本發(fā)明涉及植物組培，具體來說是一種紅寶石簇銀葉蠟菊組培快繁方法及應用。

背景技術：

1、銀葉蠟菊（學名：jacobaea?maritima）是桔梗目菊科臘菊屬的植物，為多年生草本，根狀莖粗厚，花莖直立，被灰白色密棉毛，下部不脫毛，頭狀花序倒圓錐形或鐘形，十余個或數十個在莖或枝端排列成復傘房花序；花序梗長被棉毛。

2、銀葉蠟菊的花語有純潔的愛、高雅的氣質、堅韌不拔和美好的回憶等。它的花朵潔白如雪，象征著純潔無暇的愛情；其形態(tài)優(yōu)雅，葉片如蠟般晶瑩剔透，寓意高雅的氣質；銀葉蠟菊生命力較強，在惡劣環(huán)境下也能頑強生長，代表堅韌不拔的精神；同時，它的花色豐富，形態(tài)各異，能給人留下深刻的印象，贈送銀葉蠟菊也可以表達留下美好回憶的愿望。

3、銀葉蠟菊可布置花壇花境，也可盆栽觀賞，還可用其作干燥花、切花和插花。銀葉蠟菊一般采用種子繁殖和扦插繁殖兩種方法。其中種子繁殖方法一般在12月份溫室播種，苗期生長緩慢。扦插繁殖方法是一般在2月末至3月15日之前，剪取10cm左右的嫩梢，刀前處的傷口可沾生根僂，去除基部的兩片葉子，再扦插到排水良好的砂質土壤。但扦插繁殖存在繁殖率低、繁殖周期長、生產成本高，且短時間無法實現大規(guī)模量產，因此需要開發(fā)一種紅寶石簇銀葉蠟菊組培快繁方法。

技術實現思路

1、本發(fā)明的目的是提供一種紅寶石簇銀葉蠟菊組培快繁方法及應用，以解決傳統(tǒng)繁殖方法慢、周期長的問題。

2、為實現上述目的，本發(fā)明采用的技術方案是：紅寶石簇銀葉蠟菊組培快繁方法，步驟包括：

3、（1）外植體選擇與清潔：取紅寶石簇銀葉蠟菊基部叢生芽，洗凈；

4、（2）外植體消毒：外植體依次用雙氧水、硝酸銀與吐溫-80的混合溶液，75%酒精消毒，升汞與吐溫-80的混合溶液消毒；

5、（3）初代叢生芽誘導：將消毒好的外植體接種于初代叢生芽誘導培養(yǎng)基中，溫度25±2℃，光強為2000～3000lx，光照時長為10h/d下光暗交替培養(yǎng)40～50d；

6、所述初代叢生芽誘導培養(yǎng)基配方為：ms培養(yǎng)基+iba?0.05～0.1mg/l+?tdz?1.0～2.0mg/l+cppu?0.2～0.3mg/l；

7、（4）繼代叢生芽增殖：誘導出的叢生芽剪成單芽，并剪下葉片，同時葉片剪成1～1.5cm小段，單芽接種于叢生芽繼代增殖培養(yǎng)基a中，溫度25±2℃，光強為2000～3000lx，光照時長為10h/d下光暗交替培養(yǎng)30～35d；葉片接種于叢生芽繼代增殖培養(yǎng)基b中，溫度25±2℃，全黑暗條件下培養(yǎng)10～15d，待傷口開始現白后在溫度25±2℃，光強為2000～3000lx，光照時長為10h/d下光暗交替繼續(xù)培養(yǎng)30～35d；

8、所述叢生芽繼代增殖培養(yǎng)基a配方為：ms培養(yǎng)基+iba?0.02～0.05mg/l+tdz?0.5～1.0mg/l+br?1.0～2.0ug/l；

9、所述叢生芽繼代增殖培養(yǎng)基b配方為：ms培養(yǎng)基+2,4-d?0.2～0.4mg/l+6-ba?2.0～3.0mg/l+tdz?3.0～4.0mg/l；

10、（5）叢生芽生根：將通過繼代獲得的叢生芽剪成單芽，接種于生根培養(yǎng)基中，溫度25±2℃，光強為2000～3000lx，光照時長為10h/d下光暗交替培養(yǎng)20～25d；

11、所述生根培養(yǎng)基配方為：1/2wpm培養(yǎng)基+iba?0.5～0.7mg/l+2,4-d?0.05～0.1mg/l+蘋果泥5～10mg/l。

12、進一步的，步驟（2）中，所述消毒具體為：1%雙氧水、0.1%硝酸銀與2～3滴吐溫-80的混合溶液靜置消毒12～24h，無菌水洗涮4～5次；75%酒精振搖消毒30～40s，無菌水洗涮2～3次；0.05%升汞溶液加入2～3滴吐溫-80振搖消毒5～6min，無菌水洗涮6～7次。

13、進一步的，步驟（3）中，所述初代叢生芽誘導培養(yǎng)基配方為：ms培養(yǎng)基+iba0.07mg/l+?tdz?1.5mg/l+cppu?0.25mg/l。

14、進一步的，步驟（4）中，所述叢生芽繼代增殖培養(yǎng)基a配方為：ms培養(yǎng)基+iba0.03mg/l+tdz?0.7mg/l+br?1.5ug/l。

15、進一步的，步驟（4）中，所述叢生芽繼代增殖培養(yǎng)基b配方為：ms培養(yǎng)基+2,4-d0.3mg/l+6-ba?2.5mg/l+tdz?3.5mg/l。

16、進一步的，步驟（5）中，所述生根培養(yǎng)基配方為：1/2wpm培養(yǎng)基+iba?0.6mg/l+2,4-d?0.08mg/l+蘋果泥7mg/l。

17、本發(fā)明的有益技術效果是：

18、1、紅寶石莖葉均包被大量絨毛，當采用常規(guī)的75%酒精與0.1%升汞溶液消毒時，無論時間怎么組合，要么出現大量污染，要么出現一定污染但外植體大量死亡，將絨毛用小刀刮去時，長時消毒時，污染率可大幅下降，但外植體幾乎不能承受消毒劑而導致死亡或受損不能萌發(fā)，本發(fā)明在消毒初期采用適宜濃度的雙氧水、硝酸銀與吐溫-80組成的混合液靜置12～24h，一方面有利于表層微生物的殺滅，另一方面，還可增加外植體的表面活性，搭配酒精和低濃度升汞溶液，有利于將外植體的微生物基本殺滅，同時對外植體的損傷降到最低。

19、2、本發(fā)明在初代誘導培養(yǎng)時采用naa、tdz、cppu的組合，可使初代叢生芽誘導率高達100%，且叢生芽分蘗率高。

20、3、本發(fā)明在繼代叢生芽增殖培養(yǎng)時，既利用了分蘗的叢生芽，又利用了叢生芽的葉片，其綜合增殖系數可達20以上，而在組培領域，增殖系數的增加，可大幅縮短生產周期，減少母瓶用量，從而大幅降低了生產成本以及管理成本。

21、4、本發(fā)明在生根培養(yǎng)時，采用適宜濃度的iba和2,4-d的組合，同時添加適宜濃度的蘋果泥，一方面可使生根率穩(wěn)定達到100%，且在繼代增殖過程中的玻璃化苗亦可去玻璃化，且苗健壯翠綠。

技術特征：

1.紅寶石簇銀葉蠟菊組培快繁方法，其特征在于，步驟包括：

2.根據權利要求1所述方法，其特征在于，步驟（2）中，所述消毒具體為：1%雙氧水、0.1%硝酸銀與2～3滴吐溫-80的混合溶液靜置消毒12～24h，無菌水洗涮4～5次；75%酒精振搖消毒30～40s，無菌水洗涮2～3次；0.05%升汞溶液加入2～3滴吐溫-80振搖消毒5～6min，無菌水洗涮6～7次。

3.根據權利要求1所述方法，其特征在于，步驟（3）中，所述初代叢生芽誘導培養(yǎng)基配方為：ms培養(yǎng)基+iba?0.07mg/l+?tdz?1.5mg/l+cppu?0.25mg/l。

4.根據權利要求1所述方法，其特征在于，步驟（4）中，所述叢生芽繼代增殖培養(yǎng)基a配方為：ms培養(yǎng)基+iba?0.03mg/l+tdz?0.7mg/l+br?1.5ug/l。

5.根據權利要求1所述方法，其特征在于，步驟（4）中，所述叢生芽繼代增殖培養(yǎng)基b配方為：ms培養(yǎng)基+2,4-d?0.3mg/l+6-ba?2.5mg/l+tdz?3.5mg/l。

6.根據權利要求1所述方法，其特征在于，步驟（5）中，所述生根培養(yǎng)基配方為：1/2wpm培養(yǎng)基+iba?0.6mg/l+2,4-d?0.08mg/l+蘋果泥7mg/l。

7.根據權利要求1～6任一項所述方法在紅寶石簇銀葉蠟菊組培快繁中的應用。

技術總結
本發(fā)明涉及植物組培技術領域，具體來說是一種紅寶石簇銀葉蠟菊組培快繁方法及應用；步驟包括：外植體選擇與清潔、外植體消毒、初代叢生芽誘導、繼代叢生芽增殖和叢生芽生根。本發(fā)明方法消毒污染率8%、消毒死亡率24%，初代叢生芽誘導率高達100%，綜合增殖系數可達20以上，生根率穩(wěn)定達到100%，且在繼代增殖過程中的玻璃化苗亦可去玻璃化，且苗健壯翠綠。大幅縮短生產周期，從而大幅降低了生產成本以及管理成本。

技術研發(fā)人員：唐宗英,楊燕,龔海濤,李雪娟
受保護的技術使用者：云南林業(yè)職業(yè)技術學院
技術研發(fā)日：
技術公布日：2024/10/21