專利名稱：一種利用真菌激活蛋白提高木霉菌劑生物防病活性的技術的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種真菌激活蛋白提高木霉菌劑生物防病活性的技術，屬于農(nóng)業(yè)生物技術領域。
背景技術：
木霉是自然界中普遍存在的一類真菌，在土壤、植物根圍、葉圍及種子、球莖表面經(jīng)常可以分離到。近些年人們發(fā)現(xiàn)某些木霉是植物病原真菌的寄生菌或拮抗菌，如哈茨木霉(Trichoderma harzianum)、鉤狀木霉(T. hamatum)、綠色木霉(T. viride)可以防治真 菌病害。迄今為止有關木霉在生防方面的研究已開展近70年，在國外已經(jīng)出現(xiàn)了商品化的木霉制劑。如以防治李屬果樹銀葉病(Chondrostereum purpureum)的木霉制劑在西歐已商品化生產(chǎn)；以色列的Makhteshim Agan公司開發(fā)的以哈茨木霉T39菌株為發(fā)酵液的生防制劑，商品名Trichodex,劑型為25%可濕粉,它可以用于防治灰霉病菌(Botrytiscinerea)、菌核病菌(Scleratina sclerotiorum)、葉霉病(Cladosporium fulvum)、霜霉病(Pseudoperonasplra cubensis)和白粉病(Sphaerotheca fuliginea)等葉部病害，在國內(nèi)也有研究利用木霉菌控制植物病害。近年來植物免疫藥物和促生微生物蛋白新農(nóng)藥的興起，據(jù)此研制出來的蛋白質農(nóng)藥是對多種作物具有生物活性的蛋白激發(fā)子類藥物，通過激發(fā)植物自身的抗病防蟲功能基因表達，增強植物對病蟲害的免疫能力和促進植物生長而備受關注，已成為新型環(huán)保生物農(nóng)藥發(fā)展中的一個亮點。新型多功能植物激活蛋白3%極細鏈格孢可濕性粉劑是中國農(nóng)業(yè)科學院植物保護研究所邱德文博士開發(fā)的新型蛋白農(nóng)藥，其是從真菌(Alternaria)分離出的新結構的真菌激活蛋白(專利號ZL01128666.0)?？捎糜谑卟恕⒐返冉?jīng)濟作物的拌種、葉面噴霧，能有效控制病毒病、真菌和細菌等多種病害、提高果品產(chǎn)量和質量，同時對果蔬的保鮮有明顯的作用。從公開報道的文獻中可以看到人們對生防木霉菌的研究，大多集中在菌株的篩選、鑒定、發(fā)酵培養(yǎng)及其利用等方面。為應對當前植物病害防治過程中化學農(nóng)藥過量、頻繁使用的問題，應用生防木霉制劑控制植物病害，可解決蔬菜和土壤中化學農(nóng)藥的殘留污染。但由于生防木霉是活菌制劑，主要通過活菌孢子來實現(xiàn)其生防活性，因此優(yōu)化綠色木霉、哈茨木霉等生防木霉的使用技術，提高降低該活菌劑的田間施用效果，擴大該制劑的田間應用有很好幫助。因此研究利用一種真菌激活蛋白提高木霉菌劑生物防病活性的技術，對于提高木霉菌劑的效果，加快其推廣利用有較大助益。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明專利提供了一種真菌激活蛋白提高木霉菌劑生物防病活性的技術，以提高生防木霉菌劑的防病效果。本發(fā)明是通過以下技術方案實現(xiàn)上述發(fā)明目的。主要包括將3 %極細鏈格孢激活蛋白可濕性粉劑與5億孢子/克木霉菌劑，以激活蛋白和木霉菌劑用量的(O. 2 I. 2) (I)的比例混合后，用平皿稀釋培養(yǎng)法、盆栽噴霧灌根法和田間小區(qū)藥效試驗，驗證激活蛋白對木霉菌劑抑菌增效系數(shù)達2. 03 13. 75。
具體實施例方式下面進一步詳述本發(fā)明的具體操作。
具體實施例方式下面進一步詳述本發(fā)明。本發(fā)明采用室內(nèi)采用含藥介質法、室內(nèi)盆栽活體接種法和田間小區(qū)藥效試驗等多種生物測定方法，針對設施蔬菜上灰霉病、霜霉病、白粉病、立枯病等常發(fā)病害為防治對象，測定了極細鏈格孢激活蛋白對木霉菌劑的增效作用。結果表明，這種激活蛋白對木霉菌劑具有良好的增效作用，而且隨著激活蛋白加入比例的增加，對木霉菌劑的增效作用越明顯。 通過將3%極細鏈格孢激活蛋白可濕性粉劑與5億孢子/克木霉菌劑，以激活蛋白按木霉菌劑用量的(O. 2 I. 2) (I)的比例混合后，用平皿稀釋培養(yǎng)法、盆栽噴霧灌根法和田間小區(qū)藥效試驗，驗證激活蛋白對木霉菌劑抑菌增效系數(shù)達2. 03 13. 75?，F(xiàn)將具體實例詳述如下I、極細鏈格孢激活蛋白與木霉菌劑協(xié)同控病作用防控蔬菜灰霉病采用含藥介質法進行測定。首先進行預備試驗，摸清藥劑抑菌率約為20-90%時藥劑的濃度范圍，據(jù)此設定濃度梯度。用萬分之一天平分別稱取藥劑，加定量滅菌蒸餾水分別配成5X IO6孢子/克和10000 μ g/ml母液。5億孢子/克木霉菌劑與3%極細鏈格孢激活蛋白可濕性粉劑混劑按(I O. 2,1 0.4,1 0.6,1 0.8,1 1、1 1.2)的比例配成母液。然后稀釋成系列濃度。分別取4ml藥劑稀釋液放入滅菌的小三角瓶中，加36ml PDA (濃度相對稀釋10倍)，充分搖勻。等分倒入三個滅菌的平皿中。5億孢子/克木霉菌劑的濃度梯度(平皿中培養(yǎng)基濃度，下同)設定為5X IO5孢子/克、5X IO4孢子/克、5X IO3孢子/克、5X IO2孢子/克、5X10孢子/克；3%極細鏈格孢激活蛋白可濕性粉劑的濃度梯度設定為3000、1000、100、IOU μ g/ml ;混劑的濃度梯度(稀釋倍數(shù))設定為102、103、104、105 ;以不加藥為空白對照。培養(yǎng)基凝固后接入d5mm已活化的灰霉病菌片(菌種編號003)，每處理重復三次，置于23°C恒溫箱中，48h測量菌落半徑增加值，計算抑菌率。抑菌率％=(空白對照菌落半徑增加值一處理菌落半徑增加值)X 100/空白對照菌落半徑增加值。表、極細鏈格孢激活蛋白與木霉菌劑防治灰霉病菌的試驗劑量設置權利要求
1.ー種利用真菌激活蛋白提高木霉菌劑生物防病活性的方法，涉及到利用3%極細鏈格孢激活蛋白可濕性粉劑與木霉菌劑，以激活蛋白和木霉菌制劑用量按O. 2 I. 2 1.00的比例混合后防治蔬菜灰霉病、霜霉病、白粉病、立枯病等，使兩種藥劑的防病增效系數(shù)達2.03 13. 75。
2.權利要求I所述的木霉菌劑主要包括以綠色木霉(Trichodermaviride)、哈茨木霉(Trichoderma harzianum)、綠粘帚霉(Trichoderma virens)、康氏木霉(Trichodermakoningii)、鉤狀木霉(Trichoderma hamatum)等微生物為有效成分的木霉菌齊 。
3.權利要求I所述3%極細鏈格孢激活蛋白可濕性粉劑，是由真菌極細鏈格孢產(chǎn)生、純化、擁有我國自主知識產(chǎn)權的農(nóng)作物抗病增產(chǎn)多功能蛋白，對多種植物具有增產(chǎn)抗病功能。
4.權利要求I所述激活蛋白和木霉菌劑用量，激活蛋白使用量按O.2 I. 2 (質量比)添加，木霉菌劑用量I. O (質量比)添加，混合后用于防治蔬菜病害。
5.權利要求I所述防治蔬菜病害采用噴霧法和灌根法施用，以番茄、黃瓜、辣椒、茄子等蔬菜為主，防治范圍主要包括灰霉病、白粉病、霜霉病、立枯病等。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種真菌激活蛋白提高木霉菌劑生物防病活性的技術，屬于農(nóng)業(yè)生物技術領域。本發(fā)明技術要點是利用極細鏈格孢激活蛋白提高木霉菌劑的生防活性，通過含藥介質法、室內(nèi)盆栽活體接種法和田間小區(qū)藥效試驗驗證，將激活蛋白和木霉菌劑用量的以(0.2～1.2)∶(1)的比例混合后，經(jīng)適當配方，激活蛋白可顯著提高木霉菌劑對蔬菜灰霉病、霜霉病、白粉病、立枯病等的生防效果，防病增效系數(shù)達2.03～13.75。通過激活蛋白與木霉菌劑混合使用，不但可以提高生防制劑的防治效果，且可部分解決木霉菌劑在施用過程中容易出現(xiàn)的遲效性問題，提高木霉活菌制劑的田間防治效果。
文檔編號A01G13/00GK102648713SQ201110042619
公開日2012年8月29日 申請日期2011年2月23日 優(yōu)先權日2011年2月23日
發(fā)明者劉春艷, 劉曉琳, 曾紅梅, 楊秀芬, 王萬立, 王勇, 邱德文, 郝永娟, 霍建飛 申請人:天津市植物保護研究所