一種道地藥材川楝子的質(zhì)量檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種道地藥材川楝子的質(zhì)量檢測方法，屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】。用以川楝素及多種苦味三萜成分如苦楝子酮、脂苦楝子醇，21-O-乙酰川楝子三醇，21-O-甲基川楝子五醇為指標(biāo)，采用薄層色譜：TLC和高效液相色譜：HPLC分析方法，建立川楝子藥材的質(zhì)量檢測方法；本發(fā)明在川楝子質(zhì)量檢測方法中，在進(jìn)行ＴＬＣ檢測同時，增加川楝素含量測定為指標(biāo)，從而確保能采購到正宗的川楝子藥材，確保其臨床使用的有效性和安全性。
【專利說明】一種道地藥材川楝子的質(zhì)量檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種道地藥材川楝子的質(zhì)量檢測方法，屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]川楝子又名金鈴子，中藥材，為楝科落葉喬木川楝樹的成熟果實。主要產(chǎn)于中國的南方各地，以四川的產(chǎn)者最為上乘，故又名川楝子。川楝子性寒，味苦，沉降，是行氣藥的一種。主要入肝經(jīng)，疏泄肝熱，行氣止痛，有除濕熱、清肝火、止痛、殺蟲的功能。主治:胸脅、脘腹脹痛、疝痛、蟲積腹痛。治氣郁而有熱之證尤宜。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于解決因產(chǎn)地不同引起的川楝子藥材檢測不規(guī)范、質(zhì)量差異較大的問題，從而提供一種道地藥材川楝子的質(zhì)量檢測方法。
[0004]為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
一種道地藥材川楝子的質(zhì)量檢測方法，它包括如下檢測步驟:
用以川楝素及多種苦味三萜成分如苦楝子酮、脂苦楝子醇，21-0-乙酰川楝子三醇，21-0-甲基川楝子五醇為指標(biāo)，采用薄層色譜:TLC和高效液相色譜:HPLC分析方法，建立川楝子藥材的質(zhì)量檢測方法；
A)、TLC鑒別
取待測粉末2g，加水80ml，超聲處理I小時，放冷，離心，取上清液，用二氯甲烷振搖提取3次，每次25 ml，合并二氯甲烷液，蒸干，殘渣加甲醇2 ml使溶解，作為供試品溶液；另取川楝子對照藥材2g，同法制成對照藥材溶液，再取川楝素對照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各10ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄板上，以重量比為16:1的二氯甲烷一甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，噴以對二甲氨基苯甲醛試液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清新；
供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同色的斑點(diǎn)；
B)、含量測定
照高效液相色譜一質(zhì)譜法測定；
色譜、質(zhì)譜條件與系統(tǒng)適用性試驗:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以重量比為31:69D已腈一 0.01%甲酸溶液為流動相，采用單級四極桿質(zhì)譜檢測器，電噴霧離子化和負(fù)離子模式下選擇質(zhì)荷比573離子進(jìn)行檢測.理論板數(shù)按川楝素峰計算應(yīng)不低于8000;
對照品溶液制備:取川楝素對照品，加甲醇制成每I ml含2ug的溶液.即得；
供試品溶液制備:取待測品中粉0.25g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇50 ml，稱定重量，加熱回流I小時，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得；測定法:分別精密吸取對照品溶液2ul，與供試品溶液I 一 2ul，注入液相一質(zhì)譜聯(lián)用儀，測定，以川楝素兩個峰面積之和計算，即得；
C)、線性關(guān)系考察 分別取川楝素、苦楝子酮、脂苦楝子醇，21-0-乙酰川楝子三醇，21-0-甲基川楝子五醇對照品溶液6、5、5、5、5ml，置于25 ml量瓶中，搖勻，加甲醇定容；
吸取定容后的溶液0.5、1.0、2.0、5.0、10.01111，置10 ml量瓶中，搖勻，加甲醇定容，按上述色譜條件進(jìn)樣測定；
D)、精密度試驗
取混合對照品溶液適量，按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積；
E)、穩(wěn)定性試驗
取同一供試品溶液適量，分別于0、2、4、8、12 h進(jìn)樣，記錄峰面積；
F)、重復(fù)性試驗
取同批次樣品適量，分別按B)、含量測定項下方法制備供試品溶液，照上述色譜條件進(jìn)樣，記錄峰面積，計算樣品含量；
G)、加樣回收率試驗
取已知含量的樣品約0.5 g，分別加入對照品溶液，按按B)、含量測定項下方法制備供試品溶液，照上述色譜條件進(jìn)樣，記錄峰面積，計算樣品含量和加樣回收率；
H)、樣品含量測定
稱取川楝子樣品各適量，分別按B)、含量測定項下方法制備供試品溶液；各吸取10U I分別注入HPLC儀，照上述色譜條件測定峰面積，按外標(biāo)一點(diǎn)法計算樣品中川楝素成分的含量，檢測結(jié)果得出。
[0005]本發(fā)明的有益效果:
本發(fā)明在川楝子質(zhì)量檢測方法中，在進(jìn)行T L C檢測同時，增加川楝素含量測定為指標(biāo)，從而確保能采購到正宗的川楝子藥材，確保其臨床使用的有效性和安全性。
【具體實施方式】
[0006]下面結(jié)合實施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述:
以川楝素及多種苦味三萜成分如苦楝子酮、脂苦楝子醇，21-0-乙酰川楝子三醇，21-0-甲基川楝子五醇為指標(biāo)，采用薄層色譜(TLC)和高效液相色譜(HPLC)分析方法，建立川楝子藥材的質(zhì)量評價標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果:6批川楝子的TLC中均檢出川楝素的特征斑點(diǎn)。川楝素、苦楝子酮、脂苦楝子醇，21-0-乙酰川楝子三醇，21-0-甲基川楝子五醇的質(zhì)量濃度分別在 0.06 — 0.20 ,0.003 08 ?0.061 54、0.003 74 ?0.074 88、0.002 90 ?0.057
60,0.00106 - 0.00856 mg/ml范圍內(nèi)與各自峰面積積分值呈良好線性關(guān)系(r均為0.9999);五者的平均加樣回收率分別為100.00%,99.39%,99.81%,97.86%,96.98% ；RSD分別為 1.80%、1.11 %、1.41 %、1.25%、1.36% (n = 6)。結(jié)論:TLC 鑒別方法專屬性強(qiáng)；HPLC 含量測定方法精密度高、重復(fù)性好、簡便、快捷，可用于控制川楝子是否地道藥材的檢測及含量測定，使川楝子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)更具有科學(xué)性。
[0007]1.2 試劑
川楝素對照品(供含量測定用)與川楝子對照藥材(中國食品藥品檢定研究院，批號分別為 110827-201008、110826-200712、120945-200707 );川楝素對照品(單位自制，經(jīng) HPLC測定、面積歸一化法計算純度>98%);乙腈(色譜純，美國Fisher公司);水為超純水，其他試劑均為分析純。[0008]1.3 藥材
6批川楝子藥材均采自于四川遂寧市，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)張藝研究員鑒定為真品。川楝子樣品來源見表1
【權(quán)利要求】
1.一種道地藥材川楝子的質(zhì)量檢測方法，其特征在于:它包括如下檢測步驟: 用以川楝素及多種苦味三萜成分如苦楝子酮、脂苦楝子醇，21-0-乙酰川楝子三醇，21-0-甲基川楝子五醇為指標(biāo)，采用薄層色譜:TLC和高效液相色譜:HPLC分析方法，建立川楝子藥材的質(zhì)量檢測方法； A)、TLC鑒別 取待測粉末2g，加水80ml，超聲處理I小時，放冷，離心，取上清液，用二氯甲烷振搖提取3次，每次25 ml，合并二氯甲烷液，蒸干，殘渣加甲醇2 ml使溶解，作為供試品溶液； 另取川楝子對照藥材2g，同法制成對照藥材溶液，再取川楝素對照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各10ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄板上，以重量比為16:1的二氯甲烷一甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，噴以對二甲氨基苯甲醛試液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清新； 供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同色的斑點(diǎn)； B)、含量測定 照高效液相色譜一質(zhì)譜法測定； 色譜、質(zhì)譜條件與系統(tǒng)適用性試驗:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以重量比為31:69D已腈一 0.01%甲酸溶液為流動相，采用單級四極桿質(zhì)譜檢測器，電噴霧離子化和負(fù)離子模式下選擇質(zhì)荷比5`73離子進(jìn)行檢測.理論板數(shù)按川楝素峰計算應(yīng)不低于8000; 對照品溶液制備:取川楝素對照品，加甲醇制成每I ml含2ug的溶液.即得； 供試品溶液制備:取待測品中粉0.25g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇50 ml，稱定重量，加熱回流I小時，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得； 測定法:分別精密吸取對照品溶液2ul，與供試品溶液I 一 2ul，注入液相一質(zhì)譜聯(lián)用儀，測定，以川楝素兩個峰面積之和計算，即得； C)、線性關(guān)系考察 分別取川楝素、苦楝子酮、脂苦楝子醇，21-0-乙酰川楝子三醇，21-0-甲基川楝子五醇對照品溶液6、5、5、5、5ml，置于25 ml量瓶中，搖勻，加甲醇定容； 吸取定容后的溶液0.5、1.0、2.0、5.0、10.01111，置10 ml量瓶中，搖勻，加甲醇定容，按上述色譜條件進(jìn)樣測定； D)、精密度試驗 取混合對照品溶液適量，按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積； E)、穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液適量，分別于0、2、4、8、12 h進(jìn)樣，記錄峰面積； F)、重復(fù)性試驗 取同批次樣品適量，分別按B)、含量測定項下方法制備供試品溶液，照上述色譜條件進(jìn)樣，記錄峰面積，計算樣品含量； G)、加樣回收率試驗 取已知含量的樣品約0.5 g，分別加入對照品溶液，按按B)、含量測定項下方法制備供試品溶液，照上述色譜條件進(jìn)樣，記錄峰面積，計算樣品含量和加樣回收率； H)、樣品含量測定 稱取川楝子樣品各適量，分別按B)、含量測定項下方法制備供試品溶液；各吸取10μ I分別注入HPLC儀，照上述色譜條件測定峰面積，按外標(biāo)一點(diǎn)法計算樣品中川楝素成分的含量，檢測結(jié)果 得出。
【文檔編號】G01N30/02GK103675191SQ201310716878
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2013年12月24日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月24日
【發(fā)明者】黃鳳林, 熊建英, 邵青文, 陳穎 申請人:江西南昌制藥有限公司