專利名稱：一種具有抗菌抗氧化功能的復(fù)合飼料添加劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于飼料領(lǐng)域，尤其涉及飼料添加劑。
背景技術(shù)：
現(xiàn)代畜禽養(yǎng)殖過程中，為了預(yù)防和治療動物疾病，常使用過量抗生素產(chǎn)品來確保動物健康，但過量抗生素的使用常導(dǎo)致動物肉制品及其產(chǎn)物的品質(zhì)下降和抗生素耐性增強(qiáng)，通過食物鏈的傳遞導(dǎo)致人類健康也受到抗生素問題的嚴(yán)重影響。源自自然界的一些天然物質(zhì)不僅具有良好的營養(yǎng)特性，同時還具有抗病毒、消炎、抗氧化、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能等作用，具有廣闊的應(yīng)用前景。蜂膠的主要成分是黃酮類化合物、酚類、內(nèi)酯、香豆精類、醛酮，少量的鐵、鈣、硅、錳、鉛、鎳、鋁、銅、鋅等微量元素及維生素B族、維生素A，以及多種氨基酸、酶、多糖類及豐富的阿散酸等。蜂膠還是國內(nèi)外專家公認(rèn)的“天然抗生物質(zhì)”，因?yàn)樗粌H具有防御外來的入侵者及感染病原菌擴(kuò)散的作用，還具有抗病毒、消炎、抗氧化、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能等作用。女貞子又稱女貞實(shí)、冬青子、白蠟樹子、鼠梓子。外果皮薄，中果皮較松軟，易剝離，內(nèi)果皮木質(zhì)，黃棕色，具縱棱，破開后種子通常為I粒，腎形，紫黑色，油性。無臭，味甘、微苦澀。女貞子果實(shí)含齊墩果酸(OleanoliC acid)、甘露醇、葡萄糖、棕櫚酸、硬脂酸、油酸及亞麻酸。果皮含熊果酸(Ursolic acid)、齊墩果酸、乙酰齊墩果酸(Acetyloleanolic acid)。種子含脂肪油14. 9%,油中棕櫚酸與硬脂酸為19. 5%、油酸及亞麻酸等為80. 5%。女貞子中尚含銅、鋅、鐵、猛等微量元素。女貞子補(bǔ)肝腎陰，烏須明目，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究認(rèn)為女貞子可以抑制幽門螺桿菌的作用可以治療胃病，還具有抑制嘌呤異常代謝用于痛風(fēng)和高尿酸血癥的治療。用于肝腎陰虛，腰酸耳鳴，須發(fā)早白；眼目昏暗，視物昏暗；陰虛發(fā)熱，胃病及痛風(fēng)和和高尿酸血癥。女貞子是一味臨床常用中草藥，近幾年已經(jīng)開始研究其作為飼料添加劑在畜禽生產(chǎn)中的作用。抗菌肽是一類具有抗菌活性的生物小肽，是動物天然免疫防御系統(tǒng)的重要組成部分?？咕牡睦砘再|(zhì)穩(wěn)定，相對分子質(zhì)量小，抗菌譜廣，抗菌機(jī)制獨(dú)特。與傳統(tǒng)抗生素相比，具有抗菌活性強(qiáng)、無耐藥性、無殘留和毒性小的優(yōu)點(diǎn)。近年來，抗菌肽作為抗生素的理想替代品一直是研究的熱點(diǎn)。據(jù)報道，抗菌肽作為添加劑飼喂動物，具有提高免疫性能、減少疾病的發(fā)生和提高成活率的作用。同時，抗菌肽對動物有良好的促生長作用，可提高動物的生長性能，降低料肉比。因此，抗菌肽具有成為綠色安全飼料添加劑的潛力。靈芝[Ganoderemalucidum(Leyss ex Fr. ) karst],又稱靈芝草，屬擔(dān)子菌亞門、多孔菌目、靈芝科、靈芝屬。歷代的醫(yī)典把靈芝歸位于“上上藥”，其排位在人參之前?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》、《本草綱目》記載，靈芝可明目、補(bǔ)肝氣、安神、益精、益心氣、益脾氣、益肺氣、益腎氣、通九竅、耳聰、目明、利關(guān)節(jié)、利尿、養(yǎng)顏美容，是上好的滋補(bǔ)佳品。靈芝多糖能促進(jìn)蛋白質(zhì)、核酸的合成，對血清、肝臟及骨髓細(xì)胞蛋白質(zhì)或核酸的更新、合成有促進(jìn)作用，它是靈芝扶正固本的主要有效成分之一。靈芝多糖主要存在于靈芝真菌子實(shí)體、菌核、菌絲體或發(fā)酵液中；存在于靈芝中的靈芝酸有止痛、鎮(zhèn)靜、抑制組織胺釋放、解毒、保肝、毒殺腫瘤細(xì)胞的功用，是靈芝的主要有效成分之一。如何有效開發(fā)以天然植物或真菌獲得綠色飼料添加劑產(chǎn)品對飼料添加劑行業(yè)發(fā)
展具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供具有抗菌抗氧化功能的復(fù)合飼料添加劑； 復(fù)合飼料添加劑組成如下抗菌肽10-15%，蜂膠10-20%，女貞子萃取物10_25%，枯草芽孢桿菌凍干菌粉15-30%，靈芝菌固體發(fā)酵培養(yǎng)物40-70%;枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)為、CGMCC6012，上述比例為質(zhì)量百分比。靈芝菌固體發(fā)酵培養(yǎng)物制備方法如下斜面菌種活化培養(yǎng)將保藏的靈芝斜面菌種轉(zhuǎn)接到斜面培養(yǎng)基上，22_28°C培養(yǎng)96-120小時左右，至菌絲長滿斜面即可；最佳培養(yǎng)溫度25°C。I.液體一級種子培養(yǎng)將上述靈芝斜面菌種挑取一塊接入裝有100毫升培養(yǎng)基的500毫升搖瓶中進(jìn)行一級種子培養(yǎng)，培養(yǎng)條件旋轉(zhuǎn)式搖床80-180轉(zhuǎn)/分，22-28°C培養(yǎng)96-130小時左右；旋轉(zhuǎn)式搖床150轉(zhuǎn)/分為宜，培養(yǎng)溫度以25°C為宜。2.液體二級種子培養(yǎng)將一級搖瓶種子以5-20%接種量接入裝有100毫升培養(yǎng)基的500毫升搖瓶中進(jìn)行二級種子培養(yǎng)，培養(yǎng)條件旋轉(zhuǎn)式搖床80-180轉(zhuǎn)/分，22-28°C培養(yǎng)96-130小時左右；合適接種量為10%，旋轉(zhuǎn)式搖床150轉(zhuǎn)/分為宜，培養(yǎng)溫度以25°C為宜。3.固體發(fā)酵培養(yǎng)將二級搖瓶種子以5-10%接種量接入裝有滅菌后固體發(fā)酵培養(yǎng)基的500L固體發(fā)酵罐中，培養(yǎng)條件裝料量50%，培養(yǎng)溫度20-27 °C，濕度75_90%，通風(fēng)量O. 3-1. O (V/V)，培養(yǎng)時間15-40天。每隔3-10天開啟攪拌10分鐘。采用SGF固體發(fā)酵罐。4.發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束，選擇流化床等多種干燥方法，將物料干燥到水分含量在7%以下。對固體發(fā)酵物料進(jìn)行粉碎。本發(fā)明固體發(fā)酵培養(yǎng)基的碳源主要選擇麩皮、葡萄糖、蔗糖、淀粉、玉米粉、玉米芯(粉碎后)等常用原料，氮源可以選擇花生餅粉、蛋白胨、脫脂大豆蛋白粉、豆餅粉、酵母粉等；需要添加的無機(jī)鹽有磷酸二氫鉀，硫酸鎂。在上述固體發(fā)酵培養(yǎng)基中添加有質(zhì)量比為2-6%粉碎后，過40-50目的當(dāng)歸、3_8%的粉碎后，過40-50目的板藍(lán)根，2-5%粉碎后，過40-50目的麝香草。所述女貞子萃取物制備方法如下女貞子粉碎，過40-50目篩后，添加女貞子3-6倍重量無水乙醇浸潰提取，控制溫度30-45°C，2-4小時后調(diào)整溫度為55-60°C 1-2小時，提取液濃縮、干燥得到乙醇提取物；乙醇提取后的女貞子殘?jiān)刑砑?5-85°C熱水，熱水添加量為女貞子殘?jiān)亓康?-4倍，處理時間30-50分鐘，連續(xù)提取2-3次，將提取液真空濃縮后噴霧干燥，得到熱水提取物；將上述乙醇提取物和熱水提取物合并粉碎，過60目篩，即得女貞子提取物。所述枯草芽孢桿菌為枯草芽孢桿菌CGMCC6012，凍干菌粉中活菌數(shù)量為4_8X 108個/g。所述復(fù)合飼料添加劑由以下方法制得粉碎后靈芝菌培養(yǎng)物、抗菌肽、蜂膠、女貞子萃取物和枯草芽孢桿菌凍干菌粉按照比例混合得到復(fù)合飼料添加劑。
本發(fā)明提供一種飼料生產(chǎn)用枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)菌種,該菌株已經(jīng)于2012年4月16日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址位于北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號，(郵編100101)，保藏編號為CGMCC No. 6012。有益效果枯草芽孢桿菌具有如下功能1.耗氧產(chǎn)酸，調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡，達(dá)到預(yù)防腹瀉、下痢等疾??；2.分泌多種酶類，提高飼料消化利用率；3.產(chǎn)生多種營養(yǎng)素，參與機(jī)體新陳代謝；4.提高動物免疫力。本發(fā)明女貞子進(jìn)行粉碎破壁處理，使女貞子中功能因子實(shí)現(xiàn)全價溶出和高效提取利用，分別采用有機(jī)溶劑和熱水實(shí)現(xiàn)其中不同功效成分的有效提取，特別是控制溫度分段提取更是有效提高了女貞子提取物的提取效率和質(zhì)量?？咕?antimicrobial peptides)是具有抗菌活性短肽的總稱。抗菌肽具有廣譜抗菌活性，對細(xì)菌有很強(qiáng)的殺傷作用，尤其是其對某些耐藥性病原菌的殺滅作用更引起 了人們的重視。除此之外，人們還發(fā)現(xiàn)，某些抗菌肽對部分病毒、真菌、原蟲和癌細(xì)胞等有殺滅作用，甚至能提高免疫力、加速傷口愈合過程。本發(fā)明通過科學(xué)復(fù)配，將枯草芽孢桿菌、靈芝菌實(shí)現(xiàn)了有機(jī)組合，特別是靈芝菌培養(yǎng)中添加了中藥成分，本發(fā)明產(chǎn)品可以有效降低抗生素類藥物在飼養(yǎng)動物中的使用量，提高動物肉制品的安全性，提高動物的飼料利用效率，增強(qiáng)動物的免疫力，提高飼養(yǎng)效益。具體實(shí)施方法本發(fā)明中靈芝菌培養(yǎng)物生產(chǎn)過程如下( I)斜面菌種活化培養(yǎng)(2)液體一級種子培養(yǎng)(3)液體二級種子培養(yǎng)(4)固體發(fā)酵培養(yǎng)(5)發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束，選擇流化床等多種干燥方法，將物料干燥到水分含量在7%以下。對固體發(fā)酵物料進(jìn)行粉碎。本發(fā)明所用靈芝菌種購于中國工業(yè)微生物菌種保藏中心，菌號CICC14080。本發(fā)明中斜面培養(yǎng)基組成可以為PDA斜面培養(yǎng)基或其他合適培養(yǎng)基。本發(fā)明固體發(fā)酵培養(yǎng)基的碳源主要選擇麩皮、葡萄糖、蔗糖、淀粉、玉米粉、玉米芯(粉碎后)等常用原料，氮源可以選擇花生餅粉、蛋白胨、脫脂大豆蛋白粉、豆餅粉、酵母粉等；需要添加的無機(jī)鹽有磷酸二氫鉀，硫酸鎂。在發(fā)酵培養(yǎng)基中還添加有質(zhì)量比為2-6%粉碎后過40-50目的當(dāng)歸、3_8%的粉碎后過40-50目的板藍(lán)根，2-5%粉碎后過40-50目的麝香草；本發(fā)明中液體發(fā)酵種子培養(yǎng)基組成淀粉2-3%，蔗糖3-5%，葡萄糖1_3%，蛋白胨O. 5%，脫脂大豆蛋白粉2-3%，磷酸二氫鉀O. 13-0. 2%，硫酸鎂O. 1-0. 15%，維生素B12PPm，PH6-7。本發(fā)明中靈芝培養(yǎng)方法適合同屬其它菌種通過發(fā)酵法進(jìn)行大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)。菌種誘變采取紫外誘變方法以CICC10023為出發(fā)菌株，制成菌懸液，涂布于培養(yǎng)基平皿上，紫外照射90s后37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
菌種篩選從90s平皿上挑30個長得強(qiáng)壯的單菌落，接種于斜面上，37°C培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)24小時，0-4°C冷藏保存；以原始菌種作為對照，采用常規(guī)選育條件，羧甲基纖維素鈉作為碳源和蛋白水解圈方法篩選產(chǎn)纖維素酶和蛋白酶強(qiáng)的菌株，篩選獲得產(chǎn)纖維素酶和蛋白酶強(qiáng)的菌株枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) LI,此菌株產(chǎn)纖維素酶能力比原始菌株提高了25%，產(chǎn)蛋白酶能力比原始菌株提高了 52%。將該菌種在中國普通微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏編號為CGMCC No 6012。本產(chǎn)品所用枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)菌種，該菌株已經(jīng)于2012年4月16日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址位于北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號，(郵編100101)，保藏編號為CGMCC No6012。通過實(shí)驗(yàn)研究表明本發(fā)明產(chǎn)品具有良好的抑制大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、等致病菌的特性。采用杯碟法對靈芝飼料添加劑產(chǎn)品的抑菌效果進(jìn)行了研究，試驗(yàn)采用飼料添加劑的10倍水浸提液進(jìn)行研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1，結(jié)果表明本發(fā)明產(chǎn)品具有抑制致病菌生長的良好特性。表I飼料添加劑產(chǎn)品的抑菌效果
權(quán)利要求
1.ー種具有抗菌抗氧化功能的復(fù)合飼料添加剤，所述具有抗菌抗氧化功能的復(fù)合飼料添加劑組成如下 抗菌肽10-15%，蜂膠10-20%，女貞子萃取物10-25%，枯草芽孢桿菌凍干菌粉15_30%，靈芝菌固體發(fā)酵培養(yǎng)物40-70% ;枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)為CGMCC6012，上述比例為質(zhì)量百分比；靈芝菌固體發(fā)酵培養(yǎng)物制備方法如下斜面菌種活化培養(yǎng)，液體一級種子培養(yǎng)，液體ニ級種子培養(yǎng)，固體發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束，選擇流化床干燥方法，將物料干燥到水分含量在7%以下，對固體發(fā)酵物料進(jìn)行粉碎。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述ー種具有抗菌抗氧化功能的復(fù)合飼料添加剤，其特征在于，所述靈芝菌固體發(fā)酵所用培養(yǎng)基中添加有質(zhì)量比為2-6%粉碎后過40-50目的當(dāng)歸、3-8%的粉碎后過40-50目的板藍(lán)根，2-5%粉碎后過40-50目的麝香草。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述ー種具有抗菌抗氧化功能的復(fù)合飼料添加剤，其特征在于，所述女貞子萃取物制備方法如下 女貞子粉碎，過40-50目篩后，添加女貞子3-6倍重量無水こ醇浸潰提取，控制溫度.30-45°C, 2-4小時后，調(diào)整溫度為55-60°C 1-2小時，提取液濃縮、干燥得到こ醇提取物 ’乙醇提取后的女貞子殘?jiān)刑砑?5-85°C熱水，熱水添加量為女貞子殘?jiān)亓康?-4倍，處理時間30-50分鐘，連續(xù)提取2-3次，將提取液真空濃縮后噴霧干燥，得到熱水提取物；將上述こ醇提取物和熱水提取物合并粉碎，過60目篩，即得女貞子提取物。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述ー種具有抗菌抗氧化功能的復(fù)合飼料添加剤，其特征在于，所述枯草芽孢桿菌凍干菌粉中活菌數(shù)量為4-8 X IO8個/g。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述ー種具有抗菌抗氧化功能的復(fù)合飼料添加剤，其特征在于，所述具有抗菌抗氧化功能的復(fù)合飼料添加劑組成如下 抗菌肽10%，蜂膠15%，女貞子萃取物15%，枯草芽孢桿菌凍干菌粉20%,靈芝菌固體發(fā)酵培養(yǎng)物40% ;枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)為CGMCC6012，上述比例為質(zhì)量百分比。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述ー種具有抗菌抗氧化功能的復(fù)合飼料添加剤，其特征在于，所述具有抗菌抗氧化功能的復(fù)合飼料添加劑組成如下 抗菌肽10%，蜂膠10%，女貞子萃取物10%，枯草芽孢桿菌凍干菌粉10%，靈芝菌固體發(fā)酵培養(yǎng)物60% ;枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)為CGMCC6012，上述比例為質(zhì)量百分比。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述ー種具有抗菌抗氧化功能的復(fù)合飼料添加剤，其特征在于，所述具有抗菌抗氧化功能的復(fù)合飼料添加劑組成如下 抗菌肽12%，蜂膠12%，女貞子萃取物14%，枯草芽孢桿菌凍干菌粉13%，靈芝菌固體發(fā)酵培養(yǎng)物49% ;枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)為CGMCC6012，上述比例為質(zhì)量百分比。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述ー種具有抗菌抗氧化功能的復(fù)合飼料添加剤，其特征在于，所述靈芝菌固體發(fā)酵培養(yǎng)基組成如下70%麩皮、I. 4%蔗糖、8%玉米粉、8%玉米芯(粉碎后)，.O.1%蛋白胨、2%脫脂大豆蛋白粉、O. 5%酵母粉；4%粉碎后過50目的當(dāng)歸、3%的粉碎后過40目的板藍(lán)根，3%粉碎后過40目的麝香草。
9.根據(jù)權(quán)利要求I所述ー種具有抗菌抗氧化功能的復(fù)合飼料添加剤，其特征在于，所述具有抗菌抗氧化功能的復(fù)合飼料添加劑組成如下 抗菌肽10%，蜂膠12%，女貞子萃取物11%，枯草芽孢桿菌凍干菌粉13%，靈芝菌固體發(fā)酵培養(yǎng)物54% ;枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)為CGMCC6012，上述比例為質(zhì)量百分比。
全文摘要
一種具有抗菌抗氧化功能的復(fù)合飼料添加劑，具有抗菌抗氧化功能的復(fù)合飼料添加劑組成如下抗菌肽10-15%，蜂膠10-20%，女貞子萃取物10-25%，枯草芽孢桿菌凍干菌粉15-30%，靈芝菌固體發(fā)酵培養(yǎng)物40-70%；枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)為CGMCC6012，上述比例為質(zhì)量百分比；本發(fā)明產(chǎn)品可以有效降低抗生素類藥物在飼養(yǎng)動物中的使用量，提高動物肉制品的安全性，提高動物的飼料利用效率，增強(qiáng)動物的免疫力，提高飼養(yǎng)效益。
文檔編號A01G1/04GK102657287SQ201210182838
公開日2012年9月12日 申請日期2012年6月5日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月5日
發(fā)明者劉權(quán), 王勇飛, 黃春玲 申請人:荊州雙胞胎飼料有限公司