一種藏藥材塞北紫堇的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種塞北紫堇藥材的檢測方法，其采用紫外分光光度法測定其總生物堿的含量，包括配置原阿片堿對照品溶液、制備標準溶液制作標準曲線和樣品溶液的制備，樣品溶液配制方法為將塞北紫堇藥材細粉處用甲醇回流提取，過濾后的殘渣用硫酸溶液溶解，獲得樣品溶液，在410nm波長處測其吸收度，根據標準曲線計算藥材中的總生物堿含量。本發(fā)明使用原阿片堿作為對照，在供試品的制備中采用加熱回流利用和硫酸溶液溶解的方式除去干擾因素，并利用生物堿與溴甲酚綠和磷酸鹽緩沖液發(fā)生特征反應，采用二氯甲烷萃取特征反應的產物進行測定，由于二氯甲烷只對特征反應中生成的產物進行萃取，避免了非生物堿類成分的干擾，增加了結果的準確性及科學性。
【專利說明】一種藏藥材塞北紫堇的檢測方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種藥材的檢測方法，具體地說，涉及一種藏藥材塞北紫堇的檢測方法。
【背景技術】
[0002]紫堇屬全球約320種，主要產于亞洲，我國約200余種，全國均有分布，以西南部種類分布最多，其中青藏高原約120余種，僅西藏就多達94種。塞北紫堇為罌科紫堇屬植物塞北紫堇(別名賽北紫堇)的干燥全草，分布在青海、西藏、甘肅、四川等地，為藏成藥中的常用藥，數據顯示有25%的藏成藥中含有該藥材，用于治療各種出血、肝炎、膽囊炎、流感等疾病，也有將其用于治療跌打損傷或其它外傷、發(fā)燒、腸胃炎等。
[0003]從目前對該屬植物的化學成分研究結果來看，本屬植物主要含原托品堿類、原小檗堿類、苯酚異喹啉類、苯駢菲啶類、卞基異喹啉類、阿樸堿類、螺芐異喹啉類、枯拉靈類等結構類型的生物堿。該屬植物及其提取物大多具有廣泛的藥理活性，如調節(jié)心血管系統(tǒng)、抗菌等。李吉昌等人發(fā)表的《賽北紫堇的生物堿成分研究》對采自云南省迪慶藏族自治州香格里拉縣的賽北紫堇的根進行了提取分離和結構鑒定，首次報道了從其中分離并鑒定出7種生物堿。該文獻的主要目的是對塞北紫堇植株中的有效成分進行鑒定，確定其中所含生物堿的具體種類，其對采摘植株是否是塞北紫堇的質量控制是由迪慶自治洲藏醫(yī)院扎西澤仁醫(yī)師憑經驗確定的，并沒有具體的檢測方法，而塞北紫堇標準收載于《青海省藏藥炮制規(guī)范》2010年版第60頁，現(xiàn)行質量標準相對落后，僅有性狀、薄層鑒別項，沒有任何含量測定指標，并且由于紫堇屬植物種類繁多，性狀結構基本類似，面對大量的備選紫堇屬藥材植物，不能準確的鑒別出塞北紫堇，有效的控制成藥的質量。此外藏成藥中多將生長于西藏的塞北紫堇作為原料藥入味，但是根據植物生長機理可知，即使是同一種植物，由于其使用的部位不同，生成的環(huán)境不同，則植株中有效成分及其含量也會存在一定的差異，造成塞北紫堇質量參差不齊，因此需要對該種植物進行嚴格篩選，保證以其為原料的成藥的安全性、有效性。
[0004]李吉昌、林躍華等人發(fā)表的《紫外分光光度法測定賽北紫堇中總生物堿含量》中采用對照品鹽酸小檗堿作為對照品制備標準曲線，但本實驗采用超聲后過氧化鋁柱的辦法制備樣品，使用鹽酸小檗堿為對照品，使用直接測定的辦法對賽北紫堇全草中的總生物堿含量進行測定，由于全草中含有大量的葉綠素，直接測定的方法無法避免葉綠素等有色雜質的干擾，即直接測定法無法保證其他非生物堿的的吸收干擾，尤為重要的是，塞北紫堇中并不存在鹽酸小檗堿，使用鹽酸小檗堿來作為對照品進行總生物堿的測定，明顯是不科學的。

【發(fā)明內容】

[0005]本發(fā)明的所要解決的技術問題是現(xiàn)行的塞北紫堇質量標準相對落后，僅有性狀、薄層鑒別項，沒有任何含量測定指標，不能準確有效的控制藥材的質量，進而提供一種藏藥材塞北紫堇的質量檢測方法。[0006]為此，本發(fā)明采取的技術方案為:
[0007]—種塞北紫堇藥材的檢測方法，包括采用紫外分光光度法測定其總生物堿的含量，其步驟如下，
[0008](I)第一對照品溶液的配置，稱取干燥至恒重的原阿片堿5_8mg，加體積份數比1%的硫酸溶液l_3ml使溶解，用水定容至100ml，搖勻，即得；
[0009](2)標準溶液的制備，吸取對照品溶液0、1、2、3、4、5ml，分別置分液漏斗中，各加0.1%溴甲酚綠試液2-4ml、磷酸鹽緩沖液2-3ml，用水補足溶液至10ml。加二氯甲烷10ml，振搖2min,靜置,分出有機層于400nm-450nm波長處測定吸收度,繪制標準曲線；
[0010](3)樣品溶液的制備，取塞北紫堇藥材細粉l_5g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇50ml，稱定所述塞北紫堇藥材細粉與甲醇的總重量，加熱回流I小時，過濾得到第一濾液，取所述第一濾液25ml，蒸干，得到殘渣，所述殘渣用體積份數比10%的硫酸溶液Iml溶解，再用水稀釋并定容至5ml后，過濾得到第二濾液即所需的樣品溶液；
[0011](4)測定，精密吸取所述樣品溶液Iml置分液漏斗中按所述步驟(2)的方法測定吸收度，并由標準曲線求算含量；以干燥的塞北紫堇藥材計算，生物堿總含量以原阿片堿(C20H19N05)計，不得少于 0.5%。
[0012]上述塞北紫堇藥材的檢測方法中，所述紫外分光光度法測定其總生物堿的含量，包括如下步驟，
[0013](I)第一對照品溶液的配置稱取干燥至恒重的原阿片堿5mg，加體積份數比1%的硫酸溶液Iml使溶解,用水定容至100ml，搖勻，即得。
[0014](2)標準溶液的制備吸取對照品溶液0、l、2、3、4、5ml，分別置分液漏斗中，各加0.1%溴甲酚綠試液2ml、磷酸鹽緩沖液2ml，用水補足溶液至10ml。加二氯甲烷10ml，振搖2min,靜置,分出有機層于400nm-450nm波長處測定吸收度,繪制標準曲線。
[0015](3)樣品溶液的制備取塞北紫堇藥材細粉l_5g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇50ml，稱定所述塞北紫堇藥材細粉與甲醇的總重量，加熱回流I小時，過濾得到第一濾液，取所述第一濾液25ml，蒸干，得到殘渣，所述殘渣用體積份數比10%的硫酸Iml溶解，再用水稀釋并定容至5ml后，過濾得到第二濾液即所需的樣品溶液。
[0016](4)測定精密吸取所述樣品溶液Iml置分液漏斗中，按所述步驟(2)的方法測定吸收度，并由標準曲線求算含量。
[0017]上述塞北紫堇藥材的檢測方法中，所述紫外分光光度法測定其總生物堿的含量，包括如下步驟，
[0018](I)第一對照品溶液的配置稱取干燥至恒重的原阿片堿5mg，加體積份數比1%的硫酸溶液Iml使溶解,用水定容至100ml，搖勻，即得；
[0019](2)標準溶液的制備吸取對照品溶液0、l、2、3、4、5ml，分別置分液漏斗中，各加0.1%溴甲酚綠試液2ml、磷酸鹽緩沖液2ml，用水補足溶液至10ml。加二氯甲烷10ml，振搖2min,靜置，分出有機層于，410nm波長處測定吸收度，繪制標準曲線；
[0020](3)樣品溶液的制備取塞北紫堇藥材細粉1.5g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇50ml，稱定所述塞北紫堇藥材細粉與甲醇的總重量，加熱回流I小時，過濾得到第一濾液，取所述第一濾液25ml，蒸干得到殘渣，所述殘渣用體積份數比10%的硫酸Iml溶解，再用水稀釋并定容至5ml后，過濾得到第二濾液即所需的樣品溶液；[0021](4)測定精密吸取所述樣品溶液Iml置分液漏斗中按所述步驟(2)的方法測定吸收度，并由標準曲線求算含量。
[0022]上述塞北紫堇藥材的檢測方法中，所述磷酸鹽緩沖液由38g磷酸二氫鈉與5.04g磷酸氫二鈉，加水定容至IOOOml，搖勻配制得到。
[0023]上述塞北紫堇藥材的檢測方法中，所述方法還包括采用高效液相色譜法測定原阿片堿的含量的步驟，其包括，
[0024]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以由體積份數比0.2%冰醋酸與體積份數比0.5%三乙胺的緩沖溶液形成的pH為6.0的第一混合溶液與乙腈形成的第二混合液為流動相，其中所述第一混合溶液與乙腈的體積比為(70-80): (20-30)，檢測波長為280-290nm ;理論板數按原阿片堿峰計算應不低于3000 ；
[0025]第二對照品溶液的制備取原阿片堿對照品5mg，加體積份數比1%硫酸使溶解，用水定容至100ml，即得；
[0026]供試品溶液的制備取所述塞北紫堇藥材細粉l_5g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇50ml，稱定所述塞北紫堇藥材與甲醇的總重量得到第一總重量，加熱回流I小時，放冷，再次稱定所述塞北紫堇藥材與甲醇的總重量得到第二總重量，并用甲醇補足第二總重量中減失的重量使其與第一總重量相等，搖勻，過濾得到第三濾液，取所述第三濾液25ml，蒸干得到第一殘渣。所述第一殘渣用體積份數比10%的硫酸Iml溶解，用水稀釋并定容至IOml后，過濾得到第四濾液即所需的供試品溶液；
[0027]測定法分別精密吸取第二對照品溶液與供試品溶液各10iU，注入液相色譜儀，測定，即得；
[0028]以干燥的塞北紫堇藥材計算，塞北紫堇含原阿片堿(C20H19N05)，不得少于0.5mg/g0
[0029]上述塞北紫堇藥材的檢測方法中，所述高效液相色譜法測定原阿片堿含量的步驟，包括，
[0030]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以由體積份數比0.2%冰醋酸與體積份數比0.5%三乙胺的緩沖溶液形成的pH為6.0的第一混合溶液與乙腈形成的第二混合液為流動相，其中所述第一混合溶液與乙腈的體積比為75:25，檢測波長為289nm ;理論板數按原阿片堿峰計算不低于3000 ；
[0031]第二對照品溶液的制備取原阿片堿對照品5mg，加體積份數比1%硫酸使溶解，用水定容至100ml，即得；
[0032]供試品溶液的制備取所述塞北紫堇藥材細粉2.5g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇50ml，稱定所述塞北紫堇藥材與甲醇的總重量得到第一總重量，加熱回流I小時，放冷，再次稱定所述塞北紫堇藥材與甲醇的總重量得到第二總重量，并用甲醇補足第二總重量中減失的重量使其與第一總重量相等，搖勻，過濾得到第三濾液，取所述第三濾液25ml，蒸干得到第一殘渣。所述第一殘渣用體積份數比10%的硫酸Iml溶解，用水稀釋并定容至IOml后，過濾得到第四濾液即所需的供試品溶液；
[0033]測定法分別精密吸取第二對照品溶液與供試品溶液各10iU，注入液相色譜儀，測定，即得。
[0034]上述塞北紫堇藥材的檢測方法中，所述高效液相色譜法測定原阿片堿的含量，包括，
[0035]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以由體積份數比0.2%冰醋酸與體積份數比0.5%三乙胺的緩沖溶液形成的pH為6.0的第一混合溶液與乙腈形成的第二混合液為流動相，其中所述第一混合溶液與乙腈的體積比為75:25 ;檢測波長為289nm ;理論板數按原阿片堿峰計算不低于3000 ；
[0036]第二對照品溶液的制備取原阿片堿對照品5mg，加體積份數比1%硫酸使溶解，用水定容至100ml，即得；
[0037]供試品溶液的制備取所述塞北紫堇藥材細粉2g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇50ml，稱定所述塞北紫堇藥材與甲醇的總重量得到第一總重量，加熱回流I小時，放冷，再次稱定所述塞北紫堇藥材與甲醇的總重量得到第二總重量，并用甲醇補足第二總重量中減失的重量使其與第一總重量相等，搖勻，過濾得到第三濾液，取所述第三濾液25ml，蒸干得到第一殘渣。所述第一殘渣用體積份數比10%的硫酸Iml溶解，用水稀釋并定容至IOml后，過濾得到第四濾液即所需的供試品溶液；
[0038]測定法分別精密吸取第二對照品溶液與供試品溶液各10iU，注入液相色譜儀，測定，即得。
[0039]與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明使用塞北紫堇中主要的有效成分原阿片堿作為對照，更為科學，在供試品的制備中首先采用加熱回流利用高溫環(huán)境去除葉綠素，進一步的采用硫酸溶液溶解的方式再一次除去干擾雜質，進而避免了大量的葉綠素對測定產生的干擾；更為科學的是，本發(fā)明使用生物堿與溴甲酚綠和磷酸鹽緩沖液發(fā)生特征反應，并采用二氯甲烷萃取特征反應的產物進行測定，由于二氯甲烷只對特征反應中生成的產物進行萃取，避免了非生物堿類成分的干擾，進一步增加了結果的準確性及科學性。
[0040]實驗例1:塞北紫堇中總生物堿的含量測定實驗
[0041]1.儀器、試劑和供試樣品
[0042]儀器:電子天平:島津AUW220D型；滴定管(北京玻璃儀器廠，25ml);島津UV-2450型紫外分光光度儀。
[0043]對照品:原阿片喊對照品(中國藥品生物制品檢定所)，批號:0853-200201。
[0044]樣品:塞北紫堇(青海金訶藏藥藥業(yè)股份有限公司提供)，批號分別為:110801、110802、110803。
[0045]2.總生物堿含量測定
[0046]對照品溶液的配置精密稱取干燥至恒重的原阿片堿5mg，體積份數1%的硫酸溶液Iml使溶解，用水定容至100ml，搖勻，即得。
[0047]標準溶液的制備精密吸取對照品溶液O、1、2、3、4、5ml，分別置分液漏斗中，各加0.1% (質量體積比，即IOOml溶液中溴甲酚綠含量為0.1g)溴甲酚綠試液2ml、磷酸鹽緩沖液2ml,用水補足溶液至10ml。加二氯甲燒IOml,振搖2min,靜置,分出有機層于410nm波長處測定吸收度，繪制吸收度與標準溶液中原阿片堿濃度的標準曲線。
[0048]樣品溶液的制備取本品藥材細粉約5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入甲醇50ml，稱定藥材與甲醇的總重量，加熱回流I小時，過濾得到第一濾液，取所述第一濾液25ml，蒸干得殘渣。所述殘渣用體積份數10%的硫酸溶液Iml溶解，用水稀釋并定容至5ml后，過濾得到第二濾液，即所需的樣品溶液備測。[0049]精密吸取樣品溶液Iml置分液漏斗中，按繪制標準曲線時測定標準溶液吸收度的方法測定樣品溶液的吸收度，并由標準曲線求算含量。
[0050]磷酸鹽緩沖液的配置磷酸二氫鈉38g與磷酸氫二鈉5.04g，加水定容至1000ml，搖勻，即得。
[0051]3.重現(xiàn)性試驗
[0052]取110801批號塞北紫堇藥材樣品6份，按總生物堿含量測定方法測定，計算總生物堿含量及其相對標準偏差。結果表明:該方法重復性良好。結果見表1。
[0053]表1總生物堿含量測定重現(xiàn)性試驗結果
【權利要求】
1.一種塞北紫堇藥材的檢測方法，其特征在于，采用紫外分光光度法測定其總生物堿的含量，其步驟如下， (1)第一對照品溶液的配置，稱取干燥至恒重的原阿片堿5-8mg，加體積份數比1%的硫酸溶液l_3ml使溶解，用水定容至100ml，搖勻，即得； (2)標準溶液的制備，吸取對照品溶液0、l、2、3、4、5ml，分別置分液漏斗中，各加0.1%溴甲酚綠試液2-4ml、磷酸鹽緩沖液2-3ml，用水補足溶液至10ml。加二氯甲烷10ml，振搖2min,靜置,分出有機層于400nm-450nm波長處測定吸收度,繪制標準曲線； (3)樣品溶液的制備，取塞北紫堇藥材細粉l_5g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇50ml，稱定所述塞北紫堇藥材細粉與甲醇的總重量，加熱回流I小時，過濾得到第一濾液，取所述第一濾液25ml，蒸干，得到殘渣，所述殘渣用體積份數比10%的硫酸溶液Iml溶解，再用水稀釋并定容至5ml后，過濾得到第二濾液即所需的樣品溶液； (4)測定，精密吸取所述樣品溶液Iml置分液漏斗中按所述步驟(2)的方法測定吸收度，并由標準曲線求算含量；以干燥的塞北紫堇藥材計算，生物堿總含量以原阿片堿(C20H19N05)計，不得少于 0.5%。
2.根據權利要求1所述的塞北紫堇藥材的檢測方法，其特征在于，所述紫外分光光度法測定其總生物堿的含量，包括如下步驟， (1)第一對照品溶液的配置稱取干燥至恒重的原阿片堿5mg，加體積份數比1%的硫酸溶液Iml使溶解，用水定容至100ml，搖勻，即得； (2)標準溶液的制備吸取對照品溶液0、1、2、3、4、5ml，分別置分液漏斗中，各加0.1%溴甲酹綠試液2ml、磷酸鹽緩沖液2ml,用水補足溶液至10ml。加二氯甲燒IOml,振搖2min,靜置，分出有機層于400nm-450nm波長處測定吸收度，繪制標準曲線；` (3)樣品溶液的制備取塞北紫堇藥材細粉l_5g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇50ml，稱定所述塞北紫堇藥材細粉與甲醇的總重量，加熱回流I小時，過濾得到第一濾液，取所述第一濾液25ml，蒸干，得到殘渣，所述殘渣用體積份數比10%的硫酸Iml溶解，再用水稀釋并定容至5ml后，過濾得到第二濾液即所需的樣品溶液； (4)測定精密吸取所述樣品溶液Iml置分液漏斗中，按所述步驟(2)的方法測定吸收度，并由標準曲線求算含量。
3.根據權利要求2所述的塞北紫堇藥材的檢測方法，其特征在于，所述紫外分光光度法測定其總生物堿的含量，包括如下步驟， (1)第一對照品溶液的配置稱取干燥至恒重的原阿片堿5mg，加體積份數比1%的硫酸溶液Iml使溶解，用水定容至100ml，搖勻，即得； (2)標準溶液的制備吸取對照品溶液0、1、2、3、4、5ml，分別置分液漏斗中，各加0.1%溴甲酹綠試液2ml、磷酸鹽緩沖液2ml,用水補足溶液至10ml。加二氯甲燒IOml,振搖2min,靜置，分出有機層于，410nm波長處測定吸收度，繪制標準曲線； (3)樣品溶液的制備取塞北紫堇藥材細粉1.5g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇50ml，稱定所述塞北紫堇藥材細粉與甲醇的總重量，加熱回流I小時，過濾得到第一濾液，取所述第一濾液25ml，蒸干得到殘渣，所述殘渣用體積份數比10%的硫酸Iml溶解，再用水稀釋并定容至5ml后，過濾得到第二濾液即所需的樣品溶液； (4)測定精密吸取所述樣品溶液Iml置分液漏斗中按所述步驟(2)的方法測定吸收度，并由標準曲線求算含量。
4.根據權利要求1-3任一所述的塞北紫堇藥材的檢測方法，其特征在于， 所述磷酸鹽緩沖液由38g磷酸二氫鈉與5.04g磷酸氫二鈉，加水定容至1000ml，搖勻配制得到。
5.根據權利要求1-4任一所述的塞北紫堇藥材的檢測方法，其特征在于，所述方法還包括采用高效液相色譜法測定原阿片堿的含量的步驟，其包括， 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以由體積份數比.0.2%冰醋酸與體積份數比0.5%三乙胺的緩沖溶液形成的pH為6.0的第一混合溶液與乙腈形成的第二混合液為流動相，其中所述第一混合溶液與乙腈的體積比為(70-80): (20-30)，檢測波長為280-290nm ;理論板數按原阿片堿峰計算應不低于3000 ； 第二對照品溶液的制備取原阿片堿對照品5mg，加體積份數比1%硫酸使溶解，用水定容至100ml，即得； 供試品溶液的制備取所述塞北紫堇藥材細粉l_5g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇50ml，稱定所述塞北紫堇藥材與甲醇的總重量得到第一總重量，加熱回流I小時，放冷，再次稱定所述塞北紫堇藥材與甲醇的總重量得到第二總重量，并用甲醇補足第二總重量中減失的重量使其與第一總重量相等，搖勻，過濾得到第三濾液，取所述第三濾液25ml，蒸干得到第一殘渣。所述第一殘渣用體積份數比10%的硫酸Iml溶解，用水稀釋并定容至IOml后，過濾得到第四濾液即所需的供試品溶液； 測定法分別精密吸取第二對照品溶液與供試品溶液各10 yl，注入液相色譜儀，測定，即得； 以干燥的塞北紫堇藥材計算，塞北紫堇含原阿片堿(C20H19N05)，不得少于0.5mg/g。
6.根據權利要求5所述的塞北紫堇藥材的檢測方法，其特征在于，所述高效液相色譜法測定原阿片堿含量的步驟，包括， 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以由體積份數比0.2%冰醋酸與體積份數比0.5%三乙胺的緩沖溶液形成的pH為6.0的第一混合溶液與乙腈形成的第二混合液為流動相，其中所述第一混合溶液與乙腈的體積比為75:25，檢測波長為289nm ;理論板數按原阿片堿峰計算不低于3000 ； 第二對照品溶液的制備取原阿片堿對照品5mg，加體積份數比1%硫酸使溶解，用水定容至100ml，即得； 供試品溶液的制備取所述塞北紫堇藥材細粉2.5g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇50ml，稱定所述塞北紫堇藥材與甲醇的總重量得到第一總重量，加熱回流I小時，放冷，再次稱定所述塞北紫堇藥材與甲醇的總重量得到第二總重量，并用甲醇補足第二總重量中減失的重量使其與第一總重量相等，搖勻，過濾得到第三濾液，取所述第三濾液25ml，蒸干得到第一殘渣。所述第一殘渣用體積份數比10%的硫酸Iml溶解，用水稀釋并定容至IOml后，過濾得到第四濾液即所需的供試品溶液； 測定法分別精密吸取第二對照品溶液與供試品溶液各10U1，注入液相色譜儀，測定，即得。
7.根據權利要求5所述的塞北紫堇藥材的檢測方法，其征征在于，所述高效液相色譜法測定原阿片堿的含量，包括，色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以由體積份數比.0.2%冰醋酸與體積份數比0.5%三乙胺的緩沖溶液形成的pH為6.0的第一混合溶液與乙腈形成的第二混合液為流動相，其中所述第一混合溶液與乙腈的體積比為75:25 ;檢測波長為289nm ;理論板數按原阿片堿峰計算不低于3000 ； 第二對照品溶液的制備取原阿片堿對照品5mg，加體積份數比1%硫酸使溶解，用水定容至100ml，即得； 供試品溶液的制備取所述塞北紫堇藥材細粉2g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇50ml，稱定所述塞北紫堇藥材與甲醇的總重量得到第一總重量，加熱回流I小時，放冷，再次稱定所述塞北紫堇藥材與甲醇的總重量得到第二總重量，并用甲醇補足第二總重量中減失的重量使其與第一總重量相等，搖勻，過濾得到第三濾液，取所述第三濾液25ml，蒸干得到第一殘渣。所述第一殘渣用體積份數比10%的硫酸Iml溶解，用水稀釋并定容至IOml后，過濾得到第四濾液即所需的供試品溶液； 測定法分別精 密吸取第二對照品溶液與供試品溶液各10 yl，注入液相色譜儀，測定，即得。
【文檔編號】G01N21/33GK103616344SQ201310681198
【公開日】2014年3月5日 申請日期:2013年12月12日 優(yōu)先權日:2013年12月12日
【發(fā)明者】李懷平, 任松鵬, 單玉剛, 魏永義 申請人:山東阿如拉藥物研究開發(fā)有限公司