一種煙熏肉制品中4種多環(huán)芳烴含量的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及食品安全檢測領(lǐng)域，特別涉及一種煙熏肉制品中4種多環(huán)芳烴含量的檢測方法。該方法為：采用快速溶劑萃取儀以環(huán)己烷為萃取劑將煙熏肉制品多環(huán)芳烴萃取出來，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，濃縮后得到多環(huán)芳烴的待測品，采用HPLC進(jìn)行檢測，HPLC色譜條件為:采用Eclipse PAH色譜柱，以純水和乙腈進(jìn)行梯度洗脫，根據(jù)HPLC的檢測結(jié)果，獲得多環(huán)芳烴含量。本發(fā)明提供的檢測方法可以準(zhǔn)確檢測煙熏肉制品中多環(huán)芳烴含量，檢測效率高、省時(shí)、節(jié)約檢測成本。
【專利說明】
一種煙熏肉制品中4種多環(huán)芳烴含量的檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及食品安全檢測領(lǐng)域，特別涉及一種煙熏肉制品中4種多環(huán)芳烴含量的 檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 煙熏是一種已沿用多年的傳統(tǒng)肉制品加工方法，長期以來，世界各地人們對(duì)不同 濃度的煙熏味均有一定的喜好。傳統(tǒng)的煙熏加工方法是采用木材不完全燃燒時(shí)產(chǎn)生的煙氣 熏制產(chǎn)品。煙熏可以使肉制品脫水，賦予產(chǎn)品特殊的香味，改善肉的顏色，并且有一定的殺 菌防腐和抗氧化作用。雖然傳統(tǒng)煙熏肉制品風(fēng)味獨(dú)特，但在煙熏肉制品的整個(gè)生產(chǎn)加工過 程中會(huì)會(huì)引入大量有害物質(zhì)，尤其多環(huán)芳烴的引入對(duì)人體傷害最大。現(xiàn)代加工方式雖然可 減少多環(huán)芳烴的引入，但仍不能徹底消除。
[0003] 多環(huán)芳烴(PAHs)是一類含有兩個(gè)及兩個(gè)以上苯環(huán)連在一起的環(huán)狀化合物，是最早 發(fā)現(xiàn)且數(shù)量最多的致癌物，在目前已查出的500多種主要致癌物中，有200多種屬于該類化 合物。PAHs是有機(jī)物不完全燃燒產(chǎn)生的，其中苯并[a]芘(B[a]P)是該類化合物種最具有代 表的強(qiáng)致癌物，我國規(guī)定食品中B[a]P含量不得超標(biāo)。目前煙熏肉制品中PAHs萃取的前處理 方法麻煩、耗時(shí)且成本較高;并且我國對(duì)煙熏肉制品中多環(huán)芳烴的限量僅以B[a]P的殘留量 作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，這種評(píng)價(jià)方法相對(duì)較片面，無法與歐盟以苯并[a]蒽(B[a]A)、窟(CHR)、苯并 [b]熒蒽(B[b]H以及苯并[a]芘(B[a]P)4種多環(huán)芳烴的總含量作為評(píng)價(jià)指標(biāo)相媲美。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的就是針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，而開發(fā)的可以對(duì)煙熏肉制品中的4 種多環(huán)芳烴含量進(jìn)行同時(shí)檢測的方法，具有較高的精密度。采用該方法可以有效解決煙熏 肉制品中多環(huán)芳烴檢測前處理繁瑣、檢出個(gè)數(shù)少、檢測成本高和耗時(shí)等問題。
[0005] 本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下： 一種煙熏肉制品中4種多環(huán)芳烴含量的檢測方法，其特征在于:（1)制作苯并[a]蒽、窟、 苯并[b]熒蒽以及苯并[a]芘4種多環(huán)芳烴混合溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線；（2)將活化硅膠、與聚丙烯 酸鈉混勻的煙熏肉糜樣品以及硅藻土依次裝填入萃取池中，以環(huán)己烷為萃取劑，利用快速 溶劑萃取儀萃取煙熏肉制品中的多環(huán)芳烴，萃取液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)、甲醇溶解后得到多環(huán)芳烴 的待測品；采用HPLC進(jìn)行檢測，所述HPLC色譜條件為:采用C 18色譜柱，以純水-乙腈為流動(dòng)相 進(jìn)行梯度洗脫，采用FLR檢測器進(jìn)行HPLC-FLR檢測，根據(jù)HPLC的檢測結(jié)果結(jié)合所述步驟（1) 的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行分析計(jì)算獲得多環(huán)芳烴含量。
[0006] 所述肉糜樣品為1重量份，聚丙稀酸鈉為0.6~1.0重量份，活化硅膠為4~5重量份， 硅藻土填滿萃取池。
[0007] 所述快速溶劑萃取儀的程序設(shè)置為:萃取溫度為80-100°C，加熱5~6min，50~60%沖 洗體積，靜態(tài)萃取5~6min，循環(huán)1~3次，吹掃時(shí)間120s。
[0008] 所述旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的溫度在55~60°C，轉(zhuǎn)速為80~90rpm。
[0009] 所述甲醇溶解體積為2~4mL。
[0010] 所述梯度洗脫程序如下表：
所述HPLC檢測的流速為1.6~2.4mL/min，柱溫為22~27 °C，進(jìn)樣量為10~20yL。
[0011] 所述FLR檢測器檢測采用梯度波長法，波長設(shè)置為：
本發(fā)明有益效果主要有： (1) 相較于國標(biāo)樣品前處理，本方法前處理操作簡便、節(jié)約溶劑、節(jié)約時(shí)間； (2) 所得到的液相方法可以同時(shí)測出樣品中的4種多環(huán)芳烴，并且方法的靈敏度高、重 現(xiàn)性好，檢測效率高、省時(shí)、節(jié)約檢測成本。
【附圖說明】
[0012] 圖1為30ng/mL多環(huán)芳烴混合標(biāo)準(zhǔn)品液相色譜圖。
[0013] 圖2為15ng/mL多環(huán)芳烴混合標(biāo)準(zhǔn)品液相色譜圖。
[0014]圖3為7.5ng/mL多環(huán)芳烴混合標(biāo)準(zhǔn)品液相色譜圖。
[0015]圖4為2.5ng/mL多環(huán)芳烴混合標(biāo)準(zhǔn)品液相色譜圖。
[0016] 圖5為1 .Ong/mL多環(huán)芳經(jīng)混合標(biāo)準(zhǔn)品液相色譜圖。
[0017] 圖6為0.5ng/mL多環(huán)芳烴混合標(biāo)準(zhǔn)品液相色譜圖。
[0018]圖7為苯并[a]蒽的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
[0019] 圖8為窟的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
[0020] 圖9為苯并[b]熒蒽的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
[0021] 圖10為苯并[a]芘的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
【具體實(shí)施方式】
[0022] (1 )4種多環(huán)芳烴混合標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作： 對(duì)質(zhì)量濃度分別為 30ng/ml、15ng/ml、7 · 5ng/ml、2 · 5ng/ml、1 · Ong/ml、0 · 5ng/ml 的多環(huán) 芳烴混合液(PAHs mix4)采用Eclipse PAH C18色譜柱，以純水-乙腈為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗 脫，洗脫程序?yàn)椋?br>HPLC檢測的流速為2mL/min，HPLC檢測的進(jìn)樣量為20yL，色譜柱柱溫為25ΓΑΙ^檢測波 長如下表所示：
得到的液相色譜圖如圖1-6所示。4種多環(huán)芳烴的保留時(shí)間、回歸方程與相關(guān)系數(shù)分別 如下表所示：
以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制PAHs的HPLC標(biāo)準(zhǔn)曲線，曲線分別如圖7-10 所示。
[0023] (2)供測品溶液的制備： 準(zhǔn)確稱取1.〇g肉糜樣品，加入〇. 6~1.Og的聚丙烯酸鈉，混勻。將4~5g活化后的硅膠、混 勻后的肉糜樣品以及硅藻土依次裝填入萃取池中。采用環(huán)己烷作為萃取溶劑，對(duì)ASE350設(shè) 置萃取條件為:萃取溫度為80°0100°C，加熱5min~6min，50%~60%沖洗體積，靜態(tài)萃取5 min ~6min，循環(huán)1~3次，吹掃時(shí)間120s。將所得到的萃取液55°C下旋轉(zhuǎn)濃縮至溶劑蒸發(fā)完全，溶 于2~4ml甲醇溶液中，室溫下lOOOOrpm離心5分鐘。將離心后的上清液過0.22μηι微孔濾膜，濾 液供HPLC檢測。
[0024] (3)HPLC_FLR 檢測： HPLC采用Eclipse PAH C18色譜柱，以純水-乙腈為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，洗脫程序?yàn)椋?br>HPLC檢測的流速為1.6~2.4mL/min，HPLC檢測的進(jìn)樣量為10~20yL，色譜柱柱溫為22~27 °C ALR檢測波長如下表所示。
[0025] 。
[0026] (4) 4種多環(huán)芳烴含量的計(jì)算 根據(jù)HPLC多環(huán)芳烴峰面積通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算多環(huán)芳烴含量。
[0027] 具體實(shí)施例如下： 實(shí)施例1、一種哈爾濱紅腸中4種多環(huán)芳烴含量的檢測。
[0028] (1)供測品溶液的制備 準(zhǔn)確稱取l.〇g肉糜樣品，加入〇.6g的聚丙烯酸鈉，混勻。將4g活化后的硅膠、混勻后的 肉糜樣品以及硅藻土依次裝填入萃取池中。采用環(huán)己烷作為萃取溶劑，對(duì)ASE350設(shè)置萃取 條件為:萃取溫度為80°C，加熱6min，60%沖洗體積，靜態(tài)萃取6min，循環(huán)1次，吹掃時(shí)間120s。 將所得到的萃取液55°C下旋轉(zhuǎn)濃縮至溶劑蒸發(fā)完全，溶于2mL甲醇溶液中，室溫下lOOOOrpm 離心5分鐘。將離心后的上清液過0.22μπι微孔濾膜，濾液供HPLC檢測。
[0029] (2)HPLC-FLR 檢測 HPLC采用Eclipse PAH C18色譜柱，以純水-乙腈為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，洗脫程序?yàn)椋?br>HPLC檢測的流速為1.6mL/min，HPLC檢測的進(jìn)樣量為10yL，色譜柱柱溫為檢測 波長如下表所示：
(3) 4種多環(huán)芳烴含量的計(jì)算 根據(jù)HPLC多環(huán)芳烴峰面積通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算多環(huán)芳烴含量。
[0030] 實(shí)施例2: -種煙熏火腿中4種多環(huán)芳烴含量的檢測。
[0031] (1)供測品溶液的制備 準(zhǔn)確稱取l.〇g肉糜樣品，加入〇.8g的聚丙烯酸鈉，混勻。將4.5g活化后的硅膠、混勻后 的肉糜樣品以及硅藻土依次裝填入萃取池中。采用環(huán)己烷作為萃取溶劑，對(duì)ASE350設(shè)置萃 取條件為：萃取溫度為85 °C，加熱6min，50%沖洗體積，靜態(tài)萃取6min，循環(huán)2次，吹掃時(shí)間 120s。將所得到的萃取液55°C下旋轉(zhuǎn)濃縮至溶劑蒸發(fā)完全，溶于3mL甲醇溶液中，室溫下 lOOOOrpm離心5分鐘。將離心后的上清液過0.22μπι微孔濾膜，濾液供HPLC檢測。
[0032] (2)HPLC-FLR 檢測 HPLC采用Eclipse PAH C18色譜柱，以純水-乙腈為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，洗脫程序?yàn)椋?br>HPLC檢測的流速為1.8mL/min，HPLC檢測的進(jìn)樣量為20yL，色譜柱柱溫為24 °C ALR檢測 波長如下表所示：
(3) 4種多環(huán)芳烴含量的計(jì)算 根據(jù)HPLC多環(huán)芳烴峰面積通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算多環(huán)芳烴含量。
[0033]實(shí)施例3:-種臘肉中4種多環(huán)芳烴含量的檢測。
[0034] (1)供測品溶液的制備 準(zhǔn)確稱取l.〇g肉糜樣品，加入l.〇g的聚丙烯酸鈉，混勻。將5g活化后的硅膠、混勻后的 肉糜樣品以及硅藻土依次裝填入萃取池中。采用環(huán)己烷作為萃取溶劑，對(duì)ASE350設(shè)置萃取 條件為：萃取溫度為l〇〇°C，加熱5min，50%沖洗體積，靜態(tài)萃取6min，循環(huán)3次，吹掃時(shí)間 120s。將所得到的萃取液55°C下旋轉(zhuǎn)濃縮至溶劑蒸發(fā)完全，溶于4mL甲醇溶液中，室溫下 lOOOOrpm離心5分鐘。將離心后的上清液過0.22μπι微孔濾膜，濾液供HPLC檢測。
[0035] (2)HPLC_FLR 檢測 HPLC采用Eclipse PAH C18色譜柱，以純水-乙腈為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，洗脫程序?yàn)椋?br>HPLC檢測的流速為2mL/min，HPLC檢測的進(jìn)樣量為20yL，色譜柱柱溫為25ΓΑΙ^檢測波 長如下表所示： ' (3) 4種多環(huán)芳烴含量的計(jì)算
' ' 根據(jù)HPLC多環(huán)芳烴峰面積通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算多環(huán)芳烴含量。
[0036] 實(shí)施例4: 一種培根中4種多環(huán)芳烴含量的檢測。
[0037] (1)供測品溶液的制備 準(zhǔn)確稱取l.Og肉糜樣品，加入l.Og的聚丙烯酸鈉，混勻。將5g活化后的硅膠、混勻后的 肉糜樣品以及硅藻土依次裝填入萃取池中。采用環(huán)己烷作為萃取溶劑，對(duì)ASE350設(shè)置萃取 條件為：萃取溫度為l〇〇°C，加熱5min，50%沖洗體積，靜態(tài)萃取6min，循環(huán)2次，吹掃時(shí)間 120s。將所得到的萃取液55°C下旋轉(zhuǎn)濃縮至溶劑蒸發(fā)完全，溶于4mL甲醇溶液中，室溫下 lOOOOrpm離心5分鐘。將離心后的上清液過0.22μπι微孔濾膜，濾液供HPLC檢測。
[0038] (2)HPLC-FLR 檢測 HPLC采用Eclipse PAH C18色譜柱，以純水-乙腈為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，洗脫程序?yàn)椋?br>HPLC檢測的流速為2.4mL/min，HPLC檢測的進(jìn)樣量為20yL，色譜柱柱溫為26 °C ALR檢測 波長如下表所示： _ι_ ' (3) 4種多環(huán)芳烴含量的計(jì)算
' ' 根據(jù)HPLC多環(huán)芳烴峰面積通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算多環(huán)芳烴含量。
[0039]實(shí)施例5 :方法學(xué)的確認(rèn)。
[0040]為了驗(yàn)證多環(huán)芳提取方法的準(zhǔn)確性進(jìn)行了加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，分別已知濃度的樣品中 添加高（15yg/kg)、中（2.5yg/kg)以及低（1.0yg/kg) 3個(gè)質(zhì)量濃度水平的多環(huán)芳經(jīng)混合標(biāo) 準(zhǔn)液，提取、濃縮后用高效液相色譜進(jìn)行檢測，每個(gè)添加水平重復(fù)測定6次。結(jié)果見表。從表 可以看出，三種加標(biāo)水平下，4種多環(huán)芳烴的回收率均在70%-100%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD) < 5%。表明了本發(fā)明回收率高，重復(fù)性好。
[0041 ]本發(fā)明涉及的其它未說明部分與現(xiàn)有技術(shù)相同。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種煙熏肉制品中4種多環(huán)芳控含量的檢測方法，其特征在于：（1)制作苯并[a]蔥、 窟、苯并[b]巧蔥W及苯并[a]巧4種多環(huán)芳控混合溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線；（2)將活化硅膠、與聚丙 締酸鋼混勻的煙熏肉糜樣品W及娃藻±依次裝填入萃取池中，W環(huán)己燒為萃取劑，利用快 速溶劑萃取儀萃取煙熏肉制品中的多環(huán)芳控，萃取液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)、甲醇溶解后得到多環(huán)芳 控的待測品；采用HPLC進(jìn)行檢測，所述HPLC色譜條件為:采用Ci8色譜柱，W純水-乙臘為流動(dòng) 相進(jìn)行梯度洗脫，采用FLR檢測器進(jìn)行HPLC-FLR檢測，根據(jù)HPLC的檢測結(jié)果結(jié)合所述步驟 (1)的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行分析計(jì)算獲得多環(huán)芳控含量。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種煙熏肉制品中4種多環(huán)芳控含量的檢測方法，其特征在 于:所述肉糜樣品為1重量份，聚丙締酸鋼為0.6~1.0重量份，活化硅膠為4~5重量份，娃藻± 填滿萃取池。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種煙熏肉制品中4種多環(huán)芳控含量的檢測方法，其特征在 于:所述快速溶劑萃取儀的程序設(shè)置為：萃取溫度為80-100°C，加熱5~6min，50~60%沖洗體 積，靜態(tài)萃取5~6min，循環(huán)^3次，吹掃時(shí)間120s。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種煙熏肉制品中4種多環(huán)芳控含量的檢測方法，其特征在 于:所述旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的溫度在55~60°C，轉(zhuǎn)速為80~9化pm。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種煙熏肉制品中4種多環(huán)芳控含量的檢測方法，其特征在 于:所述甲醇溶解體積為2~4mL。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種煙熏肉制品中4種多環(huán)芳控含量的檢測方法，其特征在 于:所述梯度洗脫程序如下表：7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種煙熏肉制品中4種多環(huán)芳控含量的檢測方法，其特征在 于:所述HPLC檢測的流速為1.6~2.4mL/min，柱溫為22~27°C，進(jìn)樣量為10~20yL。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種煙熏肉制品中4種多環(huán)芳控含量的檢測方法，其特征在 于:所述FLR檢測器檢測采用梯度波長法，波長設(shè)置為：
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK105974034SQ201610611051
【公開日】2016年9月28日
【申請(qǐng)日】2016年7月29日
【發(fā)明人】趙穎, 李聰, 李新福, 徐寶才, 顧千輝
【申請(qǐng)人】江蘇雨潤肉食品有限公司