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    華東覆盆子組培擴(kuò)繁方法及應(yīng)用

    文檔序號:39729481發(fā)布日期:2024-10-22 13:34閱讀:62來源:國知局
    華東覆盆子組培擴(kuò)繁方法及應(yīng)用

    本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng),具體來說是一種華東覆盆子組培擴(kuò)繁方法及應(yīng)用。


    背景技術(shù):

    1、華東覆盆子(rubus?chingii?hu)薔薇科植物。以果實(shí)入藥,具有益腎固精縮尿,養(yǎng)肝明目之功效,常用于遺精滑精,遺尿尿頻,陽痿早泄,目暗昏花。

    2、華東覆盆子苗木一般采用根蘗繁殖和扦插繁殖。分株繁殖:每年春季、秋季都會產(chǎn)生大量的根蘗枝,當(dāng)長到1-1.3m時進(jìn)行摘心,并松土進(jìn)行溝狀施肥,促進(jìn)不定根發(fā)育,季末或春初可進(jìn)行分株,每根母株每年可分株2-10株苗。扦插繁殖:在春季發(fā)芽前,剪取具芽的木質(zhì)化枝條,剪成10cm左右,插于排水良好的育苗床蓋好地膜,成活率40%左右。

    3、cn105918126a公開了一種掌葉覆盆子脫毒種苗的離體快繁方法;cn117322331a公開了一種掌葉覆盆子組織培養(yǎng)優(yōu)質(zhì)種苗繁殖方法;王利平等.優(yōu)質(zhì)掌葉覆盆子快繁體系的建立.《浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)》.2013?,(第8期),第967-970頁。但是,針對華東覆盆子組織快速繁殖的方法至今未見報道。


    技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

    1、本發(fā)明的目的是提供一種華東覆盆子組培擴(kuò)繁方法及應(yīng)用,實(shí)現(xiàn)華東覆盆子的快速繁殖。

    2、為實(shí)現(xiàn)上述目的,本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:一種華東覆盆子組培擴(kuò)繁方法,步驟包括:

    3、(1)外植體的選擇與清潔:選擇端部15~25cm的未木質(zhì)化幼嫩莖段,去掉葉片,剪成2~3cm的具芽小段,用自來水沖淋30~40min,后用飽和肥皂液涮洗10~15min,后用清水漂洗至無明顯肥皂液殘留,滴加2~3滴吐溫-80,震搖10~15min,最后用自來水沖淋50~70min;

    4、(2)外植體的消毒:將清潔好的外植體轉(zhuǎn)移至超凈工作臺,依次用75%酒精、飽和漂白粉溶液、75%酒精和0.08%升汞消毒;

    5、(3)初代叢生芽誘導(dǎo):將消毒好的外植體用無菌紙吸去表面水分,剪去兩端傷口,接種于初代叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,并置于光強(qiáng)3000~4000lx,單日光照10h,溫度25±2℃的環(huán)境下培養(yǎng)40~50天;

    6、所述初代叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為:wpm培養(yǎng)基+naa?0.02~0.05mg/l+?cppu0.10~0.15mg/l+tdz?2.0~3.0mg/l;

    7、(4)繼代增殖培養(yǎng):經(jīng)初代誘導(dǎo)培養(yǎng)獲得叢生芽剪成單芽,接種于繼代增殖培養(yǎng)基中,并置于光強(qiáng)3000~4000lx,單日光照10h,溫度25±2℃的環(huán)境下培養(yǎng)25~35天;

    8、所述繼代增殖培養(yǎng)基的配方為:改良ms培養(yǎng)基+iba?0.1~0.2mg/l+tdz?1.0~2.0mg/l+kt?5.0~6.0mg/l;

    9、(5)生根培養(yǎng):經(jīng)繼代增殖培養(yǎng)獲得的叢生芽剪成單芽,接種于生根培養(yǎng)基中,置于溫度28±2℃的全黑暗環(huán)境下培養(yǎng)5~7天,后置于光強(qiáng)3000~4000lx,單日光照10h,溫度25±2℃的全黑暗環(huán)境下培養(yǎng)30~35天;

    10、所述生根培養(yǎng)基的配方為:1/4改良ms培養(yǎng)基+iba?0.4~0.6mg/l+椰汁50~70ml/l+ac?0.2~0.4g/l;

    11、所述改良ms培養(yǎng)基的配方為:硫酸鎂使用量調(diào)整為0.50g/l,硫酸亞鐵使用量調(diào)整為0.064g/l,edta-二鈉使用量調(diào)整為0.087g/l,二水氯化鈣使用量調(diào)整為0.33g/l,ph調(diào)整為5.4,其余成分不變。

    12、進(jìn)一步的:步驟(2)中,所述消毒具體為:75%酒精消毒50~60s、無菌水涮洗3~4次,飽和漂白粉溶液消毒15~20min、無菌水涮洗4~5次,75%酒精消毒5~10s、無菌水涮洗2~3次,0.08%升汞溶液消毒8~9min、無菌水涮洗6~7次。

    13、進(jìn)一步的:步驟(3)中,所述初代叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為:wpm培養(yǎng)基+naa0.03mg/l+?cppu?0.12mg/l+tdz?2.5mg/l。

    14、進(jìn)一步的:步驟(4)中,所述繼代增殖培養(yǎng)基的配方為:改良ms培養(yǎng)基+iba0.15mg/l+tdz?1.5mg/l+kt?5.5mg/l。

    15、進(jìn)一步的:步驟(5)中,所述生根培養(yǎng)基的配方為:1/4改良ms培養(yǎng)基+iba?0.5mg/l+椰汁60ml/l+ac?0.3g/l。

    16、本發(fā)明的有益技術(shù)效果是:

    17、1、本發(fā)明采用的消毒方法,采用了75%酒精、飽和漂白粉溶液和0.08%升汞溶液的有機(jī)搭配,在不損傷外植體的前提下能最大程度的降低污染率,使得無菌體系建立過程中的污染率降低到5%以下,使華東覆盆子在無菌體系建立過程中成功率高達(dá)90%以上。

    18、2、華東覆盆子在初代誘導(dǎo)過程中,絕大部分出現(xiàn)葉片展開但發(fā)生叢生芽,本發(fā)明在初代叢生芽誘導(dǎo)研究時發(fā)現(xiàn),采用華東覆盆子對cppu極其敏感,濃度過低時,不能誘導(dǎo)出叢生芽,而當(dāng)濃度過高時,極易導(dǎo)致外植體褐化甚至壞死,且亦不能誘導(dǎo)叢生芽,本發(fā)明在初代叢生芽誘導(dǎo)時,采用適宜濃度的naa?、cppu和tdz的有機(jī)組合,可使叢生芽誘導(dǎo)率從常規(guī)植物生長調(diào)節(jié)劑組合的10%左右提高到70%以上。

    19、3、naa對華東覆盆子有明顯的抑制生根作用,當(dāng)在繼代培養(yǎng)基中采用naa時,無論多大濃度,均會降低生根培養(yǎng)時的生根率,延長生根時間,因此,在繼代增殖培養(yǎng)時,采用iba代替naa,一方面能達(dá)到增殖效果,另一方面有利于生根培養(yǎng)時的生根,與此同時,華東覆盆子對cppu過于敏感,導(dǎo)致在繼代增殖培養(yǎng)時,極易使得cppu積累而使增殖系數(shù)不穩(wěn)定且會造成毒害,且cppu使用成本較高,最終不利于工廠化生產(chǎn),本發(fā)明在繼代增殖培養(yǎng)時,采用iba與tdz以及kt的組合,可使增殖系數(shù)穩(wěn)定達(dá)到4.0以上。

    20、4、本發(fā)明創(chuàng)造性的在生根培養(yǎng)基中添加椰汁,同時采用高溫?zé)o光照暗培養(yǎng)5~7天結(jié)合常規(guī)培養(yǎng)環(huán)境30~35天,一方面可將生根時間由不添加椰汁的55~65天,縮短到35~40天,另一方面可將生根率提高至99%以上,同時還可促使苗更加粗壯,更加有利于馴化的成活。

    21、5、在增殖培養(yǎng)和生根培養(yǎng)過程中,采用組培常用的wpm、ms、n6、b5等基本培養(yǎng)基時,華東覆盆子大多會出現(xiàn)葉片在皺縮、葉片黃化等不健康狀態(tài),當(dāng)采用最為經(jīng)典的ms作為基本培養(yǎng)基時,癥狀有所改善但不能杜絕,本發(fā)明創(chuàng)造性的改變鐵鹽、鈣鹽以及鎂鹽的使用濃度,同時降低ph,可完全杜絕葉片皺縮、葉片黃化等不健康狀態(tài)的發(fā)生,減少工廠化生產(chǎn)時的商品苗損失。



    技術(shù)特征:

    1.華東覆盆子組培擴(kuò)繁方法,其特征在于,步驟包括:

    2.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法,其特征在于:步驟(2)中,所述消毒具體為:75%酒精消毒50~60s、無菌水涮洗3~4次,飽和漂白粉溶液消毒15~20min、無菌水涮洗4~5次,75%酒精消毒5~10s、無菌水涮洗2~3次,0.08%升汞溶液消毒8~9min、無菌水涮洗6~7次。

    3.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法,其特征在于:步驟(3)中,所述初代叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為:wpm培養(yǎng)基+naa?0.03mg/l+?cppu?0.12mg/l+tdz?2.5mg/l。

    4.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法,其特征在于:步驟(4)中,所述繼代增殖培養(yǎng)基的配方為:改良ms培養(yǎng)基+iba?0.15mg/l+tdz?1.5mg/l+kt?5.5mg/l。

    5.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法,其特征在于:步驟(5)中,所述生根培養(yǎng)基的配方為:1/4改良ms培養(yǎng)基+iba?0.5mg/l+椰汁60ml/l+ac?0.3g/l。

    6.根據(jù)權(quán)利要求1~5任一項(xiàng)所述方法在華東覆盆子組培擴(kuò)繁中的應(yīng)用。


    技術(shù)總結(jié)
    本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域,具體來說是一種華東覆盆子組培擴(kuò)繁方法及應(yīng)用;步驟包括:選擇外植體進(jìn)行清潔并消毒,消毒好的外植體接種于初代叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng),獲得叢生芽剪成單芽接種于繼代增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng),獲得的叢生芽剪成單芽接種于生根培養(yǎng)基中。本發(fā)明方法污染率降低到5%以下,叢生芽誘導(dǎo)率從常規(guī)植物生長調(diào)節(jié)劑組合的10%左右提高到70%以上,增殖系數(shù)穩(wěn)定達(dá)到4以上,生根率提高至99%以上,同時還可促使苗更加粗壯,更加有利于馴化的成活。

    技術(shù)研發(fā)人員:許宗亮,張金渝,曾祥飛,左應(yīng)梅,楊如玉,楊美權(quán),楊天梅,鄧清,楊維澤,魏春麗,楊朝龍,張潔
    受保護(hù)的技術(shù)使用者:云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院藥用植物研究所
    技術(shù)研發(fā)日:
    技術(shù)公布日:2024/10/21
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