專利名稱：通過植物組織培養(yǎng)生產(chǎn)福建道地金線蓮的方法
技術領域：
本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)技術領域，具體是一種通過植物組織培養(yǎng)生產(chǎn)，組織培 養(yǎng)生產(chǎn)福建道地金線蓮的方法。
背景技術：
福建道地金線蓮(Fujian daodi ShorthairyAntenoron)是蘭科，開唇蘭屬植物， 是一種瀕危珍惜的藥用全草，是我國傳統(tǒng)的珍貴藥材。其性平味甘，具有清熱、涼血、祛風利 濕、強心利尿、固腎平肝以及降血壓等功效，主治咯血、支氣管炎、腎炎、膀胱炎、糖尿病、血 尿、風濕性關節(jié)炎、小兒急驚風、毒蛇咬傷等。被稱為“藥中之王”。由于福建道地金線蓮的 顯著的藥用功效及保健功能已為世人公認，其商品價格多年來一直不菲。福建道地金線蓮(Fujian daodi ShorthairyAntenoronO)是一種前景可喜的中藥 免疫增強劑，并具有抗腫瘤、降血糖、抗衰老、抗氧化、抗誘變等作用，受到國內(nèi)外學者的高 度重視。由于金線蓮屬植物的種子不具胚乳，無發(fā)芽能力，只有在真菌共生下，才促進種子 萌發(fā)生長，發(fā)芽率很低，而傳統(tǒng)的分株扦插等無性繁殖方式的成活率很低、生長速度很慢、 繁殖率低、加之其對生長條件要求嚴格、自然條件惡化、野生資源銳減、人為肆意采挖，現(xiàn)已 瀕臨滅絕，致使藥源緊缺，國內(nèi)外市場供不應求。目前國內(nèi)外學者開展了對金線蓮的初步研究，而通過本地選優(yōu)的福建道地金線蓮 的培養(yǎng)主要集中在組培誘導、基本培養(yǎng)基條件的篩選和理化因子的考查等方面。還沒有找 到一個有效地培養(yǎng)技術用以解決福建道地金線蓮誘導和增殖中存在的疑點和難點，從而影 響了福建道地金線蓮的深入研究應用。天然的野生金線蓮已作為瀕臨滅絕的植物物種受到保護，嚴禁采摘。為此研究福 建道地金線蓮的人工培養(yǎng)技術，實現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化顯得十分重要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術中的不足，提供一種保持植物體本身優(yōu)良藥效， 繁殖速度快，增殖倍數(shù)高的的通過植物組織培養(yǎng)生產(chǎn)福建道地金線蓮的方法。本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的一種通過組織培養(yǎng)生產(chǎn)福建道地金線蓮的方法，它 包括如下步驟1. 1植物體的選擇及無菌處理選擇6-8月份生長的野生福建道地金線蓮植物體，除去根和葉進行清洗和無菌處 理，將莖段剪成0. 5-1. 5CM帶莖節(jié)的福建道地金線蓮小段組織；1.2叢生芽誘導培養(yǎng)將經(jīng)過無菌處理后的福建道地金線蓮小段組織在誘導培養(yǎng)基中進行組織誘導培 養(yǎng)叢生芽，培養(yǎng)周期10-60天，培養(yǎng)溫度10-35°C，光照培養(yǎng)時間0-24小時/天，光照強 度100 20001uX Ix ；所述的誘導培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基+蔗糖10_50g/L+瓊脂6_8g/L+活性炭 2. 0-3. Og/L+ 萘乙酸 0. 1-3. Omg/L+6-芐氨基腺嘌呤 0. 1-5. Omg/L, PH 值為 5. 0-7. 0 ；1.3大規(guī)模培養(yǎng)將誘導出的叢生芽在大規(guī)模培養(yǎng)基中進行大規(guī)模培養(yǎng)，培養(yǎng)周期10_60天，培養(yǎng) 溫度10-35°C，光照培養(yǎng)時間0-24小時/天，光照強度1000 20001ux ；所述的大規(guī)模 培養(yǎng)基為改良MS培養(yǎng)基+硝酸鈣600mg/L+香蕉泥30_50g/L+蔗糖10_50g/L/L+瓊脂 6-8g/L+ 活性炭 0. 1-5. Og/L+ 萘乙酸 0. 1-3. Omg/L+6-芐氨基腺嘌呤 0. 1-5. Omg/L, PH 值為 5. 0-7. O0作為本發(fā)明通過組織培養(yǎng)生產(chǎn)福建道地金線蓮的方法更優(yōu)化的技術方案，對培養(yǎng) 基的配方比例和培養(yǎng)條件進行優(yōu)化選擇。所述的叢生芽誘導培養(yǎng)培養(yǎng)周期20_50天，培養(yǎng)溫度20-30°C，光照培養(yǎng)時間 0-24小時/天，光照強度1500 20001uX ；所述的誘導培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基+蔗糖20_40g/ L/L+ 瓊脂 6-8g/L+ 活性炭 2. 0-3. Og/L+ 萘乙酸 1. 0-2. Omg/L+6-芐氨基腺嘌呤 2. 0-3. Omg/ L，PH 值為 5. 5-6. 5 ；所述的大規(guī)模培養(yǎng)培養(yǎng)周期20_50天，培養(yǎng)溫度20-30°C，光照培養(yǎng)時間8_16 小時/天，光照強度1500 20001UX ；所述的大規(guī)模培養(yǎng)基為改良MS培養(yǎng)基+硝酸鈣 600mg/L+ 香蕉泥 30-50g/L+ 蔗糖 20_40g/L+ 瓊脂 6_8g/L+ 活性炭 2. 0-3. 0g/L+ 萘乙酸 1. 0-2. Omg/L+6-芐氨基腺嘌呤 2. 0-3. 0mg/L, PH 值為 5. 5-6. 5。植物體的無菌處理是本發(fā)明的重要技術環(huán)節(jié)，無菌處理的方法包括如下步驟A、將選取的福建道地金線蓮植株，用自來水沖洗2-3小時，用毛刷清洗干凈，除去 根和葉，再用蒸餾水沖洗，置超凈工作臺內(nèi)。B、將除去了根和葉的莖段植物體用70-80%的酒精浸泡20-40秒進行表面滅菌， 再用無菌水清洗干凈C、將經(jīng)過酒精滅菌的莖段植物體用0. 3-0. 8%次氯酸鈉溶液浸泡消毒3-6分鐘， 用無菌水沖洗4-5次，再轉入0. 15%升汞溶液中滅菌8分鐘，倒去滅菌液，用事先準備好的 無菌水沖洗4-5次，再用濾紙吸干無菌水；D、無菌條件下將次氯酸鈉消毒的莖段剪成0. 5-1. 5CM帶莖節(jié)的小段。本發(fā)明的優(yōu)點在于通過植物組織培養(yǎng)，保持植物體的優(yōu)良性狀，保持植物優(yōu)良的 藥物療效，該方法易操作，生產(chǎn)成本低，不污染環(huán)境，可以實現(xiàn)工廠化育苗。選用配方合理的 誘導培養(yǎng)基，誘導出的叢生芽比例達到98%以上，通過兩段培養(yǎng)的方式再生植株產(chǎn)量大幅 度提高，和增殖倍數(shù)達到8倍以上。通過本發(fā)明方法生產(chǎn)福建道地金線蓮，不變異，產(chǎn)量高， 成本低，周期短，極具市場競爭力。
具體實施例方式下面結合具體實施例對本發(fā)明做進一步的說明。實施例1 一種通過組織培養(yǎng)生產(chǎn)福建道地金線蓮的方法，他包括如下步驟A.植物體的選擇及無菌處理A)選擇8月份生長的野生福建道地金線蓮植株，用自來水沖洗2-3小時，用毛刷清 洗干凈，除去根和葉，再用蒸餾水沖洗，置操凈工作臺內(nèi)；B)將除去了根和葉的莖段植物體用75%的酒精浸泡30秒進行表面滅菌，再用無菌水清洗干凈；C)將經(jīng)過酒精滅菌的莖段植物體用0. 5%次氯酸鈉溶液浸泡消毒5分鐘，用無菌 水沖洗5次，再轉入0. 15%升汞溶液中滅菌8分鐘，倒去滅菌液，用事先準備好的無菌水沖 洗4-5次，再用濾紙吸干無菌水；D)無菌條件下將消毒的莖段剪成ICM左右?guī)o節(jié)的福建道地金線蓮小段；B.叢生芽誘導培養(yǎng)將經(jīng)過無菌處理后的福建道地金線蓮小段組織在誘導培養(yǎng)基中進行組織誘導 培養(yǎng)叢生芽，培養(yǎng)周期30天，培養(yǎng)溫度28°C，光照培養(yǎng)時間24小時/天，光照強度 20001ux ；所述的誘導培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基+蔗糖45g/L+瓊脂6_8g/L+活性炭2. Og/L+萘 乙酸2. Omg/L+6-芐氨基腺嘌呤2. Omg/L, PH值為5. 0C.大規(guī)模培養(yǎng)將誘導出的叢生芽在大規(guī)模培養(yǎng)基中進行大規(guī)模培養(yǎng)，培養(yǎng)周期45天，培養(yǎng)溫 度28°C，光照培養(yǎng)時間24小時/天，光照強度15001uX所述的大規(guī)模培養(yǎng)基為改良MS 培養(yǎng)基+硝酸鈣600mg/L+香蕉泥30-50g/L+蔗糖15g/L+瓊脂6_8g/L+活性炭2. Og/L+萘 乙酸1. Omg/L+6-芐氨基腺嘌呤2. Omg/L, PH值為5. 0實施例2 —種通過組織培養(yǎng)生產(chǎn)福建道地金線蓮的方法，它包括如下步驟A.植物體的選擇及無菌處理A)選擇10月份生長的野生福建道地金線蓮植株，用自來水沖2-3小時，用毛刷清 洗干凈，除去根和葉，再用蒸餾水沖洗，置操凈工作臺內(nèi)；B)將除去了根和葉的莖段植物體用75%的酒精浸泡25秒進行表面滅菌，再用無 菌水清洗干凈；C)將經(jīng)過酒精滅菌的莖段植物體用0. 3%次氯酸鈉溶液浸泡消毒5分鐘，用無菌 水沖洗4次，再轉入0. 15%升汞溶液中滅菌8分鐘，倒去滅菌液，用事先準備好的無菌水沖 洗4-5次，再用濾紙吸干無菌水；D)無菌條件下將消毒的莖段剪成ICM左右?guī)o節(jié)的福建道地金線蓮小段；B.叢生芽誘導培養(yǎng)將經(jīng)過無菌處理后的福建道地金線蓮小段組織在誘導培養(yǎng)基中進行組織誘導 培養(yǎng)叢生芽，培養(yǎng)周期40天，培養(yǎng)溫度25°C，光照培養(yǎng)時間15小時/天，光照強度 15001ux ；所述的誘導培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基+蔗糖35g/L+瓊脂6_8g/L+活性炭2. Og/L+萘 乙酸1. 8mg/L+6-芐氨基腺嘌呤3. 0mg/L, PH值為6. 0C.大規(guī)模培養(yǎng)將誘導出的叢生芽在大規(guī)模培養(yǎng)基中進行大規(guī)模培養(yǎng)，培養(yǎng)周期60天，培養(yǎng)溫 度25°C，光照培養(yǎng)時間16小時/天，光照強度15001uX所述的大規(guī)模培養(yǎng)基為改良MS 培養(yǎng)基+硝酸鈣600mg/L+香蕉泥30-50g/L+蔗糖35g/L+瓊脂6_8g/L+活性炭3. 0g/L+萘 乙酸2. Omg/L+6-芐氨基腺嘌呤3. 0mg/L, PH值為6. 0實施例3 采用MS培養(yǎng)基、改良MS培養(yǎng)基分別對經(jīng)過無菌處理后的福建道地金線 蓮小段組織進行誘導叢生芽的培養(yǎng)試驗，本實驗重復三次，培養(yǎng)條件和實施例2相同，試驗 調(diào)查其金線蓮的分化數(shù)、組織鮮重、分化率、生長勢。試驗結果如下不同培養(yǎng)基和不同濃度激數(shù)對叢生芽的試驗比較
權利要求
一種通過植物組織培養(yǎng)生產(chǎn)福建道地金線蓮的方法，它包括如下步驟1.1植物體的選擇及無菌處理選擇5 10月份生長的福建道地金線蓮野生健壯植物，除去根和葉進行清洗和無菌處理，將莖段剪成0.5 1.5CM帶莖節(jié)的福建道地金線蓮小段組織；1.2誘導培養(yǎng)將經(jīng)過無菌處理后的福建道地金線蓮小段組織在誘導培養(yǎng)基中進行組織誘導培養(yǎng)叢生芽，培養(yǎng)周期10 60天，培養(yǎng)溫度10 35℃，光照培養(yǎng)時間0 24小時/天，光照強度0～2000lux；所述的誘導培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基+蔗糖10 50g/L+瓊脂6 8g/L+活性炭2.0 3.0g/L+萘乙酸0.1 3.0mg/L+6 芐氨基腺嘌呤0.1 5.0mg/L，PH值為5.0 7.0；1.3大規(guī)模培養(yǎng)將誘導的叢生芽在大規(guī)模培養(yǎng)基中進行大規(guī)模培養(yǎng)，培養(yǎng)周期10 60天，培養(yǎng)溫度10 35℃，光照培養(yǎng)時間0 24小時/天，光照強度0～2000lux；所述的誘導培養(yǎng)基為改良MS培養(yǎng)基+硝酸鈣600mg/L+香蕉泥30 50g/L+蔗糖10 50g/L/L+瓊脂6 8g/L+活性炭0.1 5.0g/L+萘乙酸1.0 2.0mg+6 芐氨基腺嘌呤2.0 3.0mg，PH值為5.5 6.5。
2.按照權利要求1所述的通過植物組織培養(yǎng)生產(chǎn)福建道地金線蓮的方法，其特征在 于所述的叢生芽誘導培養(yǎng)培養(yǎng)周期20-50天，培養(yǎng)溫度20-30°C，光照培養(yǎng)時間8-16 小時/天，光照強度100 20001UX ；所述的誘導培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基+蔗糖20_40g/ L+ 瓊脂 6-8g/L+ 活性炭 2. 0-3. Og/L+ 萘乙酸 1. 0-2. Omg/L+6-芐氨基腺嘌呤 2. 0-3. Omg/ L，PH值為5. 5-6. 5 ；所述的大規(guī)模培養(yǎng)培養(yǎng)周期20-50天，培養(yǎng)溫度20-30°C，光照培養(yǎng) 時間8-16小時/天，光照強度1000 20001uX ；所述的大規(guī)模培養(yǎng)基為改良MS培養(yǎng)基 +蔗糖20-40g/L瓊脂6-8g/L+活性炭2. 0-3. Og/L+萘乙酸1. 0-2. mg/L+6-芐氨基腺嘌呤 2. 0-3. 0mg/L, PH 值為 5. 5-6. 5。
3.按照權利要求1或2所述的通過植物組織培養(yǎng)生產(chǎn)福建道地金線蓮的方法，其特征 在于植物體的無菌處理方法包括如下步驟A、將選取的福建道地金線蓮野生材料植株，用自來水沖洗2-3小時，用毛刷清洗干凈， 除去根和葉，再用蒸餾水沖洗，置超凈工作臺內(nèi)；B、將除去了根和葉的莖段植物用70-80%的酒精浸泡20-40秒進行表面滅菌，再用無 菌水清洗干凈；C、將經(jīng)過酒精滅菌的莖段植物體用0.3-0. 8%次氯酸鈉溶液浸泡消毒3-6分鐘，用無 菌水沖洗4-5次，再轉入0. 15%升汞溶液中滅菌8分鐘，倒去滅菌液，用事先準備好的無菌 水沖洗4-5次，再用濾紙吸干無菌水；D、無菌條件下將消毒好的莖段剪成0.5-1. 5CM帶莖節(jié)的小段。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種通過組織培養(yǎng)生產(chǎn)福建道地金線蓮的方法，它包括植物體的選擇及無菌處理、叢生芽誘導培養(yǎng)和大規(guī)模培養(yǎng)三大環(huán)節(jié)，其技術的關鍵在于誘導培養(yǎng)和大規(guī)模培養(yǎng)兩個階段采用了兩種不同的培養(yǎng)基，誘導培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基+蔗糖10-50g/L+瓊脂6-8g/L+活性炭2.0-3.0g/L+萘乙酸0.1-3.0mg/L+6-芐氨基腺嘌呤0.1-5.0mg/L，pH值為5.0-7.0；大規(guī)模培養(yǎng)的培養(yǎng)基為改良MS培養(yǎng)基+硝酸鈣600mg/L+香蕉泥30-50g/L+蔗糖20-40g/L+瓊脂6-8g/L+活性炭2.0-3.0g/L+萘乙酸1.0-2.0mg/L+6-芐氨基腺嘌呤2.0-3.0mg/L，pH值為5.0-7.0；植物組織培養(yǎng)能保持植物的優(yōu)良性狀，該方法比較容易操作，生產(chǎn)成本低，適合工廠化育苗，產(chǎn)量高，品質(zhì)好，不污染環(huán)境，可以實現(xiàn)批量生產(chǎn)。
文檔編號A01H4/00GK101953307SQ20101051378
公開日2011年1月26日 申請日期2010年10月20日 優(yōu)先權日2010年10月20日
發(fā)明者陳詠梅, 黃碧華 申請人:福建省金草生物科技有限公司