中，升溫至100°C，開始計(jì)時(shí)，滅菌20?25小時(shí)，然后待上述原種培養(yǎng)基菌袋完全冷卻后，移至接種箱，將接種箱密封，消毒I?2小時(shí)后，備用。
[0043]所述栽培種培養(yǎng)基包括質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為50%的玉米粒、42%的木肩、7%的麥麩、I %的石膏，其制作方法為:取質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為42%的木肩，先預(yù)濕，取質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為50%的玉米粒，用質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為0.3%的多菌靈浸泡15?20小時(shí)，用清水過(guò)濾一次，再取質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為7 %的麥麩、I %的石膏，然后將上述木肩、玉米粒、麥麩、石膏拌勻后裝袋，即得栽培種培養(yǎng)基袋，在< 1h內(nèi)，置于滅菌鍋中，升溫至100°C，開始計(jì)時(shí)，滅菌20?25小時(shí)，然后待上述栽培種培養(yǎng)基袋完全冷卻后，移至接種箱，將接種箱密封，消毒I?2小時(shí)后，備用。
[0044]實(shí)施例2:
[0045](I)野生靈芝采集:采集在海拔800?1900m高山生長(zhǎng)的野生靈芝，所述野生靈芝為紫芝，形狀為蓋圓形或偏半圓形、直徑為25?35cm、柄長(zhǎng)為8?15cm、顏色為紫黑色；
[0046](2)配制試管斜面培養(yǎng)基:
[0047]①配制母種培養(yǎng)基:選取馬鈴薯培養(yǎng)基:去皮馬鈴薯200g、葡萄糖20g、瓊脂20g、水lOOOmL，馬鈴薯切片，加水lOOOmL，文水