多花型兜蘭試管苗培育方法
【專(zhuān)利摘要】多花型兜蘭試管苗培育方法，屬于植物種植【技術(shù)領(lǐng)域】。其特征在于包括以下步驟：1)果莢獲?。?)?無(wú)菌播種；3)--增殖繼代培養(yǎng)；4)生根壯苗培養(yǎng)；5)試管苗移栽。上述多花型兜蘭試管苗培育方法，具有萌發(fā)率高、出苗周期短、種苗健壯、根系發(fā)達(dá)、種苗品質(zhì)好、生產(chǎn)成本低等特點(diǎn)，可以用作兜蘭的規(guī)?；⒐S化生產(chǎn)，具有很好的應(yīng)用前景。
【專(zhuān)利說(shuō)明】多花型兜蘭試管苗培育方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于植物種植【技術(shù)領(lǐng)域】，具體為多花型兜蘭試管苗培育方法。
【背景技術(shù)】
[0002]覽蘭(Paphiopedilum)又稱(chēng)拖鞋蘭，蘭科多年生草本，本屬植物全世界約有70多種，是國(guó)家一級(jí)保護(hù)植物?！度A盛頓公約》(即《瀕危野生動(dòng)植物種國(guó)際貿(mào)易公約》，Convention on International Trade in Endangered Species of Wild Fauna and Flora，CITES)把所有兜蘭屬植物列入其附錄一名錄，受到國(guó)際社會(huì)的嚴(yán)格保護(hù)。兜蘭的栽培和育種歷史悠久，目前有大量的雜交品種。多花型系列兜蘭如麥克、國(guó)王、淑女等每個(gè)花莖上有數(shù)朵花，是栽培最普及的洋蘭之一，具有極高的觀賞價(jià)值和較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，在歐美廣受人們歡迎。兜蘭采用分株繁殖繁殖系數(shù)低、速度慢、繁殖周期長(zhǎng)，難以滿(mǎn)足商品化生產(chǎn)的需求。同大多數(shù)蘭花一樣，兜蘭種子十分細(xì)小，不含胚乳，胚未分化，只達(dá)到球形胚階段，無(wú)子葉、胚根和胚芽，在自然環(huán)境中需與真菌共生才能萌發(fā)，且萌發(fā)率極低，利用常規(guī)方法播種發(fā)芽幾乎不可能，只能于試管中在無(wú)菌條件下培養(yǎng)。但兜蘭無(wú)菌播種和組織培養(yǎng)難度大，是蘭科植物中種子試管培養(yǎng)最困難的屬之一。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述問(wèn)題，本發(fā)明的目的在于設(shè)計(jì)提供一種多花型兜蘭試管苗培育方法的技術(shù)方案，多花型兜蘭種子萌發(fā)率、成苗率和移栽成活率高，可以用作兜蘭的規(guī)?；?、工廠化生產(chǎn)。
[0004]所述的多花型兜蘭試管苗培育方法，其特征在于包括以下步驟:
1)果莢獲取:開(kāi)花時(shí)選取生長(zhǎng)健壯的兜蘭母株進(jìn)行人工雜交授粉，授粉后110-120天收取成熟果莢作為外植體，用于播種`；
2)無(wú)菌播種:果莢消毒后，切開(kāi)果莢，將粉末狀的成熟種子均勻撒在播種培養(yǎng)基上；所述的播種培養(yǎng)基為由MS培養(yǎng)基+魚(yú)肉蛋白胨2-4g/L+活性炭0.5-1 g/L+蘋(píng)果粉碎物100-150ml/L組成，播種培養(yǎng)基的PH5.4—5.6，先進(jìn)行暗培養(yǎng)30_35d，然后改為光照培養(yǎng)，待萌發(fā)的種子大多數(shù)轉(zhuǎn)綠后進(jìn)行增殖繼代培養(yǎng)；
3)增殖繼代培養(yǎng):將正常萌發(fā)轉(zhuǎn)綠的原球莖轉(zhuǎn)接到繼代培養(yǎng)基上；所述的繼代培養(yǎng)基由MS培養(yǎng)基+魚(yú)肉蛋白胨3-4g/L+活性炭0.3-0.8 g/L+3_7g/L椰汁組成，所述繼代培養(yǎng)基PH5.5—5.7，約2-3個(gè)月后形成帶短根的叢生植株苗，及時(shí)將植株轉(zhuǎn)接，進(jìn)入生根壯苗培養(yǎng);
4)生根壯苗培養(yǎng):及時(shí)將繼代培養(yǎng)生成的帶短根的叢生植株苗分開(kāi)，從根莖連接處切掉根，接種到壯苗生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)；所述的壯苗生根培養(yǎng)基由花寶一號(hào)1.5g/L+花寶二號(hào)1.5g/L+活性炭l_2g/L+馬鈴薯粉碎物200-300ml/L+香蕉40_50g/L組成，壯苗生根培養(yǎng)基 PH5.5-5.6 ；
5)試管苗移栽:生根壯苗培養(yǎng)80-90天，植株3-5厘米高，根長(zhǎng)2-3厘米，轉(zhuǎn)移到自然光煉苗15-18天，洗凈根部培養(yǎng)基，移栽至基質(zhì)中。
[0005]所述的多花型兜蘭試管苗培育方法，其特征在于步驟I)中:所述的兜蘭母株為國(guó)王、麥克或淑女多花型兜蘭品種。
[0006]所述的多花型兜蘭試管苗培育方法，其特征在于步驟2)中:果莢外植體用75%酒精浸泡30-35秒后，用0.1%升汞消毒15-20分鐘，期間不斷搖動(dòng)以使果莢外植體充分接觸升汞溶液，再用無(wú)菌水沖洗4-5次，在超凈工作臺(tái)上切開(kāi)果莢，將粉末狀的成熟種子均勻撒在播種培養(yǎng)基上。
[0007]所述的多花型兜蘭試管苗培育方法，其特征在于步驟2)中:所述的播種培養(yǎng)基為由MS培養(yǎng)基+魚(yú)肉蛋白胨3g/L+活性炭0.6-0.8 g/L+蘋(píng)果粉碎物120_130ml/L組成。
[0008]所述的多花型兜蘭試管苗培育方法，其特征在于步驟2)中:光照強(qiáng)度150-250LX，光照時(shí)間9-llh/d 周后光照強(qiáng)度增加到400_600Lx，光照時(shí)間10-1 lh/d。
[0009]所述的多花型兜蘭試管苗培育方法，其特征在于步驟2)中:所述的蘋(píng)果粉碎物采用以下方法制備:將蘋(píng)果去皮去心后，切成小塊，稱(chēng)取100g，加入IL水中，放入攪拌機(jī)攪拌2-3min,備用。
[0010]所述的多花型兜蘭試管苗培育方法，其特征在于步驟3)中:所述的繼代培養(yǎng)基由MS培養(yǎng)基+魚(yú)肉蛋白胨3.5 g/L+活性炭0.4-0.5 g/L+4_6g/L椰汁組成；光照強(qiáng)度800Lx—lOOOLx，光照時(shí)間 12-13h/d。
[0011]所述的多花型兜蘭試管苗培育方法，其特征在于步驟4)中:所述的壯苗生根培養(yǎng)基由花寶一號(hào)1.5g/L +花寶二號(hào)1.5g/L+活性炭1.5g/L+馬鈴薯粉碎物250ml/L+香蕉45g/L組成；光照強(qiáng)度1500Lx — 2000Lx，光照時(shí)間ll_12h/d。
[0012]所述的多花型兜蘭試管苗培育方法，其特征在于步驟4)中:所述的馬鈴薯粉碎物采用以下方法制備:將馬鈴薯去皮后，切成小塊，稱(chēng)取100g，放入IL水中，煮沸后再繼續(xù)煮10-15min,然后放入攪拌機(jī)攪拌2_3min，備用。。
[0013]所述的多花型兜蘭試管苗培育方法，其特征在于步驟5)中:所述基質(zhì)為為體積比1:1泥炭:樹(shù)皮混合物，基質(zhì)采用1000-1200倍多菌靈消毒，將煉苗區(qū)與其他區(qū)域隔離，溫度控制在24-26°C，濕度為50%-70%，并保持適當(dāng)通風(fēng)。
[0014]所述的花寶一號(hào)為N:P:K重量比7:6:19的混合物，所述的花寶二號(hào)為N:P:K重量比20:20:20的混合物，均可從市場(chǎng)上直接購(gòu)得。
[0015]上述多花型兜蘭試管苗培育方法，具有萌發(fā)率高、出苗周期短、種苗健壯、根系發(fā)達(dá)、種苗品質(zhì)好、生產(chǎn)成本低等特點(diǎn)，可以用作兜蘭的規(guī)?；?、工廠化生產(chǎn)，具有很好的應(yīng)用前景。
【具體實(shí)施方式】
[0016]下面結(jié)合具體實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的有益效果。
[0017]實(shí)施例1
I)果莢獲取:選用國(guó)王、麥克、淑女三個(gè)多花型兜蘭品種的成熟果莢為實(shí)驗(yàn)材料，開(kāi)花時(shí)選取生長(zhǎng)健壯的母株進(jìn)行人工雜交授粉，授粉后120天收取成熟果莢。
[0018]2)無(wú)菌播種:將果莢外植體用75%酒精浸泡30秒后，用0.1%升汞消毒15~20分鐘，期間不斷搖動(dòng)以使果莢外植體充分接觸升汞溶液，再用無(wú)菌水沖洗5次，在超凈工作臺(tái)上切開(kāi)果莢，將粉末狀的成熟種子均勻撒在播種培養(yǎng)基上；所述的播種培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基+魚(yú)肉蛋白胨3g/L+活性炭0.5 g/L+蘋(píng)果粉碎物100ml/L，PH5.4—5.6 ;暗培養(yǎng)30天左右，種子開(kāi)始萌發(fā)時(shí)改為光照培養(yǎng)，光照強(qiáng)度200Lx，光照時(shí)間10h/d，一周后光照強(qiáng)度增加到500Lx，光照時(shí)間10h/d ;此時(shí)，萌發(fā)的種子有逐漸轉(zhuǎn)綠的現(xiàn)象，待萌發(fā)的種子基本轉(zhuǎn)綠后進(jìn)行增殖繼代培養(yǎng)；
所述的蘋(píng)果粉碎物采用以下方法制備:將蘋(píng)果去皮去心后，切成小塊，稱(chēng)取100g，加入IL水中，放入攪拌機(jī)攪拌2-3min，備用。；
所述的播種培養(yǎng)基也可以為由MS培養(yǎng)基+魚(yú)肉蛋白胨2g/L+活性炭0.5 g/L+蘋(píng)果粉碎物100ml/L組成，或由MS培養(yǎng)基+魚(yú)肉蛋白胨4g/L+活性炭I g/L+蘋(píng)果粉碎物150ml/L組成；
3)增殖繼代培養(yǎng):將正常萌發(fā)轉(zhuǎn)綠的原球莖進(jìn)行增殖繼代培養(yǎng)，培養(yǎng)基為Dl號(hào)培養(yǎng)基，其成分為MS培養(yǎng)基+魚(yú)肉蛋白胨3g/L+活性炭0.5 g/L+5g/L椰汁，PH5.4—5.6，光照強(qiáng)度800Lx — lOOOLx，光照時(shí)間12h/d。培養(yǎng)2_3個(gè)月后形成帶短根的叢生植株苗，及時(shí)分苗轉(zhuǎn)接，進(jìn)入生根壯苗培養(yǎng)；
所述的繼代培養(yǎng)基也可以由MS培養(yǎng)基+魚(yú)肉蛋白胨4g/L+活性炭+3 g/L椰汁組成，或由MS培養(yǎng)基+魚(yú)肉蛋白胨3.5g/L+活性炭0.8 g/L+7 g/L椰汁組成；
4)生根壯苗培養(yǎng):及時(shí)將繼代培養(yǎng)生成的帶短根的叢生植株苗分開(kāi)，從根莖連接處切掉根，接種到壯苗生根培養(yǎng)基中。壯苗生根培養(yǎng)基為花寶一號(hào)1.5 g/L +花寶二號(hào)1.5 g/L+活性炭lg/L+馬鈴薯粉碎物200ml/L+香蕉40g/L, PH5.4—5.6。光照強(qiáng)度1500Lx—2000Lx，光照時(shí)間 12h/d ；
所述的壯苗生根培養(yǎng)基也可以由花寶一號(hào)1.5 g/L +花寶二號(hào)1.5 g/L +活性炭2g/1+馬鈴薯粉碎物2501111/1+香蕉458/1組成，或由花寶一號(hào)1.5 g/L +花寶二號(hào)1.5 g/L +活性炭1.5g/L+馬鈴薯粉碎物300ml/L+香蕉50g/L組成；
所述的馬鈴薯粉碎物采用以下方法制備:將馬鈴薯去皮后，切成小塊，稱(chēng)取100g，放入IL水中，煮沸后再繼續(xù)煮10-15min,然后放入攪拌機(jī)攪拌2-3min,備用；
5)試管苗移栽:試管苗壯苗培養(yǎng)90天后，植株約4-5厘米高，根長(zhǎng)2-3厘米，轉(zhuǎn)移到自然光下煉苗15天；而后將其從玻璃瓶中小心取出，洗凈根部培養(yǎng)基，所述基質(zhì)為為體積比1:1泥炭:樹(shù)皮混合物，基質(zhì)采用1000-1200倍多菌靈消毒，將煉苗區(qū)與其他區(qū)域隔離，溫度控制在24-26°C，濕度為50%-70%，并保持適當(dāng)通風(fēng)。
[0019]上述方法中適宜溫度均為24_26°C。
[0020]以下通過(guò)試驗(yàn)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的有益效果。
【權(quán)利要求】
1.多花型兜蘭試管苗培育方法，其特征在于包括以下步驟: 1)果莢獲取:開(kāi)花時(shí)選取生長(zhǎng)健壯的兜蘭母株進(jìn)行人工雜交授粉，授粉后110-120天收取成熟果莢作為外植體，用于播種； 2)無(wú)菌播種:果莢消毒后，切開(kāi)果莢，將粉末狀的成熟種子均勻撒在播種培養(yǎng)基上；所述的播種培養(yǎng)基為由MS培養(yǎng)基+魚(yú)肉蛋白胨2-4g/L+活性炭0.5-1 g/L+蘋(píng)果粉碎物100-150ml/L組成，播種培養(yǎng)基的PH5.4—5.6,先進(jìn)行暗培養(yǎng)30_35d，然后改為光照培養(yǎng)，待萌發(fā)的種子大多數(shù)轉(zhuǎn)綠后進(jìn)行增殖繼代培養(yǎng)； 3)增殖繼代培養(yǎng):將正常萌發(fā)轉(zhuǎn)綠的原球莖轉(zhuǎn)接到繼代培養(yǎng)基上；所述的繼代培養(yǎng)基由MS培養(yǎng)基+魚(yú)肉蛋白胨3-4g/L+活性炭0.3-0.8 g/L+3_7g/L椰汁組成，所述繼代培養(yǎng)基PH5.5—5.7，約2-3個(gè)月后形成帶短根的叢生植株苗，及時(shí)將植株轉(zhuǎn)接，進(jìn)入生根壯苗培養(yǎng); 4)生根壯苗培養(yǎng):及時(shí)將繼代培養(yǎng)生成的帶短根的叢生植株苗分開(kāi)，從根莖連接處切掉根，接種到壯苗生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)；所述的壯苗生根培養(yǎng)基由花寶一號(hào)1.5g/L+花寶二號(hào)1.5g/L+活性炭l_2g/L+馬鈴薯粉碎物200-300ml/L+香蕉40_50g/L組成，壯苗生根培養(yǎng)基 PH5.5-5.6 ； 5)試管苗移栽:生根壯苗培養(yǎng)80-90天，植株3-5厘米高，根長(zhǎng)2-3厘米，轉(zhuǎn)移到自然光煉苗15-18天，洗凈根部培養(yǎng)基，移栽至基質(zhì)中。
2.如權(quán)利要求1所述的多花型兜蘭試管苗培育方法，其特征在于步驟I)中:所述的兜蘭母株為國(guó)王、麥克或淑女多花型兜蘭品種。
3.如權(quán)利要求1所述的多花型兜蘭試管苗培育方法，其特征在于步驟2)中:果莢外植體用75%酒精浸泡30-35秒后，用0.1%升汞消毒15-20分鐘，期間不斷搖動(dòng)以使果莢外植體充分接觸升汞溶液 ，再用無(wú)菌水沖洗4-5次，在超凈工作臺(tái)上切開(kāi)果莢，將粉末狀的成熟種子均勻撒在播種培養(yǎng)基上。
4.如權(quán)利要求1所述的多花型兜蘭試管苗培育方法，其特征在于步驟2)中:所述的播種培養(yǎng)基為由MS培養(yǎng)基+魚(yú)肉蛋白胨3g/L+活性炭0.6-0.8 g/L+蘋(píng)果粉碎物120_130ml/L組成。
5.如權(quán)利要求1所述的多花型兜蘭試管苗培育方法，其特征在于步驟2)中:光照強(qiáng)度150-250LX，光照時(shí)間9-llh/d 周后光照強(qiáng)度增加到400_600Lx，光照時(shí)間10-1 lh/d。
6.如權(quán)利要求1所述的多花型兜蘭試管苗培育方法，其特征在于步驟2)中:所述的蘋(píng)果粉碎物采用以下方法制備:將蘋(píng)果去皮去心后，切成小塊，稱(chēng)取100g，加入IL水中，放入攪拌機(jī)攪拌2-3min，備用。
7.如權(quán)利要求1所述的多花型兜蘭試管苗培育方法，其特征在于步驟3)中:所述的繼代培養(yǎng)基由MS培養(yǎng)基+魚(yú)肉蛋白胨3.5g/L+活性炭0.4-0.5 g/L+4_6g/L椰汁組成；光照強(qiáng)度 800Lx — lOOOLx，光照時(shí)間 12_13h/d。
8.如權(quán)利要求1所述的多花型兜蘭試管苗培育方法，其特征在于步驟4)中:所述的壯苗生根培養(yǎng)基由花寶一號(hào)1.5g/L +花寶二號(hào)1.5g/L+活性炭1.5g/L+馬鈴薯粉碎物250ml/L+ 香蕉 45g/L 組成；光照強(qiáng)度 1500Lx — 2000Lx，光照時(shí)間 ll_12h/d。
9.如權(quán)利要求1所述的多花型兜蘭試管苗培育方法，其特征在于步驟4)中:所述的馬鈴薯粉碎物采用以下方法制備:將馬鈴薯去皮后，切成小塊，稱(chēng)取100g，放入IL水中，煮沸后再繼續(xù)煮10-15min,然后放入攪拌機(jī)攪拌2_3min,備用。
10.如權(quán)利要求1所述的多花型兜蘭試管苗培育方法，其特征在于步驟5)中:所述基質(zhì)為為體積比1:1泥炭:樹(shù)皮混合物，基質(zhì)采用1000-1200倍多菌靈消毒，將煉苗區(qū)與其他區(qū)域隔離，溫度控制在24-26°C ，濕度為50%-70%，并保持適當(dāng)通風(fēng)。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK103704139SQ201310742625
【公開(kāi)日】2014年4月9日 申請(qǐng)日期:2013年12月30日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月30日
【發(fā)明者】鄭勇平, 王春, 陳任文展, 張慕歡 申請(qǐng)人:浙江森禾種業(yè)股份有限公司