小木漆高效快速擴(kuò)繁方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及植物組培方法，尤其是小木漆的組培方法。具體來說是一種小木漆高效快速擴(kuò)繁方法，包括（1）外植體的選擇與消毒（2）啟動培養(yǎng)（3）增殖培養(yǎng)（4）生根培養(yǎng)（5）煉苗與移栽步驟，本發(fā)明具有遺傳性狀穩(wěn)定、培養(yǎng)過程簡單、易生根，培養(yǎng)擴(kuò)繁周期短，移栽容易成活的優(yōu)點(diǎn)。采用對優(yōu)良小木漆優(yōu)良單株進(jìn)行組織培養(yǎng)的方法，可使其繁殖系數(shù)達(dá)到4-5倍，每10個(gè)有效小木漆腋芽，按繁殖系數(shù)為4.5，增殖周期為45天計(jì)算，除去污染損耗，其年繁殖量仍將達(dá)到175萬個(gè)以上，有效解決了小木漆快速繁殖的問題，使得優(yōu)良無性系材料能夠大面積推廣，同時(shí)也為工廠化育苗奠定了基礎(chǔ)。
【專利說明】小木漆高效快速擴(kuò)繁方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物組培方法，尤其是小木漆的組培方法。
【背景技術(shù)】
[0002])藤域{Toxicodendronvernicifluum)是漆樹科(Anacardiacceae)漆屬的重要經(jīng)濟(jì)樹種。其主產(chǎn)物“生漆”為樹干割取的液汁，是目前世界上唯一來自綠色植物，在生物酶催化作用下，常溫能固化成膜的生物高分子涂料。隨著人們家具保健意識和環(huán)保意識的增強(qiáng)，化學(xué)油漆所含的甲醛和苯的衍生物的危害為人們所認(rèn)識，在家居裝修中，消費(fèi)者越來越多的選擇環(huán)保油漆，而環(huán)保油漆離不開生漆作重要原料。生漆越來越受到人們的重視，近10年來，生漆的價(jià)格一直在漲，2001年為2萬-4萬元/噸，3年后價(jià)格增長了 I倍，2006年為10萬-14萬元/噸，2008年達(dá)到16萬-24萬元/噸，2013年生漆價(jià)格高達(dá)26萬-36萬元/噸。
[0003]漆樹資源豐富，品種繁多，經(jīng)過長期的人工培育和自然選擇，日益適地適樹，分大木漆、小木漆兩大類，大木漆即野生的山漆樹，小木漆樹即人工栽培的家漆樹。由于小木漆的產(chǎn)漆量相對較高，質(zhì)量較好，開割時(shí)間較早，漆農(nóng)主要通過人工栽培小木漆的方式割取生漆，早在上世紀(jì)80年代王道植等人曾開展了對大木漆組織培養(yǎng)的研究，但未見有成功的人工擴(kuò)繁方式推廣實(shí)施，而關(guān)于小木漆組織培養(yǎng)快繁的技術(shù)至今尚未見報(bào)道。
[0004]小木漆的結(jié)實(shí)量少，甚至敗育，種子育苗也往往發(fā)生性狀分離，對母樹的優(yōu)良性狀不能固定，因而漆農(nóng)主要通過埋根育苗的傳統(tǒng)方式獲取幼苗，但其成苗率較低，繁殖速度慢，特別是使推廣優(yōu)良品種和優(yōu)良單株受到了限制。所以要對小木漆成活率高的快速擴(kuò)繁方法進(jìn)行研究。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明要解決現(xiàn)有技術(shù)中小木漆獲取幼苗成苗率低，繁殖速度慢的問題。
[0006]本發(fā)明提供了一種小木漆高效快速擴(kuò)繁方法，其特征在于按下列步驟實(shí)施:
(I)外植體的選擇與消毒:選取優(yōu)良小木漆單株的當(dāng)年生嫩莖或根萌幼苗，去除葉柄和葉片，用毛刷輕刷莖段表面，除去表面雜質(zhì)，用2%的洗潔精水溶液浸泡10-15分鐘，在線狀自來水下沖洗1-2小時(shí)，剪成3-4cm長含1-2個(gè)葉腋的莖段，放于滅過菌的外植體缸內(nèi)，移至超凈工作臺內(nèi)進(jìn)行消毒，75%乙醇浸泡20-30秒，1%的苯扎氯胺溶液浸泡1-2分鐘，無菌蒸餾水沖洗2-3次后，用0.1%升汞浸泡10-20分鐘，無菌蒸餾水沖洗5-8次，放于滅過菌的墊有濾紙的接種盤內(nèi)，使濾紙能夠吸干外植體表面的殘留水分。
[0007](2)啟動培養(yǎng):將莖段兩端分別切去2_4mm，平放在啟動培養(yǎng)基上，葉腋朝上，啟動培養(yǎng)基的配方為:White + 6-BA 0.5_2mg/L + NAA 0.02-0.5mg/L, 20_30g/L 蔗糖，4.0-5.0g/L瓊脂，pH為5.8-6.0。置于晝溫25±2°C，夜溫20±2°C的條件下暗培養(yǎng)15-20天后，葉腋處長出l_2cm高腋芽，再置于光照強(qiáng)度1000-2000Lux，光照時(shí)間12小時(shí)/天，晝溫25±2°C，夜溫20±2°C的條件下光照培養(yǎng)10-15天。[0008](3)增殖培養(yǎng):待腋芽長到3_4cm高時(shí)，將其從老莖上剪下，去掉底部1_2個(gè)葉片，直立于幼苗增殖培養(yǎng)基上，對于較高腋芽，從基部切取含1-2個(gè)腋芽的莖段，并平放于增殖培養(yǎng)基上，增殖培養(yǎng)基的配方為:MS + ΖΤ0.1-1.0mg/L + 6-BA0.5-3.0mg/L + TDZ0.lmg/L,20-30g/L 蔗糖，4.0-5.0g/L 瓊脂，pH 為 5.8-6.0。置于晝溫 25±2°C，夜溫 20±2°C 的條件下暗培養(yǎng)15-20天后，腋芽基部形成約Icm3的愈傷組織，莖段葉腋處長出l-2cm高腋芽，形態(tài)學(xué)下端也形成約Icm3的愈傷組織，再置于光照強(qiáng)度1000-2000LUX，光照時(shí)間12小時(shí)/天，晝溫25±2°C，夜溫20±2°C的條件下光照培養(yǎng)10-15天?；坑鷤M織誘導(dǎo)可出4_8個(gè)l-2cm高的不定芽，同時(shí)腋芽長到3-4cm。待15天后，待不定芽小苗長到3-4cm高，再將小苗切下，轉(zhuǎn)到相同的增殖培養(yǎng)基上，經(jīng)過45天的培養(yǎng)，誘導(dǎo)出的小苗又可長到3-4cm，反復(fù)將高3-4cm的小苗切下進(jìn)行增殖培養(yǎng)，可以使小木漆進(jìn)行快速大量的擴(kuò)繁，其增值倍數(shù)為4-5倍。
[0009](4)生根培養(yǎng):將3-4cm高的組培苗轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上，生根培養(yǎng)基配方為:1/2MS + IΑΑ0.05-0.2mg/L + IBA0.05-0.2mg/L，0.1-0.5g/L 活性炭，20_30g/L 蔗糖，
4.0-5.0g/L瓊脂，pH為5.8-6.0。置于光照強(qiáng)度1000_2000Lux，光照時(shí)間12小時(shí)/天，晝溫25±2°C，夜溫20±2°C的條件下光照培養(yǎng)10-15天后，得到小木漆生根苗。
[0010](5)煉苗與移栽:待生根苗的根長達(dá)1.5_2cm后，在室溫為25°C的室內(nèi)打開瓶蓋，煉苗2-4天后，取出生根苗，洗凈沾附在根部的培養(yǎng)基，之后移栽到基質(zhì)配比為腐殖土:河沙=1:1的沙盤中，移栽后注意控制溫室內(nèi)的溫度在25-30 0C之間，濕度在75-80%之間，10-15天后成活，移至杯口直徑為IOcm的營養(yǎng)袋中，移栽基質(zhì)配比同沙盤。再通過養(yǎng)護(hù)2-3個(gè)月，苗高達(dá)20-30cm時(shí)，移至室外空地造林，以待割取生漆。
[0011]本發(fā)明有以下優(yōu)點(diǎn):(I)通過生物技術(shù)對小木漆進(jìn)行組織培養(yǎng)快速繁殖，在短時(shí)間內(nèi)培育出大量可供大田栽培的小木漆幼苗，顯著提高了小木漆種苗的繁殖系數(shù)和種苗質(zhì)量，實(shí)現(xiàn)規(guī)模化生產(chǎn)，滿足生產(chǎn)上的需要。
[0012](2)通過采用暗培養(yǎng):光照培養(yǎng)=1:1，克服小木漆外植體傷口褐變死亡的問題。在啟動培養(yǎng)的過程中，選擇鹽離子含量較低的White培養(yǎng)基降低褐變率。
[0013](3)在增殖過程中，選擇多種細(xì)胞分裂素(ZT、TDZ、6_BA)相結(jié)合的方法，使小木漆腋芽的增殖系數(shù)達(dá)到4-5倍。在生根過程中也綜合運(yùn)用各種生長素(四4、嫩4、^^、2，4-0)，獲得組培苗的生根率在99%，每株平均帶3-4個(gè)根。
[0014]本發(fā)明具有遺傳性狀穩(wěn)定、培養(yǎng)過程簡單、易生根，培養(yǎng)擴(kuò)繁周期短，移栽容易成活的優(yōu)點(diǎn)。采用對優(yōu)良小木漆優(yōu)良單株進(jìn)行組織培養(yǎng)的方法，可使其繁殖系數(shù)達(dá)到4-5倍，每10個(gè)有效小木漆腋芽，按繁殖系數(shù)為4.5，增殖周期為45天計(jì)算，除去污染損耗，其年繁殖量仍將達(dá)到175萬個(gè)以上，有效解決了小木漆快速繁殖的問題，使得優(yōu)良無性系材料能夠大面積推廣，同時(shí)也為工廠化育苗奠定了基礎(chǔ)。
【具體實(shí)施方式】 [0015]實(shí)施例1、實(shí)施時(shí)間為2013年，小木漆的組培擴(kuò)繁在西南林業(yè)大學(xué)林學(xué)院實(shí)驗(yàn)室和格林溫室進(jìn)行。
[0016](I)外植體的選擇與消毒:于2013年5月選取優(yōu)良漆樹單株，獲得其當(dāng)年生嫩莖，去除葉柄和葉片，用毛刷輕刷莖段表面，除去表面雜質(zhì)，用2%的洗潔精水溶液浸泡10分鐘，在線狀自來水下沖洗2小時(shí)，剪成3-4cm長含1-2個(gè)葉腋的莖段，放于滅過菌的外植體缸內(nèi)，移至超凈工作臺內(nèi)進(jìn)行消毒，75%乙醇浸泡20秒，1%的苯扎氯胺溶液浸泡I分鐘，無菌蒸餾水沖洗2-3次后，用0.1%升汞浸泡2分鐘，無菌蒸餾水沖洗5-8次，放于滅過菌的墊有濾紙的接種盤內(nèi)，使濾紙能夠吸干外植體表面的殘留水分。
[0017](2)啟動培養(yǎng):將莖段兩端分別切去2_4mm，平放在啟動培養(yǎng)基上，葉腋朝上，啟動培養(yǎng)基的配方為=White + 6-BA2.0mg/L + NAA0.5mg/L, 20g/L 鹿糖，4.0g/L 瓊脂，pH 為 5.8。置于晝溫25±2°C，夜溫20±2°C的條件下暗培養(yǎng)15天后，葉腋處長出l-2cm高腋芽，再置于光照強(qiáng)度1000-2000Lux，光照時(shí)間12小時(shí)/天，晝溫25±2°C，夜溫20±2°C的條件下光照培養(yǎng)15天。
[0018](3)增殖培養(yǎng):2013年6月腋芽長到3-4cm高時(shí)，將其從老莖上剪下，去掉底部1-2個(gè)葉片，直立于幼苗增殖培養(yǎng)基上，對于較高腋芽，從基部切取含1-2個(gè)腋芽的莖段，并平放于增殖培養(yǎng)基上，增殖培養(yǎng)基的配方為:MS + ΖΤ0.5mg/L + 6-BA 1.0mg/L + TDZ0.lmg/L,30g/L蔗糖，4.0g/L瓊脂，pH為5.8。置于晝溫25±2°C，夜溫20±2°C的條件下暗培養(yǎng)15天后，腋芽基部形成約Icm3的愈傷組織，莖段葉腋處長出l-2cm高腋芽，形態(tài)學(xué)下端也形成約Icm3的愈傷組織，再置于光照強(qiáng)度1000-2000Lux，光照時(shí)間12小時(shí)/天，晝溫25±2°C，夜溫20±2°C的條件下光照培養(yǎng)15天?；坑鷤M織誘導(dǎo)可出4-8個(gè)l-2cm高的不定芽，同時(shí)腋芽長到3-4cm。待15天后，待不定芽小苗長到3-4cm高，再將小苗切下，轉(zhuǎn)到相同的增殖培養(yǎng)基上，經(jīng)過45天的培養(yǎng)，誘導(dǎo)出的小苗又可長到3-4cm，反復(fù)將高3_4cm的小苗切下進(jìn)行增殖培養(yǎng)，可以使小木漆進(jìn)行快速大量的擴(kuò)繁，其增值倍數(shù)為4.89倍。
[0019](4)生根培養(yǎng):2013年7月開始將3-4cm高的組培苗轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上，生根培養(yǎng)基配方為:1/2MS + IΑΑ0.05mg/L + IBA0.2mg/L,0.2g/L活性炭，30g/L蔗糖，4.0g/L瓊脂，pH為5.8。置于光照強(qiáng)度1000-2000Lux，光照時(shí)間12小時(shí)/天，晝溫25 ± 2 °C，夜溫20 ± 2 °C 的條件下光照培養(yǎng)15天后，得到小木漆生根苗。
[0020](5)煉苗與移栽:待生根苗的根長達(dá)1.5_2cm后，在室溫為25°C的室內(nèi)打開瓶蓋，煉苗3天后，取出生根苗，洗凈沾附在根部的培養(yǎng)基，之后移栽到基質(zhì)配比為腐殖土:河沙=1:1的沙盤中，移栽后注意控制溫室內(nèi)的溫度在25-30°C之間，濕度在75-80%之間，15天后成活，移至杯口直徑為IOcm的營養(yǎng)袋中，移栽基質(zhì)配比同沙盤。再通過養(yǎng)護(hù)3個(gè)月，苗高達(dá)20-30cm時(shí)，移至室外空地造林，以待割取生漆。
【權(quán)利要求】
1.一種小木漆高效快速擴(kuò)繁方法，其特征在于按下列步驟實(shí)施: (1)外植體的選擇與消毒:選取優(yōu)良小木漆單株的當(dāng)年生嫩莖或根萌幼苗，去除葉柄和葉片，用毛刷輕刷莖段表面，除去表面雜質(zhì)，用2%的洗潔精水溶液浸泡10-15分鐘，在線狀自來水下沖洗1-2小時(shí)，剪成3-4cm長含1-2個(gè)葉腋的莖段，放于滅過菌的外植體缸內(nèi)，移至超凈工作臺內(nèi)進(jìn)行消毒，75%乙醇浸泡20-30秒，1%的苯扎氯胺溶液浸泡1-2分鐘，無菌蒸餾水沖洗2-3次后，用0.1%升汞浸泡10-20分鐘，無菌蒸餾水沖洗5-8次，放于滅過菌的墊有濾紙的接種盤內(nèi)，使濾紙能夠吸干外植體表面的殘留水分； (2)啟動培養(yǎng):將莖段兩端分別切去2-4mm，平放在啟動培養(yǎng)基上，葉腋朝上，啟動培養(yǎng)基的配方為:White + 6-BA 0.5_2mg/L + NAA 0.02-0.5mg/L, 20_30g/L 蔗糖，4.0-5.0g/L 瓊月旨，pH為5.8-6.0 ;置于晝溫25±2°C，夜溫20±2°C的條件下暗培養(yǎng)15-20天后，葉腋處長出l_2cm高腋芽，再置于光照強(qiáng)度1000-2000 Lux，光照時(shí)間12小時(shí)/天，晝溫25±2°C，夜溫20±2°C的條件下光照培養(yǎng)10-15天； (3)增殖培養(yǎng):待腋芽長到3-4cm高時(shí)，將其從老莖上剪下，去掉底部1-2個(gè)葉片，直立于幼苗增殖培養(yǎng)基上，對于較高腋芽，從基部切取含1-2個(gè)腋芽的莖段，并平放于增殖培養(yǎng)基上，增殖培養(yǎng)基的配方為:MS + ΖΤ0.1-1.0mg/L + 6-BA0.5-3.0mg/L + TDZ0.lmg/L,20-30g/L 蔗糖，4.0-5.0g/L 瓊脂，pH 為 5.8_6.0 ;置于晝溫 25±2°C，夜溫 20±2°C 的條件下暗培養(yǎng)15-20天后，腋芽基部形成約Icm3的愈傷組織，莖段葉腋處長出l-2cm高腋芽，形態(tài)學(xué)下端也形成約Icm3的愈傷組織，再置于光照強(qiáng)度1000-2000LUX，光照時(shí)間12小時(shí)/天，晝溫25±2°C，夜溫20±2°C的條件下光照培養(yǎng)10-15天；基部愈傷組織誘導(dǎo)可出4_8個(gè)1-2cm高的不定芽，同時(shí)腋芽長到3-4cm;待15天后，待不定芽小苗長到3_4cm高，再將小苗切下，轉(zhuǎn)到相同的增殖培養(yǎng)基上，經(jīng)過45天的培養(yǎng)，誘導(dǎo)出的小苗又可長到3-4cm，反復(fù)將高3-4cm的小苗切下進(jìn)行增殖培養(yǎng)，可以使小木漆進(jìn)行快速大量的擴(kuò)繁，其增值倍數(shù)為4-5倍; (4)生根培養(yǎng):將3-4cm高的組培苗轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上，生根培養(yǎng)基配方為:1/2MS+IΑΑ0.05-0.2mg/L + IBA0.05-0.2mg/L，0.1-0.5g/L 活性炭，20_30g/L 蔗糖，4.0-5.0g/L 瓊月旨，pH為5.8-6.0 ;置于光照強(qiáng)度1000-2000Lux，光照時(shí)間12小時(shí)/天，晝溫25±2°C，夜溫20±2°C的條件下光照培養(yǎng)10-15天后，得到小木漆生根苗； (5)煉苗與移栽:待生根苗的根長達(dá)1.5-2cm后，在室溫為25°C的室內(nèi)打開瓶蓋，煉苗2-4天后，取出生根苗，洗凈沾附在根部的培養(yǎng)基，之后移栽到基質(zhì)配比為腐殖土:河沙=1:I的沙盤中，移栽后注意控制溫室內(nèi)的溫度在25-30°C之間，濕度在75-80%之間，10-15天后成活，移至杯口直徑為IOcm的營養(yǎng)袋中，移栽基質(zhì)配比同沙盤；再通過養(yǎng)護(hù)2-3個(gè)月，苗高達(dá)20-30cm時(shí)，移至室外空地造林，以待割取生漆。
【文檔編號】A01H4/00GK104012417SQ201410311305
【公開日】2014年9月3日 申請日期:2014年7月2日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月2日
【發(fā)明者】何承忠, 趙月明, 李旦, 劉玉鯤, 段安安, 許玉蘭, 祝建兵, 廖聲熙 申請人:西南林業(yè)大學(xué)