一種高脂松樹莖段組培芽誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種高脂松樹莖段組培芽誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)的方法，將高脂松樹嫩枝莖段滅菌消毒后，接入初代培養(yǎng)基中，在溫度7-10℃暗培養(yǎng)5-7d，溫度20-25℃培養(yǎng)50-60d形成初代芽；將初代芽轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基內(nèi)，溫度17-20℃培養(yǎng)5-7d后，溫度20-25℃培養(yǎng)15-20d形成增殖芽叢，芽叢轉(zhuǎn)入伸長培養(yǎng)基中，溫度17-20℃培養(yǎng)5-7d，溫度20-25℃培養(yǎng)18-22d，芽增殖和伸長交替培養(yǎng)。該方法能有效遏制繼代芽的褐化，使芽健康增殖，平均增殖系數(shù)6.95以上，芽伸長快，并且長勢良好，經(jīng)過多代培養(yǎng)增殖系數(shù)穩(wěn)定，達(dá)到繼代芽快速擴(kuò)繁的目的，具有較好的經(jīng)濟(jì)效益和社會效益。
【專利說明】一種高脂松樹莖段組培芽誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬植物繁殖【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及松樹組織培養(yǎng)技術(shù)，尤其是一種高脂松樹莖段組培芽誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]高脂松樹是新松木品種，是集采脂、紙漿、纖維板，膠合板、建筑材、家具材為一身的優(yōu)良樹種，具有速生、樹干通直，高產(chǎn)脂，抗逆性及適應(yīng)性強等優(yōu)良性狀，適合亞熱帶地區(qū)種植。高脂松樹一般5-8年左右可以成材，綜合利用價值高。由于高脂松樹種子量少，同時種子苗有分化，良種資源極少。無性繁殖高脂松樹，可以保持母本的優(yōu)良性狀。目前，高脂松樹主要是扦插和嫁接。高脂松樹的扦插和嫁接，由于受良種穗條有限，制約優(yōu)良品種的快速推廣。作為苗木的組培快繁技術(shù)，雖然在組織培養(yǎng)過程有所研究，仍存在著許多問題。例如繼代芽松脂含量高造成芽褐死、易玻璃化，增殖系數(shù)低，有效芽數(shù)少，繼代周期長，多次繼代芽活性降低，增殖系數(shù)降低。因此，在高脂松組培繼代芽培養(yǎng)中，上述問題更為突出，特別需要一種高脂松組培繼代芽的培養(yǎng)方法，解決現(xiàn)有存在的技術(shù)問題，適應(yīng)大力發(fā)展高脂松樹人工林的需要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有高脂松樹組織培養(yǎng)初代芽褐化嚴(yán)重至死，芽增殖系數(shù)低，高生長緩慢等問題，提供一種高脂松樹莖段組培芽誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)的方法。
[0004]本發(fā)明所解決的技術(shù)問題采用以下技術(shù)方案來實現(xiàn):
一種高脂松樹莖段組培芽誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)的方法，采用組培莖段選擇與處理、組培芽誘導(dǎo)、繼代增殖擴(kuò)繁、叢生芽伸長和壯芽培養(yǎng)等組培技術(shù)體系，獲得優(yōu)質(zhì)高脂松樹芽，其操作步驟如下:
(1)組培莖段選擇與處理
高脂松樹的組培莖段芽選自年產(chǎn)松脂達(dá)4-4.5kg/a.株的高脂松樹穗條嫁接成活的植株，剪取春季萌發(fā)的半木質(zhì)化嫩枝稍，長6-lOcm，用苯扎溴銨按常規(guī)方法清洗，然后用自來水沖洗十浸泡15min,洗去嫩枝稍上的塵埃和苯扎溴銨,再將嫩枝稍裁成l_2cm長的莖段，視木質(zhì)化程度分類置放容器內(nèi)，用0.1%的新吉爾滅浸泡10-15 min，在無菌條件下，用0.15%HgCl2滅菌消毒3-5min,再用無菌水沖洗3_4次,最后用0.l%HgCl2滅菌消毒4_6min,無菌水沖洗4-5次后，將滅菌消毒的莖段放在無菌濾紙上將水吸干；
(2)組培芽誘導(dǎo)
將無菌莖段放入誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行組培芽誘導(dǎo)，組培芽誘導(dǎo)的方法是:先放置溫度7-10°C的環(huán)境，暗培養(yǎng)5-7d，再轉(zhuǎn)入溫度20-25°C，光照強度1200-20001ux，光照12_14h/d條件下培養(yǎng)50-60d，形成初代芽；
(3)芽繼代增殖擴(kuò)繁
將初代芽接入增殖擴(kuò)繁培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代增殖擴(kuò)繁，繼代增殖擴(kuò)繁控制溫度17-20°C，光照強度2000-40001ux，光照10_14h/d，培養(yǎng)5_7d，再在溫度20_25°C，光照強度2000-40001ux，光照10-14h/d的條件下培養(yǎng)15_20d，經(jīng)2_3次繼代增殖擴(kuò)繁周期形成叢生芽，平均增殖系數(shù)6.95以上；
(4)叢生芽伸長
將< 1cm芽叢接入伸長培養(yǎng)基中進(jìn)行叢生芽伸長，叢生芽伸長控制溫度17-20°C，光照強度2000-40001uX，光照10-14h/d，培養(yǎng)5_7天，再在溫度22-25 V，光照強度2000-40001ux，光照10-14h/d的條件下培養(yǎng)20_25d，得到長2_3cm的伸長叢生芽；
(5)壯芽培養(yǎng)
將高≥2cm的單芽切下，插入壯芽培養(yǎng)基中，溫度20-25°C，光照強度2000-40001ux，光照10-14h/d，培養(yǎng)壯芽；將< Icm芽叢接入增殖擴(kuò)繁培養(yǎng)基中，進(jìn)行叢生芽繼代增殖培養(yǎng)。
[0005]以上所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為:1/2改良DCR十6-BA3-5mg/L十ΝΑΑ0.5-1.0mg/L十VC15 mg/L十椰子汁40-60ml/L十瓊脂粉3.8g/L十鹿糖20g/L。
[0006]以上所述的增殖擴(kuò)繁培養(yǎng)基配方為:1/2改良DCR十6-BA0.5_3mg/L十NAA0.05-0.5mg/L 十 VC15mg/L 十椰子汁 10_30ml/L 十瓊脂粉 3.8g/L 十鹿糖 20g/L。
[0007]以上所述的伸長培養(yǎng)基配方為:改良DCR十6-BA0.1-0.3mg/L十NAA0.05-0.2mg/L十椰子汁10-20ml/L十活性碳3g/L十瓊脂粉4.0g/L十蔗糖20g/L。
[0008]以上所述的壯芽培養(yǎng)基配方為:改良DCR十瓊脂粉4.0g/L十蔗糖20g/L。
[0009]以上所述的改良DCR培養(yǎng)基配方為:DCR十NH4N03250 mg/L十谷氨酰胺5mg/L。
[0010]本發(fā)明相對于現(xiàn)有的技術(shù)具有優(yōu)點和積極效果:
1、本發(fā)明篩選出一個適應(yīng)高脂松樹莖段芽的組培技術(shù)體系，其方案為:常規(guī)潔凈溶液處理組培莖段，用誘導(dǎo)培養(yǎng)基組培芽誘導(dǎo)，用增殖擴(kuò)繁培養(yǎng)基繼代增殖擴(kuò)繁，經(jīng)2-3次繼代周期形成叢生芽，伸長培養(yǎng)基叢生芽伸長，將高≥ 2cm的單芽切下插于壯芽培養(yǎng)基培養(yǎng)，< Icm芽叢接入增殖擴(kuò)繁培養(yǎng)基中，進(jìn)行叢生芽繼代增殖培養(yǎng)，實現(xiàn)叢生芽繼代增殖，能有效完成組培快繁芽培養(yǎng)過程。
[0011]2、本發(fā)明在芽繼代培養(yǎng)初期，采用低溫度培養(yǎng)后，轉(zhuǎn)到較高溫度下培養(yǎng)，通過前期低溫培養(yǎng)有效遏制繼代芽褐化和玻璃化，較高溫度下培養(yǎng)促進(jìn)芽快速生長，獲得恒穩(wěn)的健康芽增殖體系，保持較高增殖系數(shù)和優(yōu)質(zhì)有效芽數(shù)，達(dá)到組培芽高效擴(kuò)繁的目的，增殖系數(shù)達(dá)到6.95以上。
[0012]3、本發(fā)明一種高脂松樹莖段組培芽誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)的方法，其操作過程簡便，培養(yǎng)周期短，繼代芽質(zhì)量優(yōu)，繼代芽產(chǎn)量大幅度提高，增殖系數(shù)達(dá)到6.95以上，具有較好的經(jīng)濟(jì)效益和社會效益。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0013]圖1和圖2均為高脂松樹莖段組培壯芽。
【具體實施方式】
[0014]下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進(jìn)一步說明。
[0015]實施例1
本實施例采用高脂松樹穗條為年產(chǎn)松脂達(dá)4kg/a.株的母株穗條。在晴朗日剪取春季萌發(fā)的半木質(zhì)化嫩枝稍，長6-lOcm，剪除針葉，在常規(guī)洗潔凈溶液苯扎溴銨中刷洗干凈，然后用自來水沖洗十浸泡15min，洗去嫩枝稍上的洗潔凈溶液，再將嫩枝稍裁成l_2cm長的莖段，視木質(zhì)化程度分類置放容器內(nèi)，將幼嫩頂梢用0.1%的新吉爾滅浸泡15min，，無菌水沖洗2遍，再用0.15%的HgCl2滅菌消毒3min，然后用無菌水沖洗5次，最后用0.1%的HgCl2滅菌消毒6min，再用無菌水沖洗5次，將滅菌消毒的莖段放在無菌濾紙上將水吸干。
[0016]將無菌莖段放入含有:1/2改良DCR十6_BA4mg/L十ΝΑΑ0.8mg/L十VC15mg/L十椰子汁50ml/L十瓊脂粉3.8g/L十蔗糖20g/L的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行組培芽誘導(dǎo)。方法是:先放置放置人工光照培養(yǎng)箱，控制溫度10°C，全暗培養(yǎng)5d，再轉(zhuǎn)入溫度25°C，光照強度16001ux,光照13h/d條件下培養(yǎng)56d形成初代芽。 [0017]將形成的初代芽接入1/2改良DCR十6-BA2mg/L十ΝΑΑ0.2mg/L十VC15mg/L十椰子汁20ml/L十瓊脂粉3.8g/L十蔗糖20g/L的增殖擴(kuò)繁培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代增殖擴(kuò)繁，控制溫度18°C，光照強度30001UX，光照12h/d，培養(yǎng)6d，再在溫度23°C，光照強度30001ux，光照12h/d，培養(yǎng)18d，經(jīng)3次繼代周期形成叢生芽，平均增殖系數(shù)7.1。
[0018]將< Icm芽叢接入改良DCR十6-BA0.2mg/L十ΝΑΑ0.lmg/L十椰子汁15ml/L十活性碳3g/L十瓊脂粉4.0g/L十蔗糖20g/L的伸長培養(yǎng)基中進(jìn)行叢生芽伸長，控制溫度18°C，光照強度30001ux，光照12h/d的條件下培養(yǎng)6天，再控制溫度23°C，光照強度30001ux，光照12h/d的條件下培養(yǎng)23d，得到芽長≥2.6cm的伸長叢生芽。
[0019]將高≥2cm的單芽切下，插入壯芽培養(yǎng)基中，控制溫度25°C，光照強度30001ux，光照12h/d，培養(yǎng)壯芽。將< Icm芽叢接入增殖擴(kuò)繁培養(yǎng)基中，進(jìn)行叢生芽繼代增殖培養(yǎng)。
[0020]以上所述的改良DCR培養(yǎng)基配方為:DCR十NH4N03250mg/L十谷氨酰胺5mg/L，培養(yǎng)基 pH 5.8。
[0021]實施例2
本實施例采用高脂松樹穗條為年產(chǎn)松脂達(dá)4kg/a的母株穗條。在晴朗日剪取春季萌發(fā)的半木質(zhì)化嫩枝稍，長6-8cm，剪除針葉，在常規(guī)洗潔凈溶液苯扎溴銨中刷洗干凈，然后用自來水沖洗十浸泡15min，洗去嫩枝稍上的洗潔凈溶液，再將嫩枝稍裁成l_2cm長的莖段，視木質(zhì)化程度分類置放容器內(nèi)，將幼嫩頂梢用0.1%的新吉爾滅浸泡lOmin，，無菌水沖洗I遍，再用0.1%的HgCl2滅菌消毒5min，然后用無菌水沖洗3次，最后用0.1%的HgCl2滅菌消毒4min，再用無菌水沖洗4次，將滅菌消毒的莖段放在無菌濾紙上將水吸干。
[0022]將無菌莖段放入含有:1/2改良DCR十6_BA3mg/L十NAA0.5mg/L十VC15mg/L十椰子汁60ml/L十瓊脂粉3.8g/L十蔗糖20g/L的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行組培芽誘導(dǎo)。方法是:先放置放置人工光照培養(yǎng)箱，控制溫度10°C，全暗培養(yǎng)5d，再轉(zhuǎn)入溫度20°C，光照強度12001ux,光照14h/d條件下培養(yǎng)60d，形成初代芽。
[0023]將形成的初代芽接入1/2改良DCR十6-BA0.5mg/L十NAA0.05mg/L十VC15mg/L十椰子汁30ml/L十瓊脂粉3.8g/L十蔗糖20g/L的增殖擴(kuò)繁培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代增殖擴(kuò)繁，控制溫度17°C，光照強度20001uX，光照14h/d，培養(yǎng)7d，再在溫度25°C，光照強度20001ux，光照10h/d，培養(yǎng)15d，經(jīng)2次繼代周期形成叢生芽，平均增殖系數(shù)6.86。
[0024]將< Icm芽叢接入改良DCR十6-BA0.lmg/L十ΝΑΑ0.05mg/L十椰子汁20ml/L十活性碳3g/L十瓊脂粉4.0g/L十蔗糖20g/L的伸長培養(yǎng)基中進(jìn)行叢生芽伸長，控制溫度17°C，光照強度20001ux，光照14h/d的條件下培養(yǎng)7天，再控制溫度22°C，光照強度20001ux，光照14h/d的條件下培養(yǎng)25d，得到芽長≥2.4cm的伸長叢生芽。
[0025]將高≥2cm的單芽切下，插入壯芽培養(yǎng)基中，控制溫度22°C，光照強度20001ux，光照12h/d，培養(yǎng)壯芽。將< Icm芽叢接入增殖擴(kuò)繁培養(yǎng)基中，進(jìn)行叢生芽繼代增殖培養(yǎng)。
[0026]以上所述的改良DCR培養(yǎng)基配方為:DCR十NH4N03250mg/L十谷氨酰胺5mg/L，培養(yǎng)基pH5.8。
[0027]實施例3
本實施例采用高脂松樹穗條為年產(chǎn)松脂達(dá)4.5kg/a的母株穗條。在晴朗日剪取春季萌發(fā)的半木質(zhì)化嫩枝稍，長8-lOcm，剪除針葉，在常規(guī)洗潔凈溶液苯扎溴銨中刷洗干凈，然后用自來水沖洗十浸泡15min，洗去嫩枝稍上的洗潔凈溶液，再將嫩枝稍裁成l_2cm長的莖段，視木質(zhì)化程度分類置放容器內(nèi)，將幼嫩頂梢用0.1%的新吉爾滅浸泡15min，，無菌水沖洗2遍，再用0.1%的HgCl2滅菌消毒5min，然后用無菌水沖洗5次，最后用0.1%的HgCl2滅菌消毒4min，再用無菌水沖洗4次，將滅菌消毒的莖段放在無菌濾紙上將水吸干。
[0028]將無菌莖段放入含有:1/2改良DCR十6_BA5mg/L十NAA1.0mg/L十VC15mg/L十椰子汁40ml/L十瓊脂粉3.8g/L十蔗糖20g/L的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行組培芽誘導(dǎo)。方法是:先放置放置人工光照培養(yǎng)箱，控制溫度10°C，全暗培養(yǎng)5d，再轉(zhuǎn)入溫度25°C，光照強度20001ux,光照12h/d條件下培養(yǎng)50d，形成初代芽。
[0029]將形成的初代芽接入1/2改良DCR十6_BA3mg/L十NAA0.5mg/L十VC15mg/L十椰子汁10ml/L十瓊脂粉3.8g/L十蔗糖20g/L的增殖擴(kuò)繁培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代增殖擴(kuò)繁，控制溫度20°C，光照強度40001UX，光照10h/d，培養(yǎng)5d，再在溫度25°C，光照強度40001ux，光照10h/d，培養(yǎng)15d，經(jīng)2次繼代周期形成叢生芽，平均增殖系數(shù)6.95。
[0030]將< Icm芽叢接入改良DCR十6-BA0.3mg/L十ΝΑΑ0.2mg/L十椰子汁10ml/L十活性碳3g/L十瓊脂粉4.0g/L十蔗糖20g/L的伸長培養(yǎng)基中進(jìn)行叢生芽伸長，控制溫度20°C，光照強度40001uX，光照10h/d的條件下培養(yǎng)7天，再控制溫度25°C，光照強度40001ux，光照10h/d的條件下培養(yǎng)25d，得到芽長≥2.8cm的伸長叢生芽。
[0031]將高≥2cm的單芽切下，插入壯芽培養(yǎng)基中，控制溫度22°C，光照強度40001ux，光照14h/d，培養(yǎng)壯芽。將< Icm芽叢接入增殖擴(kuò)繁培養(yǎng)基中，進(jìn)行叢生芽繼代增殖培養(yǎng)。
[0032]以上所述的改良DCR培養(yǎng)基配方為:DCR十NH4N03250mg/L十谷氨酰胺5mg/L，培養(yǎng)基 pH5.8。
[0033]實施例4
本實施例采用高脂松樹穗條為年產(chǎn)松脂達(dá)4kg/a的母株穗條。在晴朗日剪取春季萌發(fā)的半木質(zhì)化嫩枝稍，長6-8cm，剪除針葉，在常規(guī)洗潔凈溶液苯扎溴銨中刷洗干凈，然后用自來水沖洗十浸泡15min，洗去嫩枝稍上的洗潔凈溶液，再將嫩枝稍裁成l_2cm長的莖段，視木質(zhì)化程度分類置放容器內(nèi)，將幼嫩頂梢用0.1%的新吉爾滅浸泡12min，，無菌水沖洗I遍，再用0.12%的HgCl2滅菌消毒3.5min,然后用無菌水沖洗3次，最后用0.1%的HgCl2滅菌消毒4min，再用無菌水沖洗4次，將滅菌消毒的莖段放在無菌濾紙上將水吸干。
[0034]將無菌莖段放入含有:1/2改良DCR十6_BA5mg/L十NAA1.0mg/L十VC15mg/L十椰子汁45ml/L十瓊脂粉3.8g/L十蔗糖20g/L的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行組培芽誘導(dǎo)，方法是:先放置放置人工光照培養(yǎng)箱，控制溫度9°C，全暗培養(yǎng)5.5d，再轉(zhuǎn)入溫度22°C，光照強度1200ux,光照13h/d條件下培養(yǎng)50d，形成初代芽。[0035]將形成的初代芽接入1/2改良DCR十6-BAlmg/L十NAA0.3mg/L十VC15mg/L十椰子汁12ml/L十瓊脂粉3.8g/L十蔗糖20g/L的增殖擴(kuò)繁培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代增殖擴(kuò)繁，控制溫度18°C，光照強度32001UX，光照llh/d，培養(yǎng)6d，再在溫度24°C，光照強度32001ux，光照llh/d，培養(yǎng)16d，經(jīng)3次繼代周期形成叢生芽，平均增殖系數(shù)7.13。
[0036]將< 1cm芽叢接入改良DCR十6-BA0.3mg/L十NAA0.2mg/L十挪子汁12ml/L十活性碳3g/L十瓊脂粉4.0g/L十蔗糖20g/L的伸長培養(yǎng)基中進(jìn)行叢生芽伸長，控制溫度18°C，光照強度32001uX，光照llh/d的條件下培養(yǎng)6天，再控制溫度24°C，光照強度3200ux，光照llh/d的條件下培養(yǎng)20d，得到芽長≥2.6cm的伸長叢生芽。
[0037]將高≥2cm的單芽切下，插入壯芽培養(yǎng)基中，控制溫度23°C，光照強度30001ux，光照12h/d，培養(yǎng)壯芽。將< 1cm芽叢接入增殖擴(kuò)繁培養(yǎng)基中，進(jìn)行叢生芽繼代增殖培養(yǎng)。
[0038]以上所述的改良DCR培養(yǎng)基配方為:DCR十NH4N03250mg/L十谷氨酰胺5mg/L，培養(yǎng)基 pH5.8。
【權(quán)利要求】
1.一種高脂松樹莖段組培芽誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)的方法，其特征在于:組培莖段選擇與處理、組培芽誘導(dǎo)、繼代增殖擴(kuò)繁、叢生芽伸長和壯芽培養(yǎng)等組培技術(shù)體系，獲得優(yōu)質(zhì)高脂松樹芽，其操作步驟如下: (1)組培莖段選擇與處理 高脂松樹的組培莖段芽選自年產(chǎn)松脂4-4.5kg/a.株的高脂松樹穗條嫁接成活的植株，剪取春季萌發(fā)的半木質(zhì)化嫩枝稍，長6-lOcm，用苯扎溴銨按常規(guī)方法清洗，然后用自來水沖洗十浸泡15min,洗去嫩枝稍上的塵埃和苯扎溴銨,再將嫩枝稍裁成l_2cm長的莖段，視木質(zhì)化程度分類置放容器內(nèi)，用0.1%新吉爾滅浸泡10-15min，在無菌條件下，用0.15%HgCl2滅菌消毒3_5min,無菌水沖洗3_4次,再用0.l%HgCl2滅菌消毒4_6min,無菌水沖洗4-5次后，將滅菌消毒的莖段放在無菌濾紙上將水吸干； (2)組培芽誘導(dǎo) 將無菌莖段放入誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行組培芽誘導(dǎo)，組培芽誘導(dǎo)的方法是:先置溫度7-10°C的環(huán)境，暗培養(yǎng)5-7d，再轉(zhuǎn)入溫度20-25°C，光照強度1200-20001ux，光照12_14h/d條件下培養(yǎng)50-60d，形成初代芽； (3)芽繼代增殖擴(kuò)繁 將初代芽接入增殖擴(kuò)繁培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代增殖擴(kuò)繁，繼代增殖擴(kuò)繁控制溫度17-20°C光照強度2000-40001UX，光照10-14h/d，培養(yǎng)5_7d，再在溫度20-25 °C，光照強度2000-40001ux，光照10-14h/d的條件下培養(yǎng)15_20d，經(jīng)2_3次繼代增殖擴(kuò)繁周期形成叢生芽，平均增殖系數(shù)6.95以上； (4)叢生芽伸長 將高< Icm的芽叢接入伸長培養(yǎng)基中進(jìn)行叢生芽伸長，叢生芽伸長控制溫度17-20°C，光照強度2000-40001UX，光照10_14h/d，培養(yǎng)5_7d，再在溫度22-25°C，光照強度2000-40001ux，光照10-14h/d的條件下培養(yǎng)20_25d，得到長2_3cm的伸長叢生芽； (5)壯芽培養(yǎng) 將高≥2cm的單芽切下，插入壯芽培養(yǎng)基中，溫度20-25°C，光照強度2000-40001ux，光照10-14h/d，培養(yǎng)壯芽；將< Icm的芽叢，接入繼代增殖擴(kuò)繁培養(yǎng)基中，繼續(xù)進(jìn)行叢生芽的增殖擴(kuò)繁培養(yǎng)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高脂松樹莖段組培芽誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)的方法，其特征在于:所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為:1/2改良DCR十6-BA3-5mg/L十ΝΑΑ0.5-1.0mg/L十VC15 mg/L十椰子汁40-60ml/L十瓊脂粉3.8g/L十蔗糖20g/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高脂松樹莖段組培芽誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)的方法，其特征在于:所述的增殖擴(kuò)繁培養(yǎng)基配方為:1/2改良DCR十6-BA0.5_3mg/L十ΝΑΑ0.05-0.5mg/L十VC15mg/L十椰子汁10_30ml/L十瓊脂粉3.8g/L十蔗糖20g/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高脂松樹莖段組培芽誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)的方法，其特征在于:所述的伸長培養(yǎng)基配方為:改良DCR十6-BA0.1-0.3mg/L十ΝΑΑ0.05-0.2mg/L十椰子汁10-20ml/L十活性碳3g/L十瓊脂粉4.0g/L十蔗糖20g/L。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高脂松樹莖段組培芽誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)的方法，其特征在于:所述的壯芽培養(yǎng)基配方為:改良DCR十瓊脂粉4.0g/L十蔗糖20g/L。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高脂松樹莖段組培芽誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)的方法，其特征在于:所述的改良DC R培養(yǎng)基配方為:DCR十NH4N 03250 mg/L十谷氨酰胺5mg/L。
【文檔編號】A01H4/00GK103548699SQ201310593867
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年11月22日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月22日
【發(fā)明者】蔡玲, 姚瑞玲, 劉海龍, 吳幼媚 申請人:廣西壯族自治區(qū)林業(yè)科學(xué)研究院