一種觀察痰液黏蛋白微觀結(jié)構(gòu)的光學(xué)新方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種痰液制備薄層并利用相差顯微鏡觀察其微觀結(jié)構(gòu)的新方法。痰液的微觀結(jié)構(gòu)可以反應(yīng)哮喘等病理過(guò)程，現(xiàn)有的技術(shù)需要采用冷凍透射電鏡才能觀察，但這種高端實(shí)驗(yàn)裝置是目前醫(yī)院所缺乏的，而且檢測(cè)過(guò)程繁瑣。本發(fā)明設(shè)計(jì)并制作一種痰液壓膜裝置，可將痰液制備成薄膜，隨后利用相差顯微技術(shù)觀察痰液的微觀結(jié)構(gòu)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本方法觀察的痰液微觀結(jié)構(gòu)和采用冷凍電鏡觀察的痰液微觀結(jié)構(gòu)相似。本發(fā)明為醫(yī)院檢驗(yàn)科提供了一種簡(jiǎn)單、快速的痰液微結(jié)構(gòu)觀察新方法。
【專利說(shuō)明】
一種觀察痰液黏蛋白微觀結(jié)構(gòu)的光學(xué)新方法
技術(shù)領(lǐng)域
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[0001]本發(fā)明專利涉及一種采用光學(xué)方法觀察痰液中黏蛋白微觀結(jié)構(gòu)的方法，具體屬于生物樣本檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
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[0002]痰液是由黏蛋白、細(xì)胞、DNA、微絲等成分構(gòu)成的混合體，是哮喘、肺結(jié)核等呼吸道疾病的重要檢測(cè)樣本，傳統(tǒng)檢測(cè)主要包括痰液的顏色、細(xì)胞類型以及雜質(zhì)等。常規(guī)方法是取痰液于潔凈的載玻片上，加生理鹽水一滴混合均勻，加蓋玻片置顯微鏡下檢查(必要時(shí)可染色鏡檢)，也可以采用液基細(xì)胞學(xué)檢測(cè)?？砂l(fā)現(xiàn)膿細(xì)胞、大量細(xì)胞碎片及感染菌。進(jìn)行痰液的病原微生物培養(yǎng)(包括厭氧菌及霉菌)，還可同時(shí)進(jìn)行藥物敏感試驗(yàn)。
[0003]黏蛋白是痰液的主要結(jié)構(gòu)成分，是決定黏液黏度、流動(dòng)性的主要成分，在哮喘、慢性阻塞性肺疾病等肺部病理?xiàng)l件下，患者痰液中的黏蛋白的數(shù)量和微觀結(jié)構(gòu)發(fā)生變化。但目前在實(shí)驗(yàn)室中常用的黏蛋白結(jié)構(gòu)檢測(cè)方法需要用到冷凍電鏡，而這種高端儀器設(shè)備是目前醫(yī)院不具備的設(shè)備，從而限制了在臨床檢驗(yàn)中直接檢驗(yàn)痰液中黏蛋白的結(jié)構(gòu)變化。而傳統(tǒng)的痰液涂片和液基細(xì)胞學(xué)檢測(cè)方法又無(wú)法觀察痰液中黏蛋白的結(jié)構(gòu)，因此開(kāi)發(fā)便捷的痰液黏蛋白檢測(cè)新技術(shù)具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

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[0004]本發(fā)明建立一種利用光學(xué)顯微鏡檢測(cè)痰液黏蛋白微觀結(jié)構(gòu)的方法。
[0005]痰液是一種黏稠度較高的黏液，無(wú)法直接在載玻片表面涂布。因此在傳統(tǒng)痰液涂片鏡檢之前通常采用物理或者化學(xué)的方法將黏液稀化，這樣導(dǎo)致無(wú)法觀察痰液中黏蛋白的真實(shí)結(jié)構(gòu)。本發(fā)明專利設(shè)計(jì)一種新的痰液制片方法，制備獲得薄層痰液，并結(jié)合相差顯微鏡的光學(xué)技術(shù)，從而實(shí)現(xiàn)在光學(xué)顯微鏡下觀察痰液的微觀結(jié)構(gòu)。
[0006]本發(fā)明是通過(guò)如下方法實(shí)現(xiàn):
[0007]選用潔凈的載玻片。為了保證痰液在載玻片表面能夠較均勻的分布，需要仔細(xì)清洗載波片。
[0008]采用壓片裝置制備痰液薄層。為了保證在光學(xué)顯微鏡下實(shí)時(shí)觀察痰液結(jié)構(gòu)，需要制備痰液的薄層結(jié)構(gòu)。傳統(tǒng)痰液涂片需要將痰液的微觀結(jié)構(gòu)破壞，因此無(wú)法觀察其真實(shí)的微觀結(jié)構(gòu);而采用石蠟包埋切片則需要花費(fèi)。本發(fā)明設(shè)計(jì)并制作一種痰液壓片裝置，將痰液加載在載玻片表面后，覆蓋彈性薄膜，根據(jù)粘液彈性模量在按壓軸上方放置一定重量砝碼(通常為lkg)，靜置10分鐘。在壓制過(guò)程中，為了不破壞粘液蛋白的宏觀結(jié)構(gòu)，在按壓板下貼附一層軟橡膠。壓制完成后，得到便于顯微觀察的薄層樣本，中間較薄區(qū)域即觀察區(qū)域。
[0009]采用相差顯微鏡觀察。痰液為無(wú)色樣品，采用普通光學(xué)顯微鏡無(wú)法觀察其結(jié)構(gòu)，而需要采用相差顯微鏡進(jìn)行鏡檢，采用40倍物鏡將物象放大至400倍左右，即可觀察痰液微觀結(jié)構(gòu)。【附圖說(shuō)明】:
[0010]圖1是本發(fā)明專利黏液壓片裝置；
[0011 ]圖2是采用本方法觀察的黏液微觀結(jié)構(gòu)。
【具體實(shí)施方式】
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[0012](I)清洗玻璃載玻片:采用洗滌水清洗后流水沖洗6遍，采用純水和超純水洗滌兩邊，置75%乙醇；
[0013](2)收集病人痰液，4°C保存?zhèn)溆茫?br>[0014](3)從75 %乙醇中取出載玻片擦拭干凈，將收集獲得痰液加入載玻片表面，鋪上一層軟質(zhì)薄膜；
[0015](4)采用壓片裝置將黏液壓成薄膜，制備痰液薄層；
[0016](5)采用50%、60%、70%、80%、90%、100%梯度酒精脫水，每次5分鐘；
[0017](6)采用光學(xué)相差顯微鏡(X40)觀察痰液結(jié)構(gòu)，可以看到黏液在微觀層面是由均勻、細(xì)長(zhǎng)、彎曲、折光性強(qiáng)、輪廓清晰的絲狀物形成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，與文獻(xiàn)采用冷凍透射電鏡觀察結(jié)果相似。痰液微觀結(jié)構(gòu)的檢出，對(duì)于肺部相關(guān)疾病的診斷及病情觀察具有重要意義。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.本發(fā)明建立一種制備痰液薄膜并實(shí)現(xiàn)采用相差顯微技術(shù)觀察痰液微觀結(jié)構(gòu)的新方法。2.權(quán)利要求1利用壓片裝置將新鮮痰液樣本制備成薄層，厚度范圍10-500μπι。3.權(quán)利要求1利用壓片裝置制備痰液薄層過(guò)程中，要在痰液表面覆蓋一層軟質(zhì)薄膜，之后施加一定的壓力(局部壓強(qiáng)達(dá)到10-100kPa)。4.權(quán)利要求1利用相差顯微技術(shù)觀察薄層痰液的微觀結(jié)構(gòu)。
【文檔編號(hào)】G01N1/28GK106053165SQ201610321956
【公開(kāi)日】2016年10月26日
【申請(qǐng)日】2016年5月16日
【發(fā)明人】羅明志, 王佳麗, 金陽(yáng), 劉磊, 余培麗, 鄧林紅
【申請(qǐng)人】常州大學(xué)