一種防治柑橘黃龍病的納米藥物及其制備方法
【專利摘要】一種防治柑橘黃龍病的納米藥物，制備方法為：按重量份數(shù)稱取10～100份聚氧乙烯蓖麻油，10～100份Span 80和100～1000份丙酮，混合并攪拌，得到有機(jī)相S1；按重量份數(shù)稱取10～100份Tween 80和100～1000份去離子水，混合并攪拌，得到水相S2；將有機(jī)相S1注入水相S2，在超聲波下攪拌，得到油包水納米乳；采用減壓蒸餾完全除去丙酮；再溶于1000～10000份含有Brij 35的氨芐溶液，攪拌均勻，得到納米藥物。采用涂莖法進(jìn)行施藥或者利用注射器將納米藥物注入軀干。本發(fā)明能夠?qū)⑺幬锔佑行У赝高^(guò)柑橘樹(shù)皮系統(tǒng)運(yùn)輸?shù)礁涕俚捻g皮部組織，從而有效地清除柑橘體內(nèi)的黃龍病病原菌。
【專利說(shuō)明】一種防治柑橘黃龍病的納米藥物及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種防治果樹(shù)病害的藥物及其制備方法，具體涉及一種防治柑橘黃龍 病的納米藥物及其制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 柑橘黃龍病是一種主要的柑橘病害，俗稱"柑橘癌癥"。自20世紀(jì)初在我國(guó)華南地 區(qū)首次報(bào)道以來(lái)，已在亞洲、非洲、大洋洲、北美洲、南美洲的40多個(gè)國(guó)家相繼發(fā)生。柑橘黃 龍病病原是寄生于柑橘韌皮部的一種革蘭氏陰性菌，其傳播媒介為柑橘木虱。當(dāng)柑橘木虱 在果園存在時(shí)，病原菌通過(guò)木虱大量傳播，使得超過(guò)95 %的柑橘在不到三年的時(shí)間內(nèi)均受 到侵染，受感染的柑橘出現(xiàn)梢枯、黃葉、葉斑和果實(shí)畸形等病癥，引起其品質(zhì)和產(chǎn)量性狀的 下降。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)：黃龍病給世界主要的兩大柑橘主產(chǎn)區(qū)美國(guó)佛羅里達(dá)州和巴西圣保羅 州的柑橘產(chǎn)業(yè)造成了重大的損失。我國(guó)柑桔栽培的19個(gè)?。▍^(qū)）已有11個(gè)遭受柑橘黃龍 病危害，其面積占柑桔總栽培面積的80%以上，產(chǎn)量占總產(chǎn)量的85%左右。
[0003]目前在柑橘的種質(zhì)資源中，還沒(méi)有發(fā)現(xiàn)對(duì)黃龍病具有抗性的品種，通過(guò)常規(guī)育種 途徑，培育抗性品種還存在一定的困難。防治黃龍病的方法主要是通過(guò)控制傳播媒介亞洲 柑橘木虱、生產(chǎn)健康種苗以及根除已經(jīng)受到黃龍病感染的柑橘植株。但是這些方法具有一 定的局限性，并不能從根本上清除柑橘體內(nèi)的黃龍病病菌。目前，已有相關(guān)的研究表明，化 學(xué)治療能夠有效地清除柑橘體內(nèi)的黃龍病病菌，已篩選出11種有效藥物（已申請(qǐng)美國(guó)專 利）。但是如何將這些藥物運(yùn)輸?shù)礁涕夙g皮部具有一定的局限性。納米乳作為一種供藥載 體已在醫(yī)學(xué)和食品科學(xué)得到廣泛的應(yīng)用。同時(shí)，涂莖和軀干注射也是一種在植物病害防治 廣泛應(yīng)用的供藥措施。
[0004] 經(jīng)檢索，目前尚未有適用于涂莖的納米乳配方防治柑橘黃龍病的相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。 本領(lǐng)域的技術(shù)研究人員希望能研制出一種經(jīng)濟(jì)有效的納米藥物配方，將有效藥物通過(guò)柑橘 樹(shù)皮輸運(yùn)送到韌皮部中，最后達(dá)到防治柑橘黃龍病的效果。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種經(jīng)濟(jì)有效的納米藥物，將有效藥物透過(guò)柑 橘樹(shù)皮運(yùn)輸?shù)狡漤g皮部，達(dá)到防治柑橘黃龍病的效果。
[0006] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了以下技術(shù)方案：
[0007] -種防治柑橘黃龍病的納米藥物的制備方法，包括如下步驟：
[0008] (1)按重量份數(shù)稱取10?100份聚氧乙烯蓖麻油，10?100份Span 80和100? 1000份丙酮，然后混合并攪拌，得到均質(zhì)的有機(jī)相S1 ;
[0009] (2)按重量份數(shù)稱取10?100份Tween80和100?1000份去離子水，然后混合 并攪拌，得到均質(zhì)的水相S2;
[0010] (3)將有機(jī)相S1注入水相S2,攪拌25?45min，使得有機(jī)相S1中的各組分在水相 S2內(nèi)部均勻擴(kuò)散，然后在5?20watts的超聲波下，攪拌5?lOmin，得到油包水納米乳；
[0011] (4)采用減壓蒸餾的方法，對(duì)所述油包水納米乳進(jìn)行30?60min的蒸餾，完全除去 丙酮，使得油包水納米乳在水和親水性的表面活性劑中均勻分布，得到空白納米乳；
[0012] (5)將步驟⑷獲得的空白納米乳溶于1000?10000份含有0? 1?0? 5% (w/w) Brij 35濃度為的0. 1?2mg/ml的氨芐溶液中，攪拌均勻，即得到所述納米藥物。
[0013] 一種防治柑橘黃龍病的納米藥物，由上述制備方法制備而成。
[0014] 所述納米藥物中油包水納米乳的徑粒大小范圍為5?450nm。
[0015] 上述納米藥物的使用方法：
[0016] (1)涂莖法。取所述的納米藥物，用水稀釋500?1500倍，采用涂莖法對(duì)黃龍病感 病植株進(jìn)行處理，每15?20天處理一次，直至清除感病植株體內(nèi)的黃龍病病原菌。
[0017] 涂莖法的具體步驟為：首先用刀片刮傷黃龍病感病植株的莖干的樹(shù)皮，使韌皮部 裸露出來(lái)；然后取所述的納米藥物，用水稀釋500?1500倍，將海綿完全浸入納米藥物稀釋 液中；最后用含有納米藥物稀釋液的海綿包裹住黃龍病感病植株莖干的刮傷位置。
[0018] (2)軀干注射法。利用注射器將含有所述的納米藥物注入黃龍病感病植株的莖干， 每次處理用藥50?200ml，每15?20天處理一次，直至清除感病植株體內(nèi)的黃龍病病原 菌。
[0019] (3)吊瓶供藥法。取所述的納米藥物，用水稀釋500?1500倍，利用無(wú)壓式樹(shù)木注 射裝置將所述納米藥物稀釋液對(duì)黃龍病感病植株的莖干進(jìn)行供藥，保持無(wú)壓式樹(shù)木注射裝 置的儲(chǔ)藥部件始終不干涸，直至清除感病植株體內(nèi)的黃龍病病原菌。
[0020] 與現(xiàn)有技術(shù)相比較，本發(fā)明具備的有益效果：
[0021] (1)能夠?qū)⑺幬锔佑行У赝高^(guò)柑橘樹(shù)皮系統(tǒng)運(yùn)輸?shù)礁涕俚捻g皮部組織。
[0022] (2)能夠有效地清除柑橘體內(nèi)的黃龍病病原菌。

【具體實(shí)施方式】
[0023] 下面通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步闡述。
[0024] 實(shí)施例1
[0025] -種防治柑橘黃龍病的納米藥物，以重量份數(shù)計(jì)，其制備原料如下：10份聚氧乙 烯蓖麻油，10份Span 80,100份丙酮，10份Tween 80,100份去離子水和1000份含有0.1 % (w/w)Brij 35的濃度為0? lmg/ml的氨節(jié)溶液。
[0026] 上述納米藥物的制備方法，其特征在于：
[0027] (1)按重量份數(shù)稱取10份聚氧乙烯蓖麻油，10份Span 80和100份丙酮，然后混 合并攪拌，得到均質(zhì)的有機(jī)相S1;
[0028] (2)按重量份數(shù)稱取10份Tween 80和100份去離子水，然后混合并攪拌，得到均 質(zhì)的水相S2;
[0029] (3)將有機(jī)相S1注入水相S2,攪拌30min，使得有機(jī)相S1中的各組分在水相S2內(nèi) 部均勻擴(kuò)散，然后在lOwatts的超聲波下，攪拌5min，使體系平衡，得到油包水納米乳；
[0030] (4)采用減壓蒸餾的方法，對(duì)所述油包水納米乳進(jìn)行40min的蒸餾，完全除去丙 酮，使得油包水納米乳在水和親水性的表面活性劑中均勻分布，得到空白納米乳；
[0031] (5)將步驟⑷獲得的空白納米乳溶于1000份含有0? 1% (w/w)Brij 35的0? lmg/ ml的氨芐溶液中，攪拌均勻，即得到所述納米藥物。
[0032] 經(jīng)檢測(cè)，油包水納米乳的徑粒大小為392nm。
[0033] 實(shí)施例2
[0034] 一種防治柑橘黃龍病的納米藥物，以重量份數(shù)計(jì)，其制備原料如下：100份聚氧乙 烯蓖麻油，100份Span 80,1000份丙酮，100份Tween 80,1000份去離子水和10000份含有 0? 5% (w/w)Brij 35的濃度為2. Omg/ml的氨節(jié)溶液。
[0035] 上述納米藥物的制備方法，其特征在于：
[0036] (1)按重量份數(shù)稱取100份聚氧乙烯蓖麻油，100份Span 80和1000份丙酮，然后 混合并攪拌，得到均質(zhì)有機(jī)相S1;
[0037] (2)按重量份數(shù)稱取100份Tween 80和1000份去離子水，然后混合并攪拌，得到 均質(zhì)的水相S2;
[0038] (3)將有機(jī)相S1注入水相S2,攪拌60min，使得有機(jī)相S1中的各組分在水相S2內(nèi) 部均勻擴(kuò)散，然后在20watts的超聲波下，攪拌lOmin，使體系平衡，得到油包水納米乳；
[0039] (4)采用減壓蒸餾的方法，對(duì)所述油包水納米乳進(jìn)行60min的蒸餾，完全除去丙 酮，使得油包水納米乳在水和親水性的表面活性劑中均勻分布，得到空白納米乳；
[0040] (5)將步驟⑷獲得的空白納米乳溶于10000含有0? 5% (w/w)Bri j 35的2. Omg/ ml的氨芐溶液中，攪拌均勻，即得到所述納米藥物。
[0041] 經(jīng)檢測(cè)，油包水納米乳的徑粒大小范圍為57nm。
[0042] 實(shí)施例3
[0043] 一種防治柑橘黃龍病的納米藥物，以重量份數(shù)計(jì)，其制備原料如下：25份聚氧乙 烯蓖麻油，25份Span80, 300份丙酮，25份Tween80, 300份去離子水和3000份含有0.2% (w/w)Brij35的濃度為0. 8mg/ml的氨節(jié)溶液。
[0044] 上述納米藥物的制備方法，其特征在于：
[0045] (1)按重量份數(shù)稱取25份聚氧乙烯蓖麻油，25份Span 80和300份丙酮，然后混 合并攪拌，得到均質(zhì)的有機(jī)相S1;
[0046] (2)按重量份數(shù)稱取25份Tween 80和300份去離子水，然后混合并攪拌，得到均 質(zhì)的水相S2;
[0047] (3)將有機(jī)相S1注入水相S2,攪拌35min，使得有機(jī)相S1中的各組分在水相S2內(nèi) 部均勻擴(kuò)散，然后在5watts的超聲波下，攪拌7min，使體系平衡，得到油包水納米乳；
[0048] (4)采用減壓蒸餾的方法，對(duì)所述油包水納米乳進(jìn)行45min的蒸餾，完全除去丙 酮，使得油包水納米乳在水和親水性的表面活性劑中均勻分布，得到空白納米乳；
[0049] (5)將步驟（4)獲得的空白納米乳溶于3000份含有0? 2% (w/w)Brij 35的0? 8mg/ ml的氨芐溶液中，攪拌均勻，即得到所述納米藥物。
[0050] 經(jīng)檢測(cè)，油包水納米乳的徑粒大小為276nm。
[0051] 實(shí)施例4
[0052] -種防治柑橘黃龍病的納米藥物，以重量份數(shù)計(jì)，其制備原料如下：50份聚氧乙 烯蓖麻油，50份Span80, 550份丙酮，50份Tween80, 550份去離子水和5000份含有0.3% (w/w)Brij35的濃度為1. 2mg/ml的氨節(jié)溶液。
[0053] 上述納米藥物的制備方法，其特征在于：
[0054] (1)按重量份數(shù)稱取50份聚氧乙烯蓖麻油，50份Span 80和550份丙酮，然后混 合并攪拌，得到均質(zhì)的有機(jī)相si;
[0055] (2)按重量份數(shù)稱取50份Tween 80和550份去離子水，然后混合并攪拌，得到均 質(zhì)的水相S2;
[0056] (3)將有機(jī)相S1注入水相S2,攪拌45min，使得有機(jī)相S1中的各組分在水相S2內(nèi) 部均勻擴(kuò)散，然后在15watts的超聲波下，攪拌9min，使體系平衡，得到油包水納米乳；[0057] (4)采用減壓蒸餾的方法，對(duì)所述油包水納米乳進(jìn)行50min的蒸餾，完全除去丙 酮，使得油包水納米乳在水和親水性的表面活性劑中均勻分布，得到空白納米乳；
[0058] (5)將步驟⑷獲得的空白納米乳溶于5000份含有0? 3% (w/w)Brij 35的1. 2mg/ ml的氨芐溶液中，攪拌均勻，即得到所述納米藥物。
[0059] 經(jīng)檢測(cè)，油包水納米乳的徑粒大小為195nm。
[0060] 實(shí)施例5
[0061] 一種防治柑橘黃龍病的納米藥物，以重量份數(shù)計(jì)，其制備原料如下：75份聚氧乙 烯蓖麻油，75份Span80, 750份丙酮，75份Tween80, 750份去離子水和7500份含有0.4% (w/w)Brij35的濃度為1. 6mg/ml的氨節(jié)溶液。
[0062] 上述納米藥物的制備方法，其特征在于：
[0063] (1)按重量份數(shù)稱取75份聚氧乙烯蓖麻油，75份Span80和750份丙酮，然后混 合并攪拌，得到均質(zhì)的有機(jī)相S1 ;
[0064] (2)按重量份數(shù)稱取75份Tween 80和750份去離子水，然后混合并攪拌，得到均 質(zhì)的水相S2 ;
[0065] (3)將有機(jī)相S1注入水相S2,攪拌50min，使得有機(jī)相S1中的各組分在水相S2內(nèi) 部均勻擴(kuò)散，然后在18watts的超聲波下，攪拌7min，使體系平衡，得到油包水納米乳； [0066] (4)采用減壓蒸餾的方法，對(duì)所述油包水納米乳進(jìn)行50min的蒸餾，完全除去丙 酮，使得油包水納米乳在水和親水性的表面活性劑中均勻分布，得到空白納米乳；
[0067] (5)將步驟（4)獲得的空白納米乳溶于7500份含有0? 4% (w/w)Brij 35的濃度 為1.6mg/ml的氨芐溶液中，攪拌均勻，即得到所述納米藥物。
[0068] 經(jīng)檢測(cè)，油包水納米乳的徑粒大小為123nm。
[0069] 實(shí)施例6
[0070] 納米藥物組分粒徑的比較：
[0071] 使用動(dòng)態(tài)光散射的方法，在Nanotrac 250上，對(duì)油脂、表面活性劑組合和有機(jī)溶 劑所組成的納米乳進(jìn)行徑粒分析。試驗(yàn)分為以下三組：（1)將表面活性劑組合和有機(jī)溶劑 分別固定為Span 80/Tween 80和丙酮，當(dāng)油脂為豆油、聚氧乙烯菌麻油、香療酚或園藝礦 物油Orchex 796時(shí)所組成的納米乳進(jìn)行徑粒分析。（2)將油脂和有機(jī)溶劑分別固定為豆油 和丙酮，當(dāng)親脂和親水表面活性劑組合為Span 80/Tween 80，Span 85/Tween 20，Span 80/ Tween 20或Span85/Tween 20)時(shí)所組成的納米乳進(jìn)行徑粒分析。（3)將油脂和表面活性 劑分別固定為豆油和Span 80/Tween 80,當(dāng)有機(jī)溶劑為丙酮、乙醇、丁酮、甲酸乙酯或乙酸 乙酯時(shí)所組成的納米乳進(jìn)行徑粒分析。
[0072] 從表1的結(jié)果可以看出，在第一組試驗(yàn)中，當(dāng)選用油脂為聚氧乙烯蓖麻油，其他成 分固定（Span 80/Tween 80和丙酮）時(shí)，所得納米乳徑粒最小（16. 3nm)。在第二組試驗(yàn) 中，當(dāng)表面活性劑組合為Span 80/Tween 80時(shí)，其他組分分別為豆油和丙酮時(shí)，其納米乳 徑粒最小（228. 4nm)。在第三組試驗(yàn)中選用有機(jī)溶劑丙酮時(shí)，其他組分固定為豆油和Span 80/Tween80時(shí)，納米乳的徑粒最?。?13. 5nm)。根據(jù)上述結(jié)果，聚氧乙烯菌麻油、Span 80/ Tween 80和丙酮在使用自發(fā)乳化方法制備納米乳過(guò)程中能夠有效地降低油包水納米乳徑 粒大小。因此將聚氧乙烯菌麻油、Span 80/Tween 80和丙酮混合乳化制成油包水納米乳， 經(jīng)檢測(cè)，該納米乳的徑粒大小為13. 68nm。由此可見(jiàn)，相比于表中其他配方組合形成的油包 水納米乳，權(quán)利要求2所述的納米藥物中油包水納米乳粒徑更小，因此更利用植物的吸收， 能更有效地將有效成分帶到感病部位。
[0073] 表1:不同油脂、表面活性劑組合和有機(jī)溶劑所形成的納米乳的徑粒大小
[0074]

【權(quán)利要求】
1. 一種防治柑橘黃龍病的納米藥物的制備方法，其特征在于，包括如下步驟： (1) 按重量份數(shù)稱取10?100份聚氧乙烯蓖麻油，10?100份Span 80和100?1000 份丙酮，然后混合并攪拌，得到均質(zhì)的有機(jī)相S1 ; (2) 按重量份數(shù)稱取10?100份Tween 80和100?1000份去離子水，然后混合并攪 拌，得到均質(zhì)的水相S2 ; (3) 將有機(jī)相S1注入水相S2,攪拌25?45min，使得有機(jī)相S1中的各組分在水相S2 內(nèi)部均勻擴(kuò)散，然后在5?20watts的超聲波下，攪拌5?lOmin，得到油包水納米乳； (4) 采用減壓蒸餾的方法，對(duì)所述油包水納米乳進(jìn)行30?60min的蒸餾，完全除去丙 酮，使得油包水納米乳在水和親水性的表面活性劑中均勻分布，得到空白納米乳； (5) 將步驟（4)獲得的空白納米乳溶于1000?10000份含有0. 1?0. 5% (w/w)Brij 35濃度為的0. 1?2. Omg/ml的氨芐溶液中，攪拌均勻，即得到所述納米藥物。
2. -種防治柑橘黃龍病的納米藥物，其特征在于，由權(quán)利要求1所述的制備方法制備 而成。
3. 如權(quán)利要求2所述的納米藥物，其特征在于，所述納米藥物中油包水納米乳的徑粒 大小范圍為5?450nm。
4. 一種如權(quán)利要求2或3所述的納米藥物的使用方法，其特征在于，取如權(quán)利要求2 或3所述的納米藥物，用水稀釋500?1500倍，采用涂莖法對(duì)黃龍病感病植株進(jìn)行處理，每 15?20天處理一次，直至清除感病植株體內(nèi)的黃龍病病原菌。
5. -種如權(quán)利要求2或3所述的納米藥物的使用方法，其特征在于，利用注射器將含有 如權(quán)利要求2或3所述的納米藥物注入黃龍病感病植株的莖干，每次處理用藥50?200ml， 每15?20天處理一次，直至清除感病植株體內(nèi)的黃龍病病原菌。
6. -種如權(quán)利要求2或3所述的納米藥物的使用方法，其特征在于，取如權(quán)利要求1? 3任意一項(xiàng)所述的納米藥物，用水稀釋500?1500倍，利用無(wú)壓式樹(shù)木注射裝置將所述納米 藥物稀釋液對(duì)黃龍病感病植株的莖干進(jìn)行供藥，保持無(wú)壓式樹(shù)木注射裝置的儲(chǔ)藥部件始終 不干涸，直至清除感病植株體內(nèi)的黃龍病病原菌。
【文檔編號(hào)】A01P1/00GK104430308SQ201410614025
【公開(kāi)日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2014年11月4日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月4日
【發(fā)明者】張木清, 楊川毓 申請(qǐng)人:廣西大學(xué)