專利名稱：枯草芽孢桿菌sf-628和咪鮮胺錳鹽復(fù)配殺菌劑及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種復(fù)配殺菌劑及其應(yīng)用，尤其是將一株枯草芽孢桿菌Sf-628和咪鮮胺錳鹽復(fù)配成殺菌劑及其在防治茄果類作物土傳病害(枯萎病和青枯病)中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
隨著人們生活水平的提高，對食品安全性的要求也越來越高。保障無公害、優(yōu)質(zhì)農(nóng)產(chǎn)品的供給和實現(xiàn)資源的可持續(xù)利用是21世紀(jì)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)面臨的最大挑戰(zhàn)。一方面大幅度增加設(shè)施蔬菜種植面積是種植業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整中的核心內(nèi)容；另一方面高產(chǎn)、連作、多樣化的設(shè)施蔬菜種植布局為病蟲害提供了充裕的營養(yǎng)和繁殖條件。因此，近年來設(shè)施條件下茄果類作物土傳病害(枯萎病和青枯病等)頻繁暴發(fā)，形成了在蔬菜生長期連續(xù)不斷使用化學(xué)農(nóng)藥的嚴(yán)峻局面。利用化學(xué)藥劑防治蔬菜土傳病害的方法不僅造成生態(tài)環(huán)境嚴(yán)重污染，而且直接增加蔬菜中有毒化學(xué)物質(zhì)的殘留，對人類健康帶來嚴(yán)重危害。如何減少蔬菜中的化學(xué)藥劑殘留量，已經(jīng)成為各級政府、學(xué)者和菜農(nóng)關(guān)注的焦點。生物農(nóng)藥對人畜安全、環(huán)境兼容 性好。因此利用生物農(nóng)藥防治蔬菜土傳病害日益引起人們的重視。但是田間使用生物農(nóng)藥時也存在著一些問題，如田間防治效果不穩(wěn)定、藥效作用緩慢等。解決這一突出問題的根本途徑是突破目前以化學(xué)農(nóng)藥為主的防治對策的局限性，開展生防微生物與低毒化學(xué)藥劑協(xié)同控制茄果類作物土傳病害的技術(shù)體系。通過有目的地引進有益微生物，惡化病菌生存環(huán)境，形成優(yōu)勢互補，既能發(fā)揮化學(xué)藥劑高效、快速的抑菌作用，又能發(fā)揮生防微生物在誘導(dǎo)植物抗病性、持久地控制茄果類蔬菜土傳病害流行的目的。江蘇省農(nóng)科院篩選獲得的、對多種真菌病害有很好防效的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) sf-628于2006年8月I日被中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)受理保藏，保藏編號為CGMCC No. 1772，拉丁學(xué)名為Bacillus subtilissf-628 (本文簡稱sf-628)。其生物學(xué)性狀記載為sf_628菌落圓形，米色，表面有皺褶。革蘭氏反應(yīng)陽性，細胞形狀桿狀，細胞直徑大于I Pm，嚴(yán)格好氣，L-阿拉伯糖、D-葡萄糖、D-木糖、D-甘露醇、淀粉水解、明膠液化等利用反應(yīng)均為陽性。2007年以來江蘇省農(nóng)科院開展了枯草芽孢桿菌sf-628防治梨輪紋病的研究，并有相關(guān)報道(詳見果樹學(xué)報2010，27 (5) ；2010,27(1) ；2009,26(3);江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報2009，25(5))。近年來研究室發(fā)現(xiàn)枯草芽孢桿菌sf-628對蔬菜枯萎病和青枯病也有很強的防治作用?？莶菅挎邨U菌sf-628是一株對化學(xué)藥劑咪鮮胺錳鹽有天然抗性的菌株，用咪鮮胺錳鹽進一步抗性誘導(dǎo)，枯草芽孢桿菌sf-628能夠在咪鮮胺錳鹽含量IOOOOppm的YGPA培養(yǎng)基上正常生長?？莶菅挎邨U菌sf-628還具有許多優(yōu)良性能，如有較廣的抑菌譜；生長速度快，適應(yīng)環(huán)境能力強，能在土壤和植物表面定殖，并形成優(yōu)勢種群；誘導(dǎo)寄主產(chǎn)生抗病性；分泌產(chǎn)生多種抗菌物質(zhì)。目前，江蘇省蘇科農(nóng)化有限責(zé)任公司已生產(chǎn)了 200億枯草芽孢桿菌sf-628可濕性粉劑。咪鮮胺猛鹽,英文通用名prochloraz-manganese chloride complex ;化學(xué)名稱為N-丙基-N[2-(2，4，6-三氯苯氧基)乙基]-IH咪唑-I-甲酰胺-氯化錳。其他名稱施保功。原藥外觀為白色至褐色砂粒狀粉末，氣味微芳香，熔點141-142. 5°C，水中溶解度為40mg/L，易溶于有機溶劑。蒸氣壓為0.02Pa(20°C )。在水溶液中或懸浮液中，此復(fù)合物很快地分離，在25°C下其分離度于4小時內(nèi)達55°C，屬于低毒殺菌劑。原藥對大鼠急性經(jīng)口LD50 1600-3200mg/kgo咪鮮胺錳鹽具有治療和保護雙重作用，內(nèi)吸性強，可被根、莖、葉部吸收，并能很快地在植物株體內(nèi)向上傳導(dǎo)，能有效地防治多數(shù)真菌引起的病害。其作用機理是影響留醇的生物合成，使病原菌的細胞膜功能受到破壞，最終導(dǎo)致細胞死亡，從而起到殺菌、防病和治病的功效。咪鮮胺錳鹽對茄果類作物土傳病害有較好的防效。目前，將枯草芽孢桿菌sf-628和咪鮮胺錳鹽復(fù)配的可濕性殺菌粉劑并未見諸報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) sf-628,該菌株已于2006年8月I日被中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心受理保藏，保藏編號為CGMCC No. 1772。本發(fā)明的另一目的是針對目前生產(chǎn)上大量使用化學(xué)農(nóng)藥防治蔬菜病害、嚴(yán)重污染生態(tài)環(huán)境、導(dǎo)致農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留超標(biāo)的問題，提出一株對茄果類作物土傳病害(枯萎病、青枯病等)具有良好防治效果的枯草芽孢桿菌sf-628和咪鮮胺錳鹽復(fù)配的可濕性殺菌粉劑及其應(yīng)用?？莶菅挎邨U菌sf-628和咪鮮胺錳鹽復(fù)配后，形成優(yōu)勢互補的作用，既能發(fā)揮化學(xué)藥劑高效、快速的抑菌作用，又能發(fā)揮枯草芽孢桿菌sf-628在誘導(dǎo)植物抗病性、持久地控制茄果類蔬菜土傳病害流行的目的發(fā)明人從采樣分離獲得的2000個細菌菌株中篩選出枯草芽孢桿菌sf-628，抑菌試驗結(jié)果表明該菌株對多種真菌病害具有很強的抑制作用；而且枯草芽孢桿菌sf-628是一株對化學(xué)藥劑咪鮮胺錳鹽有天然抗性的菌株，通過抗性誘導(dǎo)，枯草芽孢桿菌sf-628能夠在咪鮮胺錳鹽含量IOOOOppm的YGPA培養(yǎng)基上正常生長。因而可以將枯草芽孢桿菌sf-628與咪鮮胺錳鹽復(fù)配成殺菌劑，實現(xiàn)長期共存。本發(fā)明提供了一種復(fù)配殺菌劑，其中有效活性成分由枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis) sf-628和咪鮮胺猛鹽組成。本發(fā)明所述的復(fù)配殺菌劑，其中，枯草芽孢桿菌sf-628與咪鮮胺錳鹽的的重量比為1-99 99-1。本發(fā)明所述的復(fù)配殺菌劑，它是可濕性粉劑，其中各組成與含量如下
活性成分10%-85%助劑1%-20%粘合劑2%-20%
表面活性劑l%-20°/o
填充劑10%-70%
本發(fā)明所述的復(fù)配殺菌劑，其中助劑可任選一種或多種下列物質(zhì)NN0(亞甲基二萘磺酸鈉)、氮酮、噻酮；粘合劑可任選一種或多種下列物質(zhì)聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、聚乙烯醇(聚合數(shù)12000-20000);表面活性劑可任選一種或多種下列物質(zhì)十二烷基磺酸鈉、十二烷基苯磺酸鈉、木質(zhì)素磺酸鈉、茶枯粉、皂角粉；填充劑可任選一種或多種下列物質(zhì)輕質(zhì)碳酸鈣、硅藻土、高嶺土、絹云母粉和白碳黑。本發(fā)明提供了所述復(fù)配殺菌劑的用途，將所述的殺菌劑稀釋后灌入蔬菜根部用于防治蔬菜土傳病害；其特征在于所述的蔬菜土傳病害是茄果類作物枯萎病和青枯病。本發(fā)明進一步提供了所述復(fù)配殺菌劑的應(yīng)用，其特征在于將成品藥劑稀釋后的有效藥物成分含量至少為300mg/L。本發(fā)明的優(yōu)點在于通過引進對人畜安全、對茄果類作物枯萎病菌、青枯病菌均具有較強抑制作用的枯草芽孢桿菌sf-628，將其與低毒化學(xué)藥劑咪鮮胺錳鹽按一定比例復(fù)配，達到互補優(yōu)勢、減少化學(xué)藥劑用藥量、降低用藥成本，在提高防治效果的同時，改善了生態(tài)環(huán)境、減少了化學(xué)藥劑在蔬菜中的殘留量。
具體實施例方式實施例I、枯草芽孢桿菌sf-628對番茄枯萎病菌和青枯病菌的抑制作用。供試病原菌菌株番茄枯萎病菌由江蘇省農(nóng)科院植保所提供。用PSA培養(yǎng)基(200g馬鈴薯、20g蔗糖、20g瓊膠和IOOOmL蒸餾水，pH 5. 6 6. 6) 28°C培養(yǎng)5d，備用。番茄青枯病菌由江蘇省農(nóng)科院植保所提供。用NA培養(yǎng)基(牛肉浸膏3.0g，酵母膏l(xiāng)g，蛋白胨5g，葡萄糖10g，瓊脂20g，蒸餾水IOOOmL) 28。。振蕩(150r/m)培養(yǎng)2d，備用。將江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院篩選獲得的枯草芽孢桿菌sf-628在NA培養(yǎng)基上進行活化，然后移入50mL NA培養(yǎng)液中，在28°C下振蕩(150r/m)培養(yǎng)2d，備用。在PSA平板中央放置枯萎病菌菌塊，直徑為7mm ;培養(yǎng)皿四周呈十字架型放置4張濾紙片(離培養(yǎng)皿中心距離為22. 5mm)，每張濾紙片上加入不同稀釋倍數(shù)的枯草芽孢桿菌sf-628菌液7 y L ;設(shè)清水對照。每處理重復(fù)3皿。28°C恒溫培養(yǎng)，待對照平板上病原菌菌落長滿時，測量處理菌落生長直徑。計算抑制率抑制率(％)=[(對照菌落直徑-處理菌落直徑)/(對照菌落直徑-7)] X 100%吸取青枯菌液涂布NA平板(0. 3mL菌液/平板)。培養(yǎng)皿中央放置I張滅菌濾紙片，濾紙片上加入不同稀釋倍數(shù)的枯草芽孢桿菌sf-628菌液7 y L ;設(shè)清水對照。每處理重復(fù)3皿。28°C恒溫培養(yǎng)2d，測量抑菌圈直徑。試驗結(jié)果見表I?？莶菅挎邨U菌sf-628原液、100倍稀釋液和500倍稀釋液對番茄枯萎病菌和青枯病菌均具有較強的抑制作用。表I枯草芽孢桿菌sf-628對番茄枯萎病菌和青枯病菌的抑制作用
權(quán)利要求
1.一種復(fù)配殺菌劑，其中有效活性成分由枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) sf-628和咪鮮胺錳鹽組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的枯草芽孢桿菌sf-628和咪鮮胺錳鹽復(fù)配殺菌劑，其中，枯草芽孢桿菌sf-628與咪鮮胺錳鹽的的重量比為1-99 :99-1。
3.根據(jù)權(quán)利要求1-2所述的枯草芽孢桿菌sf-628和咪鮮胺錳鹽復(fù)配殺菌劑是可濕性粉劑，其組成與含量如下 活性成分10%-85% 助劑1%-20% 粘合劑2%-20%。 表面活性劑1%-20% 填充劑10%-70%
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的枯草芽孢桿菌sf-628和咪鮮胺錳鹽復(fù)配可濕性殺菌粉劑，其中助劑可任選一種或多種下列物質(zhì)NNO(亞甲基二萘磺酸鈉)、氮酮、噻酮；粘合劑可任選一種或多種下列物質(zhì)聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、聚乙烯醇(聚合數(shù)12000-20000);表面活性劑可任選一種或多種下列物質(zhì)十二烷基磺酸鈉、十二烷基苯磺酸鈉、木質(zhì)素磺酸鈉、茶枯粉、皂角粉；填充劑可任選一種或多種下列物質(zhì)輕質(zhì)碳酸鈣、硅藻土、高嶺土、絹云母粉和白碳黑。
5.一種權(quán)利要求1-4所述的復(fù)配殺菌劑的用途，其特征在于將所述的殺菌劑稀釋后灌入蔬菜根部用于防治蔬菜土傳病害。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的復(fù)配殺菌劑的應(yīng)用，其特征在于所述的蔬菜土傳病害是茄果類作物枯萎病和青枯病。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的復(fù)配殺菌劑的應(yīng)用，其特征在于將成品藥劑稀釋后的有效藥物成分含量至少為300mg/L。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種復(fù)配殺菌劑，其中有效活性成分由枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)sf-628和咪鮮胺錳鹽組成。其特征在于所述的有效成分中，枯草芽孢桿菌sf-628與咪鮮胺錳鹽的重量比為1-99∶99-1。該復(fù)配殺菌劑是可濕性粉劑，其組成與含量比例分別是50％咪鮮胺錳鹽30％；200億枯草芽孢桿菌sf-628可濕性粉劑30％；NNO(亞甲基二萘磺酸鈉)為7％；聚乙二醇為3％；十二烷基苯磺酸鈉為5％；輕質(zhì)碳酸鈣為25％。應(yīng)用時，將上述復(fù)配殺菌劑稀釋后灌入蔬菜根部用于防治蔬菜土傳病害，主要是茄果類作物枯萎病和青枯??；稀釋后的有效藥物成分含量至少為300mg/L。其優(yōu)點是將枯草芽孢桿菌sf-628與化學(xué)藥劑咪鮮胺錳鹽按一定比例混合使用，能實現(xiàn)優(yōu)勢互補、減少化學(xué)藥劑用藥量、降低用藥成本，在提高防治效果的同時，改善生態(tài)環(huán)境、減少了化學(xué)藥劑在農(nóng)產(chǎn)品中的殘留量。
文檔編號A01N59/16GK102715193SQ20111033903
公開日2012年10月10日 申請日期2011年11月1日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月1日
發(fā)明者喬俊卿, 劉永鋒, 劉郵洲, 聶亞峰, 陳志誼 申請人:江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院