一種文心蘭化學(xué)消毒組培方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種植物組織培養(yǎng)方法，具體涉及一種文心蘭化學(xué)消毒組培方法，屬 生物技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 文心蘭屬蘭科文心蘭屬（Oncidium),又名瘤唇蘭屬，全屬有原生種400多個(gè)。它 花小而繁多，顏色艷麗多彩，形態(tài)變化多樣，花朵連續(xù)不斷開(kāi)放，可持續(xù)1~3個(gè)月，是 上等的盆栽觀賞和切花材料。文心蘭傳統(tǒng)的分株繁殖速度慢，一年僅分2~3個(gè)芽，繁殖 系數(shù)低。通過(guò)組培技術(shù)，可加快繁殖速度，進(jìn)行工廠化生產(chǎn)。實(shí)踐表明，文心蘭在生產(chǎn)上 受病毒病危害，導(dǎo)致質(zhì)量和產(chǎn)量下降，失去商品價(jià)值，造成品質(zhì)退化，應(yīng)用組織培養(yǎng)技術(shù) 快速繁殖文心蘭種苗，利于保持文心蘭的優(yōu)良特性，有效控制病毒危害，因此探索文心蘭 的組培快速繁殖方式具有重要意義。
[0003] 文心蘭組織培養(yǎng)，一方面可以擴(kuò)大其繁殖系數(shù)，從而實(shí)現(xiàn)規(guī)?；敝?；另一方面， 可以在保存其原有的優(yōu)良性狀的基礎(chǔ)上，實(shí)現(xiàn)文心蘭的種質(zhì)資源保存和轉(zhuǎn)基因研宄等。文 心蘭組織培養(yǎng)的成本主要包括組培苗生產(chǎn)所需的培養(yǎng)基、設(shè)施設(shè)備、供電成本、耗材和人工 成本。常規(guī)的文心蘭組織培養(yǎng)方法要求外植體接種在高溫高壓滅菌后的無(wú)菌培養(yǎng)基中才能 正常生長(zhǎng)，耗能大，人工操作成本高。如果能通過(guò)化學(xué)消毒的方法來(lái)改造培養(yǎng)基，使培養(yǎng)基 在不需要進(jìn)行高溫高壓滅菌，就能夠獲得文心蘭的正常生長(zhǎng)。這樣，一方面可以降低文心蘭 組織培養(yǎng)對(duì)設(shè)施設(shè)備的要求，尤其不需要高溫高壓滅菌所需配置的高壓鍋設(shè)備，縮減了投 資成本，電能消耗也將大幅度降低；另一方面，采用這種培養(yǎng)基開(kāi)展文心蘭組織培養(yǎng)，組培 環(huán)節(jié)大為簡(jiǎn)化，人工操作的速度大幅提高，從而降低了人工成本。此外，由于改造后的培養(yǎng) 基自身具有殺菌、抗菌或抑菌作用，能有效控制組織培養(yǎng)過(guò)程中的污染問(wèn)題，又不會(huì)對(duì)文心 蘭生長(zhǎng)產(chǎn)生毒害或抑制，即不影響文心蘭的正常生長(zhǎng)，從根本上簡(jiǎn)化了文心蘭組織培養(yǎng)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種文心蘭化學(xué)消毒組培方法。
[0005] 本發(fā)明的目的是通過(guò)以下方法實(shí)現(xiàn)的。
[0006] 本發(fā)明的一種文心蘭化學(xué)消毒組培方法，包括培養(yǎng)容器消毒、培養(yǎng)基配制、誘導(dǎo)培 養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和瓶苗移栽，其特征在于：
[0007] 1.培養(yǎng)容器消毒：將培養(yǎng)瓶瓶蓋及接種用的不銹鋼盤在100mg/L次氯酸鈉+IOmg/ L乳酸鏈球菌素+100mg/L丙酸鈣的水溶液中浸泡不少于10h，保存?zhèn)溆茫?br>[0008] 2.培養(yǎng)基配制：誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+1~5mg/L6-BA+0. 1~I. 0mg/LNAA+40~ 100mg/L次氯酸鈉+5~10mg/L乳酸鏈球菌素+50~100mg/L丙酸1? +20g/L鹿糖+3.Og/ L瓊脂粉，pH5. 8 ;增殖培養(yǎng)基為：MS+1. 0~3mg/L6-BA+0. 1~I. 0mg/LNAA+40~100mg/L 次氯酸鈉+5~10mg/L乳酸鏈球菌素+50~100mg/L丙酸1? +20g/L鹿糖+3. 0g/L瓊脂粉， pH5. 8 ;壯苗培養(yǎng)基為 MS+0. 1~0? 5mg/L6-BA+0. 5~I. 0mg/LNAA+40~100mg/L次氯酸 鈉+5~lOmg/L乳酸鏈球菌素+50~lOOmg/L丙酸1? +20g/L鹿糖+3. Og/L瓊脂粉，pH5. 8 ; 生根培養(yǎng)基為1/2MS+0. 5~I. 5mg/L NAA+40~100mg/L次氯酸鈉+5~10mg/L乳酸鏈球菌 素+50~100mg/L丙酸鈣+20g/L蔗糖+3. Og/L瓊脂粉，pH5. 8 ;所述MS培養(yǎng)基為1962年， Murashige和Skoog公開(kāi)的MS培養(yǎng)基；所述6-BA，指6-節(jié)氨基嗓吟；所述NAA，指 > -萘乙 酸；配制培養(yǎng)基時(shí)，先稱各培養(yǎng)基配方中蔗糖和瓊脂粉，加培養(yǎng)基總體積1/2的自來(lái)水，加 熱至瓊脂粉完全溶解，再按各培養(yǎng)基配方配齊其他原料后，定容、然后用lmol/L的NaOH或 lmol/L的HCl調(diào)pH值至5. 8,分裝到消毒過(guò)的培養(yǎng)容器中，封口，冷卻凝固后備用；
[0009] 3.誘導(dǎo)培養(yǎng)：從母株上切取葉片尚未展開(kāi)的幼苗，除去外層葉片，用自來(lái)水沖洗 30min，剝?nèi)プ钔饷娴囊粚尤~鞘，在體積比為75%的酒精中浸2~3s，用體積比為0. 1%的 升汞溶液消毒lOmin，取出用無(wú)菌水沖洗3次后，然后在無(wú)菌條件下剝?nèi)№斞炕騻?cè)芽，切 取0. 5~1mm，的莖尖，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)25d后形成大量原球莖；培養(yǎng)室溫度為 26°C，光照12h，光照強(qiáng)度為14001x ;
[0010] 4.增殖培養(yǎng)：將生長(zhǎng)健壯的原球莖轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中，30d后開(kāi)始分化，逐步誘導(dǎo) 出叢生芽并發(fā)育成不具根的幼芽；每30d轉(zhuǎn)接一次，獲得大量幼芽；培養(yǎng)室溫度為26°C，光 照12h，光照強(qiáng)度為14001x ;
[0011] 5.壯苗培養(yǎng)：將增殖培養(yǎng)的幼芽接種到壯苗培養(yǎng)基上，30d成為高度為6~8cm叢 生芽苗；培養(yǎng)室溫度為26°C，光照12h，光照強(qiáng)度為14001x;
[0012] 6.生根培養(yǎng)：取高度為6~8cm叢生芽苗，切成單株，接種到生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng) 25d后成為完整植株；培養(yǎng)室溫度為25°C，光照12h，光照強(qiáng)度為15001x ;
[0013] 7.瓶苗移栽：將生根培養(yǎng)獲得的完整植株取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，用800倍的多 菌靈浸泡30min后，移栽至透水性好的水草中，大棚上層用遮光網(wǎng)遮蓋，移栽的環(huán)境溫度為 22 ~28。。。
[0014] 本發(fā)明的應(yīng)用效果：
[0015] 由于本發(fā)明的化學(xué)消毒組培方法，是利用化學(xué)試劑添加到各種培養(yǎng)基中，達(dá)到滅 菌或抑菌的作用，所以，配制的培養(yǎng)基是無(wú)需高溫高壓滅菌。因此，在文心蘭誘導(dǎo)培養(yǎng)、增殖 培養(yǎng)、壯苗培養(yǎng)、生根培養(yǎng)各個(gè)階段的影響，除了要考慮常用的評(píng)價(jià)指標(biāo)外，還要考慮污染 率的問(wèn)題。
[0016] 1.誘導(dǎo)培養(yǎng)：通過(guò)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，本發(fā)明的一種文心蘭的化學(xué)消毒組培方法與常規(guī)的 文心蘭組培方法相比，結(jié)果如表1所示，在誘導(dǎo)培養(yǎng)階段的外植體培養(yǎng)的成活率、污染率和 死亡率都沒(méi)有太大差異。
[0017] 表1本發(fā)明的化學(xué)消毒組培方法對(duì)文心蘭誘導(dǎo)培養(yǎng)的影響
[0018]
[0019] 2.增殖培養(yǎng)：本發(fā)明的化學(xué)消毒組培方法與常規(guī)組培文心蘭的增殖倍數(shù)和污染 率的比較，結(jié)果如表2所示，增殖倍數(shù)和污染率二個(gè)指標(biāo)都沒(méi)有太大差異。在瓶苗的生長(zhǎng)狀 況看，本發(fā)明的化學(xué)消毒組培方法的培養(yǎng)基由于不經(jīng)過(guò)高溫高壓滅菌，激素和營(yíng)養(yǎng)元素?fù)p 失較少，其文心蘭組培苗更綠，更壯。
[0020] 表2本發(fā)明的化學(xué)消毒組培方法對(duì)文心蘭增殖倍數(shù)和污染率的影響
[0021]
[0022] 3.壯苗培養(yǎng)：壯苗培養(yǎng)的試驗(yàn)結(jié)果如表3所示，本發(fā)明的文心蘭化學(xué)消毒組培方 法的每瓶平均壯苗數(shù)明顯高于常規(guī)的文心蘭組培方法，瓶苗也更壯、更綠。在污染率方面沒(méi) 有差異。
[0023] 表3本發(fā)明的化學(xué)消毒組培方法對(duì)文心蘭壯苗數(shù)和污染率的影響
[0024]
[0025] *苗高大于2cm的瓶苗為壯苗
[0026] 4本發(fā)明的化學(xué)消毒組培方法對(duì)文心蘭生根率和污染率的影響：在生根過(guò)程中， 本發(fā)明的化學(xué)消毒組培方法與常規(guī)的文心蘭組培方法相比，結(jié)果如表4所示，生根率和污 染率都沒(méi)有太大差異；從瓶苗的生長(zhǎng)狀況看，用本發(fā)明的方法，文心蘭組培苗莖更粗，葉片 更大。
[0027] 表4本發(fā)明的化學(xué)消毒組培方法的文心蘭瓶苗生根情況
[0028]
[0029] 5.成本分析：本發(fā)明的化學(xué)消毒組培方法與常規(guī)組培的成本分析見(jiàn)表5。
[0030] 本發(fā)明組培省去了高壓滅菌環(huán)節(jié)，簡(jiǎn)化了組培程序，提高了工作效率。從可以直 接計(jì)算出來(lái)的費(fèi)用來(lái)算，每年可以節(jié)約5萬(wàn)元左右（以每天配制50L培養(yǎng)基計(jì)算）。另外， 還有一些不容易計(jì)算的項(xiàng)目，如高壓鍋維修，安全，節(jié)約空間等。
[0031] 表5本發(fā)明的文心蘭簡(jiǎn)便組培方法培養(yǎng)與常規(guī)組培的成本分析表
[0032]
[0033] 本發(fā)明具有如下有益效果：
[0034] 1.本發(fā)明的文心蘭化學(xué)消毒組培方法中，培養(yǎng)容器和培養(yǎng)基都無(wú)需高溫高壓滅 菌，減少了工作量和能源消耗，簡(jiǎn)化了文心蘭組培環(huán)節(jié)，降低了文心蘭組培成本。
[0035] 2.本發(fā)明的文心蘭化學(xué)消毒組培方法，操作簡(jiǎn)單，只要按不同的培養(yǎng)基配方配制 后即可，實(shí)用性強(qiáng)，推廣性好。
[0036] 3.本發(fā)明的文心蘭化學(xué)消毒組培方法與常規(guī)的文心蘭組培方法對(duì)比，可以降