用固定液增強(qiáng)生物組織力學(xué)性狀并延長其可檢時間的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及用固定液增強(qiáng)生物組織力學(xué)性狀并延長其可檢時間的方法，本方法基于生物組織固定液主通過使蛋白質(zhì)分子發(fā)生交聯(lián)而產(chǎn)生固定作用，用其固定不同PMI的離體生物組織，可以立即滅活生物組織細(xì)胞內(nèi)的自溶酶和腐敗細(xì)菌而終止尸體或離體組織的自溶和腐敗過程，同時迅速固定組織結(jié)構(gòu)并在一定程度上增強(qiáng)其生物力學(xué)性狀，從而可更好地利用敏感的生物力學(xué)性狀檢測指標(biāo)來推斷PMI，且可在一定程度上延長生物組織力學(xué)性狀的可檢時間，延長推斷PMI的最佳“窗口期”時限。利用固定液對離體生物組織進(jìn)行固定取樣時應(yīng)依照“六定”法進(jìn)行：1、定時；1、定位；3、定量；4、定形；5、定比；6、定時。固定液可以為甲醛、酒精等常用固定液。
【專利說明】用固定液增強(qiáng)生物組織力學(xué)性狀并延長其可檢時間的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種用固定液增強(qiáng)生物組織力學(xué)性狀并延長其可檢時間的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]死亡時間(Postmortem Interval,PMI)是指機(jī)體從死亡時刻至檢驗(yàn)時刻之間的時間間隔。PMI在刑事案件的偵破上對于確定案發(fā)時間、排查嫌疑人、劃定偵查范圍的司法意義重大，對于遺產(chǎn)繼承、保險(xiǎn)理賠等案件處理亦具有一定意義。由于許多非自然死亡案件發(fā)生的時間并不清楚，所以如何準(zhǔn)確地推斷PMI，一直是法醫(yī)實(shí)際鑒定工作的重要課題。
[0003]當(dāng)前應(yīng)用生物力學(xué)技術(shù)的方法已相當(dāng)成熟和靈敏，只需很小規(guī)則形狀的一維、二維或三維生物組織的標(biāo)準(zhǔn)化試件，即可簡單、快速、精確地以不同施力加載方式:壓縮、拉伸、剪切、彎曲、扭轉(zhuǎn)三維試件；拉伸一維和二維試件，檢測應(yīng)力、應(yīng)變、屈服點(diǎn)、斷裂點(diǎn)(極限強(qiáng)度)、彈性范圍和非彈性范圍絕對值，計(jì)算彈性模量和泊松比等相對值，從而獲得相應(yīng)的生物力學(xué)特征性參數(shù)。生物力學(xué)在各種機(jī)械性損傷成傷機(jī)制的研究以及各種損傷方式、致傷物推斷等法醫(yī)鑒定方面有較多的報(bào)道和應(yīng)用，但利用尸體組織生物力學(xué)性狀的時序性變化來推斷PMI的研究報(bào)道較少。
[0004]生物體各組織因具有不同的物質(zhì)成分、空間結(jié)構(gòu)及形態(tài)特點(diǎn)，決定了其特有的生物力學(xué)性狀，當(dāng)組織結(jié)構(gòu)不變時，生物力學(xué)性狀不會發(fā)生變化，組織結(jié)構(gòu)發(fā)生變化則會引起其生物力學(xué)性狀的變化。人或其它動物死后，隨著時間的推移，尸體會在相應(yīng)的環(huán)境下發(fā)生一系列死后變化，其中自溶和腐敗是造成尸體組織嚴(yán)重破壞的主要原因，自溶和腐敗使尸體組織的生物大分子逐漸降解成各種不同的小分子物質(zhì)，蛋白質(zhì)、核酸、糖類、脂類等大分子逐漸減少，胺類、氨基酸、脂肪酸、電解質(zhì)等水溶性或脂溶性中小分子、元素和離子，以及一些不溶解的大分子懸浮顆粒的物質(zhì)逐漸增多，此外，還可能包括一些腐敗菌的代謝產(chǎn)物的增加。
[0005]在這種不可逆的進(jìn)行性尸體組織自溶和腐敗的作用下，生物組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)和組成成分均會遭受到持續(xù)性的破壞，具有不同形態(tài)結(jié)構(gòu)、不同成分及其構(gòu)成比的各種尸體組織，也必然發(fā)生相應(yīng)的生物力學(xué)性狀的時序性變化，并存在各自的最佳檢測“窗口期”及其組合。
[0006]生物組織固定液主要是通過使蛋白質(zhì)分子發(fā)生交聯(lián)而產(chǎn)生固定作用，使用固定液固定不同PMI的離體生物組織，可以立即滅活生物組織細(xì)胞內(nèi)的自溶酶和腐敗細(xì)菌而終止尸體或離體組織的自溶和腐敗過程，同時，迅速固定組織結(jié)構(gòu)并在一定程度上增強(qiáng)其生物力學(xué)性狀，從而可更好地利用敏感的生物力學(xué)性狀檢測指標(biāo)來推斷PMI，且可在一定程度上延長生物組織力學(xué)性狀的可檢時間，延長推斷PMI的最佳“窗口期”時限。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明提供了一種用固定液增強(qiáng)生物組織力學(xué)性狀并延長其可檢時間的方法。
[0008]采用固定液對離體生物組織取樣進(jìn)行固定時應(yīng)依照“六定”法進(jìn)行:1、定時:提取死后的尸體生物組織，立即放入備制的固定液中，防止生物組織自溶和腐敗，保證生物組織形態(tài)結(jié)構(gòu)及其物質(zhì)成分和含量等情況，均停留在取材的時間點(diǎn)的水平不變；2、定位:每種不同生物組織均選定結(jié)構(gòu)均勻、個體差異小、不易發(fā)生傷病的部位取材，以期最大限度地避免因同一生物器官不同部位的組織結(jié)構(gòu)及其成分存在一定的差異而導(dǎo)致的取材誤差；3、定量:每個生物組織檢材均應(yīng)提取相同質(zhì)量，以期達(dá)到最大限度地可比性；4、定形:每個可成形的生物組織檢材均應(yīng)切取同一形狀大小，保證其體積和表面積基本相等；5、定比:統(tǒng)一固定液的配比參數(shù)，統(tǒng)一生物組織與固定液的質(zhì)量容積比，從而固定生物組織的形態(tài)結(jié)構(gòu):
6、定時:依據(jù)不同生物組織檢材的不同性質(zhì)，應(yīng)統(tǒng)一相應(yīng)的固定時間，一般以固定后各項(xiàng)組織生物力學(xué)性狀達(dá)到穩(wěn)定平臺期的時刻為限。
[0009]本發(fā)明所述的固定液可以為甲醛、酒精等常用固定液。
[0010]本發(fā)明所述的方法具有如下優(yōu)點(diǎn):1、固定液可迅速凝固蛋白，即刻終止自溶酶活性和腐敗菌生長從而終止生物組織的自溶和腐敗，保證了取材時間點(diǎn)的原始組織形態(tài)結(jié)構(gòu)，有效地避免了取材到檢測之間的離體組織繼續(xù)自溶和腐敗而影響推斷PMI的準(zhǔn)確性；
2、生物組織固定后強(qiáng)度增加，更易于檢測試件的定型和定量；3、增強(qiáng)生物組織力學(xué)性狀，延長了死后可檢時間，為檢測尸體組織生物力學(xué)性狀時序性變化，推斷PMI提供了科學(xué)性和可行性的新思路；4、生物組織多為粘彈性體，具有應(yīng)力松馳、蠕變和彈性滯后等特性，一般生物力學(xué)測試都要求預(yù)調(diào)過程，內(nèi)部結(jié)構(gòu)隨加載和卸載循環(huán)次數(shù)而變化，經(jīng)多次重復(fù)后才能達(dá)到一個穩(wěn)定狀態(tài)，但經(jīng)固定液固定的生物組織蛋白凝固，基本消除了新鮮生物組織的粘彈性，而呈穩(wěn)定狀態(tài)，減少了預(yù)調(diào)次數(shù)，簡化了實(shí)驗(yàn)操作、縮短實(shí)驗(yàn)過程，測試更方便簡單；5、便于同步進(jìn)行常規(guī)HE組織切片的形態(tài)學(xué)觀察，以及構(gòu)效關(guān)系分析，更精確地推斷PMI。
[0011]本發(fā)明的內(nèi)容結(jié)合以下實(shí)施例作更進(jìn)一步的說明，但本發(fā)明的內(nèi)容不僅限于實(shí)施例中所涉及的內(nèi)容。
【具體實(shí)施方式】
[0012]取屠宰后新鮮豬肝樣本10件(1500±15g)，置于恒溫25°C、恒濕70%、白晝光照12h人工氣候箱，讓其自溶和腐敗。
[0013]按取樣“六定”法規(guī)范化取材:1、定時:按2h、12h、18h、24h、30h、36h、48h、60h、72h、84h、96h、108h、120h、132h、144h、156h&168h 時間點(diǎn)分組取材；2、定位:在肝左外、左
內(nèi)、右內(nèi)、右外四葉中最厚、遠(yuǎn)離大血管及其周邊的間質(zhì)結(jié)締組織部分，進(jìn)行取材；3、定量:截取重量相同的肝組織標(biāo)本IOg ;4、定形:不同樣本的取樣統(tǒng)一切取同一矩形大小，保證其體積和表面積基本相等；5、定比:按9:1蒸餾水/甲醛原液配制10%甲醛固定液，豬肝組織與甲醛固定液的質(zhì)量體積比為1:10 ;6、定時:在甲醛固定液中豬肝組織樣本固定10小時后，取出豬肝的生物力學(xué)試件。
[0014]應(yīng)用生物力學(xué)檢測儀進(jìn)行縱軸單向壓縮測試(測量誤差為千分之一)，預(yù)調(diào)后，設(shè)定預(yù)載加力0.05N,運(yùn)行速度10mm/min,停機(jī)條件為變形IOmm,設(shè)定上壓縮頭在停機(jī)后自動返回。機(jī)器自動采集記錄力-變形曲線、應(yīng)力-應(yīng)變曲線及極限載荷、應(yīng)力、應(yīng)變、彈性模量、最大吸收能量等組織生物力學(xué)性狀參數(shù)。
[0015]按取樣“六定”法規(guī)范化取材的10例豬肝的生物力學(xué)試件與與未采取固定液處理的豬肝的生物力學(xué)試件對比，其各項(xiàng)生物力學(xué)性狀數(shù)據(jù)和檢測PMI的最佳“窗口期”時間均有顯著的提升。
【權(quán)利要求】
1.用固定液增強(qiáng)生物組織力學(xué)性狀并延長其可檢時間的方法，其特征在于所述利用固定液對離體生物組織進(jìn)行固定取樣時應(yīng)依照“六定”法進(jìn)行:1、定時:提取死后的尸體生物組織，立即放入備制的固定液中，防止生物組織自溶和腐敗，保證生物組織形態(tài)結(jié)構(gòu)及其物質(zhì)成分和含量等情況，均停留在取材的時間點(diǎn)的水平不變；2、定位:每種不同生物組織均選定結(jié)構(gòu)均勻、個體差異小、不易發(fā)生傷病的部位取材，以期最大限度地避免因同一生物器官不同部位的組織結(jié)構(gòu)及其成分存在一定的差異而導(dǎo)致的取材誤差；3、定量:每個生物組織檢材均應(yīng)提取相同質(zhì)量，以期達(dá)到最大限度地可比性；4、定形:每個可成形的生物組織檢材均應(yīng)切取同一形狀大小，保證其體積和表面積基本相等；6、定比:統(tǒng)一固定液的配比參數(shù)，統(tǒng)一生物組織與固定液的質(zhì)量容積比，從而固定生物組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)；6、定時:依據(jù)不同生物組織檢材的不同性質(zhì)，應(yīng)統(tǒng)一相應(yīng)的固定時間，一般以固定后各項(xiàng)組織生物力學(xué)性狀達(dá)到穩(wěn)定平臺期的時刻為限。
2.依據(jù)權(quán)利要求1中所述的用固定液增強(qiáng)生物組織力學(xué)性狀并延長其可檢時間的方法，其特征在于所述的固定液可以為甲醛、酒精等常用固定液。
【文檔編號】G01N1/30GK103698268SQ201310669674
【公開日】2014年4月2日 申請日期:2013年12月10日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月10日
【發(fā)明者】于曉軍, 楊含金, 劉志偉, 王玉 申請人:汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院