專利名稱：一種同時(shí)檢測(cè)泰樂(lè)菌素、交沙霉素和螺旋霉素殘留的毛細(xì)管電泳-納米金敏化電化學(xué)發(fā)光法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及利用毛細(xì)管電泳-納米金敏化電化學(xué)發(fā)光聯(lián)用技術(shù)對(duì)三種大環(huán)內(nèi) 酯類藥物(泰樂(lè)菌素、交沙霉素、螺旋霉素)殘留同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)的方法。屬于 醫(yī)藥化工中的電化學(xué)分析和儀器分析技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
隨著人們對(duì)動(dòng)物性食品需求量的增加，動(dòng)物性食品中的獸藥殘留也越來(lái)越 成為全社會(huì)共同關(guān)注的公共衛(wèi)生問(wèn)題，而大環(huán)內(nèi)酯類藥物因良好的抗菌消炎作 用被廣泛用于飼料，食品以及獸藥當(dāng)中。泰樂(lè)菌素、交沙霉素、螺旋霉素是獸 藥中常用的三種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，其使用量較大，且應(yīng)用廣泛。使動(dòng)物長(zhǎng)期 服用后，代謝物會(huì)在動(dòng)物的組織及器官內(nèi)蓄積或貯存，達(dá)到一定濃度可造成動(dòng) 物前庭和俄耳蝸神經(jīng)的損害，導(dǎo)致眩暈和聽力減退，嚴(yán)重者還將造成肝腎的損 害。大環(huán)內(nèi)酯類抗生素更可通過(guò)食物鏈進(jìn)入到人體，將對(duì)人類健康構(gòu)成嚴(yán)重威 脅。因此急需建立大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的藥物殘留分析和監(jiān)測(cè)體系，保證食品和 用藥安全。
目前關(guān)于大環(huán)內(nèi)酯類檢測(cè)分析方法主要為高效液相色譜法(HPLC)、液相 色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(LC-MS)、薄層色譜分析法、微生物效價(jià)法等。但它們本身也 存在許多問(wèn)題。如微生物法比較費(fèi)時(shí)，定量難度大。而由于許多大環(huán)內(nèi)酯類藥 物紫外吸收非常弱，因此采用紫外-可見吸收檢測(cè)器的高效液相色譜法很難對(duì)大 多數(shù)大環(huán)內(nèi)酯類藥物實(shí)現(xiàn)靈敏檢測(cè)；通用的解決方法是柱前衍生化，這樣會(huì)使 得檢測(cè)工作相對(duì)繁瑣；采用其他檢測(cè)器時(shí)同樣存在需要衍生化或靈敏度差的缺 陷。液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)很好的解決了這些問(wèn)題，但存在儀器設(shè)備昂貴、檢 測(cè)成本高等問(wèn)題。而本發(fā)明方法則克服了上述方法的缺點(diǎn)，能實(shí)現(xiàn)同時(shí)對(duì)泰樂(lè) 菌素、交沙霉素、螺旋霉素三種大環(huán)內(nèi)酯類藥物的快速靈敏檢測(cè)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及利用毛細(xì)管電泳-納米金敏化電化學(xué)發(fā)光聯(lián)用技術(shù)對(duì)動(dòng)物組織中 三種大環(huán)內(nèi)酯類藥物殘留同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)的方法。較為獨(dú)特的是該方法采用毛細(xì) 管電泳-納米金敏化電化學(xué)發(fā)光聯(lián)用技術(shù)，不但可同時(shí)檢測(cè)泰樂(lè)菌素、交沙霉素、 螺旋霉素三種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，而且快速、簡(jiǎn)便，定性、定量準(zhǔn)確、靈敏度 高、選擇性好。
本發(fā)明方法原理為采用毛細(xì)管電泳-電化學(xué)發(fā)光聯(lián)用技術(shù)，基于該三種藥 物能顯著增強(qiáng)Ru(bpy) +電化學(xué)發(fā)光(ECL)信號(hào)的現(xiàn)象，結(jié)合毛細(xì)管電泳(CE) 分離技術(shù)，通過(guò)對(duì)分離檢測(cè)條件進(jìn)行優(yōu)化，進(jìn)一步結(jié)合納米金敏化該電化學(xué)發(fā) 光反應(yīng)信號(hào)的現(xiàn)象，實(shí)現(xiàn)對(duì)該三種藥物的快速靈敏分離檢測(cè)。本發(fā)明方法泰樂(lè) 菌素檢出限為23 ng/mL、交沙霉素檢出限為15 ng/mL、螺旋霉素檢出限為15 ng/mL，且在6分鐘內(nèi)三種抗生素可實(shí)現(xiàn)完全分離，線性關(guān)系、重復(fù)性良好。經(jīng) 與權(quán)威部門檢測(cè)數(shù)據(jù)對(duì)比本發(fā)明方法檢測(cè)的數(shù)據(jù)同樣準(zhǔn)確可靠?？梢詫?duì)大環(huán)內(nèi) 酯類抗生素的臨床使用和殘留進(jìn)行定性定量檢測(cè)，以彌補(bǔ)目前檢測(cè)方法周期長(zhǎng)、 不能同時(shí)分析、靈敏度低等不足之處。
具體來(lái)說(shuō)，本發(fā)明的主要分析步驟如下 1工作電極的制備
檢測(cè)池上的工作電極為直徑300,的鉑盤電極。它的制作過(guò)程如下將長(zhǎng) 度為2.5 cm、直徑為0.5拜的鉑絲焊接上一段金屬導(dǎo)線，并套進(jìn)聚丙烯塑料管 中(內(nèi)徑lmm、外徑3mm)，使鉑絲露出塑料管約100 的長(zhǎng)度，采用透明 的環(huán)氧樹脂分別封住頂端和底端，室溫條件下放置24 h，然后用刀片將露出的 多余鉑絲切去，分別用不同粒徑的八1203研磨粉和砂紙打磨電極拋光，最后超聲 洗滌干凈。然后將工作電極安裝在毛細(xì)管電泳出口的相對(duì)位置上，通過(guò)在光學(xué) 顯微鏡下的觀察把鉑絲工作電極和毛細(xì)管出口處之間的距離控制在70±5 iim范 圍內(nèi)。
為了減少鉑電極表面的氧化層，提高分析結(jié)果的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性，在每次電泳運(yùn)行檢測(cè)前，使工作電極進(jìn)行循環(huán)伏安處理3min，通過(guò)這種電化學(xué)清洗， 以減少試劑損耗或者反應(yīng)中電壓干擾對(duì)其形成的影響。 2毛細(xì)管的處理
采用長(zhǎng)度為45 cm，內(nèi)徑為50 ^m，外徑為320 ^m的熔融石英硅毛細(xì)管。為 了保證實(shí)驗(yàn)儀器的穩(wěn)定性和測(cè)定結(jié)果的重現(xiàn)性，新的毛細(xì)管首次使用前要用 O.IM氫氧化鈉浸泡過(guò)夜，每次分離檢測(cè)前，都要用0.1M氫氧化鈉、二次蒸餾水
(簡(jiǎn)稱二次水)和運(yùn)行緩沖溶液分別沖洗毛細(xì)管各IO min。 3標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備
分別稱取泰樂(lè)菌素、交沙霉素、螺旋霉素的標(biāo)準(zhǔn)品各O.l g，用超純水溶解， 并定容于100mL容量瓶中，冰箱低溫保藏以備下次使用，使用時(shí)逐級(jí)稀釋。 4毛細(xì)管電泳分離條件
(1) 分離緩沖液本發(fā)明直接采用磷酸鹽作為分離緩沖液
(2) 分離緩沖液pH:研究發(fā)現(xiàn)pH值在5.0 7.5范圍時(shí)，ECL強(qiáng)度隨pH值增大而 升高；pH大于6時(shí)，三種抗生素才能分開。而在7.5之后，ECL強(qiáng)度有所下 降，分離效率明顯降低。在pH值為7.5時(shí)，信噪比和分離效率相對(duì)較高， 因此將緩沖液的pH值選擇在7.5。
(3) 分離緩沖液濃度當(dāng)緩沖溶液濃度在5 15mM之間變化時(shí)，三種藥物電化 學(xué)發(fā)光強(qiáng)度均迅速增大，且分離效率逐漸增加。隨著PBS濃度進(jìn)一步增大， 電化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度在15mM達(dá)到最大，然后迅速下降，且基線噪聲增高，分 離效率開始下降。故選擇緩沖液的濃度為15mM。
(4) 分離電壓當(dāng)分離電壓在11 18 kV時(shí)，隨著分離電壓的升高，三種抗生 素的ECL強(qiáng)度迅速上升，遷移時(shí)間也在逐漸減少。但是當(dāng)分離電壓高于15 kV時(shí)，ECL強(qiáng)度開始下降，分離效率開始降低，15 kV時(shí)樣品分離效率最 高，是實(shí)驗(yàn)的最佳分離電壓。
(5) 進(jìn)樣電壓研究在6 15kV范圍內(nèi)變化時(shí)對(duì)ECL強(qiáng)度的影響。結(jié)果表明， 較高的進(jìn)樣電壓有利于ECL強(qiáng)度的增加，但由于進(jìn)樣量的增加會(huì)導(dǎo)致理論塔板數(shù)的降低，不利于分離檢測(cè)效率的提高。綜合考慮，選取12 kV為進(jìn) 樣電壓。
(6)進(jìn)樣時(shí)間考察了進(jìn)樣時(shí)間在5 15s時(shí)對(duì)分離檢測(cè)的影響。結(jié)果顯示，隨 著進(jìn)樣時(shí)間的增加，ECL強(qiáng)度逐漸增加，但當(dāng)進(jìn)樣時(shí)間超過(guò)IO s時(shí)，ECL 強(qiáng)度增長(zhǎng)緩慢并且偏離線性且有拖尾現(xiàn)象，因此選擇IO s作為進(jìn)樣時(shí)間。 5電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)條件
(1) 檢測(cè)電位本發(fā)明采用三種獸藥抗生素的標(biāo)準(zhǔn)溶液，借助循環(huán)伏安法，在 0.8 1.4V范圍內(nèi)，考察檢測(cè)電位對(duì)樣品電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的影響。由圖1 可以看出，檢測(cè)電位低于0.8V時(shí)，沒(méi)有明顯的電化學(xué)發(fā)光峰信號(hào)；電位 高于l.OV時(shí)，三種抗生素的電化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度均迅速上升，檢測(cè)電位高于 1.2V時(shí)，所有抗生素的電化學(xué)發(fā)光響應(yīng)均不再增加。綜合考慮靈敏度、背 景電流和基線噪聲等影響因素，本方法將最佳檢測(cè)電位選定在1.15V。
(2) 檢測(cè)池中緩沖液pH:調(diào)節(jié)檢測(cè)池中磷酸鹽緩沖液的pH值在6.0 9.0變化，
考察了其對(duì)ECL強(qiáng)度和分離效率的影響。在6.0 8.0范圍內(nèi)，ECL強(qiáng)度 隨pH值增大而升高，分離效率影響不大。而當(dāng)pH大于8.0之后，ECL強(qiáng) 度有所下降。而超過(guò)這一數(shù)值時(shí)，ECL強(qiáng)度減弱，分離效率降低，因此將 緩沖液的pH值選擇在8.0。
(3) 檢測(cè)池中緩沖液濃度在20 60mM范圍內(nèi)改變檢測(cè)池中緩沖液濃度，結(jié) 果發(fā)現(xiàn)隨著PBS濃度的進(jìn)一步增大，ECL強(qiáng)度快速增長(zhǎng)，分離效率增加， 在PBS濃度到達(dá)50mM之后，增長(zhǎng)速度有所減慢，且分離效率開始下降， 不能達(dá)到基線分離。而在PBS濃度為50mM可以獲得最大信噪比，最佳 的分離效率，故選擇ECL池中PBS濃度為50mM。
(4) 電化學(xué)發(fā)光試劑濃度調(diào)節(jié)Ru(bpy)f濃度在1 9mM中變化，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)， 隨著Ru(bpy)f的濃度從lmM 9mM逐漸增大，三種抗生素ECL強(qiáng)度也 隨之快速增加，這是由于高濃度的Ru(bpy),提高了背景噪聲，增加單位 時(shí)間內(nèi)ECL釋放量。綜合ECL強(qiáng)度以及三種抗生素的分離效率，選擇Ru(bpy)32+濃度為7mM。 6納米金制備方法
(1) 在圓底燒瓶中加入95.8mL超純水，再加入4.2mLiy。的氯金酸溶液，磁力 加熱攪拌，持續(xù)煮沸10min。
(2) 加入10mL 1%的檸檬酸三鈉溶液(迅速)，溶液開始有些藍(lán)色，然后變淺 藍(lán)色，再加熱出現(xiàn)紅色。
(3) 等到出現(xiàn)透明的橙紅色，停止加熱，將熱源除去，繼續(xù)攪拌15min。
圖2為所制備納米金透視電鏡(TEM)圖，可以看出納米金形貌為較均一的球
狀，粒徑在15nm左右。 7納米金添加量
研究表明(圖3)隨著納米金添加到體系中，ECL強(qiáng)度明顯增大，并隨著比例 的增加快速增長(zhǎng)，但對(duì)三者的分離效率影響不大，而在達(dá)到與Ru(bpy)^+的體積 比為0.75以后，ECL強(qiáng)度開始快速下降，因此將比例定為0.75。 8分析性能
通過(guò)以上對(duì)CE-ECL條件的考察，確定最佳的檢測(cè)條件為電極電位1.15V， 電動(dòng)進(jìn)樣，分離電壓15kV，進(jìn)樣電壓12kV，進(jìn)樣時(shí)間10s，分離緩沖液為 15mMPBS (pH=7.5)，檢測(cè)池溶液7mM Ru(bpy)32+ 50 mM PBS (pH=8)。在6 分鐘內(nèi)三種抗生素可實(shí)現(xiàn)完全分離。圖4為三種抗生素完全分離的典型CE-ECL 譜圖。
本發(fā)明所建立的毛細(xì)管電泳-電化學(xué)發(fā)光體系能很好的滿足大環(huán)內(nèi)酯類的分 禽檢測(cè)，并通過(guò)將納米金引入到檢測(cè)體系中，提髙了檢測(cè)的分離效率和靈敏度完 成了對(duì)泰樂(lè)菌素、螺旋霉素、交沙霉素分離檢測(cè)，并已成功應(yīng)用于動(dòng)物組織中 藥物殘留的檢測(cè)。


圖l:檢測(cè)電位對(duì)三種抗生素電化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度的影響 圖2:所制備納米金的透射電鏡下形貌圖3:添加到Ru(bpy^+溶液中不同體積比的納米金對(duì)ECL強(qiáng)度的影響 圖4:最優(yōu)條件下泰樂(lè)菌素、螺旋霉素和交沙霉素的典型CE-ECL圖譜。
具體實(shí)施例方式
下面的實(shí)例將具體說(shuō)明本發(fā)明的操作方法，但不能作為對(duì)本發(fā)明的限定。 實(shí)例1動(dòng)物肝臟組織中三種大環(huán)內(nèi)酯類藥物的加標(biāo)回收測(cè)定 1材料 1.1儀器
MPI—B型毛細(xì)管電泳一多參數(shù)化學(xué)分析測(cè)試系統(tǒng)，WH—2微型漩渦混合 儀，HH—4數(shù)顯恒溫水浴鍋，Centrifiige 5804R臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)，TecnaiG220 透射電鏡(TEM)，涂層石英毛細(xì)管內(nèi)徑(ID) 50|am,外徑(OD) 320pm。電 化學(xué)檢測(cè)采用三電極系統(tǒng)工作電極為直徑300|im鉑盤電極，參比電極為 Ag/AgCl電極，輔助電極為鉑電極。
1.2試劑和樣品
聯(lián)吡啶釕(Fluka公司)。泰樂(lè)菌素和交沙霉素標(biāo)準(zhǔn)品(Sigma公司)。螺旋 霉素標(biāo)準(zhǔn)品(德國(guó)D.R.公司)。磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉(中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上?；?學(xué)試劑公司)。納米金實(shí)驗(yàn)制備。
動(dòng)物組織樣品為購(gòu)買自當(dāng)?shù)?個(gè)不同農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)的雞和豬肝臟組織樣品。
1.3標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液
分別精確稱取泰樂(lè)菌素、螺旋霉素和交沙霉素標(biāo)準(zhǔn)品0.1 g用超純水溶解， 充分?jǐn)嚢枞芙夂蠖ㄈ莸?00mL容量瓶中，并根據(jù)需要稀釋成不同的濃度，放入 冰箱，低溫保存，以備待測(cè)時(shí)使用。
1.4動(dòng)物組織樣品處理
分別稱取5g豬肝臟組織樣品，制備勻漿液，置于50mL離心管中，分別加 入系列濃度的所測(cè)定三種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素標(biāo)準(zhǔn)溶液，于振蕩器振蕩混勻。加 入15 mL乙腈，于振蕩器上劇烈振蕩10 min。以4200 r/min的轉(zhuǎn)速離心5 min，取上清液于另一離心管中，加入10mL正己烷，于振蕩器上劇烈振蕩10 min。 以4200 r/min的轉(zhuǎn)速離心10 min，小心吸取中間乙腈層12 mL于另一離心管中， 用氮?dú)庥?5'C水浴中吹至近干。準(zhǔn)確加入l mL稀鹽酸溶解殘?jiān)＝?jīng)過(guò)0.22Mm 濾膜過(guò)濾后，供分析測(cè)定。 2實(shí)驗(yàn)方法
2.1檢測(cè)條件
(1) 電極電位L15V;
(2) 分離緩沖液15 mM pH7.5PBS，檢測(cè)池中，7 mM Ru(bpy)32+配置 于50mM pH8.0PBS;
(3) 進(jìn)樣時(shí)間10 S;
(4) 進(jìn)樣電壓10kV;
(5) 納米金與Ru(bpy)f溶液體積比0.75。 2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線
分別取泰樂(lè)菌素、螺旋霉素、交沙霉素單標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液，用超純水稀釋得到 泰樂(lè)菌素濃度為7xl0—s lxl0—5，螺旋霉素濃度為2xlO—S-5xl(T6，交沙霉素濃度為 5xlO—s lxlO—s的混合系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。在最優(yōu)的條件下進(jìn)行CE-ECL測(cè)定，以增強(qiáng) 發(fā)光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(或回歸方程)。結(jié)果如 表1所示c
表1本發(fā)明方法對(duì)泰樂(lè)菌素、螺旋霉素、交沙霉素的分析參數(shù) 線性范圍(g/mL) 回歸方程 相關(guān)系數(shù)檢測(cè)限(ng/mL)
泰樂(lè)菌素7xl(T8-1 xlCT5 y = 25.7x + 186.67 0.9942 23
螺旋霉素2xl0-s-5xl0-6 y = 323.6x +402.93 0.9961 6
交沙霉素5xl0-8-lxl0-5y= 102.05x +342.330.9954 15
92.3樣品檢測(cè)
按照1.4方法獲得動(dòng)物組織提取液，利用2.1的條件進(jìn)行CE-ECL檢測(cè)，將 得到的增加發(fā)光強(qiáng)度代入相應(yīng)的回歸方程中，通過(guò)計(jì)算得出三種大環(huán)內(nèi)酯抗生 素在豬肝臟組織中的加標(biāo)回收率。
結(jié)果表明(表2),豬肝臟組織中標(biāo)準(zhǔn)泰樂(lè)菌素的回收率在79 83.3%之間， 螺旋霉素的回收率在74 86.4%之間，交沙霉素的回收率在74.5 84.7%之間。 表2豬肝臟組織中所研究三種藥物加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果
添加濃度(嗎/mL) 檢測(cè)到濃度(昭/mL) 回收率(％)
TysSpmJosTysSpmJosTysSpmJ,os
10.005.0010.008.334.328.4783.3086.4084.70
5.002.004.004.061.543.2581.2077.0081.25
2.001.002.001.580.741.4979.0074.0074.50
注Tys，泰樂(lè)菌素；Spm,螺旋霉素；Jos，交沙霉素 3結(jié)果分析
實(shí)例1結(jié)果表明，所建立毛細(xì)管電泳-電化學(xué)發(fā)光法可于用于動(dòng)物肝臟組織 中泰樂(lè)菌素、螺旋霉素、交沙霉素的三種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的同時(shí)檢測(cè)，其結(jié) 果準(zhǔn)確、選擇性好、檢測(cè)數(shù)據(jù)重復(fù)性好,可滿足實(shí)際檢測(cè)的需要。
實(shí)例2雞和豬肝臟組織中所三種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素殘留檢測(cè)
用CE-ECL方法進(jìn)行購(gòu)自4個(gè)不同農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)的雞和豬肝臟組織中所研究三 種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的殘留檢測(cè)，組織液提取方法(省略加入標(biāo)準(zhǔn)溶液步驟)， 毛細(xì)管、電化學(xué)檢測(cè)條件，標(biāo)準(zhǔn)曲線等均參照實(shí)例1所述。檢測(cè)結(jié)果如表3所示。表3不同動(dòng)物組織樣品中三種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素檢出結(jié)果樣品類型樣本號(hào)檢出濃度(嗎/kg)(平均值±SD， "=3)
泰樂(lè)菌素 交沙霉素 螺旋霉素
雞肉組織1 2 3-- _
4-- 124±15
524±22 - -
6460±25- -
7823±37- -
豬肉組織1215±18- -
2242±20- 314士30
3
4-- _
6--
8—— _
實(shí)例2表明所建立毛細(xì)管電泳-電化學(xué)發(fā)光法可于用于動(dòng)物肝臟組織中泰樂(lè) 菌素、螺旋霉素、交沙霉素的殘留檢測(cè)，其結(jié)果準(zhǔn)確、檢測(cè)數(shù)據(jù)重復(fù)性好,可滿 足實(shí)際檢測(cè)的需要。
1權(quán)利要求
1.一種毛細(xì)管電泳-納米金敏化電化學(xué)發(fā)光同時(shí)檢測(cè)泰樂(lè)菌素、交沙霉素和螺旋霉素殘留的方法，其特征在于(1)采用毛細(xì)管電泳對(duì)泰樂(lè)菌素、交沙霉素和螺旋霉素進(jìn)行分離；(2)利用泰樂(lè)菌素、交沙霉素和螺旋霉素能顯著增強(qiáng)Ru(bpy)32+電化學(xué)發(fā)光信號(hào)的現(xiàn)象，進(jìn)行檢測(cè)；(3)將納米金引入檢測(cè)體系，大大提升了分離效果和靈敏度。
2. 如權(quán)利要求1所述一種毛細(xì)管電泳-納米金敏化電化學(xué)發(fā)光同時(shí)檢測(cè)泰樂(lè)菌 素、交沙霉素和螺旋霉素殘留的方法，其特征在于可以同時(shí)對(duì)泰樂(lè)菌素、交 沙霉素和螺旋霉素三種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素殘留進(jìn)行檢測(cè)。
3. 如權(quán)利要求1所述一種毛細(xì)管電泳-納米金敏化電化學(xué)發(fā)光同時(shí)檢測(cè)泰樂(lè)菌 素、交沙霉素和螺旋霉素殘留的方法，其特征在于采用毛細(xì)管電泳-電化學(xué)發(fā) 光聯(lián)用技術(shù)同時(shí)加入納米金作為活性劑。
4. 如權(quán)利要求1所述一種毛細(xì)管電泳-納米金敏化電化學(xué)發(fā)光同時(shí)檢測(cè)泰樂(lè)菌 素、交沙霉素和螺旋霉素殘留的方法，其特征在于最佳毛細(xì)管電泳條件為15 mM磷酸鹽(pH7.5)作為分離緩沖液，電動(dòng)進(jìn)樣，分離電壓15kV，進(jìn)樣電 壓12kV，進(jìn)樣時(shí)間10s，在6分鐘內(nèi)三種抗生素可實(shí)現(xiàn)完全分離。
5. 如權(quán)利要求1所述一種毛細(xì)管電泳-納米金敏化電化學(xué)發(fā)光同時(shí)檢測(cè)泰樂(lè)菌 素、交沙霉素和螺旋霉素殘留的方法，其特征在于最佳電化學(xué)發(fā)光條件為 電極電位1.15V，檢測(cè)池溶液7mMRu(bpy) +50mMPBS (pH=8)。泰樂(lè)菌素 檢出限為23 ng/mL、交沙霉素檢出限為15ng/mL、螺旋霉素檢出限為15 ng/mL。
6. 如權(quán)利要求1所述一種毛細(xì)管電泳-納米金敏化電化學(xué)發(fā)光同時(shí)檢測(cè)泰樂(lè)菌 素、交沙霉素和螺旋霉素殘留的方法，其特征在于納米金添加到體系比例定 為0.75: 1 (v/v)。
全文摘要
本發(fā)明涉及利用毛細(xì)管電泳-納米金敏化電化學(xué)發(fā)光聯(lián)用技術(shù)對(duì)三種大環(huán)內(nèi)酯類藥物(泰樂(lè)菌素、交沙霉素、螺旋霉素)殘留同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)的方法。尤為獨(dú)特的是該方法采用毛細(xì)管電泳-電化學(xué)發(fā)光聯(lián)用技術(shù)，同時(shí)加入納米金作為活性劑大大增強(qiáng)了三種抗生素與Ru(bpy)₃²⁺電化學(xué)發(fā)光體系的信號(hào)強(qiáng)度。在六分鐘內(nèi)三種抗生素完全分離，泰樂(lè)菌素檢出限為23ng/ml、交沙霉素檢出限為15ng/ml、螺旋霉素檢出限為15ng/ml。該發(fā)明不但可以同時(shí)檢測(cè)三種大環(huán)內(nèi)酯類藥物而且線性關(guān)系良好，靈敏度高，重現(xiàn)性好，在檢測(cè)時(shí)間上也具有明顯優(yōu)勢(shì)。
文檔編號(hào)G01N27/48GK101672822SQ20091003533
公開日2010年3月17日 申請(qǐng)日期2009年9月25日 優(yōu)先權(quán)日2009年9月25日
發(fā)明者吳世嘉, 雙 李, 震 楊, 諾 段, 王周平 申請(qǐng)人:江南大學(xué)