茵木愈肝顆粒中綠原酸的質量檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種茵木愈肝顆粒中綠原酸的質量檢測方法，屬于藥品質量控制【技術領域】。本發(fā)明是以綠原酸為對照品，茵木愈肝顆粒為供試品，通過高效液相色譜法進行的鑒別和含量檢測。高效液相色譜條件為：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇：0.5％冰醋酸(20：80)為流動相，檢測波長為327nm；理論板數(shù)按綠原酸峰計算應不低于4000。本發(fā)明采用高效液相色譜法對綠原酸進行鑒別和含量檢測，方法更科學，檢測手段更先進，定性定量更準確，不僅可以更好更全面的反映茵木愈肝顆粒的有效成分，而且還可以杜絕采用其他藥材代替茵陳投料生產(chǎn)的情況，從而確保了該藥品的質量，保證了用藥的安全有效。
【專利說明】茵木愈肝顆粒中綠原酸的質量檢測方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種藥物制劑中活性成分的質量檢測方法，具體來說，涉及的是一種治療濕熱型肝炎的中藥顆粒劑中綠原酸的質量檢測方法，屬于藥品質量控制【技術領域】。
【背景技術】
[0002]本發(fā)明涉及一種藥物制劑中活性成分的質量檢測方法，具體來說，涉及的是一種治療濕熱型肝炎的中藥顆粒劑中綠原酸的質量檢測方法，屬于藥品質量控制【技術領域】。
[0003]本發(fā)明具體涉及的治療濕熱型肝炎的中藥顆粒劑即茵木愈肝顆粒，由茵陳、木賊、黃芩、板藍根、大黃、白茅根等藥材，經(jīng)適當工藝制備得到，該制劑對于辯證為濕熱之證的病毒性肝炎、膽囊炎均有很好的療效。。
[0004]茵木愈肝顆粒中茵陳、木賊具有清利熱濕、退黃的功效，經(jīng)研究證明，茵陳的主要有效成分——綠原酸具有具有抗菌、抗病毒、免疫調節(jié)、抗氧化等多種作用；木賊的主要有效成分——山柰素具有抗炎、抗氧化、抗?jié)兊榷喾N作用。在對茵木愈肝顆粒的分析中發(fā)現(xiàn)本品中的主要有效成分為綠原酸。
[0005]通過查詢目前國內外的相關文獻發(fā)現(xiàn)，僅有單獨測定茵陳制劑中的綠原酸或單獨測定木賊制劑中山柰素的報道，還沒有關于對由茵陳、木賊、黃芩、板藍根、大黃、白茅根組成的復方制劑中的綠原酸和山柰素進行檢測昀文獻報道。為了更好的控制茵木愈肝顆粒的質量，保證臨床用藥的安全性，有必要建立一套完整的質量控制標準以更好的控制本品的質量。
[0006]茵木愈肝顆粒的制備工藝中主要涉及制備方法為:取茵陳400g，木賊400g，大黃IOOg,板藍根200g，黃芩200g，白茅根200g。將6味藥材洗凈，按比例混合，加藥材總重量的6-10倍的水煎煮2次，每次1.5小時，合并2次煎煮液，過濾，并濃縮至90°C時相對密度為1.05，待冷卻至室溫，加入乙醇，使藥液含醇量為70 %，攪勻，靜置24小時，取上清液，回收乙醇后，濃縮至60°C時相對密度為1.25的浸膏，加蔗糖，糊精，乙醇適量，制成軟材，過12目篩制成顆粒，干燥，即得。
[0007]經(jīng)過分析可以得知，整個生產(chǎn)工藝中質量控制比較簡單，可能會因為生產(chǎn)批次的不一樣，或者就算是同一批次也會生產(chǎn)出含量各不相同、品質不均勻的產(chǎn)品。如果在顆粒制備完成或者制備過程中，進行適當?shù)蔫b別和含量檢測，這無疑會對產(chǎn)品的質量和療效穩(wěn)定起著至關重要的作用。

【發(fā)明內容】

[0008]本發(fā)明的目的是針對中藥制劑茵木愈肝顆粒，提供一種可以全面鑒別及檢測該制劑有效成分之——綠原酸的質量檢測方法，確保了該藥物制劑的安全有效。
[0009]為實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的具體技術方案如下:
[0010]茵木愈肝顆粒中綠原酸的質量檢測方法，其特征在于:以綠原酸為對照品，以甲醇、0.5%冰醋酸溶液的混合物為流動相，甲醇:0.5%冰醋酸溶液V / v=20:80，用高效液相色譜法進行鑒別和含量檢測。
[0011]所述高效液相色譜的條件為:用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比20:80的甲醇-0.5%冰醋酸溶液為流動相，檢測波長為327nm，理論板數(shù)按綠原酸峰計算不低于 4000。
[0012]所述鑒別檢測的具體方法如下:
[0013]A對照品溶液的制備:精密稱取綠原酸對照品適量，用甲醇制成每Iml中含0.1mg的對照品溶液；
[0014]B供試品溶液的制備:精密稱定茵木愈肝顆粒0.5g，置于錐形瓶內，加入甲醇:水
V/ v=50:50的溶液50ml，精密稱定后，超聲提取30分鐘，取出，放冷，再精密稱定并采用甲醇:水V / v=50:50的溶液補足失去的重量，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液；
[0015]C液相色譜測定色譜峰:分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀中，檢測出供試品色譜中與對照品色譜峰保留時間相一致的色譜峰。
[0016]所述含量檢測的具體步驟如下:
[0017]A對照品溶液的制備:精密稱取綠原酸對照品適量，用甲醇溶液制成每Iml中含
0.1mg的對照品溶液；
[0018]B供試品溶液的制備:精密稱定茵木愈肝顆粒0.5g，置于錐形瓶內，加入甲醇:水
V/ v=50:50的溶液50ml，精密稱定后，超聲提取30分鐘，取出，放冷，再精密稱定并采用甲醇:水V / v=50:50的溶液補足失去的重量，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液；
[0019]C液相色譜測定色譜峰:分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀中，檢測出供試品色譜中與對照品色譜峰保留時間相一致的色譜峰。
[0020]發(fā)明人對鑒別方法和含量測定方法的可行性進行了驗證研究；具體實驗資料如下:
[0021]1、綠原酸的高效液相鑒別研究
[0022]方法:高效液相色譜法
[0023]樣品和對照品處理方法:精密稱取綠原酸對照品適量,加甲醇溶液制成每Iml中含0.1mg的對照品溶液液。供試品溶液制備:取供試品0.5g，精密稱定，置錐形瓶內，加入50ml甲醇:水V / v=50:50的溶液，精密稱定后，超聲提取30分鐘，取出，放冷，再精密稱定并采用甲醇:水V / v=50:50的溶液補足失去的重量，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各IOy 1，注入液相色譜儀中，測定，即得。
[0024]色譜柱:AgilentEclipse XDB-C18 (4.6mmX 150mm, 5 μ m)
[0025]流動相:甲醇:0.5%冰醋酸溶液(20:80)
[0026]檢測波長:327nm
[0027]流速:1.0ml / min
[0028]結果:在擬定條件下，樣品中有與對照品保留時間一致的色譜峰。
[0029]2、綠原酸的高效液相含量測定研究
[0030]方法:高效液相色譜法
[0031]1.儀器與實驗藥
[0032]Agilentl200型高效液相色譜儀，KQ3200DB型數(shù)控超聲波清洗器。甲醇為色譜級，冰醋酸為分析純。綠原酸對照品為中國藥品生物制品檢定所提供，茵木愈肝顆粒由解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院提供。
[0033]2.方法與結果
[0034]2.1色譜條件:
[0035]色譜柱:AgilentEclipse XDB-C18 (4.6mmX 150mm, 5 μ m)
[0036]流動相:甲醇:0.5%冰醋酸溶液(20:80)
[0037]檢測波長:327nm
[0038]流速:1.0ml/ min
[0039]2.2溶液制備
[0040]2.2.1精密稱取綠原酸對照品適量，加甲醇溶液制成每Iml中含0.1mg的對照品溶液。
[0041]2.2.2供試品溶液制備:取供試品0.5g，精密稱定，置錐形瓶內，加入50ml甲醇:水V / v=50:50的溶液，精密稱定后，超聲提取30分鐘，取出，放冷，再精密稱定并采用甲醇:水V / v=50:50的溶液補足失去的重量，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液。
[0042]2.3系統(tǒng)適用性實驗:分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μ 1，注入高效液相色譜儀中，記錄色譜圖，結果綠原酸的保留時間為5.813min，綠原酸峰與前后色譜峰的分離度均大于1.5，理論塔板以綠原酸峰計算為6250。
[0043]2.4線性關系:分別精密吸取2.2.1項下對照品溶液1，2，5，10，15，20 μ 1，注入液相色譜儀中，按照上述色譜條件測定峰面積，以峰面積積分值Y對進樣量X進行回歸，得標準曲線方程:Υ=3173.61Χ+0.5692 (r=0.9999)，結果表明綠原酸進樣量在2.5_20ng范圍內峰面積與進樣量有良好的線性關系。
[0044]2.5精密度研究:精密吸取2.2.1項下對照品溶液10 μ 1，注入液相色譜儀中，按照上述色譜條件測定峰面積，重復進樣6次，測得綠原酸峰面積RSD為1.05%，表明儀器精密度良好。
[0045]2.6穩(wěn)定性研究:精密吸取2.2.2項下對照品溶液10 μ 1，分別在0，2，4，6，8，12小時注入液相色譜儀中，按照上述色譜條件測定峰面積，測得綠原酸峰面積RSD為1.99%，表明供試品溶液在12小時內穩(wěn)定。
[0046]2.7重復性實驗:精密吸取2.2.2項下樣品溶液10 μ 1，注入液相色譜儀中，按照上述色譜條件測定峰面積，重復進樣6次，測得綠原酸峰面積RSD為1.91%，表明儀器精密度良好。
[0047]2.8回收率實驗:精密稱取已知含量的本品9份，每份0.5g，分成3組，每組3份，分別精密添加綠原酸對照溶液適量，按照2.2.2項下方法制備供試品溶液，按照上述色譜條件測定峰面積，計算回收率，回收率為100.15%, RSD=2.58%，實驗結果表明本品具有良好的回收率。
[0048]2.9樣品含量測定:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀中，測定，即得。本品每Ig含綠原酸(C16H18O9)不得少于2.5mg。
[0049]本發(fā)明的優(yōu)點是采用高效液相色譜法對綠原酸的鑒別及含量進行檢測，方法更科學，檢測手段更先進，定性定量更準確，不僅可以更好更全面的反映茵木愈肝顆粒的有效成分，而且還可以杜絕采用其他藥材代替茵陳投料生產(chǎn)的情況，從而保證該藥品的質量，保證用藥安全有效。[0050]本發(fā)明的另一優(yōu)點是，通過對綠原酸的鑒別和含量檢測，可以在顆粒制備之前就進行質量控制，以便生產(chǎn)出質量合格的產(chǎn)品，同時，也可以為產(chǎn)品提供一種科學合理的檢測方法，以便從生產(chǎn)和流通領域控制產(chǎn)品質量。
具體實施例
[0051]下面結合實施例對本發(fā)明的上述內容再作進一步的詳細說明，但不應將此理解為本發(fā)明技術方案僅限于以下實施例。
[0052]實施例1綠原酸的鑒別
[0053]用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇:0.5%冰醋酸溶液(20:80)為流動相；檢測波長為327nm ;理論板數(shù)按綠原酸峰計算應不低于4000。精密稱取綠原酸對照品適量，用甲醇溶液制成每Iml中含0.1mg的溶液，作為對照品溶液。取本品粉末約0.5g，精密稱定，置于錐形瓶內，加入50ml甲醇:水V / v=50:50的溶液，精密稱定后，超聲提取30分鐘，取出，放冷，再精密稱定并采用甲醇:水V / v=50:50的溶液補足失去的重量，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液。分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀中，檢測，供試品色譜中應存在與對照品色譜峰保留時間相一致的色譜峰。
[0054]實施例2綠原酸的含量測定
[0055]用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇:0.5%冰醋酸溶液(20:80)為流動相；檢測波長為327nm ;理論板數(shù)按綠原酸峰計算應不低于4000。精密稱取綠原酸對照品適量，用甲醇溶液制成每Iml中含0.1mg的溶液，作為對照品溶液。取本品粉末約0.5g，精密稱定，置于錐形瓶內，加入50ml甲醇:水V / v=50:50的溶液，精密稱定后，超聲提取30分鐘，取出，放冷，再精密稱定并采用甲醇:水V / v=50:50的溶液補足失去的重量，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液。分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀中，測定即得。
【權利要求】
1.茵木愈肝顆粒中綠原酸的質量檢測方法，其特征在于:以綠原酸為對照品，以甲醇、0.5%冰醋酸溶液的混合物為流動相，甲醇:0.5%冰醋酸溶液V / v=20:80，用高效液相色譜法進行鑒別和含量檢測。
2.根據(jù)權利要求1所述的茵木愈肝顆粒中綠原酸的質量檢測方法，其特征在于:所述高效液相色譜的條件為:用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比20:80的甲醇-0.5%冰醋酸溶液為流動相，檢測波長為327nm，理論板數(shù)按綠原酸峰計算不低于4000。
3.根據(jù)權利要求1所述的茵木愈肝顆粒中綠原酸的質量檢測方法，其特征在于:所述鑒別檢測的具體方法如下: A對照品溶液的制備:精密稱取綠原酸對照品適量，用甲醇制成每Iml中含0.1mg的對照品溶液； B供試品溶液的制備:精密稱定茵木愈肝顆粒0.5g，置于錐形瓶內，加入甲醇:水V /v=50:50的溶液50ml，精密稱定后，超聲提取30分鐘，取出，放冷，再精密稱定并采用甲醇:水V / v=50:50的溶液補足失去的重量，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液； C液相色譜測定色譜峰:分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀中，檢測出供試品色譜中與對照品色譜峰保留時間相一致的色譜峰。
4.根據(jù)權利要求1所述的茵木愈肝顆粒中綠原酸的質量檢測方法，其特征在于:所述含量檢測的具體步驟如下: A對照品溶液的制備:精密稱取綠原酸對照品適量，用甲醇溶液制成每Iml中含0.1mg的對照品溶液； B供試品溶液的制備:精密稱定茵木愈肝顆粒0.5g，置于錐形瓶內，加入甲醇:水V /v=50:50的溶液50ml，精密稱定后，超聲提取30分鐘，取出，放冷，再精密稱定并采用甲醇:水V / v=50:50的溶液補足失去的重量，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液； C液相色譜測定色譜峰:分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀中，檢測出供試品色譜中與對照品色譜峰保留時間相一致的色譜峰。
【文檔編號】G01N30/02GK103592390SQ201310591316
【公開日】2014年2月19日 申請日期:2013年11月22日 優(yōu)先權日:2013年11月22日
【發(fā)明者】李翔, 劉皈陽, 馬建麗, 周亮 申請人:中國人民解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院