專利名稱：液相色譜反相分離-電化學(xué)檢測(cè)分析系統(tǒng)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種化學(xué)儀器分析的使用系統(tǒng)，特別是涉及自制聚合物反相柱直接分離，電化學(xué)檢測(cè)氨基糖苷類抗生素(妥布霉素)的液相色譜-電化學(xué)分析系統(tǒng)。
背景技術(shù)：
氨基糖苷類抗生素(Aminoglycosides)是由氨基糖與氨基環(huán)醇通過氧橋連接而成的苷類抗生素，主要通過抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成，用于敏感需氧革蘭陰性和陽性桿菌所致的全身感染。妥布霉素(tobramycin)為氨基糖苷類廣譜抗生素中的一種，對(duì)革蘭陽性菌和陰性菌均具有良好的抗菌作用。由于缺乏紫外吸收，妥布霉素的測(cè)定多采用微生物法，旋光法，分光光度法，HPLC柱前柱后衍生，紫外或熒光檢測(cè)法，HPLC-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法，HPLC柱后加堿電化學(xué)檢測(cè)法，糖柱分離電化學(xué)檢測(cè)法。微生物法、旋光度法、和分光光度法均不能排除制劑中雜質(zhì)的干擾，操作繁鎖、費(fèi)時(shí)，而且反應(yīng)過程產(chǎn)生的副產(chǎn)物也可干擾測(cè)定。衍生法復(fù)雜，條件較難控制，容易因衍生劑等各種因素造成系統(tǒng)不穩(wěn)定。蒸發(fā)光散射法需易揮發(fā)的流動(dòng)相，且檢測(cè)靈敏度低。糖柱分離電化學(xué)檢測(cè)法因妥布霉素保留弱，需高交換容量糖柱和低濃度淋洗液，條件較難控制，且低濃度淋洗液造成檢測(cè)靈敏度低。一般反相柱為硅膠基質(zhì)，氨基糖苷類抗生素的液相分離多為在酸性條件下采用離子對(duì)分離，而脈沖安培電化學(xué)檢測(cè)需在堿性條件下工作，因此必須在柱后加堿。本發(fā)明采用自制聚合物反相柱，直接在堿性條件下分離檢測(cè)妥布霉素，不需柱后加堿。迄今為止，未見以聚合物反相柱在堿性條件下直接分離，電化學(xué)檢測(cè)氨基糖苷類抗生素的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種液相分離-電化學(xué)檢測(cè)分析系統(tǒng)，利用聚合物反相柱能在堿性條件下使用與脈沖安培檢測(cè)法需在堿性條件下工作相匹配，而堿性條件下妥布霉素在聚合物反相柱中有所保留，因此直接采用氫氧化鈉溶液加少量乙腈作為淋洗液，自制的聚苯乙烯-二乙烯基苯基質(zhì)的聚合物反相柱作為固定相，脈沖安培法檢測(cè)妥布霉素。本發(fā)明的具體技術(shù)方案如下
本發(fā)明是一種液相色譜反相分離-電化學(xué)檢測(cè)分析系統(tǒng)，該系統(tǒng)利用聚合物反相柱能在堿性條件下使用與脈沖安培檢測(cè)法需在堿性條件下工作相匹配，而堿性條件下妥布霉素在聚合物反相柱中有所保留，因此直接采用氫氧化鈉溶液加少量乙腈作為淋洗液，自制的聚苯乙烯-二乙烯基苯基質(zhì)的聚合物反相柱作為固定相，脈沖安培法檢測(cè)妥布霉素。結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，無需采用繁瑣的衍生方法，用電化學(xué)檢測(cè)無需額外的柱后加堿裝置，條件易于控制， 操作簡(jiǎn)便，并能在短時(shí)間內(nèi)完成測(cè)定，檢測(cè)靈敏度高。本發(fā)明采用自制的苯乙烯-二乙烯基苯微球填充的聚合物反相柱作為固定相，分析成本大大降低。
本發(fā)明可望用于其他氨基糖苷類抗生素的檢測(cè)。本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)和效果
本發(fā)明利用自制的聚合物反相柱，分析成本大大降低，在堿性條件下直接分離妥布霉素，脈沖安培法檢測(cè)，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，無需采用繁瑣的衍生方法，電化學(xué)檢測(cè)無需額外的柱后加堿裝置，條件易于控制，操作簡(jiǎn)便，并能在短時(shí)間內(nèi)完成測(cè)定，檢測(cè)靈敏度高。


圖1為分析方法的裝置圖； 圖2為分析方法的標(biāo)準(zhǔn)樣品(妥布霉素)信號(hào)峰； 圖3為分析方法的實(shí)際樣品(妥布霉素滴眼液)信號(hào)峰； 圖4為分析方法的實(shí)際樣品(妥布霉素注射液)信號(hào)峰； 圖1中標(biāo)記為
1-泵；2-六通閥；3-被分析樣品；4-定量環(huán)；5-分離柱；6-脈沖安培檢測(cè)器；7-廢液
缸；
圖2中標(biāo)記為
8-妥布霉素a; 圖3中標(biāo)記為
9-妥布霉素b； 圖4中標(biāo)記為
10-妥布霉素C。
具體實(shí)施方案下面結(jié)合說明書附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步具體的說明
本發(fā)明利用聚合物反相柱能在堿性條件下使用與脈沖安培檢測(cè)法需在堿性條件下工作相匹配，而妥布霉素在聚合物反相柱中有保留。圖1為分析方法的裝置圖，如圖所示，流動(dòng)相自離子色譜泵1輸送，被分析樣品3由六通閥2上的定量環(huán)4進(jìn)樣，經(jīng)分離柱5分離后的組分進(jìn)入脈沖安培檢測(cè)器6，尾液排至廢液缸7，信號(hào)由計(jì)算機(jī)和工作站記錄處理。圖2 為利用上述方法分析妥布霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖，8號(hào)色譜峰為妥布霉素a (10 ppm);圖3 為滴眼液樣品的色譜圖，9號(hào)色譜峰為妥布霉素b ；圖4為注射液樣品的色譜圖，10號(hào)色譜峰為妥布霉素C。以美國(guó)戴安公司(Dionex)的離子色譜儀Dionex ICS-2000，自制的苯乙烯-二乙烯苯微球(粒徑5 μ m)填充的250X4mm的液相柱為固定相，以50 mmol. L^1NaOH(由50%Na0H 配制)+0. 5% (ν/ν)乙腈為流動(dòng)相，流動(dòng)相流速為1. 0 mL/min,進(jìn)樣量為25 μ , ED40電化學(xué)檢測(cè)器脈沖安培檢測(cè)。檢測(cè)電位設(shè)置為=E1, E2, E3和E4分別為0. 05 V，-2. 00 V，0. 60 V和-1. 00 V，相應(yīng)的時(shí)間間隔為0-0. 40，0. 41-0. 42，0. 43和0. 44-0. 50 s,積分區(qū)間為 0. 20-0. 40 S。在該實(shí)驗(yàn)條件下，用本發(fā)明的液相色譜-電化學(xué)檢測(cè)分析系統(tǒng)，可以對(duì)妥布霉素滴眼液和注射液進(jìn)行分析。
權(quán)利要求
1.一種液相色譜反相分離-電化學(xué)檢測(cè)分析系統(tǒng)，其特征在于利用聚合物反相柱能在堿性條件下使用與脈沖安培檢測(cè)法需在堿性條件下工作相匹配，堿性條件下妥布霉素在聚合物反相柱中有所保留，直接采用氫氧化鈉溶液加少量乙腈作為淋洗液，自制的聚苯乙烯-二乙烯基苯基質(zhì)的聚合物反相柱作為固定相，脈沖安培法檢測(cè)妥布霉素。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的液相色譜反相分離-電化學(xué)檢測(cè)分析系統(tǒng)，其特征在于，該系統(tǒng)可望用于其他氨基糖苷類抗生素的檢測(cè)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種化學(xué)儀器分析的使用系統(tǒng)，特別是涉及自制聚合物反相柱直接分離，電化學(xué)檢測(cè)氨基糖苷類抗生素的液相色譜-電化學(xué)分析系統(tǒng)。其利用聚合物反相柱能在堿性條件下使用與脈沖安培檢測(cè)法需在堿性條件下工作相匹配，堿性條件下妥布霉素在聚合物反相柱中有所保留，直接采用氫氧化鈉溶液加少量乙腈作為淋洗液，自制的聚苯乙烯-二乙烯基苯基質(zhì)的聚合物反相柱作為固定相，脈沖安培法檢測(cè)妥布霉素。本發(fā)明利用自制的聚合物反相柱，分析成本大大降低，在堿性條件下直接分離妥布霉素，脈沖安培法檢測(cè)，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，無需采用繁瑣的衍生方法，電化學(xué)檢測(cè)無需額外的柱后加堿裝置，條件易于控制，操作簡(jiǎn)便，并能在短時(shí)間內(nèi)完成測(cè)定，檢測(cè)靈敏度高。
文檔編號(hào)G01N30/02GK102331464SQ20111017027
公開日2012年1月25日 申請(qǐng)日期2011年11月15日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月15日
發(fā)明者朱作藝, 朱巖 申請(qǐng)人:浙江大學(xué)