本發(fā)明涉及茶樹花粉的采集和貯藏，具體說是一種茶樹花粉的采集貯藏方法。

背景技術(shù)：

茶樹雜交育種已成為資源創(chuàng)新和品種改良的主要途徑之一。茶樹雜交育種研究中經(jīng)常會遇到父母本花期不遇或外地優(yōu)異資源花粉引進(jìn)利用等問題，這就必須采集相關(guān)品種花粉后進(jìn)行保存和貯藏，延長花粉壽命，以保持花粉生活力。目前，影響花粉壽命的因素主要是遺傳因子(品種)、溫度與相對濕度，而不同品種的茶樹花粉生活力與貯藏溫度、濕度的關(guān)系卻鮮有報導(dǎo)。本發(fā)明探求一種新的茶樹花粉貯藏有效而簡便的方法，為優(yōu)異資源創(chuàng)新利用、雜交親本的選配、制定有效育種方案提供理論依據(jù)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種可延長花粉壽命的茶樹花粉的采集貯藏方法。

本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為：一種茶樹花粉的采集貯藏方法，其包括以下步驟：

(1)采集茶樹上松動的、乳白色的含苞欲放的花蕾，將其存放在干燥器內(nèi)干燥；

(2)然后取出花蕾，敲取花粉；

(3)再將花粉放入密閉容器內(nèi)密封；

(4)最后貯藏密封后的花粉。

作為優(yōu)選，將采集的所述花蕾用羊皮紙袋裝好，再存放在裝有變色硅膠的所述干燥器內(nèi)。

作為優(yōu)選，干燥溫度為室溫，時間為20-24h。

作為優(yōu)選，用鑷子夾住花蕾的花柄，再敲打振動使花粉散落在培養(yǎng)皿中，然后用羊皮紙袋包好花粉。

作為優(yōu)選，所述密閉容器采用指形管，用羊皮紙袋包好的花粉放入該指形管內(nèi)密封。

作為優(yōu)選，先在所述指形管底部放入1/3管變色硅膠，并用少量脫脂棉將其固定；然后將用羊皮紙袋包好的花粉放入指形管內(nèi)，最后放入脫脂棉固定花粉。

作為優(yōu)選，用保鮮膜密封所述指形管。

作為優(yōu)選，貯藏溫度為-20℃至室溫。

從以上技術(shù)方案可知，本發(fā)明可在父本花期早于母本以及從外地引進(jìn)優(yōu)異品種花粉時，對采集的新鮮花粉進(jìn)行貯藏和保存；該方法簡便有效，能延長花粉壽命，保持花粉生活力。

具體實(shí)施方式

下面將詳細(xì)說明本發(fā)明，在此本發(fā)明的示意性實(shí)施例以及說明用來解釋本發(fā)明，但并不作為對本發(fā)明的限定。

一種茶樹花粉的采集貯藏方法，其包括以下步驟：

首先，采集茶樹上松動的、乳白色的含苞欲放的花蕾，將其存放在干燥器內(nèi)干燥；一般在秋季晴朗天，盛花期采集茶樹中上部發(fā)育良好的松動、乳白色的含苞欲放的花蕾，用羊皮紙袋裝好置于放有變色硅膠的干燥器中，在室溫下干燥20-24h。本發(fā)明中，羊皮紙袋透氣性好，可防止霉變；變色硅膠有干燥效果；將花蕾存放于干燥器20-24小時后，有利于花粉的干燥后熟，便于取粉。

然后取出花蕾，敲取花粉；具體是用鑷子夾住花柄，輕輕敲打振動，使花粉散落在培養(yǎng)皿中，然后用羊皮紙袋包好花粉；用該方法取粉，花粉易脫落，取粉量多，花粉生活力強(qiáng)，發(fā)芽率高。

再將花粉放入密閉容器內(nèi)密封；所述密閉容器采用指形管，用羊皮紙袋包好的花粉放入該指形管內(nèi)密封；具體來說，先在所述指形管底部放入1/3管變色硅膠，并用少量脫脂棉將其固定；然后將用羊皮紙袋包好的花粉放入指形管內(nèi)，最后放入脫脂棉固定花粉，并用保鮮膜密封所述指形管；指形管方便易貯藏，放入硅膠后放入脫脂棉是用于固定管中的硅膠，最后放入脫脂棉和用保鮮膜封口都是為了更好的密閉，防吸水。

最后貯藏密封后的花粉，貯藏溫度為-20℃至室溫。由于花粉生活力的喪失是一個連續(xù)的過程，并沒有一個明顯的界限標(biāo)識，也就是說，在研究花粉生活力的時候，需要確定一個闕值來表示試驗(yàn)結(jié)果。一般以花粉存活時間為衡量標(biāo)準(zhǔn)，即將花粉萌發(fā)率大于50％時定義為花粉存活時間，而通過本發(fā)明的方法可使花粉在室溫、4℃、-20℃條件下分別保存7天、20-30天、30-40天，花粉萌發(fā)率最高仍可達(dá)60％以上，具有較強(qiáng)的生活力。

本發(fā)明的參試品種為湖南省茶研所實(shí)驗(yàn)茶場種質(zhì)資源圃中的保靖黃金茶1號、藪北種、福鼎大白茶、佛香3號四個品種。保靖黃金茶1號是湖南省省級良種，灌木型，中葉類，特早生種；福鼎大白茶屬國家級良種，小喬木型，中葉類，早生種；藪北種是日本選育的茶樹良種，灌木型，中小葉類，中生種；佛香3號是云南省省級良種，小喬木型，大葉類，早生種。

花粉生活力的測定采用離體萌發(fā)測定法，即根據(jù)花粉離體后不同時間及不同貯藏條件的萌發(fā)率判斷生活力。培養(yǎng)基配置：1％瓊脂+300mg/LCa(NO3)2+200mg/L MgSO4+100mg/L KNO3+10％蔗糖+100mg/L H3BO3。操作方法：用解剖針將花粉均勻撒播在滴有該培養(yǎng)基的載玻片上，然后將載玻片置于鋪有濕潤濾紙的培養(yǎng)皿中，于25℃的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)6h后觀察花粉萌發(fā)情況。每個處理3次重復(fù)，每個載玻片上取3個視野，以花粉管長度大于花粉直徑時記為萌發(fā)，記錄每個視野的發(fā)芽率(萌發(fā)的花粉數(shù)/總的花粉數(shù)×100％)，取其平均值作為該處理的花粉萌發(fā)率。數(shù)據(jù)采用SPSS20軟件進(jìn)行處理，計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，對不同時間、不同茶樹品種花粉萌發(fā)率的比較采用重復(fù)測量資料的方差分析。

實(shí)施例1

在10月中旬晴朗天，分別采摘保靖黃金茶1號、藪北種、福鼎大白茶、佛香3號四種含苞欲放的花蕾，分別用羊皮紙袋裝好置于放有變色硅膠的干燥器中，在室溫下干燥20h；再用鑷子夾住花柄，輕輕敲打振動，使花粉分別散落在培養(yǎng)皿中，然后分別用羊皮紙袋包好花粉；接著在四個指形管底部分別放入1/3管變色硅膠，并用少量脫脂棉將其固定；然后將用羊皮紙袋包好的四種花粉分別放入指形管內(nèi)，接著放入脫脂棉固定花粉，并用保鮮膜密封；最后室溫貯藏密封后的四種花粉，測定結(jié)果如表1：

表1 室溫貯藏條件下不同茶樹品種的花粉萌發(fā)率(％)

實(shí)施例2

在10月中旬晴朗天，分別采摘保靖黃金茶1號、藪北種、福鼎大白茶、佛香3號四種含苞欲放的花蕾，分別用羊皮紙袋裝好置于放有變色硅膠的干燥器中，在室溫下干燥22h；再用鑷子夾住花柄，輕輕敲打振動，使花粉分別散落在培養(yǎng)皿中，然后分別用羊皮紙袋包好花粉；接著在四個指形管底部分別放入1/3管變色硅膠，并用少量脫脂棉將其固定；然后將用羊皮紙袋包好的四種花粉分別放入指形管內(nèi)，接著放入脫脂棉固定花粉，并用保鮮膜密封；最后4℃貯藏密封后的四種花粉，測定結(jié)果如表2：

表2 4℃貯藏條件下不同茶樹品種的花粉萌發(fā)率(％)

實(shí)施例3

在10月中旬晴朗天，分別采摘保靖黃金茶1號、藪北種、福鼎大白茶、佛香3號四種含苞欲放的花蕾，分別用羊皮紙袋裝好置于放有變色硅膠的干燥器中，在室溫下干燥24h；再用鑷子夾住花柄，輕輕敲打振動，使花粉分別散落在培養(yǎng)皿中，然后分別用羊皮紙袋包好花粉；接著在四個指形管底部分別放入1/3管變色硅膠，并用少量脫脂棉將其固定；然后將用羊皮紙袋包好的四種花粉分別放入指形管內(nèi)，接著放入脫脂棉固定花粉，并用保鮮膜密封；最后-20℃貯藏密封后的四種花粉，測定結(jié)果如表3：

表3 -20℃貯藏條件下不同茶樹品種的花粉萌發(fā)率(％)

由上可知，(1)參試品種無論是大葉種還是中小葉種，新鮮花粉生活力都很強(qiáng)，萌發(fā)率在90％以上，說明本發(fā)明采用的采摘“含苞欲放”的花蕾，在干燥器中存放20-24小時后取粉的方法是一種高效、可靠的方法。(2)采集的新鮮花粉，在當(dāng)天或第二天使用為宜，如需短時間保存，必須將采集備用的花粉用燒杯或培養(yǎng)皿盛放在干燥器內(nèi)，在室溫條件下保存不超過7天。這是茶樹雜交育種中必要的、常用的、簡便有效的花粉貯藏方法。(3)雜交授粉花期不遇時，將開花較早的父本花粉采集后，用羊皮紙包好，放入加有干燥劑的密封容器內(nèi)，采用本發(fā)明的方法貯藏，并根據(jù)貯藏時間要求，置于室溫(保存7天)、4℃冷藏(保存20-30天)或-20℃冷凍(保存30-40天)條件下保存，花粉萌發(fā)率最高仍可達(dá)60％以上。(4)從外地引進(jìn)優(yōu)異品種資源花粉時，最佳貯運(yùn)方法是采集后用羊皮紙包好，放入加有干燥劑(變色硅膠等)的密封容器(如指形試管)內(nèi)，采用本發(fā)明的方法貯藏，并根據(jù)條件采用常溫(保存7天)或4℃冷藏(保存20-30天)，也可采用-20℃冷凍(保存30-40天)，花粉萌發(fā)率最高仍可達(dá)60％以上，具有較強(qiáng)的生活力。由此可見，本發(fā)明解決了茶樹雜交育種中常出現(xiàn)父母本花期不遇，遠(yuǎn)距離雜交中優(yōu)異資源花粉采集等技術(shù)問題，同時對種質(zhì)資源保存與利用也有重要意義。

以上對本發(fā)明實(shí)施例所提供的技術(shù)方案進(jìn)行了詳細(xì)介紹，本文中應(yīng)用了具體個例對本發(fā)明實(shí)施例的原理以及實(shí)施方式進(jìn)行了闡述，以上實(shí)施例的說明只適用于幫助理解本發(fā)明實(shí)施例的原理；同時，對于本領(lǐng)域的一般技術(shù)人員，依據(jù)本發(fā)明實(shí)施例，在具體實(shí)施方式以及應(yīng)用范圍上均會有改變之處，綜上所述，本說明書內(nèi)容不應(yīng)理解為對本發(fā)明的限制。