檢測(cè)水和水稻植株中的井岡霉素a的方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種檢測(cè)田水中井岡霉素A的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：1）量取田水樣品10mL到刻度管中，加入甲酸水，調(diào)節(jié)田水的pH值為2-3，混勻，待凈化；2）凈化的步驟包括：提供MCX小柱，3cc/60mg,；用3mL甲醇和3mL水分別按照順序添加進(jìn)行活化MCX小柱，2mL的經(jīng)0.2%甲酸水酸化后的田水樣品全部上樣，3mL甲醇淋洗，用吸耳球吹干MCX小柱中的液體；3mL的5%氨水甲醇溶液洗脫MCX小柱，洗脫液在50℃條件下濃縮干，用甲醇定容到2.0mL，過(guò)0.22μm濾膜，進(jìn)行檢測(cè)。通過(guò)本發(fā)明的方法，可以提高檢測(cè)的最低閥值，提高了檢測(cè)的靈敏度。
【專利說(shuō)明】檢測(cè)水和水稻植株中的井岡霉素 A的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于分析檢測(cè)領(lǐng)域，特別的，屬于井R霉素 A在水和水稻植株中的分析檢 測(cè)方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 井岡霉素（validamycin)是由水鏈霉菌井岡變種產(chǎn)生的水溶性抗生素，共有A、B、C、 D、E、F6種組分，主要活性物質(zhì)為井R霉素 A，一般產(chǎn)品中均以A組分的含量來(lái)標(biāo)示產(chǎn)品的規(guī)格 及產(chǎn)品的質(zhì)量。井R霉素為我國(guó)獨(dú)立開(kāi)發(fā)研制的生物源殺菌劑，至今未見(jiàn)有關(guān)抗藥性上升的報(bào) 道，也無(wú)變異菌種的報(bào)道，主要用于防治水稻紋枯病菌，對(duì)絲核菌亦有良好生物活性，具有強(qiáng)內(nèi) 吸性，兼具保護(hù)和治療作用，是我國(guó)南方稻區(qū)防治水稻紋枯病的主要藥劑品種，使用量大。
[0003] 井岡霉素 A(Validamycin A)的化學(xué)名稱為 N-[(1S)-(1，4, 6/5)-3-羥甲 基-4, 5, 6-三羥基-2-環(huán)己烯]-(0- β -D-批喃葡萄糖基-(1 - 3) ] - (1S) - (1，2, 4/3, 5) -2, 3 ，4-三羥基-5-羥甲基環(huán)己胺（Α組分）；化學(xué)結(jié)構(gòu)式為
[0004]

【權(quán)利要求】
1. 一種檢測(cè)田水中井R霉素 A的方法，其特征在于，該方法由以下順序的步驟組成： 1) 、量取田水樣品10 mL到刻度管中，加入甲酸水，調(diào)節(jié)田水的pH值為2-3,混勻，待凈化； 2) 、凈化的步驟包括：提供MCX小柱，3cc/60mg，；用3mL甲醇和3mL水分別按照順序添加進(jìn) 行活化MCX小柱，2 mL的經(jīng)0. 2%甲酸水酸化后的田水樣品全部上樣，3mL甲醇淋洗，用吸耳 球吹干MCX小柱中的液體；3mL的5%氨水甲醇溶液洗脫MCX小柱，洗脫液在50°C條件下濃 縮干，用甲醇定容到2. 0 mL，過(guò)0. 22ΜΠ 1濾膜，進(jìn)行檢測(cè)。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，在10 mL田水樣品中加入10 mLO. 2%甲酸水，讓 混合后的液體pH值為2. 7。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，甲酸水的濃度為0. 2%。
4. 一種檢測(cè)水稻中井R霉素 A的方法，其特征在于，該方法由以下順序的步驟組成： 1)、從水稻中提取井R霉素 A，其中提取的方法包括：稱取成熟期干燥的水稻莖桿2g (精確 至0. Olg)，加入60 mL甲醇/水溶液（8/2, V/V)振蕩1小時(shí)后，布氏漏斗抽濾到分液漏斗中， 獲得的濾液用石油醚（l〇〇mLX 2)萃取兩次，棄去石油醚相，甲醇/水混合相在60°C濃縮干， 加入4mL純凈水溶解；2)、再在4mL純凈水溶解的溶液中加入甲酸水，讓溶液的PH為2-3， 混勻，待凈化；3)、凈化的步驟包括：提供MCX小柱，3cc/60mg ;用3mL甲醇和3mL水分別按 照順序添加進(jìn)行活化MCX小柱，2 mL的經(jīng)0. 2%甲酸水酸化后的田水樣品全部上樣，3mL甲 醇淋洗，用吸耳球吹干MCX小柱中的液體；3mL的5%氨水甲醇溶液洗脫MCX小柱，洗脫液在 50°C條件下濃縮干，用甲醇定容到2. 0 mL，過(guò)0. 22ΜΠ 1濾膜，進(jìn)行檢測(cè)。
5. 根據(jù)權(quán)利1或4所述的方法，檢測(cè)的方法包括采用超高效液相色譜進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定 的條件為：色譜柱：ACQHTY UPLC Hilic (1. 7μπι，2· lXIOOmm，Waters 公司）；流動(dòng)相：乙腈 /10M Mol醋酸銨溶液=70/30 ;流速：0. 2mL/min ;柱溫：40°C ;進(jìn)樣量：WL ;質(zhì)譜條件：毛 細(xì)管電壓：3. 0KV ;離子源溫度：150°C ;去溶劑溫度：400°C ;去溶劑氣流量800L/hr ;錐孔反 吹氣流量：30L/hr ;碰撞氣流量：0. 15 mL/min ;定量模式：MRM模式；電離方式：ESI+ ;母離 子：498. 2 ;錐孔電壓28 ;碰撞能量為28eV的定量離子：178. 2 ;碰撞能量為24eV的定性離 子：336.19。
6. -種檢測(cè)水稻中井R霉素 A的方法，其特征在于，該方法由以下順序的步驟組成： 1)、從水稻中提取井R霉素 A，其中提取的方法包括：稱取成熟期干燥的水稻莖桿2g，加入 60 mL甲醇/水溶液（8/2, V/V)振蕩1小時(shí)后，布氏漏斗抽濾到分液漏斗中，獲得的濾液用 石油醚（100mLX2)萃取兩次，棄去石油醚相，甲醇/水混合相在60°C濃縮干，加入4mL純凈 水溶解；2)、凈化：3mL甲醇、3mL水分別按照順序添加進(jìn)行活化HLB小柱，取2mL溶解液全部 上樣，3mL純凈水洗脫，用吸耳球吹干HLB小柱中的液體；洗脫液收集經(jīng)過(guò)HLB小柱的溶解 液和洗脫液到平底燒瓶中，50°C條件下濃縮干，甲醇定容到2. 0 mL，過(guò)0. 22ΜΠ 1濾膜過(guò)濾，待 測(cè)定。
【文檔編號(hào)】G01N30/14GK104280495SQ201410169872
【公開(kāi)日】2015年1月14日 申請(qǐng)日期:2014年4月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月25日
【發(fā)明者】張昌朋, 趙華, 吳珉, 平立鳳, 朱亞紅, 張春榮, 何紅梅, 湯濤 申請(qǐng)人:浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院