一種矮小傘霉及其在鐵皮石斛抗葉斑病中的應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種矮小傘霉，其分類命名為接合菌亞門毛霉目傘形霉屬矮小傘霉(Umbelopsis?nana)，菌株號為JSNL001-3，現(xiàn)已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC?No.9565，保藏日期為2014年8月15日。本發(fā)明矮小傘霉JSNL001-3在提高鐵皮石斛生長抗葉斑病能力等方面作用效果顯著；且能夠人工培養(yǎng)，繁殖速度快，便于進行規(guī)?；a(chǎn)，具有良好的開發(fā)應用前景。
【專利說明】一種矮小傘霉及其在鐵皮石斛抗葉斑病中的應用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于微生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種矮小傘霉及其在鐵皮石斛抗葉斑病中 的應用。

【背景技術(shù)】
[0002] 鐵皮石斛是蘭科石斛屬多年生附生草本植物，研究表明，從其種子萌發(fā)到苗的健 康生長，無不需要共生真菌的參與。由于野生鐵皮石斛資源瀕臨枯竭，目前，鐵皮石斛的 市場需求主要靠人工栽培，但人工種植鐵皮石斛生長速度慢，平均產(chǎn)量低，病害發(fā)生較為嚴 重。目前，病害的防治仍然主要依靠農(nóng)藥。從保護生態(tài)環(huán)境和食品安全的角度出發(fā)，鐵皮石 斛作為名貴中藥，應盡可能減少農(nóng)藥、化學肥料的施用量。菌根是土壤中菌根真菌與植物根 系形成的具有特定形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能的共生體，是自然界中普遍存在的一種共生現(xiàn)象。蘭科 植物對菌根的依賴性較強，菌根真菌與植物根系互為條件形成共生體，在生理上是一個相 互協(xié)調(diào)的整體，并在共同進化的過程中，形成特定的形態(tài)特征。菌根真菌與宿主植物的相互 關(guān)系多數(shù)情況下是互利的，菌根真菌從植物體內(nèi)獲取生長必需的營養(yǎng)物質(zhì)，而植物通過與 共生真菌結(jié)合，也能更好的從土壤中得到所需的養(yǎng)分及水分等。合理利用菌根資源，提高鐵 皮石斛的抗病能力，在一定程度上減少化學農(nóng)藥的施用量，這也符合農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展戰(zhàn) 略。因此，菌根菌劑相關(guān)研究已成為鐵皮石斛產(chǎn)業(yè)的一個重要方向。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種對鐵皮石斛抗病作用效果顯著地菌根真 菌-接合菌亞門毛霉目傘形霉屬矮小傘霉（Umbelopsis nana)。
[0004] 本發(fā)明還要解決的技術(shù)問題是提供上述真菌在提高鐵皮石斛抗病能力中的應用。
[0005] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：
[0006] -種矮小傘霉，其分類命名為接合菌亞門毛霉目傘形霉屬矮小傘霉（Umbelopsis nana)，菌株號為JSNL001-3,現(xiàn)已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心 (CGMCC)，保藏編號為CGMCC No. 9565,保藏日期為2014年8月15日。保藏地址為北京市朝 陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所，郵編100101。
[0007] 上述菌株JSNL001-3是2010年10月在浙江省樂清市鐵皮石斛栽植區(qū)內(nèi)生長狀況 較好的植株上分離獲得的，該菌株對鐵皮石斛促生作用不顯著。但能明顯改善鐵皮石斛的 抗病能力。
[0008] 矮小傘霉（Umbelopsis nana) JSNL001-3的菌落特征如下：
[0009] 形態(tài)學特征觀察表明：在PDA平叛上培養(yǎng)，菌絲稀疏，呈輪紋狀，附于基物表面；正 反兩面均為灰白色（圖1)。擴增ITS區(qū)全序列并進行測序，PCR擴增得到的16sRNA全序列 如 SEQ ID No :1 所示。
[0010] 上述矮小傘霉在鐵皮石斛抗葉斑病中的應用也在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
[0011] 具體的應用方法是：將矮小傘霉（Umbelopsis nana) JSNL001-3制備成固體菌劑， 置于鐵皮石斛幼苗栽培基質(zhì)表面，每叢鐵皮石斛幼苗的固體菌劑接種量為5g，施用菌劑后， 基質(zhì)相對含水量維持在60%以上10天，以確保菌絲在基質(zhì)內(nèi)成活。
[0012] 其中，所述的固體菌劑按如下方法制備得到：以棉籽殼菌渣為培養(yǎng)基質(zhì)、硝酸銨為 外源氮源、鹿糖為外源碳源，制備成固體培養(yǎng)基，滅菌，接種矮小傘霉（Umbelopsis nana) JSNL001-3,在28°C、12h光照+12h黑暗、pH6. 5條件下培養(yǎng)25?35天，將培養(yǎng)好的菌劑切 割成lcm3大小的塊狀物，用于鐵皮石斛植株菌根菌劑的接種。
[0013] 有益效果：與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點是：
[0014] (1)矮小傘霉（Umbelopsis nana) JSNL001-3對鐵皮石斛抗病作用效果較為顯著， 對減少化學農(nóng)藥的使用有一定作用，也是保證食用安全的重要手段。
[0015] (2)矮小傘霉（Umbelopsis nana) JSNL001-3培養(yǎng)條件簡單、容易保存，易于工業(yè) 化生產(chǎn)，具有良好的開發(fā)應用前景。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0016] 圖1為JSNL001-3菌落培養(yǎng)照片。
[0017] 圖2為JSNL001-3菌菌根化鐵皮石斛的抗葉斑病能力分析。

【具體實施方式】
[0018] 根據(jù)下述實施例，可以更好地理解本發(fā)明。然而，本領(lǐng)域的技術(shù)人員容易理解，實 施例所描述的內(nèi)容僅用于說明本發(fā)明，而不應當也不會限制權(quán)利要求書中所詳細描述的本 發(fā)明。
[0019] 實施例1 :
[0020] 矮小傘霉（Umbelopsis nana) JSNL001-3對鐵皮石斛的抗病能力作用效果分析。
[0021] (1)以棉籽殼菌渣為培養(yǎng)基質(zhì)、硝酸銨為外源氮源、蔗糖為外源碳源，制備成固體 培養(yǎng)基質(zhì)裝入高壓滅菌袋內(nèi)，于121°C和101. 3千帕的高壓條件下滅菌20分鐘。待培養(yǎng)基質(zhì) 冷卻后在無菌條件下接種菌根真菌JSNL001-3,然后進行人工培養(yǎng)。具體培養(yǎng)條件為28°C、 12h光照+12h黑暗、pH6. 5,培養(yǎng)25?35天。將培養(yǎng)好的菌劑加工成lcm3大小的塊狀物， 置于鐵皮石斛幼苗栽培基質(zhì)表面，每叢鐵皮石斛幼苗的固體菌劑接種量為5g，施用菌劑后， 基質(zhì)相對含水量維持在60%以上10天，以確保菌絲在基質(zhì)內(nèi)成活。
[0022] (2)通過紫外光和黑暗處理培養(yǎng)在PDA培養(yǎng)基上的葉斑病病原菌，制得病菌孢子 懸浮液，將其稀釋到2 X 105個/mL。
[0023] (3)將供試鐵皮石斛植株在同等條件下進行管理，均選取供試植株上部第五片葉， 用針刺法人工制造傷口，在制造傷口的葉片表面噴灑病原菌孢子懸浮液2ml/每株，溫室內(nèi) 溫度為30-35°C，濕度95%，每種處理均為100株，并設3組重復。
[0024] (4)接種后每天監(jiān)控葉斑病的發(fā)病程度，統(tǒng)計發(fā)病率、發(fā)病指數(shù)。
[0025] 病株分級標準：病情分級主要根據(jù)接種葉片正反兩面出現(xiàn)病斑數(shù)量及直徑，初定 分級標準為：
[0026] 0 :正常；
[0027] I :正反兩面有少量病斑；
[0028] II :正反兩面有病斑，發(fā)病面積占葉片總面積1/4以下；
[0029] III :正反兩面有病斑，發(fā)病面積占葉片總面積的1/4-1/2 ;
[0030] IV :正反兩面有病斑，發(fā)病面積占葉片總面積1/2-3/4 ;
[0031] IV :正反兩面有病斑，發(fā)病面積占葉片總面積3/4以上。
[0032] 感病指數(shù)=Σ (各級病株數(shù)X該級代表數(shù)值）X10(V(總株數(shù)X最高一級代表 數(shù)值）；
[0033] 感病率=(感病株樹/接種株樹）X 100%。
[0034] 結(jié)果見圖2。
【權(quán)利要求】
1. 一種矮小傘霉，其分類命名為接合菌亞門毛霉目傘形霉屬矮小傘霉（Umbelopsis nana)，菌株號為JSNL001-3,現(xiàn)已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心， 保藏編號為CGMCC No. 9565,保藏日期為2014年8月15日。
2. 權(quán)利要求1所述的矮小傘霉在鐵皮石斛抗葉斑病中的應用。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的應用，其特征在于：將矮小傘霉（Umbelopsis nana) JSNL001-3制備成固體菌劑，置于鐵皮石斛幼苗栽培基質(zhì)表面，每叢鐵皮石斛幼苗的固體菌 劑接種量為5g，施用菌劑后，基質(zhì)相對含水量維持在60%以上10天，以確保菌絲在基質(zhì)內(nèi) 成活。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的應用，其特征在于，所述的固體菌劑按如下方法制備得到：以 棉籽殼菌渣為培養(yǎng)基質(zhì)、硝酸銨為外源氮源、蔗糖為外源碳源，制備成固體培養(yǎng)基，滅菌，接 種矮小傘霉（Umbelopsis nana)JSNL001-3,在 28°C、12h 光照 +12h 黑暗、ρΗ6· 5 條件下培 養(yǎng)25?35天，將培養(yǎng)好的菌劑切割成lcm3大小的塊狀物，用于鐵皮石斛植株菌根菌劑的 接種。
【文檔編號】A01N63/04GK104195057SQ201410459653
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2014年9月10日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月10日
【發(fā)明者】徐超, 席剛俊, 張紅巖, 趙桂華, 何任紅, 史俊, 鄭凱, 楊鶴同 申請人:江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學院