專利名稱：一種火龍果的組織培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物工程領(lǐng)域，涉及植物組織培養(yǎng)技術(shù)，具體地說是一種火龍果的組 織培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
火龍果(Hylocereus undatus)為仙人掌科(Cactaceae)三角柱屬(又稱量天尺 屬，Hylocereus)的果用栽培品種，起源于中美洲，自然分布在哥斯達(dá)尼加、尼加拉瓜、墨西 哥、古巴等國(guó)家和地區(qū)的熱帶雨林及沙漠地帶。在亞洲地區(qū)，火龍果主要分布在中國(guó)臺(tái)灣和 越南?；瘕埞墓麑?shí)橢圓形，果皮有紅、黃兩種，色澤艷麗，果肉顏色有紅、白兩類?；瘕埞?具有高纖維、低熱量，富含維A、維B、維C、維E、維K、氨基酸及礦質(zhì)營(yíng)養(yǎng)。正常果實(shí)可溶性 固形物含量12% 13 %，最高達(dá)到22 %，各類維生素含量46mg/100g。果肉中芝麻狀的種 子更有促進(jìn)腸胃消化之功能，長(zhǎng)期食用還可降血糖、降血脂、降血壓等。火龍果果肉營(yíng)養(yǎng)豐 富，功效獨(dú)特，具有較高的食療價(jià)值，有降血壓、降血脂、解毒、滋肺、養(yǎng)顏、明目之功效，對(duì)便 秘和糖尿病也有療效?；瘕埞坏兜揽胺Q一絕，而且對(duì)人體健康有絕佳的食療功效。主要 是因?yàn)樗幸话阒参锷儆械闹参镄园椎鞍准盎ㄇ嗨?、豐富維生素和水溶性膳食纖維?；?龍果中的白蛋白是具黏性、膠質(zhì)性的物質(zhì)，對(duì)重金屬中毒有解毒的功效。它對(duì)胃壁還有保護(hù) 作用。火龍果含有維生素E和一種更為特殊的成分抓花青素。花青素在葡萄皮、紅甜菜等 果蔬中都含有，但以火龍果果實(shí)中的花青素含量最高。它們都具有抗氧化、抗自由基、抗衰 老的作用，還能提高對(duì)腦細(xì)胞變性的預(yù)防，抑制癡呆癥的作用?；瘕埞€含有美白皮膚的維 生素C及豐富的具有減肥、降低血糖、潤(rùn)腸、預(yù)防大腸癌的水溶性膳食纖維?；瘕埞€有食 療、保健功能，對(duì)預(yù)防便秘、降低血糖、血脂等，效果顯著。火龍果經(jīng)臺(tái)灣改良馴化后傳入大陸，近幾年來廣東、廣西、海南和福建等地相繼引 種，現(xiàn)已成為一種新興的常見水果，開發(fā)潛力巨大。但火龍果為熱帶植物，從其適生條件來 看適生范圍相對(duì)較狹，通過擴(kuò)展栽培范圍來提高果實(shí)的供應(yīng)量受資源條件的限制。而火龍 果的產(chǎn)量直接構(gòu)成因素主要有掛果期長(zhǎng)短、掛果數(shù)量、果實(shí)大小等。因此，加強(qiáng)對(duì)火龍果 產(chǎn)量和品質(zhì)的促進(jìn)因素進(jìn)行研究，有十分重要的意義。目前在我國(guó)南方，如海南、廣東和廣 西一些地區(qū)也有一定規(guī)模的種植。研究和開發(fā)火龍果這一新型水果品種，對(duì)調(diào)整我國(guó)水果 的生產(chǎn)結(jié)構(gòu)有重要的意義。但是目前火龍果的繁育僅僅是靠扦插育苗，繁殖速度慢且影響 母株的長(zhǎng)勢(shì)，不利于擴(kuò)大生產(chǎn)。組織培養(yǎng)是火龍果進(jìn)行快速繁育的有效途徑。目前，火龍果 組織培養(yǎng)已有少量報(bào)道，陳廣超等通過新生嫩莖培養(yǎng)獲得了火龍果的再生植株(中國(guó)南方 果樹，2003，32 (3))。本發(fā)明專利提供的快速繁殖方法及其使用的培養(yǎng)基與目前已有報(bào)道不 同，試管苗增殖率高，方法更簡(jiǎn)單，應(yīng)用價(jià)值高等優(yōu)點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供火龍果的組織培養(yǎng)方法，該方法非常適合工業(yè)化生產(chǎn)，配方 效果佳，出芽快，培養(yǎng)時(shí)間短，可操作性強(qiáng)，應(yīng)用價(jià)值高的優(yōu)點(diǎn)。具有投入少，產(chǎn)出高的特點(diǎn)。
本發(fā)明所述的一種火龍果組織培養(yǎng)方法，其具體操作步驟如下1、外植體的選擇與滅菌選用火龍果生長(zhǎng)健壯母莖上的成熟莖，首先用無菌水清 洗莖外部，然后切成1. 5-2. 5cm左右長(zhǎng)的三菱形，每個(gè)外植體至少帶1個(gè)腋芽生長(zhǎng)點(diǎn)，在無 菌操作臺(tái)上用70%酒精處理30秒左右，再用0. 的升汞消毒15-20分鐘，用無菌水沖洗 5-7次備用；2、腋芽的誘導(dǎo)將腋芽生長(zhǎng)點(diǎn)向上接種在MS+多效唑0. l_1.5mg/L腋芽誘導(dǎo)培 養(yǎng)基中，接種瓶?jī)?nèi)每瓶接種2-3個(gè)外植體，在光照250-3001UX下，保持溫度24+2°C，培養(yǎng) 28-42天左右腋芽長(zhǎng)至2 3cm高，切下轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基上；3、叢生芽誘導(dǎo)及增殖將切下來的腋芽再切成2 3段接種在MS+6-BA1. 0 6. 0mg/L+矮壯素0. 1 1. 5mg/L培養(yǎng)基中，培養(yǎng)28-42天左右，幼莖上各腋芽萌出，形成一 個(gè)類似鹿角狀的叢芽組織，并同步生根，有42%叢生芽形成2 3條根，可以直接用于移栽。 若是增殖叢生芽，則28-42天為一個(gè)增殖周期，以保持高速度遞增，增殖系數(shù)為5以上；之后 再繼代。4、移栽選取根系生長(zhǎng)良好的試管苗，放入清水中把根部的瓊脂清洗干凈，移栽到 天然泥土中，注意保水保濕，移栽1個(gè)月后，移栽成活率達(dá)到95%以上。本發(fā)明具有如下的優(yōu)點(diǎn)和效果1、利用母莖上的成熟莖為外植體，保證了遺傳穩(wěn)定性，操作簡(jiǎn)便，取材容易，數(shù)量 大，出芽快；至今有一篇報(bào)道采用母莖上的嫩莖為外植體，40天左右，腋芽可萌發(fā)至1 1. 5cm,(陳廣超等，中國(guó)南方果樹，2003，32 (3))。本發(fā)明30天左右腋芽萌發(fā)至2 3cm高， 多效唑能促進(jìn)腋芽萌發(fā)及伸長(zhǎng)；2、增殖培養(yǎng)基中添加矮壯素，促進(jìn)叢生芽的形成，40天左右為一個(gè)增殖周期，能保 持高速度遞增，增殖系數(shù)為5以上；比目前報(bào)道的叢生芽形成時(shí)間提早15天左右，比其完整 植株的形成提早45天左右；3、在增殖過程中，其中42%試管苗可以直接用于移栽，移栽基質(zhì)為天然泥土，本發(fā) 明方法不僅省去生根階段，而且移栽基質(zhì)為天然泥土，容易獲得，大大節(jié)省了生產(chǎn)成本。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例描述本發(fā)明的最佳實(shí)施方案，本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于此。1、外植體的選擇與滅菌選用火龍果生長(zhǎng)健壯母莖上的成熟莖，首先用無菌水清 洗莖外部，然后切成2cm左右長(zhǎng)的三菱形，至少帶1個(gè)腋芽生長(zhǎng)點(diǎn)，在無菌操作臺(tái)上用70% 酒精處理30秒左右，再用0. 的升汞消毒15-18分鐘，用無菌水沖洗5-7次備用；2、腋芽的誘導(dǎo)腋芽生長(zhǎng)點(diǎn)向上接種在MS+多效唑1.0mg/L培養(yǎng)基中，接種瓶?jī)?nèi) 每瓶接種2-3個(gè)外植體，在3001UX光照下培養(yǎng)，保持溫度24+2°C，培養(yǎng)30天左右腋芽直至 2 3cm高，切下轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基上；3、叢生芽誘導(dǎo)及增殖將切下來的腋芽再切成2 3段接種在MS+6-BA4. 0mg/L+ 矮壯素0. 8mg/L培養(yǎng)基中，培養(yǎng)30天左右，幼莖上各腋芽也萌出，形成一個(gè)類似鹿角狀的叢 芽組織。在增殖過程中，42%試管苗形成2 3條根，可以直接用于移栽。叢生芽增殖40 天為一個(gè)增殖周期，以保持高速度遞增，增殖系數(shù)為5以上，之后繼代培養(yǎng)。4、移栽選取根系生長(zhǎng)良好的試管苗，放入清水中把根部的瓊脂清洗干凈，移栽到天然泥土中，注意保水保濕，移栽1個(gè)月后，移栽成活率達(dá)到95%以上。實(shí)施例21、外植體的選擇與滅菌選用火龍果生長(zhǎng)健壯母莖上的成熟莖，首先用無菌水清 洗莖外部，然后切成2cm左右長(zhǎng)的三菱形，至少帶1個(gè)腋芽生長(zhǎng)點(diǎn)，在無菌操作臺(tái)上用70% 酒精處理30秒左右，再用0. 的升汞消毒15-18分鐘，用無菌水沖洗5-7次備用；2、腋芽的誘導(dǎo)腋芽生長(zhǎng)點(diǎn)向上接種在MS+多效唑1.5mg/L培養(yǎng)基中，接種瓶?jī)?nèi) 每瓶接種2-3個(gè)外植體，在3001UX光照下培養(yǎng)，保持溫度24+2°C，培養(yǎng)30天左右腋芽直至 1. 5 2. 5cm高，切下轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基上；3、叢生芽誘導(dǎo)及增殖將切下來的腋芽再切成2 3段接種在MS+6-BA6. 0mg/L+ 矮壯素lmg/L培養(yǎng)基中，培養(yǎng)30天左右，幼莖上各腋芽也萌出，形成一個(gè)類似鹿角狀的叢芽 組織。在增殖過程中，38%試管苗形成2 3條根，可以直接用于移栽；叢生芽增殖30天為 一個(gè)增殖周期，增殖系數(shù)為4. 5以上，之后繼代培養(yǎng)。4、移栽選取根系生長(zhǎng)良好的試管苗，放入清水中把根部的瓊脂清洗干凈，移栽到 天然泥土中，注意保水保濕，移栽1個(gè)月后，移栽成活率達(dá)到95%以上。實(shí)施例31、外植體的選擇與滅菌選用火龍果生長(zhǎng)健壯母莖上的成熟莖，首先用無菌水清 洗莖外部，然后切成2cm左右長(zhǎng)的三菱形，至少帶1個(gè)腋芽生長(zhǎng)點(diǎn)，在無菌操作臺(tái)上用70% 酒精處理30秒左右，再用0. 的升汞消毒15 18分鐘，用無菌水沖洗5 7次備用；2、腋芽的誘導(dǎo)腋芽生長(zhǎng)點(diǎn)向上接種在MS+多效唑0. lmg/L培養(yǎng)基中，接種瓶?jī)?nèi) 每瓶接種2-3個(gè)外植體，在3001UX光照下培養(yǎng)，保持溫度24+2°C，培養(yǎng)40天左右腋芽直至 1. 5 2cm高，切下轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基上；3、叢生芽誘導(dǎo)及增殖將切下來的腋芽再切成2 3段接種在MS+6-BA1. 0mg/L+ 矮壯素1. 5mg/L培養(yǎng)基中，培養(yǎng)30天左右，幼莖上各腋芽也萌出，形成一個(gè)類似鹿角狀的叢 芽組織，在增殖過程中，40%試管苗形成2 3條根，可以直接用于移栽；叢生芽增殖35天 為一個(gè)增殖周期，以保持高速度遞增，增殖系數(shù)為4. 5以上；之后繼代培養(yǎng)。4、移栽選取根系生長(zhǎng)良好的試管苗，放入清水中把根部的瓊脂清洗干凈，移栽到 天然泥土中，注意保水保濕，移栽1個(gè)月后，移栽成活率達(dá)到95%以上。實(shí)施例41、外植體的選擇與滅菌選用火龍果生長(zhǎng)健壯母莖上的成熟莖，首先用無菌水清 洗莖外部，然后切成2cm左右長(zhǎng)的三菱形，至少帶1個(gè)腋芽生長(zhǎng)點(diǎn)，在無菌操作臺(tái)上用70% 酒精處理30秒左右，再用0. 的升汞消毒15-18分鐘，用無菌水沖洗5-7次備用；2、腋芽的誘導(dǎo)腋芽生長(zhǎng)點(diǎn)向上接種在MS+多效唑1.0mg/L培養(yǎng)基中，接種瓶?jī)?nèi) 每瓶接種2-3個(gè)外植體，在3001UX光照下培養(yǎng)，保持溫度24+2°C，培養(yǎng)30天左右腋芽直至 2 3cm高，切下轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基上；3、叢生芽誘導(dǎo)及增殖將切下來的腋芽再切成2 3段接種在MS+6-BA2. 0mg/L+ 矮壯素0. lmg/L培養(yǎng)基中，培養(yǎng)40天左右，幼莖上各腋芽也萌出，形成一個(gè)類似鹿角狀的叢 芽組織；在增殖過程中，35%試管苗形成2 3條根，可以直接用于移栽；叢生芽增殖40天 為一個(gè)增殖周期，增殖系數(shù)為3. 5以上；之后繼代培養(yǎng)。4、移栽選取根系生長(zhǎng)良好的試管苗，放入清水中把根部的瓊脂清洗干凈，移栽到天然泥土中，注意保水保濕，移栽1個(gè)月后，移栽成活率達(dá)到90%以上。
本發(fā)明提出的火龍果組織培養(yǎng)方法，克服了傳統(tǒng)方法繁殖慢，很難滿足大規(guī)模生 產(chǎn)需求的不足，可以將火龍果的種苗繁殖工廠化，在很短的時(shí)間內(nèi)可以繁殖出滿足大規(guī)模 繁殖所需要的種苗；本方法具有成本低，種苗生長(zhǎng)整齊；利用火龍果莖段為外植體，使得外 植體取材容易，數(shù)量大；本培養(yǎng)方法出芽快，增殖率高，可批量生產(chǎn)，生產(chǎn)成本低，應(yīng)用價(jià)值 尚ο
權(quán)利要求
一種火龍果的組織培養(yǎng)方法，其特征是火龍果的成熟莖段經(jīng)消毒處理，接種在MS+多效唑0.1～1.5mg/L腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，將獲得的腋芽切下轉(zhuǎn)入MS+6-BA1.0～6.0mg/L+矮壯素0.1～1.5mg/L的增殖培養(yǎng)基上增殖28-42天，同步生根，將同步生根的增殖叢生芽，直接用于移栽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的火龍果的組織培養(yǎng)方法，其特征是，所述的消毒處理過程如 下選用火龍果生長(zhǎng)健壯母莖上的成熟莖段，首先用無菌水清洗成熟莖段外部，然后切成 1. 5-2. 5cm長(zhǎng)的三菱形，每個(gè)外植體至少帶1個(gè)腋芽生長(zhǎng)點(diǎn)，在無菌操作臺(tái)上用70%酒精處 理30秒，再用0. 1 %的升汞消毒15-20分鐘，無菌水沖洗5-7次備用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的火龍果的組織培養(yǎng)方法，其特征是，腋芽誘導(dǎo)時(shí)將外植 體的腋芽生長(zhǎng)點(diǎn)向上接種在腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，接種瓶?jī)?nèi)每瓶接種2-3個(gè)外植體，在 250-3001ux光照強(qiáng)度下，保持溫度24+2°C，培養(yǎng)28-42天，腋芽長(zhǎng)至2 3cm高切下，并將 腋芽再切成2 3段轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基上。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的火龍果的組織培養(yǎng)方法，其特征是，增殖叢生芽時(shí)，28-42天 為一個(gè)增殖周期，然后繼代培養(yǎng)。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種火龍果的組織培養(yǎng)方法，屬植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域。火龍果的成熟莖段經(jīng)消毒處理，接種在MS+多效唑0.1～1.5mg/L腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，將獲得的腋芽切下轉(zhuǎn)入MS+6-BA1.0～6.0mg/L+矮壯素0.1～1.5mg/L培養(yǎng)基上增殖，42％試管苗同步生根，直接用于移栽，移栽成活率達(dá)到95％以上；本發(fā)明方法適合工業(yè)化生產(chǎn)，配方效果佳，出芽快，生產(chǎn)出的火龍果種苗具有遺傳穩(wěn)定性高，可操作性強(qiáng)，應(yīng)用價(jià)值高的優(yōu)點(diǎn)。使火龍果能實(shí)現(xiàn)工廠化快速育苗，能夠更有效地開發(fā)利用火龍果。
文檔編號(hào)A01H4/00GK101874472SQ200910311410
公開日2010年11月3日 申請(qǐng)日期2009年12月14日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月14日
發(fā)明者易自力, 王紅權(quán), 艾辛, 蔣建雄, 覃靜萍, 陳智勇, 黃麗芳 申請(qǐng)人:湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)