一種注射用哌拉西林鈉舒巴坦鈉有關(guān)物質(zhì)檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種檢測注射用哌拉西林鈉舒巴坦鈉中有關(guān)物質(zhì)的方法。本發(fā)明采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，以四丁基氫氧化銨溶液?乙腈為流動相進(jìn)行梯度洗脫，快速準(zhǔn)確的實現(xiàn)了哌拉西林鈉舒巴坦鈉有關(guān)物質(zhì)的測定。
【專利說明】
一種注射用哌拉西林鈉舒巴坦鈉有關(guān)物質(zhì)檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ]本發(fā)明涉及一種注射用哌拉西林鈉舒巴坦鈉有關(guān)物質(zhì)檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 哌拉西林鈉是半合成青霉素，通過與細(xì)菌的青霉素結(jié)合蛋白（PBPs)結(jié)合抑制細(xì)菌 細(xì)胞壁的合成而起到殺菌作用。它具有廣譜、低毒的特點，但易被細(xì)菌產(chǎn)生的0-內(nèi)酰胺酶 水解而產(chǎn)生耐藥性。舒巴坦鈉為0-內(nèi)酰胺酶抑制劑，能抑制n-v型的e-內(nèi)酰胺酶，是一 種競爭性的、不可逆抑制劑。
[0003] 2010版中國藥典收錄了一種注射用哌拉西林鈉舒巴坦鈉，其為哌拉西林鈉和舒巴 坦鈉按4:1的比例組成的復(fù)方制劑。哌拉西林與舒巴坦聯(lián)合應(yīng)用后，增強了哌拉西林的抗菌 活性，擴(kuò)大了抗菌譜，使其對哌拉西林耐藥的產(chǎn)酶菌的抗菌活性增強。
[0004] 研究發(fā)現(xiàn)，在注射用哌拉西林鈉舒巴坦鈉中有十余種雜質(zhì)，其中含量最高的雜質(zhì) 為哌拉西林雜質(zhì)B、哌拉西林雜質(zhì)D和哌拉西林雜質(zhì)E，均為已知雜質(zhì)，其各自結(jié)構(gòu)式如下：
[0005] 2010版中國藥典所收錄的注射用哌拉西林鈉舒巴坦鈉有關(guān)物質(zhì)的檢測方法為：用 十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以四丁基氫氧化銨溶液[水-3. 12%磷酸二氫鈉溶液-8% 四丁基氫氧化銨溶液(576 : 200 : 24)(用磷酸調(diào)節(jié)pH值至5. 5 )]-乙腈(800:200)為 流動相A，四丁基氫氧化銨溶液[水-3.12%磷酸二氫鈉溶液-8 %四丁基氫氧化銨溶液（126: 200 : 24)(用磷酸調(diào)節(jié)pH值至5. 5)]-乙腈(350 : 650 )為流動相B，柱溫為40°C，檢測 波長為220nm，梯度洗脫條件為：
該方法雖能同時檢測注射用哌拉西林鈉舒巴坦鈉中的有關(guān)物質(zhì)，但其需要的檢測時間 長達(dá)75分鐘，無法滿足快速檢測該產(chǎn)品的有關(guān)物質(zhì)的需要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]為了克服現(xiàn)有的有關(guān)物質(zhì)檢測方法存在的檢測時間過長的問題，本發(fā)明提供了一 種快速檢測哌拉西林鈉舒巴坦鈉有關(guān)物質(zhì)的方法： (1) 溶液的配置:將注射用哌拉西林鈉舒巴坦鈉粉末用流動相A溶解并稀釋成濃度為 2.5mg/ml的溶液，搖勻，作為供試品溶液;精密量取供試品溶液lml，置100ml量瓶中，用流動 相A稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液； (2) 精密量取供試品溶液和對照溶液各2iU，分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，高 效液相色譜條件： 色譜柱：lOOmmX 2.1mm，1.7mi，十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑； 柱溫:40°C; 檢測波長：220nm; 流速:〇.613ml/min; 梯度洗脫條件：
所述流動相A是溶液1與乙腈按照786:200的體積比混合，并用磷酸調(diào)節(jié)pH至6.0制得 的;所述溶液1的組成為水:3.12%磷酸二氫鈉溶液:20%四丁基氫氧化銨溶液=576:200:9.6， v/v； 所述流動相B是溶液2與乙腈按照336:650的體積比混合，并用磷酸調(diào)節(jié)pH至6.0制得 的；所述溶液2的組成為：水：3.12%磷酸二氫鈉溶液：20%四丁基氫氧化銨溶液=126: 200 : 9.6, v/v〇
[0007] 所述步驟(2)中高效液相色譜的具體測定流程如下:取對照溶液2iil注入高效液相 色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使哌拉西林峰的峰高為滿量程的20%，再精密量取供試品溶液和 對照溶液各2iU，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。
[0008] 另取氨芐西林對照品、哌拉西林雜質(zhì)B、哌拉西林雜質(zhì)D對照品、哌拉西林雜質(zhì)E對 照品、舒巴坦對照品、哌拉西林對照品各適量，加流動相A溶解并稀釋制成每lml中各含50yg 的混合溶液，取2yl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，氨芐西林峰與舒巴坦峰之間的分離度應(yīng) 大于1.5。
[0009] 本發(fā)明人經(jīng)過對高效液相色譜分析中色譜柱、流動相等條件進(jìn)行篩選，選用合適 的緩沖溶液體系，在流動相的比例調(diào)節(jié)上，充分兼顧哌拉西林鈉與舒巴坦鈉中十幾種雜質(zhì) 的分離要求，最終建立了 UPLC梯度洗脫的方法，將分析時間控制在lOmin，實現(xiàn)了同時對哌 拉西林鈉、舒巴坦鈉及其有關(guān)物質(zhì)的快速分離，可用于注射用哌拉西林鈉舒巴坦鈉的質(zhì)量 控制。
【具體實施方式】
[0010] 以下通過各實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步描述，但是這些實施例不限制本發(fā)明的保護(hù) 范圍。
[0011] 實施例1:檢測注射用哌拉西林鈉舒巴坦鈉有關(guān)物質(zhì) 1、溶液的配置 供試品溶液:將注射用哌拉西林鈉舒巴坦鈉粉末(生產(chǎn)企業(yè):蘇州二葉制藥有限公司， 規(guī)格2:1)用流動相A溶解并稀釋成濃度為2.5mg/ml的溶液，搖勻，作為供試品溶液； 對照品溶液:精密量取供試品溶液lml，置100ml量瓶中，用流動相A稀釋至刻度，搖勻， 作為對照溶液； 流動相A:四丁基氫氧化銨溶液[水：3.12%磷酸二氫鈉溶液：20%四丁基氫氧化銨溶液 (576:200:9.6)]-乙腈(786:200)，用磷酸調(diào)節(jié)pH至6.0為流動相A; 流動相B:以四丁基氫氧化銨溶液[水:3.12%磷酸二氫鈉溶液:20%四丁基氫氧化銨溶液 (126:200:9.6)]-乙腈(336:650)，用磷酸調(diào)節(jié)pH至6.0為流動相B。
[0012] 2、色譜條件： 色譜柱：lOOmmX 2.1mm，1.7mi，十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑； 柱溫:40°C; 檢測波長：220nm; 流速:〇.613ml/min; 梯度洗脫條件：
3、量取供試品溶液和對照溶液各2yl，分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果見 表1。
[0013]從表1可以看出，注射用哌拉西林鈉舒巴坦鈉的各雜質(zhì)均實現(xiàn)了較好的分離，因此 該實驗條件可以滿足檢測注射用哌拉西林鈉舒巴坦鈉有關(guān)物質(zhì)的要求。
[0014]供試品溶液的色譜圖中如有雜質(zhì)峰，哌拉西林雜質(zhì)B按校正后的峰面積計算(乘以 校正因子1.76)，不得大于對照溶液主峰面積（1.0%)，哌拉西林雜質(zhì)D按校正后的峰面積計 算(乘以校正因子2.6)，不得大于對照溶液主峰面積的2倍(2.0%)，哌拉西林雜質(zhì)E按校正后 的峰面積計算(乘以校正因子0.31)，不得大于對照溶液主峰面積的0.2倍(0.2%)，其他單 個雜質(zhì)峰面積不得大于對照溶液主峰面積的0.2倍(0.2%)，各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對 照溶液主峰面積的3.5倍(3.5%)。
[0015]實施例2:注射用哌拉西林鈉舒巴坦鈉系統(tǒng)適用性試驗 采用與實施例1相同的檢測條件，分別對柱溫、流速以及流動相pH進(jìn)行考察，結(jié)果見表 1〇
[0016]表1.注射用哌拉西林鈉舒巴坦鈉系統(tǒng)適用性試驗
注:哌拉西林雜質(zhì)E為第一個峰，在譜圖上未顯示其分離度，哌拉西林雜質(zhì)E和舒巴坦雜 質(zhì)A的分離度為舒巴坦雜質(zhì)A項下的分離度，依次類推，故哌拉西林雜質(zhì)E項下的分離度以 u ?? 表亦。
[0017] 由上述試驗結(jié)果表明，柱溫、流速有微小變動時，該方法系統(tǒng)適用性試驗的分離度 均較好。但在流動相pH值變化時，雜質(zhì)的峰個數(shù)減少(雜質(zhì)之間重合），故在調(diào)節(jié)流動相pH時 應(yīng)注意。
[0018] 從上述實施例以及對比實施例的比較說明，本發(fā)明檢測方法準(zhǔn)確，操作簡便，重現(xiàn) 性好，靈敏度高，可以充分滿足注射用哌拉西林鈉舒巴坦鈉中有關(guān)物質(zhì)的檢測要求，同時檢 測哌拉西林鈉和舒巴坦鈉兩種來源的雜質(zhì)，保證產(chǎn)品質(zhì)量。
【主權(quán)項】
1. 一種注射用贓拉西林鋼舒己坦鋼有關(guān)物質(zhì)檢測方法： (1) 溶液的配置：將注射用贓拉西林鋼舒己坦鋼粉末用流動相A溶解并稀釋成濃度為 2.5mg/ml的溶液，搖勻，作為供試品溶液;精密量取供試品溶液Iml，置100mL量瓶中，用流動 相A稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液； (2) 精密量取供試品溶液和對照溶液各化1，分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，高 效液相色譜條件： 色譜柱：IOOmm X 2. Imm，1.7皿，十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑； 柱溫:40°C; 檢測波長:220nm; 流速:〇 .613ml/min; 梯度洗脫條件：所述流動相A是溶液1與乙臘按照786:200的體積比混合，并用憐酸調(diào)節(jié)pH至6.0制得 的;所述溶液1的組成為水:3.12%憐酸二氨鋼溶液:20%四下基氨氧化錠溶液=576:200:9.6， v/v； 所述流動相B是溶液2與乙臘按照336:650的體積比混合，并用憐酸調(diào)節(jié)pH至6.0制得 的；所述溶液2的組成為：水：3.12%憐酸二氨鋼溶液：20%四下基氨氧化錠溶液=126: 200 : 9.6,v/v。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的注射用贓拉西林鋼舒己坦鋼有關(guān)物質(zhì)檢測方法，其特征在于： 所述步驟(2)中高效液相色譜的具體測定流程如下：取對照溶液化L注入高效液相色譜儀， 調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使贓拉西林峰的峰高為滿量程的20%，再精密量取供試品溶液和對照溶液 各化1，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的注射用贓拉西林鋼舒己坦鋼有關(guān)物質(zhì)檢測方法，其特征在于： 雜質(zhì)的檢測限度為:贓拉西林雜質(zhì)B校正后的峰面積(乘W校正因子1.76)，不得大于對照溶 液主峰面積，贓拉西林雜質(zhì)D校正后的峰面積(乘W校正因子2.6)，不得大于對照溶液主峰 面積的2倍，贓拉西林雜質(zhì)E校正后的峰面積(乘W校正因子0.31)，不得大于對照溶液主峰 面積的0.2倍，其他單個雜質(zhì)峰面積不得大于對照溶液主峰面積的0.2倍，各雜質(zhì)峰面積的 和不得大于對照溶液主峰面積的3.5倍。
【文檔編號】G01N30/02GK105911193SQ201610429714
【公開日】2016年8月31日
【申請日】2016年6月17日
【發(fā)明人】張健, 朱煒, 陸文娟, 郭順, 王寧
【申請人】蘇州二葉制藥有限公司