專利名稱：多重指向性免疫層析分析的制作方法
多重指向性免疫層析分析
相關(guān)申請案
本申請案主張2005年8月23日申請的美國臨時申請案第60/710,582 號的權(quán)益。上述申請案的整個教示內(nèi)容都并入本文用作參考。
背景技術(shù)：
流體樣本、尤其是體液樣本中細胞和分析物的定量分析通常會為醫(yī)師 和患者提供重要的診斷和治療信息。定量免疫分析是利用抗原(Ag)-抗體 (Ab)反應(yīng)的特異性來檢測和量化樣本中的Ag或Ab。在固相免疫分析中， 將一種試劑(例如，Ag或Ab)附著于固體表面，從而促進已結(jié)合的試劑 或分析物與游離試劑或分析物的分離。將固相暴露于含有與Ag或Ab結(jié)合 的分析物的樣本；量化此結(jié)合的程度以便測量樣本中的分析物濃度。然而， 將結(jié)合事件轉(zhuǎn)換成可測量信號受到多種因素限制，其中包括由顆粒在固相 上移動的限制，這會影響定量免疫分析的特異性和適用性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及使用固相分析法(例如，夾心免疫分析或抑制免疫分析) 測量流體樣本中所關(guān)注分析物的量的方法，其中將所關(guān)注分析物和捕捉劑 用作特異性結(jié)合對的部分；還涉及用于所述方法的套組。
在本發(fā)明的方法中，提供一種固相裝置，其包括具有施加點、 一個或 一個以上樣本捕捉區(qū)(一個與各所關(guān)注分析物對應(yīng))和控制捕捉區(qū)的膜； 所述樣本捕捉區(qū)和所述控制捕捉區(qū)與所述施加點大致等距(例如，彼此平 行或放射狀分散)。樣本捕捉劑(例如，與所關(guān)注分析物結(jié)合的試劑，諸如 所關(guān)注分析物的抗體)被吸附于各所關(guān)注分析物的樣本捕捉區(qū)。控制捕捉 劑(例如，與分析物結(jié)合性顆粒結(jié)合的試劑，諸如抗免疫球蛋白抗體)被 吸附于控制捕捉區(qū)。還提供一種樣本收集裝置，其含有以穩(wěn)定形式儲存的 顆粒群，諸如脂質(zhì)體、膠體金或有機聚合物乳膠粒子。
在本發(fā)明的夾心免疫分析中，所述顆粒為涂有針對所關(guān)注分析物的結(jié) 合劑(例如，抗體)或者涂有針對多種所關(guān)注分析物的結(jié)合劑的分析物結(jié) 合性顆粒；或者，利用各自涂有針對一種所關(guān)注分析物的結(jié)合劑的不同分 析物結(jié)合性顆粒群。在竟爭分析或抑制分析中，顆粒為涂有所關(guān)注分析物 或者涂有多種所關(guān)注分析物的"分析物涂覆，，顆粒；或者，利用各自涂有一種 所關(guān)注分析物的不同分析物涂覆顆粒群。在任一類分析中，都可使用比色 標記、熒光標記、發(fā)光標記、化學(xué)發(fā)光標記或其它適當(dāng)標記來對顆粒做標記以便于檢測。
在所述方法的 一個具體態(tài)樣中，將待評定一種或 一種以上分析物的流 體樣本引入樣本收集裝置中，并且隨后將緩沖液引入混合流體樣本中。在 所述方法的另一個具體態(tài)樣中，將緩沖液引入樣本收集裝置中，并且隨后 引入待評定所關(guān)注分析物的流體樣本。在所述方法的第三個具體態(tài)樣中， 通過將固體引入緩沖液中來形成流體樣本，并且隨后將流體樣本引入樣本 收集裝置中。在這些具體態(tài)樣的任一具體態(tài)樣中，都產(chǎn)生含有所述顆粒的 緩沖混合流體樣本。
在夾心分析中，樣本中的所關(guān)注分析物與分析物結(jié)合性顆粒之間存在 相互作用，從而在混合流體樣本內(nèi)產(chǎn)生接觸的分析物結(jié)合性顆粒。將緩沖 混合流體樣本施加到固相裝置中膜的施加點上。隨后將固相裝置維持在一 定條件下以能使流體通過毛細作用將顆粒輸送到并通過樣本捕捉區(qū)，并且 同時輸送到并通過控制捕捉區(qū)。樣本捕捉劑與接觸的分析物結(jié)合性顆粒相 互作用，從而將顆粒阻滯在樣本捕捉區(qū)中。
流體的毛細作用還不僅使接觸的分析物結(jié)合性顆粒移動到并通過樣本 捕捉區(qū)，而且同時也使其移動到并通過控制捕捉區(qū)，在所述控制捕捉區(qū)中， 所述顆粒將與控制捕捉劑結(jié)合。流體的毛細作用繼續(xù)使剩余未結(jié)合的顆粒 移動通過樣本捕捉區(qū)和控制捕捉區(qū)(例如，進入芯吸墊中)。然后測定被阻 滯在各樣本捕捉區(qū)和控制捕捉區(qū)中的分析物結(jié)合性顆粒的量。
接著測定流體樣本中所關(guān)注分析物的量。舉例來i兌，流體樣本中所關(guān) 注分析物的量可以1 )被阻滯在與所述所關(guān)注分析物對應(yīng)的樣本捕捉區(qū)中的 分析物結(jié)合性顆粒的量與2 )控制捕捉區(qū)中分析物結(jié)合性顆粒的量的比率測 定。或者，流體樣本中所關(guān)注分析物的量可以l)被阻滯在與所述所關(guān)注分 析物對應(yīng)的樣本捕捉區(qū)中的分析物結(jié)合性顆粒的量與2 )控制捕捉區(qū)中分析 物結(jié)合性顆粒的量和被阻滯在所述所關(guān)注分析物的樣本捕捉區(qū)中的分析物 結(jié)合性顆粒的量的總和的比率測定。
在竟爭或抑制型分析中，將緩沖混合流體樣本施加于固相裝置中膜的 施加點上。隨后將固相裝置維持在一定條件下以能使流體通過毛細作用將 分析物涂覆顆粒輸送到并通過控制捕捉區(qū)(所述顆粒將在其中結(jié)合控制捕 捉劑)并且同時輸送到并通過樣本捕捉區(qū)。樣本捕捉劑與分析物涂覆顆粒
相互作用；樣本捕捉劑和分析物涂覆顆粒之間的相互作用將使分析物涂覆
顆粒被阻滯在樣本捕捉區(qū)中。由于分析物涂覆顆粒和樣本中的分析物(如
果存在)竟爭結(jié)合樣本捕捉區(qū)中樣本捕捉劑上的結(jié)合位點，因此被阻滯在 樣本捕捉區(qū)中的分析物涂覆顆粒的量與樣本中分析物的量成反比。流體的 毛細作用繼續(xù)使剩余未結(jié)合的顆粒移動通過樣本捕捉區(qū)和控制捕捉區(qū)(例 如，進入芯吸墊中)。然后測定被阻滯在樣本捕捉區(qū)和控制捕捉區(qū)中的分析物涂覆顆粒的量。
接著測定流體樣本中所關(guān)注分析物的量。舉例來說，流體樣本中所關(guān) 注分析物的量與1 )被阻滯在與所述所關(guān)注分析物對應(yīng)的樣本捕捉區(qū)中的分 析物涂覆顆粒的量與2 )控制捕捉區(qū)中分析物涂覆顆粒的量的比率成反比關(guān) 系?；蛘撸黧w樣本中所關(guān)注分析物的量與l)被阻滯在與所述所關(guān)注分析 物對應(yīng)的樣本捕捉區(qū)中的分析物涂覆顆粒的量與2 )控制捕捉區(qū)中分析物涂 覆顆粒的量和被阻滯在樣本捕捉區(qū)中的分析物涂覆顆粒的量的總和的比率 成反比關(guān)系。


圖1描述固相裝置上樣本捕捉區(qū)和/或控制捕捉區(qū)的平行布置。
圖2描述固相裝置上樣本捕捉區(qū)和/或控制捕捉區(qū)的放射狀布置。
具體實施例方式
本發(fā)明涉及使用分析、尤其是定量免疫層析分析定量測量一種或一種 以上所關(guān)注分析物的量的方法，和用于所述方法的套組。
如本文所使用，分析是指分析樣本以確定一種或一種以上分析物的存 在、不存在或數(shù)量的活體外(/wv/Zra)程序。本發(fā)明的分析利用至少一種所 關(guān)注分析物和分析物結(jié)合劑。各所關(guān)注分析物和其分析物結(jié)合劑為特異性 結(jié)合對的成員，其中所述結(jié)合對的第一成員(例如分析物)與第二成員(例 如，結(jié)合劑)特異性反應(yīng)。結(jié)合對的一個或兩個成員可為抗體。舉例來說， 結(jié)合對的第一成員(例如，所關(guān)注分析物)可為抗體，而結(jié)合對的第二成 員(例如，結(jié)合劑)可為抗免疫球蛋白抗體；或者，結(jié)合對的第一成員(例 如，分析物)可為抗原，而結(jié)合對的第二成員(例如，結(jié)合劑)可為抗體。
在一個具體態(tài)樣中，所述分析是利用抗體作為所述程序的一個組分的
免疫分析。在一優(yōu)選具體態(tài)樣中，免疫分析為夾心分析，是針對分析物的 測試，其中使待評定分析物的存在或不存在或數(shù)量的流體樣本與涂有分析 物結(jié)合劑(諸如，針對分析物的抗體)的顆粒接觸，并且將所得混合物施 加于膜上，且隨后通過毛細作用使其移動通過膜。檢測到分析物與膜捕捉 區(qū)中分析物結(jié)合劑涂覆顆粒之間的相互作用時，指示陽性結(jié)果，捕捉區(qū)中 分析物結(jié)合劑涂覆顆粒的量與流體樣本中分析物的量相關(guān)。在另 一優(yōu)選具 體態(tài)樣中，免疫分析為抑制或竟爭分析，是針對分析物的測試，其中使待 評定分析物的存在或不存在或數(shù)量的流體樣本與涂有分析物的顆粒接觸， 并且將所得混合物施加于膜上，且隨后通過毛細作用使系統(tǒng)移動通過膜。 檢測到分析物結(jié)合劑與膜捕捉區(qū)中分析物涂覆顆粒之間的相互作用時，指 示陽性結(jié)果，捕捉區(qū)中分析物涂覆顆粒的量與流體樣本中分析物的量成反比關(guān)系。
在本發(fā)明分析的其它具體態(tài)樣中，分析物與結(jié)合劑都不為抗體例如， 結(jié)合對的第一成員可為配體，而結(jié)合對的第二成員可為受體；或者，結(jié)合 對的第一成員可為凝集素，而結(jié)合對的第二成員可為糖。在另一具體態(tài)樣 中，結(jié)合對的第一成員可為核酸(例如，DNA、 RNA)，而結(jié)合對的第二成 員可為與所述結(jié)合對的第一成員特異性雜交的核酸。如本文所使用，特異
性雜交是指第一核酸能夠與第二核酸雜交，但不與第二核酸以外的任何核 酸雜交(例如，當(dāng)?shù)谝缓怂崤c第二核酸具有比其與進行雜交的樣本中的任 何其它核酸高的相似性時)。雜交的"嚴格條件"是所屬領(lǐng)域的術(shù)語，是指能 使特定核酸與第二核酸雜交的培養(yǎng)和洗滌條件，例如溫度和緩沖液濃度條 件；所述第一核酸可與第二核酸完全(即，100%)互補，或者所述第一核 酸與第二核酸可共有某種程度的、低于完全互補的互補性(例如，70%、 75%、 80%、 85%、 90%、 95%)。舉例來說，可使用使完全互補核酸與具有較低互 補性的核酸相區(qū)別的某些高嚴格度條件。核酸雜交的"高嚴格度條件"、"中 等嚴格度條件"和"4氐嚴才各度條件"在Cwre"Z Pratoco/s Afo/ecw/ar歷o/ogy (Ausubel, F.M.等人，〃CwrewZ /Vo/oco/s /" TV/o/ecw/ar John Wiley &
Sons, (1998),所述文獻的整個教示內(nèi)容都并入本文用作參考)中第 2.10.1-2.10.16頁和第6.3.1-6.3.6頁中有說明。決定雜交嚴格度的確切條件 不僅取決于離子強度(例如，0.2xSSC、 O.lxSSC)、溫度(例如，室溫、42°C、 68°C)和去穩(wěn)定劑(諸如，曱酰胺)或變性劑(諸如，SDS)的濃度，而且 還取決于以下因素諸如，核酸序列的長度、堿基組成、雜交序列之間的 錯配百分比和其它不一致序列內(nèi)所述序列的亞群出現(xiàn)的頻率。因此，可通 過改變一個或一個以上所述參數(shù)且同時保持兩個核酸分子之間的一致性或 相似性的程度來確定相當(dāng)?shù)臈l件。
不管分析物和結(jié)合劑的組成如何，這兩個組分都將形成特異性結(jié)合對， 其中第一成員將與第二成員特異性反應(yīng)。結(jié)合對成員之間的特異性相互作 用表明，結(jié)合對的第一成員優(yōu)先結(jié)合所述結(jié)合對的第二成員或者以其它方 式與所述結(jié)合對的第二成員相互作用，優(yōu)選排除與分析中的另 一化合物的 任何結(jié)合。
如本文所使用，用語分析物或所關(guān)注分析物是指如上所述的結(jié)合對的 第一成員。分析物為將測量數(shù)量的分子或化合物。分析物可為固體形式， 諸如干物質(zhì)(例如，粉末、微粒、孢子或其它顆粒)，或可為流體形式(例 如，已溶解或懸浮于流體中的如上所述的固體；或其它液體樣本)。分析物 的實例包括孢子、蛋白質(zhì)(諸如激素或酶)、糖蛋白、肽、小分子、多糖、 抗體、核酸、藥物、毒素(例如，環(huán)境毒素)、病毒或病毒粒子、細胞壁部 分，和其它化合物。在一優(yōu)選具體態(tài)樣中，分析物具有"免疫原性"，表明可產(chǎn)生針對分析物或針對與載體結(jié)合的分析物(例如，半抗原-載體連結(jié)物， 為此，可產(chǎn)生針對所述半抗原的抗體)的抗體(如下所述)。在一些代表性
具體態(tài)樣中，所關(guān)注分析物可為肌紅蛋白(myoglobin )、 CK-MB、肌鈣蛋 白I (troponin 1)、 PSA、地高辛(digoxin)、茶堿(theophylline )、激素(例 如，T-3或T-4)、濫用藥物(LSD、 THC、巴比妥類(barbituate)等)或炭 疽芽胞桿菌(Sac/〃w朋Arac^ )(炭疽(anthrax))的孢子。所關(guān)注分析物 可為液體樣本；或者，所關(guān)注分析物可為干(非流體)樣本(例如固體， 諸如微粒樣本、粉末樣本或土壤樣本)。如果需評估一種以上所關(guān)注分析物， 那么各所關(guān)注分析物為如上所述的結(jié)合對的第一成員，即，各所關(guān)注分析 物與結(jié)合對的第二成員特異性反應(yīng)。
在本發(fā)明的方法中，評定流體樣本中 一種或一種以上所關(guān)注分析物的 存在或不存在，或數(shù)量。流體可為潤濕膜材料；支持各所需反應(yīng)物與其分 析物結(jié)合劑之間的反應(yīng)(諸如抗體/抗原反應(yīng))(即，不干擾抗體/抗原相互 作用)；和粘度足夠低能使流體通過毛細作用移動的的流體。在優(yōu)選具體態(tài) 樣中，流體為水性溶液(諸如，體液)；含有所關(guān)注分析物的流體溶液；或 者，流體樣本可為具有許多組分的流體，諸如復(fù)雜環(huán)境樣本(例如，污水、 廢水、地下水或其它水樣本)或復(fù)雜生物流體(例如，全血、血漿、血清、 尿液、腦脊髓液、唾液、精液、玻璃體液、滑液或其它生物流體)。在流體 為生物流體的優(yōu)選具體態(tài)樣中，流體為全血、血漿或血清。需要時，可稀
釋流體樣本；例如，如果將復(fù)雜生物樣本用作流體樣本，那么可用溶液(例
如，水溶液)將其稀釋。
如果所關(guān)注分析物不是呈溶液狀態(tài)(例如，所關(guān)注分析物為如上所述 的干樣本或固體樣本形式)，那么可首先將其提取、懸浮或溶解于流體樣本 中。舉例來說，如果所關(guān)注分析物為核酸，那么可將其從所需細胞提取到
溶液(例如，水溶液，諸如下文所述的緩沖液)中；在另一實例中，如果 所關(guān)注分析物為粉末或微粒材料(例如，粉末、微粒、土壤樣本或孢子)， 那么可(諸如)通過獲得所述干材料的樣本(例如，使用藥簽或其它工具) 并將所述干材料樣本放入溶液(例如，水溶液，諸如下文所述的緩沖液) 中，來將其懸浮或溶解于所述溶液中。因此，流體樣本不僅可以指待評定 所關(guān)注分析物的液體樣本，而且還可以指提取、懸浮或溶解固體材料(待 評定所關(guān)注分析物)的流體樣本。
如本文所使用，分析物結(jié)合劑是指如上所述的結(jié)合對的第二成員。各 分析物結(jié)合劑為與所關(guān)注分析物(結(jié)合對的第一成員)特異性結(jié)合的化合 物，諸如抗體、半抗原或藥物連結(jié)物、受體或另一結(jié)合配對物。在優(yōu)選具 體態(tài)樣中，分析物結(jié)合劑為針對所關(guān)注分析物的抗體。
夾心分析本發(fā)明的夾心分析利用固相裝置。固相裝置包括具有施加點、 一個或 一個以上樣本捕捉區(qū)、和控制捕捉區(qū)的膜。固相裝置可視情況包括在控制 捕捉區(qū)之后的芯吸墊和鄰近或覆蓋施加點的施加墊。所述膜可以是由具有
以下特征的物質(zhì)制成足夠多孔以能使流體沿其表面和在其內(nèi)部產(chǎn)生毛細 作用；通過毛細作用使涂覆顆粒(例如，分析物結(jié)合性顆粒，如下所述) 或顆粒與所關(guān)注分析物的復(fù)合物(例如，接觸的分析物結(jié)合性顆粒，如下 所述)移動的能力(即，其不能阻斷顆?；蝾w粒與所關(guān)注分析物的復(fù)合物); 和被含有分析物的流體潤濕的能力(例如，水性流體的親水性、有機溶劑 的疏水性)?？赏ㄟ^(諸如)美國專利第4,340,482號或美國專利第4,618,533 號中所述的方法來改變膜的疏水性以使膜具有適用于水性流體的親水性， 所述專利中描述將疏水性表面轉(zhuǎn)變成親水性表面。膜物質(zhì)的實例包括纖 維素、硝酸纖維素、乙酸纖維素、玻璃纖維、尼龍(nylon)、聚電解質(zhì)離子 交換膜、丙烯酸共聚物/尼龍和聚醚砜。在優(yōu)選具體態(tài)樣中，所述膜是由硝 酸纖維素制成(例如，具有聚酯薄膜背襯(Mylar backing )的硝酸纖維素膜)。
施加點(或施加區(qū))為所述膜上可施加流體的位置。也可視情況使用 施加墊；施加墊位于膜上與施加點緊密相鄰或;f隻蓋施加點。施加墊可以是 由可將施加于所述墊的流體樣本傳送到膜施加點的吸收性物質(zhì)制成。代表 性物質(zhì)包括纖維素、硝酸纖維素、乙酸纖維素、尼龍、聚電解質(zhì)離子交換 膜、丙烯酸共聚物/尼龍、聚醚砜或玻璃纖維。在一個具體態(tài)樣中，所述墊 為Hemasep -V墊(Pall Corporation )。在另一具體態(tài)樣中，所述墊為玻璃 纖維墊。如果存在芯吸塾，那么其可同樣由這種吸收性物質(zhì)制成。
樣本捕捉區(qū)是指膜上吸附有(例如，涂覆在膜上和/或滲透到膜內(nèi))樣
本捕捉劑的點。如本文所使用，術(shù)語"吸附"表示通過非共價相互作用固定或 粘附試劑，這與使用化學(xué)方式產(chǎn)生兩個連接分子之間共用電子的不可逆化 學(xué)鍵的共價鍵聯(lián)有所不同。吸附到膜上的試劑可能進一步移動，但這對本 發(fā)明分析的影響微不足道。
對于特定所關(guān)注分析物來說，樣本捕捉劑為分析物結(jié)合劑，諸如上文 所述的結(jié)合劑。樣本捕捉劑無需為與下文關(guān)于顆粒上的分析物結(jié)合劑所述 相同的分析物結(jié)合劑；然而，各樣本捕捉劑也因其特異性且優(yōu)先結(jié)合其所 關(guān)注分析物而與其所關(guān)注分析物形成結(jié)合對。在優(yōu)選具體態(tài)樣中，樣本捕 捉劑為針對其所關(guān)注分析物的抗體，其可針對與結(jié)合用作涂覆于顆粒上的 分析物結(jié)合劑的抗體的表位相同的分析物表位，或針對與結(jié)合用作涂覆于 顆粒上的分析物結(jié)合劑的抗體的表位不同的分析物表位。如果存在一種以 上所關(guān)注分析物，那么將相應(yīng)地存在一個以上樣本捕"t足區(qū)，即一個樣本捕 捉區(qū)對應(yīng)一種所關(guān)注分析物。各樣本捕捉區(qū)具有吸附于其上的樣本捕捉劑， 其中所述樣本捕捉劑為針對其特定(相應(yīng))所關(guān)注分析物的分析物結(jié)合劑。所述裝置另外包括吸附于控制捕捉區(qū)中的控制捕捉劑?？刂撇蹲絼?br> 與分析物結(jié)合性顆粒反應(yīng)但不與待測量的任何分析物相互作用的試劑例
如，所述控制捕捉劑可與分析物結(jié)合劑涂覆顆粒上的分析物結(jié)合劑、所述 顆粒上的另一材料或所述顆粒本身反應(yīng)。舉例來說，如果分析物結(jié)合劑為 抗體，那么控制捕捉劑可為抗免疫球蛋白抗體。在優(yōu)選具體態(tài)樣中，各分 析物結(jié)合劑為抗體，并且控制捕捉劑為抗免疫球蛋白抗體。控制捕捉劑被 吸附于控制捕捉區(qū)中的膜上(涂覆在膜上和/或滲透到膜內(nèi))。
定位控制捕捉區(qū)和樣本捕捉區(qū)，使其與施加點大致等距。舉例來說，
在本發(fā)明的代表性具體態(tài)樣中，如果施加點長約5毫米并且捕捉區(qū)長約1-2 毫米，那么施加點到樣本捕捉區(qū)的距離可為約20-50毫米，優(yōu)選為約25-40 毫米，甚至更優(yōu)選為30-40毫米；并且施加點中心到樣本捕捉區(qū)中心的距離 和施加點中心到控制捕捉區(qū)中心的距離大致等距。在一個具體態(tài)樣中，所 述距離變動5毫米或更少，并且甚至更優(yōu)選變動1毫米或更少例如，如 果施加點中心到控制捕捉區(qū)中心的距離為35毫米，那么施加點中心到各樣 本捕捉區(qū)中心的距離將在35毫米±5毫米以內(nèi)，也就是說，在30到40毫米 的范圍內(nèi)；并且更優(yōu)選在35毫米士1毫米以內(nèi)，也就是說在34到36毫米的 范圍內(nèi)。在特定具體態(tài)樣中，"大致等距"表示使用標準制造設(shè)備測量時，距 離盡可能接近例如，如果制造設(shè)備的分辨度為毫米，那么大致等距將在l 毫米以內(nèi)?；蛘?，在另一特定具體態(tài)樣中，大致等距的分辨度可與施加點 中心到樣本捕捉中心的距離(路徑長度)相關(guān)例如，施加點中心到樣本 捕捉區(qū)中心的距離和施加點中心到控制捕捉區(qū)中心的距離之間的差異在施 加點中心到樣本捕捉區(qū)中心的距離的長度(路徑長度)的10%以內(nèi)、優(yōu)選 在7%以內(nèi)、優(yōu)選在5%以內(nèi)、更優(yōu)選在4%以內(nèi)、更優(yōu)選在3%以內(nèi)、甚至 更優(yōu)選在2%以內(nèi)并且甚至更優(yōu)選在1%以內(nèi)。
在某些具體態(tài)樣中，控制捕捉區(qū)和樣本捕捉區(qū)呈放射狀分散在施加點 周圍(例如參看圖2);在其它具體態(tài)樣中，控制捕捉區(qū)和樣本捕捉區(qū)彼此 相鄰并且沿流體通過毛細作用流動的方向平行定位(例如參看圖1)。因此， 各樣本捕捉區(qū)和控制捕捉區(qū)與中心點的距離大致相等(例如，在放射狀布 置的情況下)，或各樣本捕捉區(qū)與控制捕捉區(qū)的距離大致相等(例如，在平 行布置的情況下)。應(yīng)注意，施加點到各樣本捕捉區(qū)和施加點到控制捕捉區(qū) 的毛細3各徑并不交叉也就是說，從施加點到各捕捉區(qū)的流體流動路徑不 同并且不穿過任何其它流體流動路徑。
此外，在優(yōu)選具體態(tài)樣中，樣本捕捉區(qū)和控制捕捉區(qū)與施加點分開足 夠大距離，以便將毛管鋒的速度延緩到足夠低的速率從而能夠使毛管鋒到 達樣本捕捉區(qū)時捕捉顆粒。此外，所述距離必須足夠大，以使總遷移(毛 管鋒移動通過整個膜)時間足夠長，從而能夠使流體樣本中的游離分析物與分析物結(jié)合性顆粒結(jié)合。膜上各組件之間的最佳距離可使用常規(guī)實驗確 定并加以調(diào)整。
另外，定量分析還使用樣本收集裝置。如本文所使用，樣本收集裝置 是指可用于收集流體樣本或者可沉積或儲存所收集的流體樣本的裝置。樣 本收集裝置可為可含有如下所述的分析物結(jié)合性顆粒并且可加入測量體積 的流體樣本的任何裝置。代表性樣本收集裝置包括樣本管、試管、小瓶、 吸量管或吸量管吸頭，或注射器。在優(yōu)選具體態(tài)樣中，樣本收集裝置為吸 量管或吸量管吸頭。
在一種所關(guān)注分析物的情況下，樣本收集裝置含有涂有分析物結(jié)合劑 的分析物結(jié)合性顆粒群。如果存在一種以上所關(guān)注分析物，那么分析物結(jié)
合性顆粒上涂有針對各所關(guān)注分析物的分析物結(jié)合劑例如，針對第一所 關(guān)注分析物的第 一分析物結(jié)合劑；針對第二所關(guān)注分析物的第二分析物結(jié) 合劑，等；使得存在與各所關(guān)注分析物對應(yīng)的分析物結(jié)合劑?；蛘?，樣本 收集裝置可含有針對各分析物結(jié)合劑的分析物結(jié)合性顆粒群，也就是說， 針對第 一所關(guān)注分析物的分析物結(jié)合性顆粒群、針對第二所關(guān)注分析物的 分析物結(jié)合性顆粒群，等；使得存在與各所關(guān)注分析物對應(yīng)的分析物結(jié)合 性顆粒群。顆粒群的規(guī)模視顆粒的尺寸和組成、固相裝置中膜的組成和分 析的靈敏程度而變化。所述顆粒群通常在約lxi()S與lxi(^之間的范圍內(nèi)， 但也可視需要使用較少或較多的顆粒。在優(yōu)選具體態(tài)樣中，顆粒群為約 2xl()S個顆粒。如果評定一種以上所關(guān)注分析物，那么相應(yīng)地可視需要增加 顆粒群(例如，如果評定三種所關(guān)注分析物，那么可將顆粒數(shù)增到三倍)。 分析物結(jié)合性顆粒為可涂覆上各所關(guān)注分析物的分析物結(jié)合劑(結(jié)合對的 第二成員)的顆粒。在優(yōu)選具體態(tài)樣中，分析物結(jié)合性顆粒為脂質(zhì)體、膠 體金、有機聚合物乳膠顆粒、無機熒光顆粒或磷光顆粒。在特別優(yōu)選具體 態(tài)樣中，所述顆粒為聚苯乙烯乳膠珠粒，并且最特別地，為在不存在表面 活性劑的情況下制備的聚苯乙烯乳膠珠粒，諸如不含表面活性劑的 Superactive Uniform Aldehyde/Sulfate Latexes (Interfacial Dynamics Corp., Portland, OR )。
顆粒的尺寸與膜的多孔性相關(guān)(對于流體樣本中的分析物)，也與所關(guān) 注分析物的尺寸相關(guān)(例如，對于微粒分析物)所述顆粒必須足夠小以通 過流體的毛細作用沿膜輸送，而且(對于固體，例如微粒分析物)如下所 述的接觸的分析物結(jié)合性顆粒的復(fù)合物必須足夠小以通過毛細作用沿膜輸 送?？蓪︻w粒進行標記以便于檢測?？赏ㄟ^不顯著影響顆粒的物理特性的 方式對顆粒進行標記；例如在內(nèi)部對顆粒進行標記(也就是說，標記包括 在顆粒內(nèi)，諸如在脂質(zhì)體內(nèi)或在聚苯乙烯乳膠珠粒內(nèi)部)。
代表性標記包括發(fā)光標記、化學(xué)發(fā)光標記、磷光標記、酶連接標記、化學(xué)標記(諸如電活性劑，例如亞鐵氰化物)和比色標記(諸如染料或熒 光標記)。在一個具體態(tài)樣中，使用熒光標記。在另一個具體態(tài)樣中，使用
磷光標記，尤其是"上轉(zhuǎn)換(up-converting)，，磷光顆粒，諸如美國專利第 5,043,265號中所述的顆粒。
所述顆粒上涂有分析物結(jié)合劑，分析物結(jié)合劑是針對各所關(guān)注分析物 的結(jié)合對的第二成員(例如，涂有一種以上分析物結(jié)合劑的顆粒；或不同 的顆粒群，各顆粒群上涂有針對其分析物的一種分析物結(jié)合劑)。如上所述， 分析物結(jié)合劑(結(jié)合對的第二成員)特異性且優(yōu)先與其所關(guān)注分析物(結(jié) 合對的第一成員)結(jié)合。代表性分析物結(jié)合劑包括抗體(或其片段)、半抗 原、藥物連結(jié)物、受體或其它結(jié)合配對物。在一個優(yōu)選具體態(tài)樣中，分析 物結(jié)合劑為針對所關(guān)注分析物的抗體?？贵w可為單克隆抗體或多克隆抗體。 如本文所使用，術(shù)語"抗體"還指足以與所關(guān)注分析物結(jié)合的抗體片段。另夕卜， 在另一具體態(tài)樣中，也可使用與所關(guān)注分析物特異性結(jié)合的分子，諸如具 有分析物結(jié)合位點的工程設(shè)計蛋白質(zhì)(Holliger， P,和H. R. Hoogenbloom, 7>*eM<is 歷她c/ wo/ogy 13:7 9 (1995); Chamow, S. M.和A. Ashkenazi, 7>e"(^ /"^o&c/z"o/ogy 14:52 60:1996 )。在另一具體態(tài)樣中，如果所關(guān)注分析物為 藥物，那么可將半抗原或其它藥物連結(jié)物用作分析物結(jié)合劑。或者，在另 一具體態(tài)樣中，可使用與分析物結(jié)合的受體(例如，如果所關(guān)注分析物為 配體)。如果分析物為具有已知特異性的抗體，那么可將顆粒上涂覆針對分 析物抗體的抗原，或者可涂覆分析物抗體的抗體。此外，由于分析物和分 析物結(jié)合劑形成結(jié)合對，故描述為代表性分析物的化合物或分子也可用作
用作如本文所述的分析物:' ' 5'5 '
樣本收集裝置內(nèi)所含有的分析物結(jié)合性顆粒是以穩(wěn)定形式儲存于樣本 收集裝置內(nèi)。如本文所使用，術(shù)語"穩(wěn)定形式"表示顆粒在儲存期間不顯著改 變化學(xué)組成或物理狀態(tài)的形式。穩(wěn)定形式可為液體、凝膠或固體形式。在 優(yōu)選具體態(tài)樣中，樣本收集裝置內(nèi)所含有的分析物結(jié)合性顆粒是經(jīng)蒸發(fā)干 燥、冷凍干燥和/或真空干燥。
在特別優(yōu)選具體態(tài)樣中，樣本收集裝置為吸量管吸頭，其中是真空干 燥的分析物結(jié)合性顆粒。
為進行所述分析，使用如上所述的待評定所關(guān)注分析物的存在的流體 樣本。在一個具體態(tài)樣中，將流體樣本引入(抽吸入、倒入或以其它方式 放入)樣本收集裝置中。舉例來說，在一個具體態(tài)樣中，將流體樣本抽吸 到包含吸量管吸頭的樣本收集裝置中。將流體樣本引入樣本收集裝置中將 使流體樣本與分析物結(jié)合性顆?；旌希瑥亩纬?混合流體樣本"。如果分析 物結(jié)合性顆粒是經(jīng)蒸發(fā)干燥、冷凍干燥或真空干燥，那么將流體樣本引入樣本收集裝置中可使分析物結(jié)合性顆粒在流體樣本中再水合和懸浮。也將 緩沖液(例如，對于稀釋)引入混合流體樣本中，形成"緩沖混合流體樣本"。 可通過將混合流體樣本分配到含有緩沖液的"緩沖液容器"(例如，試管)中 或者通過在引入流體樣本之前將緩沖液引入樣本收集裝置中來形成緩沖混 合流體樣本?；蛘?，如果所關(guān)注分析物為固體(例如，粉末、微粒、孢子 或其它顆粒，如上所述)，那么可通過將固體引入緩沖液容器中來制備如上 所述的流體樣本；在本具體態(tài)樣中，緩沖混合流體樣本是通過將流體樣本 (包含緩沖液)引入樣本收集裝置中來形成。在另一具體態(tài)樣中，將緩沖液 引入樣本收集裝置中，隨后將流體樣本引入樣本收集裝置中。
緩沖液可為支持所需反應(yīng)物與分析物結(jié)合劑之間的反應(yīng)(例如，不干
擾抗體/抗原相互作用)；并且粘度足夠低從而能使流體通過毛細作用移動的 水性流體。在一個具體態(tài)樣中，緩沖液含有以下一種或一種以上組分緩 沖劑(例如，磷酸鹽)、鹽(例如，NaCl)、蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑(例如，BSA、 干酪素(casein )、血清)和/或去污劑(諸如，非離子去污劑)或表面活性 劑(例如，通?？梢员砻婊钚詣┕ぞ咛捉M形式獲得的以下一種或一種以上 試劑NINATE411、 ZonylFSNlOO、 Aerosol OT 100%、 GEROPONT77、 BIO TERGE AS 40、 STANDAPOL ES 1、 Tetronic 1307、 Surfnyol 465、 Surfyno1.485、 Surfynol 104PG 50、 IGEPALCA210、 TRITON X 45、 TRITON X100、 TRITON X305、 SILWETL7600、 RHODASURF ON 870、 Cremophor EL、 TWEEN20、 TWEEN 80、 BRIJ 35、 CHEMAL LA 9、 Pluronic L64、 SURFACTANT 10 G、 SPAN 60、 CREL )。視情況，需要時，緩沖液可含有 增稠劑。緩沖液的所述組分可為市售。例如，代表性緩沖液包括生理鹽水 或50 mM Tris HC1 (pH 7.2 )?；蛘?，可用水代替緩沖溶液；如本文所使用， 術(shù)語"緩沖液"是指緩沖溶液或水。
為使分析物結(jié)合性顆粒進一步分散到流體樣本中，需要時，可攪動(例 如，渦旋、振動、上下吸取等)已引入流體樣本和緩沖液的樣本收集裝置 或者已引入混合流體樣本的緩沖液容器。
在優(yōu)選具體態(tài)樣中，樣本收集裝置包含在尖部具有真空干燥的分析物 結(jié)合性顆粒的吸量管吸頭；將流體樣本抽吸到吸量管中，借此使干燥的分 析物結(jié)合性顆粒再水合并且形成混合流體樣本。在特別優(yōu)選的具體態(tài)樣中， 將混合流體樣本引入緩沖液容器中，產(chǎn)生緩沖混合流體樣本；使用羊本收 集裝置上下吸取緩沖混合流體樣本，借此使分析物結(jié)合性顆粒進一步分散。 如果緩沖混合流體樣本中存在所關(guān)注分析物，那么分析物與其分析物結(jié)合 性顆粒之間發(fā)生結(jié)合。分析物與分析物結(jié)合性顆粒的"結(jié)合"表明，涂覆于顆 粒上的分析物結(jié)合劑與其所關(guān)注分析物相互作用(例如，結(jié)合)。本文中將 被維持(培養(yǎng))在能使流體中的分析物(如果存在)與吸附于接觸區(qū)中的劑結(jié)合的;析物，這取決于流體樣本中是^存在i;關(guān)注分^物以及分析
性顆粒上存在多個分析物結(jié)合位點，因此與分析物結(jié)合性顆粒結(jié)合的分析 物的存在和濃度會變化；與分析物結(jié)合性顆粒結(jié)合的分析物的濃度隨流體 樣本中存在的分析物量成比例增加，并且分析物結(jié)合性顆粒被阻滯于樣本 捕捉區(qū)(如下所述)的可能性也同樣隨與分析物結(jié)合性顆粒結(jié)合的分析物 量的增加而增加。因此，接觸的分析物結(jié)合性顆粒群可包含具有各種量的
與分析物結(jié)合劑結(jié)合的分析物的顆粒；以及不具有與分析物結(jié)合劑結(jié)合的 分析物的顆粒(正如分析物結(jié)合性顆粒最初不具有與分析物結(jié)合劑結(jié)合的 分析物)。另外，結(jié)合程度隨條件的時間因素增加而增加當(dāng)大部分結(jié)合在 一分鐘內(nèi)(例如，60秒，優(yōu)選為小于60秒(例如，45秒、30秒或更少)) 發(fā)生時，額外養(yǎng)(例如， 一分鐘以上(2分鐘、5分鐘、10分鐘、15 分鐘))導(dǎo)致額外的結(jié)合。如果存在一個以上分析物結(jié)合性顆粒群(例如， 針對不同所關(guān)注分析物的單獨群體)，那么將被維持(培養(yǎng))在能使流體中 的分析物(如果存在)與分析物結(jié)合性顆粒結(jié)合的分析物結(jié)合性顆粒稱為 "接觸的第一分析物結(jié)合性顆粒"、"接觸的第二分析物結(jié)合性顆粒"等，并且 統(tǒng)稱為接觸的分析物結(jié)合性顆粒。
將緩沖混合流體樣本施加于固相裝置中膜的施加點上或施加于施加墊 (如果存在)上。在使膜與緩沖混合流體樣本接觸后，將所述膜維持在能使 流體通過毛細作用移動到并通過膜的條件下。接觸的分析物結(jié)合性顆粒因 來自緩沖混合流體樣本的流體的毛細作用而移動通過膜，并且所述接觸的 分析物結(jié)合性顆粒沿膜移動到并通過膜上的樣本捕捉區(qū)，且還移動到并通 過控制捕捉區(qū)。將所述膜維護在一定條件下(例如，足夠時間和流體體積)， 以能使接觸的分析物結(jié)合性顆粒通過毛細作用沿膜移動到并通過樣本捕捉 區(qū)，且移動到并通過控制捕捉區(qū)，并且隨后到達捕捉區(qū)之外(例如，進入 芯吸墊)，借此將任何未結(jié)合的顆粒從捕捉區(qū)中除去。
的樣本捕捉劑結(jié)合，并且同時通過二些接:的分析物結(jié)合性顆粒與控制捕 捉區(qū)中的控制捕捉劑結(jié)合， 一些接觸的分析物結(jié)合性顆粒的移動被阻滯。 在一個優(yōu)選具體態(tài)樣中，分析物結(jié)合劑為所需抗原的抗體，并且控制捕捉 劑可為針對得到分析物結(jié)合劑的物種的免疫球蛋白的抗體。在本具體態(tài)樣 中，免疫球蛋白的抗體應(yīng)不與樣本的其它組分交叉反應(yīng)例如，如果測試 人類樣本，那么可將不與人類免疫球蛋白反應(yīng)的抗體用作控制捕捉劑。
樣本捕捉劑通過結(jié)合與接觸的分析物結(jié)合性顆粒上的分析物結(jié)合劑結(jié)合的所關(guān)注分析物來結(jié)合接觸的分析物結(jié)合性顆粒。如本文所使用，用語 樣本-試劑-顆粒復(fù)合物是指樣本捕捉劑與接觸的分析物結(jié)合性顆粒的復(fù)合
分析物結(jié)合性顆粒，i接觸的分析物結(jié)合性顆粒被阻滯在樣本捕捉區(qū)中，'
從而形成樣本-試劑-顆粒復(fù)合物。各樣本捕捉區(qū)可能具有被阻滯的樣本-試 劑-顆粒復(fù)合物，這取決于樣本中是否存在各特定所關(guān)注分析物以及其是否 已經(jīng)與接觸的分析物結(jié)合性顆粒上的分析物結(jié)合劑結(jié)合。
控制捕捉劑通過結(jié)合接觸的分析物結(jié)合性顆粒上的分析物結(jié)合劑來結(jié) 合接觸的分析物結(jié)合性顆粒。如本文所使用，術(shù)語控制-試劑-顆粒復(fù)合物是 指控制捕捉劑與接觸的分析物結(jié)合性顆粒的復(fù)合物。由于通過分析物結(jié)合 性顆粒與控制捕捉區(qū)中的控制捕捉劑相互作用來捕捉接觸的分析物結(jié)合性 顆粒，故接觸的分析物結(jié)合性顆粒被阻滯在控制捕捉區(qū)中，從而形成控制-試劑-顆粒復(fù)合物。如上所述，控制捕捉劑與分析物結(jié)合性顆粒(例如，分 析物結(jié)合劑涂覆顆粒上的分析物結(jié)合劑，或所述顆粒上的另一材料，或所 述顆粒本身)相互作用，但不與分析物本身相互作用。
毛細作用隨后將未被阻滯在樣本捕捉區(qū)或控制捕捉區(qū)中的任何接觸的 分析物結(jié)合性顆粒向前移動到這些區(qū)之外，借此除去未被阻滯的任何顆粒。 在優(yōu)選具體態(tài)樣中，流體將未被阻滯的任何接觸的分析物結(jié)合性顆粒移動 到各樣本捕捉區(qū)和控制捕捉區(qū)后的芯吸墊中。
需要時，可使用次級洗滌步驟。在將緩沖混合流體樣本浸入膜或施加 墊(如果存在)中后，可將緩沖液(例如，上文所述的緩沖液)施加到施 加點?？稍谥蟮娜魏螘r間使用次級洗滌步驟，只要不會稀釋緩沖混合流 體樣本即可。如下所述，當(dāng)檢測分析物結(jié)合性顆粒時，次級洗滌步驟可幫
助減少背景信號。
隨后使用針對分析物結(jié)合性顆粒上所使用的標記類型的適當(dāng)方式來檢 測被阻滯在各樣本捕捉區(qū)(樣本-試劑-顆粒復(fù)合物)中的分析物結(jié)合性顆粒 的量。在優(yōu)選具體態(tài)樣中，通過光學(xué)方法，諸如通過測量分析物結(jié)合性顆 粒標記的焚光量來檢測所述量?；蛘?，可使用電導(dǎo)率或電介質(zhì)(電容)檢 測樣本-試劑-顆粒復(fù)合物的量?；蛘?，可使用釋放的電活性劑進行電化學(xué)檢
測，諸如，如Hayes等人(j"a/_y"ca/ Cfe附.66:1860-1865 (1994))所述的銦、 鉍、鎵或碲離子，或如Roberts和DurstUwa一c"/ C7z，. 67:482-491 (1995))
所提出的亞鐵氰化物。舉例來說，如果使用脂質(zhì)體，那么可通過在捕捉區(qū) 中加入一滴去污劑來釋放封裝在脂質(zhì)體內(nèi)的亞鐵氰化物，并且通過電化學(xué) 方式檢測所釋放的亞鐵氰化物(Roberts和Durst,同上)。如果使用螯合劑-蛋白質(zhì)連結(jié)物來螯合金屬離子，那么可通過在捕捉區(qū)加入一滴酸來釋放離 子并且可以通過陽極溶出伏安法(Hayes等人，同上)進行量化。同樣，以與檢測樣本捕捉區(qū)中分析物結(jié)合性顆粒的量相同的方式檢測被阻滯于控制 捕捉區(qū)中的分析物結(jié)合性顆粒的量。
在一個具體態(tài)樣中，將檢測出的分析物結(jié)合性顆粒的量通過與沿固相
(例如，膜)的位置存在的標記量直接相關(guān)的曲線來表示。舉例來說，可測
定膜上各位置處(例如，樣本捕捉區(qū)和控制捕捉區(qū)；和/或樣本捕捉區(qū)與控 制捕捉區(qū)之間的區(qū)域或者與樣本捕捉區(qū)和控制捕捉區(qū)相鄰的區(qū)域；和/或膜 的其它區(qū)域)的檢測顆粒量并且作為沿膜上位置的距離的函數(shù)繪圖。隨后 可將顆粒量計算為曲線下面積的函數(shù)，其與所存在的標記的量相關(guān)。
接著測定經(jīng)校正的分析物結(jié)合性顆粒的量，并且隨后可使用適當(dāng)計算 法由針對所關(guān)注分析物的經(jīng)校正的分析物結(jié)合性顆粒量測定所述分析物的 量。經(jīng)校正的分析物結(jié)合性顆粒的量是基于與所關(guān)注分析物對應(yīng)的樣本捕 捉區(qū)中和控制捕捉區(qū)中被阻滯的分析物結(jié)合性顆粒的量。舉例來說，在一 個具體態(tài)樣中，經(jīng)校正的分析物結(jié)合性顆粒的量是以樣本捕捉區(qū)中存在的 分析物結(jié)合性顆粒的量與控制捕捉區(qū)中存在的分析物結(jié)合性顆粒的量的比 率(R)測定。隨后可利用標準曲線由經(jīng)校正的分析物結(jié)合性顆粒的量(所 述比率)測定所存在的分析物的量。標準曲線是通過制備一系列對照樣本 產(chǎn)生，所述對照樣本含有在待;險測分析物的流體(諸如耗盡分析物的血清) 中已知濃度的所關(guān)注分析物。然后對所述對照樣本系列進行分析；測量各 對照樣本的R值；并且將R值作為對照樣本中所包括的分析物濃度的函數(shù) 繪圖。通過測量含有未知量分析物的樣本("測試樣本")的R值來分析測 試樣本，并且通過參考標準曲線測定所述測試樣本中分析物的濃度。如上 所述，可產(chǎn)生一個標準曲線并且將其用于一組所有測試樣本(例如，使用 測試試劑的指定制備法得到的所有測試樣本)；無需再產(chǎn)生各測試樣本的標 準曲線。在另一具體態(tài)樣中，經(jīng)校正的分析物結(jié)合性顆粒的量是以樣本捕 捉區(qū)中存在的分析物結(jié)合性顆粒的量與控制捕捉區(qū)中存在的分析物結(jié)合性 顆粒量和樣本捕捉區(qū)中存在的分析物結(jié)合性顆粒量的總和的比率(R)測定。 隨后可利用標準曲線由經(jīng)校正的分析物結(jié)合性顆粒的量(所述比率)測定 所存在的分析物的量?；蛘撸€可使用其它比率和/或標準曲線測定樣本中 分析物的量。此外，需要時，可在計算比率(R)之前，將背景中存在的標 記的量從樣本捕捉區(qū)中存在的分析物結(jié)合性顆粒的量和控制捕捉區(qū)中存在 的分析物結(jié)合性顆粒的量中扣除。
舉例來說，在執(zhí)行分析之后(液體已移動通過捕捉區(qū)并且達到捕捉區(qū) 之外)，可對整個膜或部分膜進行掃描，以評定捕捉區(qū)之前、捕捉區(qū)中和捕 捉區(qū)之后各區(qū)域中經(jīng)標記顆粒的量。所述掃描可主要在包括捕捉區(qū)的區(qū)域 周圍進行，但也可對擴展到這些區(qū)之外的區(qū)域進行。捕捉區(qū)外的區(qū)域中存 在的顆粒為"背景"一也就是說，在樣本和也存在于捕捉區(qū)的樣本基質(zhì)中的其它組分的存在下與膜非特異性結(jié)合的顆粒。捕捉區(qū)中存在的顆粒量除捕捉 劑所捕捉的特異顆粒外還包括此非特異性背景。可將背景顆粒量(在捕捉 區(qū)之前和/或之后取得)從捕捉區(qū)中所測定的顆?？偭恐锌鄢?。由此得到經(jīng) 校正的背景量，這樣可產(chǎn)生對于樣本中存在的分析物量的較為精確的測定 結(jié)果。如果檢測 一種以上所關(guān)注分析物，那么使用與所述所關(guān)注分析物對應(yīng) 的樣本捕捉區(qū)中阻滯的分析物結(jié)合性顆粒的量和控制捕捉區(qū)中阻滯的分析 物結(jié)合性顆粒的量分別測定針對各所關(guān)注分析物的經(jīng)校正的分析物結(jié)合性 顆粒的量。因此，控制捕捉區(qū)中分析物結(jié)合性顆粒的量將用于測定所有所 關(guān)注分析物的經(jīng)校正的分析物結(jié)合性顆粒的量，但各單獨樣本捕捉區(qū)中分 析物結(jié)合性顆粒的量僅用于測定所述特定所關(guān)注分析物的經(jīng)校正的分析物 結(jié)合性顆粒的量。應(yīng)注意，上文所述的評定多種所關(guān)注分析物的方法也可適用于分析所 關(guān)注分析物都相同時的多種所關(guān)注分析物(即， 一種分析物評定多次)。在 本具體態(tài)樣中，可將相同樣本捕捉劑用于各樣本捕捉區(qū)中。需要時，可對 經(jīng)校正的分析物結(jié)合性顆粒的量求平均值，并且所關(guān)注分析物的量將與所 得經(jīng)校正的分析物結(jié)合性顆粒的量的平均值相關(guān)。"竟爭"或"抑制"分析與夾心分析類似，本發(fā)明的竟爭或抑制分析是利用固相裝置，所述固 相裝置包括具有施加點、 一個或一個以上樣本捕捉區(qū)和控制捕捉區(qū)的如上 所述的膜。所述膜可視情況包括在控制捕捉區(qū)和/或樣本捕捉區(qū)之后的芯吸 墊，以及在施加點之前的樣本墊。本具體態(tài)樣也利用如上所述的樣本收集 裝置。在某些具體態(tài)樣中，竟爭(抑制)分析的樣本收集裝置含有涂有所 關(guān)注分析物(而非如上文針對夾心分析所述涂有分析物結(jié)合劑)或涂有所 關(guān)注分析物的類似物的分析物涂覆顆粒群 在存在一種以上所關(guān)注分析物 的其它具體態(tài)樣中，分析物涂覆顆粒涂有所有不同的所關(guān)注分析物(或所 關(guān)注分析物的類似物，或一種所關(guān)注分析物與另一種所關(guān)注分析物的類似物的組合等)；或者，樣本收集裝置含有一種以上分析物涂覆顆粒群(一個 群對應(yīng)一種所關(guān)注分析物)；各顆粒群涂有所關(guān)注分析物或所關(guān)注分析物的 類似物。如本文所使用，分析物類似物是與分析物具有類似結(jié)合特性，即 與如上所述的分析物結(jié)合劑形成結(jié)合對的化合物。分析物或分析物類似物 可直接涂覆于顆粒上，或者可與顆粒間接結(jié)合。如下文所使用，用語分析 物涂覆顆?？梢灾竿坑兴P(guān)注分析物或所關(guān)注分析物類似物的顆粒。如上 文關(guān)于夾心分析所述，顆粒群規(guī)模視顆粒的尺寸和組成、固相裝置中膜的 組成和分析的靈敏程度而變化。如上所述，樣本捕捉區(qū)是指膜上吸附有樣本捕捉劑的點。樣本捕捉劑為分析物結(jié)合劑，諸如上文所述的結(jié)合劑。樣本捕捉劑無需為與上文所述 相同的分析物結(jié)合劑；然而，樣本捕捉劑也因其特異性且優(yōu)先結(jié)合其所關(guān) 注分析物而與所關(guān)注分析物形成結(jié)合對。如果存在一種以上所關(guān)注分析物， 那么如上所述將存在一個以上樣本捕捉區(qū)。如上所述，在優(yōu)選具體態(tài)樣中，樣本捕捉劑為針對分析物的抗體；其可針對與結(jié)合用作涂覆于顆粒上的分 析物結(jié)合劑的抗體的表位相同的分析物表位，或針對與結(jié)合用作涂覆于顆 粒上的分析物結(jié)合劑的抗體的表位不同的分析物表位。所述裝置另外包括與分析物涂覆顆粒反應(yīng)，但不與待測量的分析物相 互作用的如上所述的控制捕捉劑例如，控制捕捉劑可與顆粒上的另一材 料(例如，結(jié)合顆粒的分析物的載體；抗體)反應(yīng)，或與顆粒本身反應(yīng)。 在優(yōu)選具體態(tài)樣中，樣本捕捉劑和控制捕捉劑都為抗體?？刂撇蹲絼┦俏?附于控制捕捉區(qū)中的膜上(涂覆在膜上和/或滲透到膜內(nèi))。竟爭分析的組 件是以與上文關(guān)于夾心分析所述類似的方式定位。為進行竟爭分析，使用如上所述的待評定所關(guān)注分析物的存在的流體 樣本。在一個具體態(tài)樣中，將流體樣本引入(抽吸入、倒入或以其它方式 放入)樣本收集裝置中。舉例來說，在一個具體態(tài)樣中，將流體樣本抽吸 到包含吸量管吸頭的樣本收集裝置中。將流體樣本引入樣本收集裝置中將 使流體樣本與分析物涂覆顆粒混合，從而形成混合流體樣本。如果分析物 涂覆顆粒是經(jīng)蒸發(fā)干燥、冷凍干燥或真空干燥，那么將流體樣本引入樣本 收集裝置中可使分析物結(jié)合性顆粒在流體樣本中再水合和懸浮。也將緩沖 液(例如，如上所述)引入混合流體樣本中，形成緩沖混合流體樣本。可 通過將混合流體樣本分配到含有緩沖液的緩沖液容器(例如，試管)中或 者通過在引入流體樣本之前將緩沖液引入樣本收集裝置中來形成緩沖混合 流體樣本。在另一具體態(tài)樣中，將緩沖液引入樣本收集裝置中，隨后將流 體樣本引入樣本收集裝置中。或者，如果所關(guān)注分析物為固體(例如，粉 末、微粒、孢子或其它顆粒，如上所述)，那么可通過將固體引入緩沖液容 器中來制備如上所述的流體樣本；在本具體態(tài)樣中，緩沖混合流體樣本是 通過將流體樣本(包含緩沖液)引入樣本收集裝置中來形成。為使分析物涂覆顆粒進一步分散到流體樣本中，需要時，可攪動(例 如，渦旋、振動、上下吸取等)已引入流體樣本和緩沖液的樣本收集裝置 或者已引入混合流體樣本的緩沖液容器。在優(yōu)選具體態(tài)樣中，樣本收集裝置包含在尖部具有真空干燥的分析物 涂覆顆粒的吸量管吸頭；將流體樣本抽吸到吸量管中，借此使干燥的分析 物涂覆顆粒再水合并且形成混合流體樣本。在特別優(yōu)選的具體態(tài)樣中，將 混合流體樣本引入緩沖液容器中，產(chǎn)生緩沖混合流體樣本；使用樣本收集 裝置上下吸取緩沖液容器中的緩沖混合流體樣本，借此使分析物涂覆顆粒進一步分散。將緩沖混合流體樣本施加于固相裝置中膜的施加點上或施加于施加墊 (如果存在)上。在使膜與緩沖混合流體樣本接觸后，將所述膜維持在能使 流體通過毛細作用移動到并通過膜的條件下。分析物涂覆顆粒(和分析物 (如果樣本中存在))因來自緩沖混合流體樣本的流體的毛細作用而移動到 并通過膜上的樣本捕捉區(qū)，且同時移動到并通過控制捕捉區(qū)。將所述膜維 持在一定條件下(例如，足夠時間和流體體積)，以能使分析物涂覆顆粒通 過毛細作用沿膜移動到并通過樣本捕捉區(qū)，且同時移動到控制捕捉區(qū)，并 且隨后到達捕捉區(qū)之外(例如，進入芯吸墊)，借此將任何未結(jié)合的顆粒從 捕捉區(qū)中除去。通過分析物涂覆顆粒與樣本捕捉區(qū)中的樣本捕捉劑結(jié)合，以及通過一 些分析物涂覆顆粒與控制捕捉區(qū)中的控制捕捉劑結(jié)合， 一 些分析物涂覆顆 粒的移動被阻滯。分析物涂覆顆粒與樣本中的分析物(如果存在)竟爭結(jié) 合樣本捕捉劑。樣本捕捉劑通過與分析物涂覆顆粒上的分析物結(jié)合來結(jié)合 分析物涂覆顆粒。如本文所使用，用語樣本-試劑-分析物涂覆顆粒復(fù)合物 是指樣，捕捉劑與分析物涂覆顆粒的復(fù)合物。由于通過分析，涂覆，粒t粒，故分析物涂覆顆粒被阻滯在樣本捕捉區(qū)中，從而形成樣本-試劑-分析 物涂覆顆粒復(fù)合物?？刂撇蹲絼┩ㄟ^與除分析物本身外的分析物涂覆顆粒的任何組分結(jié)合 來結(jié)合分析物涂覆顆粒。如本文所使用，用語控制-試劑-分析物涂覆顆粒 復(fù)合物是指控制捕捉劑與分析物涂覆顆粒的復(fù)合物。如上所述，由于通過 分析物結(jié)合性顆粒與控制捕捉區(qū)中控制捕捉劑的相互作用來捕捉分析物涂 覆顆粒，故分析物涂覆顆粒被阻滯在控制捕捉區(qū)中，從而形成控制-試劑-分析物涂覆顆粒復(fù)合物。毛細作用隨后將未被阻滯在樣本捕捉區(qū)或控制捕捉區(qū)中的任何分析物 涂覆顆粒向前移動到捕捉區(qū)外。在優(yōu)選具體態(tài)樣中，流體將未被阻滯在任 一捕捉區(qū)中的任何接觸的分析物涂覆顆粒移動到控制捕捉區(qū)后的芯吸墊 中。隨后檢測各樣本捕捉區(qū)中所阻滯的分析物涂覆顆粒的量。使用針對分 析物涂覆顆粒上所使用的標記類型的適當(dāng)方式檢測分析物涂覆顆粒。在優(yōu) 選具體態(tài)樣中，通過光學(xué)方法，諸如通過測量分析物結(jié)合性顆粒標記的熒 光量來檢測分析物涂覆顆粒的量。以與檢測樣本捕捉區(qū)中分析物涂覆顆粒 的量相同的方式檢測被阻滯在控制捕捉區(qū)中的分析物涂覆顆粒的量。在一 個具體態(tài)樣中，如上所述，將分析物涂覆顆粒的量通過與沿固相(例如， 膜)的位置存在的標記量直接相關(guān)的曲線來表示。舉例來說，可測定膜上各位置處(例如，樣本捕捉區(qū)和控制捕捉區(qū)；和/或樣本捕捉區(qū)與控制捕捉區(qū)之間的區(qū)域或者與樣本捕捉區(qū)和控制捕捉區(qū)相鄰的區(qū)域；和/或膜的其它 區(qū)域)的顆粒量并且作為沿膜位置的距離的函數(shù)繪圖。隨后可將顆粒量計 算為曲線下面積的函數(shù)，其與所存在的標記的量相關(guān)。測定經(jīng)校正的分析物涂覆顆粒的量，并且隨后可使用適當(dāng)計算法由經(jīng) 校正的分析物涂覆顆粒量測定分析物的量。經(jīng)校正的分析物涂覆顆粒的量 是基于樣本捕捉區(qū)中和控制捕捉區(qū)中所阻滯的分析物涂覆顆粒的量。舉例 來說，在一個具體態(tài)樣中，經(jīng)校正的分析物涂覆顆粒的量與樣本捕捉區(qū)中 存在的分析物涂覆顆粒量與控制捕捉區(qū)中存在的分析物涂覆顆粒量的比率 (R)成反比。隨后可利用標準曲線由經(jīng)校正的分析物涂覆顆粒量(所述比 率)測定所存在的分析物的量。標準曲線是通過制備一系列對照樣本產(chǎn)生， 所述對照樣本含有待檢測分析物的流體(諸如耗盡分析物的血清)中已知 濃度的所關(guān)注分析物。然后對所述對照樣本系列進行分析；測量各對照樣 本的R值；并且將R值作為對照樣本中所包括的分析物濃度的函數(shù)繪閨。 通過測量含有未知量分析物的樣本("測試樣本")的R值來分析測試樣本， 并且通過參考標準曲線測定所述測試樣本中分析物的濃度。如上所述，可 產(chǎn)生一個標準曲線并且將其用于一組所有測試樣本(例如，使用測試試劑 的指定制備法得到的所有測試樣本)；無需再產(chǎn)生各測試樣本的標準曲線。 在另 一具體態(tài)樣中，經(jīng)校正的分析物涂覆顆粒的量與樣本捕捉區(qū)中存在的分析物涂覆顆粒的量與控制捕捉區(qū)中存在的分析物涂覆顆粒量和樣本捕捉 區(qū)中存在的分析物涂覆顆粒量的總和的比率(R)成反比。隨后可利用標準 曲線由經(jīng)校正的分析物涂覆顆粒的量(所述比率)測定所存在的分析物的 量?；蛘?，可使用其它比率和/或標準曲線測定樣本中分析物的量。此外， 需要時，可如先前關(guān)于夾心分析所述，在計算比率(R)之前從樣本捕捉區(qū) 中存在的分析物涂覆顆粒的量和控制捕捉區(qū)中存在的分析物涂覆顆粒的量 中扣除背景中存在的標記量。如果存在一種以上所關(guān)注分析物，那么使用被阻滯在針對各所關(guān)注分 析物的樣本捕捉區(qū)中的分析物涂覆顆粒的量分別測定針對各所關(guān)注分析物 的經(jīng)校正的分析物涂覆顆粒量。本發(fā)明的益處本發(fā)明的方法提供與分析物結(jié)合性顆粒被嵌入固相裝置的膜內(nèi)的分析 相比，靈敏性增強的分析。舉例來說，對于夾心分析，由于在施加到膜之 前將待分析所關(guān)注分析物的流體樣本與分析物結(jié)合性顆?；旌?，故在膜中 發(fā)生捕捉反應(yīng)之前存在較長的時間供所關(guān)注分析物與分析物結(jié)合性顆粒結(jié) 合。此外，由于所關(guān)注分析物與分析物結(jié)合性顆粒之間的相互作用是在流 體相中發(fā)生，因此與在固相裝置的膜基質(zhì)中存在的所關(guān)注分析物與分析物結(jié)合性顆粒之間的相同相互作用相比，顆粒的活動性更高，從而使結(jié)合更 有效。此外，對于夾心分析與竟爭分析，可將數(shù)量比可能嵌入固相裝置中 多的顆粒包括進流體收集裝置中；所述較多的數(shù)量進一步增強反應(yīng)的靈敏 性。另外，由于分析物結(jié)合性顆粒(或分析物涂覆顆粒)是在將緩沖混合 流體樣本施加到固相膜之前分散于所述緩沖混合流體樣本中，故顆粒經(jīng)由流體的毛細作用以連續(xù)方式通過捕捉區(qū)，而不是以快速波形式通過流體前緣波峰。因此，較低濃度的顆粒經(jīng)過較長時間流過捕捉區(qū)由此有效地增 加了可"捕捉，，顆粒的時間，使得在通過捕捉區(qū)的顆粒量有效減少的同時 在捕捉區(qū)產(chǎn)生高特異性結(jié)合，從而避免當(dāng)顆粒通過流體前緣波峰時發(fā)生的 一些顆粒對其它顆粒捕捉的非特異性物理阻斷。此外，可使用一種內(nèi)部對 照進行多種分析物的評定，從而便于同時分析數(shù)種化合物。另外，樣本捕 捉區(qū)和控制捕捉區(qū)的分析條件盡可能相似這是因為它們與施加點等距， 故各捕捉區(qū)的流速極為相似。而且，由于樣本捕捉區(qū)和控制捕捉區(qū)是在先 前從未遭遇任何捕捉區(qū)的情況下遇到液體，故由流過第 一樣本捕捉區(qū)進入 隨后的第二樣本捕捉區(qū)所引起的任何可能的干擾得以消除。盡管已特別地關(guān)于免疫分析描述本發(fā)明的分析，但所述分析也可類似 地利用如上所述的其它結(jié)合對(例如，核酸、受體-配體、凝集素-糖)，使 用與上文所述相同的方法，且以所希望的組分作為分析物和分析物結(jié)合劑。本發(fā)明的套組本發(fā)明還包括用于本文所述方法的套組。套組組件可包括特異性結(jié) 合對的第一和/或第二成員、緩沖液和/或緩沖液容器、流體收集工具、一 個或一個以上固相裝置G見情況包含施加墊和/或芯吸墊)、至少一個樣本 收集裝置、 一個或一個以上緩沖液容器、用來產(chǎn)生標準曲線和/或其它標準 曲線信息的對照樣本、分析物結(jié)合性顆粒、分析物涂覆顆粒和/或?qū)φ疹w粒、 捕捉劑、抗體、輔助收集待評定所關(guān)注分析物的樣本的工具(藥簽)、處理 裝置(例如，有害生物物質(zhì)廢物袋)和/或關(guān)于樣本收集裝置的其它信息或 說明(例如，批次信息、有效期等)。舉例來說，在一個具體態(tài)樣中，套組 包含至少一個樣本收集裝置，所述裝置內(nèi)具有分析物結(jié)合性顆粒；在優(yōu)選 具體態(tài)樣中，套組包含至少一個吸量管吸頭，所述吸量管吸頭內(nèi)具有蒸發(fā) 干燥、真空干燥或冷凍干燥的分析物結(jié)合性顆粒。在另一具體態(tài)樣中，套 組包含至少一個如本文所述的固相裝置和至少一個樣本收集裝置。在另一 優(yōu)選具體態(tài)樣中，套組包含至少一個吸量管、至少一個或一個以上具有蒸 發(fā)干燥、真空千燥或冷凍干燥的分析物結(jié)合性顆粒的吸量管吸頭，和至少 一個固相裝置。此優(yōu)選具體態(tài)樣也可視情況含有關(guān)于與吸量管吸頭中分析 物結(jié)合性顆粒有關(guān)的標準曲線、批次信息和/或有效期的信息。在另一優(yōu)選 具體態(tài)樣中，套組包含至少一個樣本收集裝置、至少一個具有干燥分析物結(jié)合性顆粒的吸量管吸頭、至少一個固相裝置，和至少一個緩沖液容器。 此優(yōu)選具體態(tài)樣還可視情況在緩沖液容器內(nèi)含有緩沖液，和供收集固體樣 本的工具(例如，藥簽)。盡管已參考本發(fā)明的優(yōu)選具體態(tài)樣特別展示和描述本發(fā)明，但所屬領(lǐng) 域技術(shù)人員應(yīng)了解，可在不偏離隨附權(quán)利要求所涵蓋的本發(fā)明范圍的情況 下對其中的形式和細節(jié)進行修改。
權(quán)利要求
1、一種定量測量流體樣本中所關(guān)注分析物的量的方法，其包含a)提供固相裝置，所述裝置包含包含施加點、樣本捕捉區(qū)、和控制捕捉區(qū)的膜；所述樣本捕捉區(qū)具有吸附于其上的樣本捕捉劑，而所述控制捕捉區(qū)具有吸附于其上的控制捕捉劑；其中所述樣本捕捉區(qū)和所述控制捕捉區(qū)與所述施加點大致等距；b)提供樣本收集裝置，所述裝置含有分析物結(jié)合性顆粒群，其中所述分析物結(jié)合性顆粒上涂有分析物結(jié)合劑；c)i)將所述流體樣本引入所述樣本收集裝置中，產(chǎn)生混合流體樣本，并且隨后將緩沖液引入所述混合流體樣本中；ii)將緩沖液引入所述樣本收集裝置中，并且隨后引入所述流體樣本；或iii)通過將固體引入緩沖液中來形成所述流體樣本，且隨后將所述流體樣本引入所述樣本收集裝置中，借此產(chǎn)生包含接觸的分析物結(jié)合性顆粒的緩沖混合流體樣本；d)將所述緩沖混合流體樣本施加到所述膜的所述施加點；e)將所述膜維持在一定條件下，以能使流體通過毛細作用將接觸的分析物結(jié)合性顆粒經(jīng)由所述膜帶輸送到并通過所述樣本捕捉區(qū)，借此使接觸的分析物結(jié)合性顆粒與所述樣本捕捉劑結(jié)合；并且同時能使所述樣本中的流體通過毛細作用將接觸的分析物結(jié)合性顆粒經(jīng)由所述膜帶輸送到并通過所述控制捕捉區(qū)，借此使接觸的分析物結(jié)合性顆粒與所述控制捕捉劑結(jié)合；f)進一步將所述膜維持在一定條件下，以能使所述樣本中的流體通過毛細作用將未與所述樣本捕捉劑或所述控制捕捉劑結(jié)合的任何接觸的分析物結(jié)合性顆粒輸送到所述樣本捕捉區(qū)之外或所述控制捕捉區(qū)之外；g)測定所述樣本捕捉區(qū)中接觸的分析物結(jié)合性顆粒的量和所述控制捕捉區(qū)中接觸的分析物結(jié)合性顆粒的量；h)由所述樣本捕捉區(qū)中分析物結(jié)合性顆粒的量和所述控制捕捉區(qū)中分析物結(jié)合性顆粒的量測定經(jīng)校正的分析物結(jié)合性顆粒的量；其中所述流體樣本中所關(guān)注分析物的量與所述經(jīng)校正的分析物結(jié)合性顆粒的量直接相關(guān)。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述經(jīng)校正的分析物結(jié)合性顆粒 的量是以所述樣本捕捉區(qū)中分析物結(jié)合性顆粒的量與所述控制捕捉區(qū)中分 析物結(jié)合性顆粒的量的比率測定。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述經(jīng)校正的分析物結(jié)合性顆粒 的量是以所述樣本捕捉區(qū)中分析物結(jié)合性顆粒的量與所述控制捕捉區(qū)中分 析物結(jié)合性顆粒的量和所述樣本捕捉區(qū)中分析物結(jié)合性顆粒的量的總和的 比率測定。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述分析物和所述分析物結(jié)合劑 為結(jié)合對的成員，并且所述結(jié)合對的一個成員是選自由以下物質(zhì)組成的群組孢子、蛋白質(zhì)、激素、酶、糖蛋白、肽、小分子、多糖、凝集素、抗 體、抗體片段、核酸、藥物、藥物連結(jié)物、毒素、病毒、病毒粒子、細胞壁的一部分、半抗原和受體。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述分析物結(jié)合劑是選自由以下 物質(zhì)組成的群組抗體、抗體片段、半抗原、藥物連結(jié)物和受體。
6、 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述分析物結(jié)合劑是抗體。
7、 根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中所述樣本捕捉劑是選自由以下物 質(zhì)組成的群組的抗體針對與所述分析物結(jié)合性顆粒上的抗體相同的表位 的抗體；和針對與所述分析物結(jié)合性顆粒上的抗體不同的表位的抗體。
8、 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述控制捕捉劑是抗免疫球蛋白 抗體。
9、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述流體樣本是選自由以下物質(zhì) 組成的群組全血、血漿、血清、尿液、腦脊髓液、唾液、精液、玻璃體 液和滑液。
10、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述流體樣本包含懸浮固體。
11、 根據(jù)權(quán)利要求IO所述的方法，其中所述固體是選自由以下物質(zhì)組 成的群組微粒樣本、粉末樣本、土壤樣本和孢子。
12、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述流體樣本是選自由以下物 質(zhì)組成的群組水、地下水、污水和廢水。
13、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中在步驟(d)中，將所述混合流 體樣本經(jīng)由施加墊施加到所述施加點上。
14、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中在步驟(f)中，所述樣本中的 流體通過毛細作用將未與所述樣本捕捉劑或所述控制捕捉劑結(jié)合的任何接 觸的分析物結(jié)合性顆粒輸送到所述樣本捕捉區(qū)或所述控制捕捉區(qū)之外的芯 吸墊中。
15、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述樣本收集裝置是選自由以 下裝置組成的群組吸量管和吸量管吸頭。
16、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述分析物結(jié)合性顆粒群是經(jīng) 蒸發(fā)干燥、真空干燥或冷凍干燥。
17、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述樣本捕捉區(qū)和所述控制捕 捉區(qū)呈放射狀分散在所述施加點周圍。
18、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述樣本捕捉區(qū)和所述控制捕 捉區(qū)4皮此相鄰并且沿流體通過毛細作用流動的方向平4亍定位。
19、 一種定量測量流體樣本中所關(guān)注分析物的量的方法，其包含a) 提供固相裝置，所述裝置包含包含施加點、樣本捕捉區(qū)、和控制捕 捉區(qū)的膜；所述樣本捕捉區(qū)具有吸附于其上的樣本捕捉劑，而所述控制捕 捉區(qū)具有吸附于其上的控制捕捉劑；其中所述樣本捕捉區(qū)和所述控制捕捉 區(qū)與所述施加點大致等距；b) 提供樣本收集裝置，所述裝置含有分析物涂覆顆粒群，其中所述分 析物涂覆顆粒上涂有分析物或所述分析物的類似物；c) i)將所述流體樣本引入所述樣本收集裝置中，產(chǎn)生混合流體樣本， 并且隨后將緩沖液引入所述混合流體樣本中；ii)將緩沖液引入所述樣本收 集裝置中，并且隨后引入所述流體樣本；或iii)通過將固體引入緩沖液中 來形成所述流體樣本，且隨后將所述流體樣本引入所述樣本收集裝置中， 借此產(chǎn)生包含分析物涂覆顆粒的緩沖混合流體樣本；d) 將所述緩沖混合流體樣本施加到所述膜的所述施加點；e) 將所述膜維持在一定條件下，以能使流體通過毛細作用將分析物涂 覆顆粒經(jīng)由所述膜帶輸送到并通過所述樣本捕捉區(qū)，借此使分析物涂覆顆 粒與所述樣本捕捉劑結(jié)合；并且同時能使所述樣本中的流體通過毛細作用 將分析物涂覆顆粒經(jīng)由所述膜帶輸送到并通過所述控制捕捉區(qū)，借此使分 析物涂覆顆粒與所述控制捕捉劑結(jié)合；f) 進一步將所述膜維持在一定條件下，以能使所述樣本中的流體通過 毛細作用將未與所述樣本捕捉劑或所述控制捕捉劑結(jié)合的任何分析物涂覆 顆粒輸送到所述樣本捕捉區(qū)之外或所述控制捕捉區(qū)之外；g) 測定所述樣本捕捉區(qū)中分析物涂覆顆粒的量和所述控制捕捉區(qū)中分 析物涂覆顆粒的量；h) 由所述樣本捕捉區(qū)中分析物涂覆顆粒的量和所述控制捕捉區(qū)中分析 物涂覆顆粒的量測定經(jīng)校正的分析物涂覆顆粒的量；其中所述流體樣本中所關(guān)注分析物的量與所述經(jīng)校正的分析物涂覆顆 粒的量成反比關(guān)系。
20、 根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述經(jīng)校正的分析物涂覆顆粒 的量是以所述樣本捕捉區(qū)中分析物涂覆顆粒的量與所述控制捕捉區(qū)中分析 物涂覆顆粒的量的比率測定。
21、 根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述經(jīng)校正的分析物涂覆顆粒 的量是以所述樣本捕捉區(qū)中分析物涂覆顆粒的量與所述控制捕捉區(qū)中分析 物涂覆顆粒的量和所述樣本捕捉區(qū)中分析物涂覆顆粒的量的總和的比率測 定。
22、 根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述分析物和所述樣本捕捉劑 為結(jié)合對的成員，并且所述結(jié)合對的一個成員是選自由以下物質(zhì)組成的群 組孢子、蛋白質(zhì)、激素、酶、糖蛋白、肽、小分子、多糖、凝集素、抗體、抗體片段、核酸、藥物、藥物連結(jié)物、毒素、病毒、病毒粒子、細胞 壁的一部分、半抗原和受體。
23 、根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述樣本捕捉劑是選自由以下 物質(zhì)組成的群組抗體、抗體片段、半抗原、藥物連結(jié)物和受體。
24、 根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中所述樣本捕捉劑是抗體。
25、 根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中所述控制捕捉劑是抗免疫球蛋 白抗體。
26、 根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述流體樣本是選自由以下物 質(zhì)組成的群組全血、血漿、血清、尿液、腦脊髓液、唾液、精液、玻璃 體液和滑液。
27、 根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述流體樣本包含懸浮固體。
28、 根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其中所述固體是選自由以下物質(zhì)組 成的群組微粒樣本、粉末樣本、土壤樣本和孢子。
29、 根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述流體樣本是選自由以下物 質(zhì)組成的群組水、地下水、污水和廢水。
30、 根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中在步驟(d)中，將所述混合 流體樣本經(jīng)由施加墊施加到所述施加點上。
31、 根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中在步驟(f)中，所述樣本中的 流體通過毛細作用將未與所述樣本捕捉劑或所述控制捕捉劑結(jié)合的任何分 析物涂覆顆粒輸送到所述控制捕捉區(qū)或所述控制捕捉區(qū)之外的芯吸墊中。
32、 根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述樣本收集裝置是選自由以 下裝置組成的群組吸量管和吸量管吸頭。
33、 根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述分析物涂覆顆粒群是經(jīng)蒸 發(fā)干燥、真空干燥或冷凍干燥。
34、 根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述樣本捕捉區(qū)和所述控制捕 捉區(qū)呈放射狀分散在所述施加點周圍。
35、 根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述樣本捕捉區(qū)和所述控制捕 捉區(qū)彼此相鄰并且沿流體通過毛細作用流動的方向平行定位。
36、 一種定量測量流體樣本中至少兩種所關(guān)注分析物的量的方法，其 包含a) 提供固相裝置，所述裝置包含包含施加點、至少兩個樣本捕捉區(qū)、 和控制捕捉區(qū)的膜；所述第一樣本捕捉區(qū)具有吸附于其上的第一樣本捕捉 劑，所述第二樣本捕捉區(qū)具有吸附于其上的第二樣本捕捉劑，并且所述控 制捕捉區(qū)具有吸附于其上的控制捕捉劑；其中各樣本捕捉區(qū)和所述控制捕 捉區(qū)與所述施加點大致等距；b) 提供樣本收集裝置，所述裝置含有第一分析物結(jié)合性顆粒群和第二分析物結(jié)合性顆粒群，其中所述第 一分析物結(jié)合性癩粒上涂有第 一分析物結(jié)合劑并且所述第二分析物結(jié)合性顆粒上涂有第二分析物結(jié)合劑；c) i)將所述流體樣本引入所述樣本收集裝置中，產(chǎn)生混合流體樣本， 并且隨后將緩沖液引入所述混合流體樣本中；ii)將緩沖液引入所述樣本收 集裝置中，并且隨后引入所述流體樣本；或iii)通過將固體引入緩沖液中 來形成所述流體樣本，且隨后將所述流體樣本引入所述樣本收集裝置中， 借此產(chǎn)生包含接觸的第 一分析物結(jié)合性顆粒和接觸的第二分析物結(jié)合性顆 粒的緩沖混合流體樣本；d) 將所述緩沖混合流體樣本施加到所述膜的所述施加點；e) 將所述膜維持在一定條件下，以能使流體通過毛細作用將接觸的第 一分析物結(jié)合性顆粒和接觸的第二分析物結(jié)合性顆粒經(jīng)由所述膜帶輸送到 并通過各樣本捕捉區(qū)，借此使接觸的第一分析物結(jié)合性顆粒與所述第一樣 本捕捉區(qū)中的所述第 一樣本捕捉劑結(jié)合，并使接觸的第二分析物結(jié)合性顆 粒與所述第二樣本捕捉區(qū)中的所述第二樣本捕捉劑結(jié)合；并且同時能使所 述樣本中的流體通過毛細作用將接觸的第 一分析物結(jié)合性顆粒和接觸的第 二分析物結(jié)合性顆粒經(jīng)由所述膜帶輸送到并通過所述控制捕捉區(qū)，借此使 接觸的第 一分析物結(jié)合性顆粒和接觸的第二分析物結(jié)合性顆粒與所述控制 捕捉劑結(jié)合；f) 進一步將所述膜維持在一定條件下，以能使所述樣本中的流體通過物結(jié)合性顆粒;接觸的第二-析物結(jié)合性顆粒輸送到所i樣本捕捉區(qū)之外 或所述控制捕捉區(qū)之外；g) 測定所述第一樣本捕捉區(qū)中接觸的第一分析物結(jié)合性顆粒的量、所 述第二捕捉區(qū)中接觸的第二分析物結(jié)合性顆粒的量和所述控制捕捉區(qū)中接 觸的第 一分析物結(jié)合性顆粒和接觸的第二分析物結(jié)合性顆粒的量；h) 由所述第一樣本捕捉區(qū)中接觸的第一分析物結(jié)合性顆粒的量，和所 述控制捕捉區(qū)中接觸的第 一分析物結(jié)合性顆粒和接觸的第二分析物結(jié)合性 顆粒的量測定第一經(jīng)校正的分析物結(jié)合性顆粒的量；并且由所述第二樣本 捕捉區(qū)中接觸的第二分析物結(jié)合性顆粒的量，和所迷控制捕捉區(qū)中接觸的 第 一分析物結(jié)合性顆粒和接觸的第二分析物結(jié)合性顆粒的量測定第二經(jīng)校 正的分析物結(jié)合性顆粒的量；其中所述流體樣本中所述第 一所關(guān)注分析物的量與所述第 一經(jīng)校正的 分析物結(jié)合性顆粒的量直接相關(guān)，并且所述流體樣本中所述第二所關(guān)注分 析物的量與所述第二經(jīng)校正的分析物結(jié)合性顆粒的量直接相關(guān)。
37、根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法，其中所述樣本捕捉區(qū)和所述控制捕 捉區(qū)呈放射狀分散在所述施加點周圍。
38. 根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法，其中所述樣本捕捉區(qū)和所述控制捕 捉區(qū)彼此相鄰并且沿流體通過毛細作用流動的方向平行定位。
39. 根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法，其另外包含定量測量一種或一種以 上額外所關(guān)注分析物的量，其中所述膜包含針對各額外所關(guān)注分析物的額 外樣本捕捉區(qū)，各額外樣本捕捉區(qū)具有吸附于其上的樣本捕捉劑；其中樣群；其中將所述膜維持在一定條件下，以能使流體通過毛細作用將接觸的 額外分析物結(jié)合性顆粒經(jīng)由所述膜帶輸送到并通過各樣本捕捉區(qū)，借此使劑結(jié)合；其中針對各所關(guān)注分^f:的經(jīng)校正的分析物結(jié)合性顆粒的量是由 各相應(yīng)額外樣本捕捉區(qū)中接觸的額外分析物結(jié)合性顆粒的量和所述控制捕 捉區(qū)中所有分析物結(jié)合性顆粒的量測定，并且其中所述流體樣本中各所關(guān) 注分析物的量與相應(yīng)的經(jīng)校正的分析物結(jié)合性顆粒的量直接相關(guān)。
40. 根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法，其中所述兩種所關(guān)注分析物是相同 分析物。
41. 根據(jù)權(quán)利要求40所述的方法，其中將所述經(jīng)校正的分析物結(jié)合性 顆粒的量求平均值并且所關(guān)注分析物的量與經(jīng)校正的分析物結(jié)合性顆粒的 量的平均值相關(guān)。
42. 一種定量測量流體樣本中至少兩種所關(guān)注分析物的量的方法，其 包含a) 提供固相裝置，所述裝置包含包含施加點、至少兩個樣本捕捉區(qū)、 和控制捕捉區(qū)的膜；所述第一樣本捕捉區(qū)具有吸附于其上的第一樣本捕捉 劑，所述第二樣本捕捉區(qū)具有吸附于其上的第二樣本捕捉劑，并且所述控 制捕捉區(qū)具有吸附于其上的控制捕捉劑；其中各樣本捕捉區(qū)和所述控制捕 捉區(qū)與所述施加點大致等距；b) 提供樣本收集裝置，所述裝置含有分析物結(jié)合性顆粒群，其中所述 分析物結(jié)合性顆粒上涂有第一分析物結(jié)合劑和第二分析物結(jié)合劑；c) i)將所述流體樣本引入所述樣本收集裝置中，產(chǎn)生混合流體樣本， 并且隨后將緩沖液引入所述混合流體樣本中；ii)將緩沖液引入所述樣本收 集裝置中，并且隨后引入所述流體樣本；或iii)通過將固體引入緩沖液中 來形成所述流體樣本，且隨后將所述流體樣本引入所述樣本收集裝置中， 借此產(chǎn)生包含接觸的分析物結(jié)合性顆粒的緩沖混合流體樣本；d) 將所述緩沖混合流體樣本施加到所述膜的所述施加點；e) 將所述膜維持在一定條件下，以能使流體通過毛細作用將接觸的分 析物結(jié)合性顆粒經(jīng)由所述膜帶輸送到并通過各樣本捕捉區(qū)，借此使接觸的 分析物結(jié)合性顆粒與所述第 一樣本捕捉區(qū)中的所述第 一樣本捕捉劑結(jié)合，并使接觸的分析物結(jié)合性顆粒與所述第二樣本捕捉區(qū)中的所述第二樣本捕捉劑結(jié)合；并且同時能使所述樣本中的流體通過毛細作用將接觸的分析物 結(jié)合性顆粒經(jīng)由所述膜帶輸送到并通過所述控制捕捉區(qū)，借此使接觸的分 析物結(jié)合性顆粒與所述控制捕捉劑結(jié)合；f) 進一步將所述膜維持在一定條件下，以能使所述樣本中的流體通過 毛細作用將未與樣本捕捉劑或所述控制捕捉劑結(jié)合的任何接觸的分析物結(jié) 合性顆粒輸送到所述樣本捕捉區(qū)之外或所述控制捕捉區(qū)之外；g) 測定所述第一樣本捕捉區(qū)中接觸的分析物結(jié)合性顆粒的量、所述第 二捕捉區(qū)中接觸的分析物結(jié)合性顆粒的量和所述控制捕捉區(qū)中接觸的分析 物結(jié)合性顆粒的量；h) 由所述第一樣本捕捉區(qū)中接觸的分析物結(jié)合性顆粒的量和所述控制 捕捉區(qū)中接觸的分析物結(jié)合性顆粒的量測定第 一經(jīng)校正的分析物結(jié)合性顆 粒的量；并且由所述第二樣本捕捉區(qū)中接觸的分析物結(jié)合性顆粒的量和所 述控制捕捉區(qū)中接觸的分析物結(jié)合性顆粒的量測定第二經(jīng)校正的分析物結(jié) 合性顆粒的量；其中所述流體樣本中所述第 一所關(guān)注分析物的量與所述第 一經(jīng)校正的分析物結(jié)合性顆粒的量直接相關(guān)，并且所述流體樣本中所述第 二所關(guān)注分析物的量與所述第二經(jīng)校正的分析物結(jié)合性顆粒的量直接相 關(guān)。
43、 根據(jù)權(quán)利要求42所述的方法，其中所述樣本捕捉區(qū)和所述控制捕 捉區(qū)呈放射狀分散在所述施加點周圍。
44、 根據(jù)權(quán)利要求42所述的方法，其中所述樣本捕捉區(qū)和所述控制捕 捉區(qū)彼此相鄰并且沿流體通過毛細作用流動的方向平行定位。
45、 才艮據(jù)權(quán)利要求42所述的方法，其另外包含定量測量一種或一種以 上額外所關(guān)注分析物的量，其中所述膜包含針對各額外所關(guān)注分析物的額 外樣本捕捉區(qū)，各額外樣本捕捉區(qū)具有吸附于其上的樣本捕捉劑；其中所述樣本收集裝置中所述分析物結(jié)合性顆粒另外包含涂覆于針對各額外所關(guān)維持在一定條件下，以能使流體通過毛細作用將接觸的額外分析物結(jié)合性 顆粒經(jīng)由所述膜帶輸送到并通過各樣本捕捉區(qū)，借此使接觸的分析物結(jié)合關(guān)注分析物的經(jīng)校正的分析物結(jié)合性顆粒的量是由各相應(yīng)額外樣本捕捉區(qū) 中接觸的分析物結(jié)合性顆粒的量和所述控制捕捉區(qū)中接觸的分析物結(jié)合性 顆粒的量測定，并且其中所述流體樣本中各所關(guān)注分析物的量與相應(yīng)的經(jīng) 校正的分析物結(jié)合性顆粒的量直接相關(guān)。
46、 根據(jù)權(quán)利要求42所述的方法，其中所述兩種所關(guān)注分析物是相同 分析物。
47、 根據(jù)權(quán)利要求46所述的方法，其中將所述經(jīng)校正的分析物結(jié)合性 顆粒的量求平均值并且所關(guān)注分析物的量與經(jīng)校正的分析物結(jié)合性顆粒的 量的平均值相關(guān)。
48、 一種定量測量流體樣本中至少兩種所關(guān)注分析物的量的方法，其 包含a) 提供固相裝置，所述裝置包含包含施加點、至少兩個樣本捕捉區(qū)、 和控制捕捉區(qū)的膜；所述第一樣本捕捉區(qū)具有吸附于其上的第一樣本捕捉 劑，所述第二樣本捕捉區(qū)具有吸附于其上的第二樣本捕捉劑，并且所述控 制捕捉區(qū)具有吸附于其上的控制捕捉劑；其中各樣本捕捉區(qū)和所述控制捕 捉區(qū)與所述施加點大致等距；b) 提供樣本收集裝置，所述裝置含有第一分析物涂覆顆粒群和第二分 析物涂覆顆粒群，其中所述第一分析物涂覆顆粒上涂有第一分析物或所述 第 一分析物的類似物，并且所述第二分析物涂覆顆粒上涂有第二分析物或 所述第二分析物的類似物；c) i)將所述流體樣本引入所述樣本收集裝置中，產(chǎn)生混合流體樣本， 并且隨后將緩沖液引入所述混合流體樣本中；ii)將緩沖液引入所述樣本收 集裝置中，并且隨后引入所述流體樣本；或iii)通過將固體引入緩沖液中 來形成所述流體樣本，且隨后將所述流體樣本引入所述樣本收集裝置中，借此產(chǎn)生包含第 一分析物涂覆顆粒和第二分析物涂覆顆粒的緩沖混合流體樣本；d) 將所述緩沖混合流體樣本施加到所述膜的所述施加點；e) 將所述膜維持在一定條件下，以能使流體通過毛細作用將第一分析 物涂覆顆粒和第二分析物涂覆顆粒經(jīng)由所述膜帶輸送到并通過各樣本捕捉 區(qū)，借此使第 一分析物涂覆顆粒與所述第 一樣本捕捉區(qū)中的所述第 一樣本 捕捉劑結(jié)合，并使第二分析物涂覆顆粒與所述第二樣本捕捉區(qū)中的所述第 二樣本捕捉劑結(jié)合；并且同時能使所述樣本中的流體通過毛細作用將第一 分析物涂覆顆粒和第二分析物涂覆顆粒經(jīng)由所述膜帶輸送到并通過所述控 制捕捉區(qū)，借此使第一分析物涂覆顆粒和第二分析物涂覆顆粒與所述控制 捕捉劑結(jié)合；f) 進一步將所述膜維持在一定條件下，以能使所述樣本中的流體通過 毛細作用將未與樣本捕捉劑或所述控制捕捉劑結(jié)合的任何第 一分析物涂覆 顆粒和第二分析物涂覆顆粒輸送到所述樣本捕捉區(qū)之外或所述控制捕捉區(qū)之外；g) 測定所述第一樣本捕捉區(qū)中第一分析物涂覆顆粒的量、所述第二樣 本捕捉區(qū)中第二分析物涂覆顆粒的量和所述控制捕捉區(qū)中第一分析物涂覆顆粒和第二分析物涂覆顆粒的量；h)由所述第一樣本捕捉區(qū)中第一分析物涂覆顆粒的量，和所述控制捕 捉區(qū)中第一分析物涂覆顆粒和第二分析物涂覆顆粒的量測定第一經(jīng)校正的分析物涂覆顆粒的量；并且由所述第二樣本捕捉區(qū)中第二分析物涂覆顆粒的量，和所述控制捕捉區(qū)中第一分析物涂覆顆粒和第二分析物涂覆顆粒的量測定第二經(jīng);歐正的分析物涂覆顆粒的量；其中所述流體樣本中所述第 一所關(guān)注分析物的量與所述第 一經(jīng)校正的 分析物涂覆顆粒的量成反比關(guān)系，并且所述流體樣本中所述第二所關(guān)注分 析物的量與所述第二經(jīng)校正的分析物涂覆顆粒的量成反比關(guān)系。
49、 根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中所述樣本捕捉區(qū)和所述控制捕 捉區(qū)呈放射狀分散在所述施加點周圍。
50、 根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中所述樣本捕捉區(qū)和所述控制捕 捉區(qū)彼此相鄰并且沿流體通過毛細作用流動的方向平行定位。
51、 根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其另外包含定量測量一種或一種以 上額外所關(guān)注分析物的量，其中所述膜包含針對各額外所關(guān)注分析物的額 外樣本捕捉區(qū)，各額外樣本捕捉區(qū)具有吸附于其上的樣本捕捉劑；其中樣本收集裝置另外含有針對各額外所關(guān)注分析物的額外分析物涂覆顆粒群； 其中將所述膜維持在一定條件下，以能使流體通過毛細作用將額外分析物 涂覆顆粒經(jīng)由所述膜帶輸送到并通過各樣本捕捉區(qū)，借此使額外分析物涂 覆顆粒與各額外樣本捕捉區(qū)中的所述額外樣本捕捉劑結(jié)合；其中針對各所 關(guān)注分析物的經(jīng)校正的分析物結(jié)合性顆粒的量是由各相應(yīng)額外樣本捕捉區(qū) 中額外分析物涂覆顆粒的量和所述控制捕捉區(qū)中分析物涂覆顆粒的量測 定，并且其中所述流體樣本中各所關(guān)注分析物的量與相應(yīng)的經(jīng)校正的分析 物涂覆顆粒的量直"t妻相關(guān)。
52、 根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中所述兩種所關(guān)注分析物是相同 分析物。
53、 根據(jù)權(quán)利要求52所述的方法，其中將所述經(jīng)校正的分析物涂覆顆 粒的量求平均值并且所關(guān)注分析物的量與經(jīng)校正的分析物涂覆顆粒的量的 平均值相關(guān)。
54、 一種定量測量流體樣本中至少兩種所關(guān)注分析物的量的方法，其 包含a) 提供固相裝置，所述裝置包含包含施加點、至少兩個樣本捕捉區(qū)、 和控制捕捉區(qū)的膜；所述第一樣本捕捉區(qū)具有吸附于其上的第一樣本捕捉 劑，所述第二樣本捕捉區(qū)具有吸附于其上的第二樣本捕捉劑，并且所述控 制捕捉區(qū)具有吸附于其上的控制捕捉劑；其中各樣本捕捉區(qū)和所述控制捕 捉區(qū)與所述施加點大致等距；b) 提供樣本收集裝置，所述裝置含有分析物涂覆顆粒群，其中所述分析物涂覆顆粒上涂有第一分析物或所述分析物的類似物，并且涂有第二分析物或所述第二分析物的類似物；c) i)將所述流體樣本引入所述樣本收集裝置中，產(chǎn)生混合流體樣本， 并且隨后將緩沖液引入所述混合流體樣本中；ii)將緩沖液引入所述樣本收 集裝置中，并且隨后引入所述流體樣本；或iii)通過將固體引入緩沖液中 來形成所述流體樣本，且隨后將所述流體樣本引入所述樣本收集裝置中，借此產(chǎn)生包含分析物涂覆顆粒的緩沖混合流體樣本；d) 將所述緩沖混合流體樣本施加到所述膜的所述施加點；e) 將所述膜維持在一定條件下，以能使流體通過毛細作用將分析物涂 覆顆粒經(jīng)由所述膜帶輸送到并通過各樣本捕捉區(qū)，借此使分析物涂覆顆粒 與所述第 一樣本捕捉區(qū)中的所述第 一樣本捕捉劑結(jié)合，并使分析物涂覆顆 粒與所述第二樣本捕捉區(qū)中的所述第二樣本捕捉劑結(jié)合；并且同時能使所 述樣本中的流體通過毛細作用將分析物涂覆顆粒經(jīng)由所述膜帶輸送到并通 過所述控制捕捉區(qū)，借此使分析物涂覆顆粒與所述控制捕捉劑結(jié)合；f) 進一步將所述膜維持在一定條件下，以能使所述樣本中的流體通過 毛細作用將未與樣本捕捉劑或所述控制捕捉劑結(jié)合的任何分析物涂覆顆粒 輸送到所述樣本捕捉區(qū)之外或所述控制捕捉區(qū)之外；g) 測定所述第一樣本捕捉區(qū)中分析物涂覆顆粒的量、所述第二樣本捕 捉區(qū)中分析物涂覆顆粒的量、和所述控制捕捉區(qū)中分析物涂覆顆粒的量；h) 由所述第一樣本捕捉區(qū)中分析物涂覆顆粒的量和所述控制捕捉區(qū)中分析物涂覆顆粒的量測定第一經(jīng)校正的分析物涂覆顆粒的量；并且由所述 第二樣本捕捉區(qū)中分析物涂覆顆粒的量和所述控制捕捉區(qū)中分析物涂覆顆粒的量測定第二經(jīng)校正的分析物涂覆顆粒的量；其中所述流體樣本中所述第一所關(guān)注分析物的量與所述第一經(jīng)校正的 分析物涂覆顆粒的量成反比關(guān)系，并且所述流體樣本中所述第二所關(guān)注分 析物的量與所述第二經(jīng)校正的分析物涂覆顆粒的量成反比關(guān)系。
55、 根據(jù)權(quán)利要求54所述的方法，其中所述樣本捕捉區(qū)和所述控制捕 捉區(qū)呈放射狀分散在所述施加點周圍。
56、 根據(jù)權(quán)利要求54所述的方法，其中所述樣本捕捉區(qū)和所述控制捕 捉區(qū)彼此相鄰并且沿流體通過毛細作用流動的方向平行定位。
57、 根據(jù)權(quán)利要求54所述的方法，其另外包含定量測量一種或一種以 上額外所關(guān)注分析物的量，其中所述膜包含針對各額外所關(guān)注分析物的額 外樣本捕捉區(qū)，各額外樣本捕捉區(qū)具有吸附于其上的樣本捕捉劑；其中分析物涂覆顆粒群另外包含涂覆于所述顆粒上的各額外所關(guān)注分析物；其中 將所述膜維持在一定條件下，以能使流體通過毛細作用將接觸的額外分析 物涂覆顆粒經(jīng)由所述膜帶輸送到并通過各樣本捕捉區(qū)，借此使接觸的額外分析物涂覆顆粒與各額外樣本捕捉區(qū)中的所述額外樣本捕捉劑結(jié)合；其中針對各所關(guān)注分析物的經(jīng)校正的分析物結(jié)合性顆粒的量是由各相應(yīng)額外樣 本捕捉區(qū)中額外分析物涂覆顆粒的量和所述控制捕捉區(qū)中分析物涂覆顆粒 的量測定，并且其中所述流體樣本中各所關(guān)注分析物的量與相應(yīng)的經(jīng)校正 的分析物涂覆顆粒的量直接相關(guān)。
58、 根據(jù)權(quán)利要求54所述的方法，其中所述兩種所關(guān)注分析物是相同 分析物。
59、 根據(jù)權(quán)利要求58所述的方法，其中將所述經(jīng)校正的分析物涂覆顆 粒的量求平均值并且所關(guān)注分析物的量與經(jīng);艮正的分析物結(jié)合顆粒的量的 平均值相關(guān)。
60、 一種定量測量流體樣本中多種所關(guān)注分析物的量的方法，其包含a) 提供固相裝置，所述裝置包含包含施加點、針對各所關(guān)注分析物的 樣本捕捉區(qū)、和控制捕捉區(qū)的膜；各樣本捕捉區(qū)具有吸附于其上的為所關(guān) 注分析物的結(jié)合配對物的樣本捕捉劑，并且所述控制捕捉區(qū)具有吸附于其 上的控制捕捉劑；其中各樣本捕捉區(qū)和所述控制捕捉區(qū)與所述施加點大致 等距；b) 提供樣本收集裝置，所述裝置含有分析物結(jié)合性顆粒群，其中各分 析物結(jié)合性顆粒群上涂有針對所關(guān)注分析物的分析物結(jié)合劑，使得對各所 關(guān)注分析物存在一個分析物結(jié)合性顆粒群；c) i)將所述流體樣本引入所述樣本收集裝置中，產(chǎn)生混合流體樣本， 并且隨后將緩沖液引入所述混合流體樣本中；ii)將緩沖液引入所述樣本收 集裝置中，并且隨后引入所述流體樣本；或iii)通過將固體引入緩沖液中 來形成所述流體樣本，且隨后將所述流體樣本引入所述樣本收集裝置中， 借此產(chǎn)生包含接觸的分析物結(jié)合性顆粒的緩沖混合流體樣本；d) 將所述緩沖混合流體樣本施加到所述膜的所述施加點；e) 將所述膜維持在一定條件下，以能使流體通過毛細作用將接觸的分 析物結(jié)合性顆粒經(jīng)由所述膜帶輸送到并通過各樣本捕捉區(qū)，借此使接觸的捕捉劑結(jié)合；并且;時能使所述樣本中的流體通過毛細作用將接觸的分析 物結(jié)合性顆粒經(jīng)由所述膜帶輸送到并通過所述控制捕"t足區(qū)，借此使接觸的 分析物結(jié)合性顆粒與所述控制捕捉劑結(jié)合；f) 進一步將所述膜維持在一定條件下，以能使所述樣本中的流體通過 毛細作用將未與樣本捕捉劑或所述控制捕捉劑結(jié)合的任何接觸的分析物結(jié) 合性顆粒輸送到所述樣本捕捉區(qū)之外或所述控制捕捉區(qū)之外；g) 測定各樣本捕捉區(qū)中接觸的分析物結(jié)合性顆粒的量和所述控制捕捉 區(qū)中接觸的分析物結(jié)合性顆粒的量；h )由所述相應(yīng)樣本捕捉區(qū)中分析物結(jié)合性顆粒的量和所述控制捕捉區(qū) 中分析物結(jié)合性顆粒的量測定針對各所關(guān)注分析物的經(jīng)校正的分析物結(jié)合性顆粒的量；其中所述流體樣本中所關(guān)注分析物的量與所述經(jīng);f交正的分析物結(jié)合性 顆粒的量直接相關(guān)。
61、 根據(jù)權(quán)利要求60所述的方法，其中所述樣本捕捉區(qū)和所述控制捕 捉區(qū)呈放射狀分散在所述施加點周圍。
62、 根據(jù)權(quán)利要求60所述的方法，其中所述樣本捕捉區(qū)和所述控制捕 捉區(qū)彼此相鄰并且沿流體通過毛細作用流動的方向平行定位。
63、 一種定量測量流體樣本中多種所關(guān)注分析物的量的方法，其包含a) 提供固相裝置，所述裝置包含包含施加點、針對各所關(guān)注分析物的 樣本捕捉區(qū)、和控制捕捉區(qū)的膜；各樣本捕捉區(qū)具有吸附于其上的為所關(guān) 注分析物的結(jié)合配對物的樣本捕捉劑，并且所述控制捕捉區(qū)具有吸附于其 上的控制捕捉劑；其中各樣本捕捉區(qū)和所述控制捕捉區(qū)與所述施加點大致 等距；b) 提供樣本收集裝置，所述裝置含有分析物結(jié)合性顆粒群，其中所述 分析物結(jié)合性顆粒群上涂有針對各所關(guān)注分析物的分析物結(jié)合劑，使得對 各所關(guān)注分析物存在分析物結(jié)合劑；c) i)將所述流體樣本引入所述樣本收集裝置中，產(chǎn)生混合流體樣本， 并且隨后將緩沖液引入所述混合流體樣本中；ii)將緩沖液引入所述樣本收 集裝置中，并且隨后引入所述流體樣本；或iii)通過將固體引入緩沖液中 來形成所述流體樣本，且隨后將所述流體樣本引入所述樣本收集裝置中， 借此產(chǎn)生包含接觸的分析物結(jié)合性顆粒的緩沖混合流體樣本；d) 將所述緩沖混合流體樣本施加到所述膜的所述施加點；e) 將所述膜維持在一定條件下，以能使流體通過毛細作用將接觸的分 析物結(jié)合性顆粒經(jīng)由所述膜帶輸送到并通過各樣本捕捉區(qū)，借此使接觸的捕捉劑結(jié)合；并且同時能使所述樣本中的流體通過毛細作用將接觸的分析 物結(jié)合性顆粒經(jīng)由所述膜帶輸送到并通過所述控制捕捉區(qū)，借此使接觸的 分析物結(jié)合性顆粒與所述控制捕捉劑結(jié)合；f) 進一步將所述膜維持在一定條件下，以能使所述樣本中的流體通過 毛細作用將未與樣本捕捉劑或所述控制捕捉劑結(jié)合的任何接觸的分析物結(jié) 合性顆粒輸送到所述樣本捕捉區(qū)之外或所述控制捕捉區(qū)之外；g) 測定各樣本捕捉區(qū)中接觸的分析物結(jié)合性顆粒的量和所述控制捕捉 區(qū)中接觸的分析物結(jié)合性顆粒的量；h) 由所述相應(yīng)樣本捕捉區(qū)中分析物結(jié)合性顆粒的量和所述控制捕捉區(qū)中分析物結(jié)合性顆粒的量測定針對各所關(guān)注分析物的經(jīng)校正的分析物結(jié)合性顆粒的量；其中所述流體樣本中所關(guān)注分析物的量與所述經(jīng)校正的分析物結(jié)合性 顆粒的量直接相關(guān)。
64、 根據(jù)權(quán)利要求63所述的方法，其中所述樣本捕捉區(qū)和所述控制捕 捉區(qū)呈放射狀分散在所述施加點周圍。
65、 根據(jù)權(quán)利要求63所述的方法，其中所述樣本捕捉區(qū)和所述控制捕 捉區(qū)彼此相鄰并且沿流體通過毛細作用流動的方向平行定位。
66、 一種定量測量流體樣本中多種所關(guān)注分析物的量的方法，其包含a) 提供固相裝置，所述裝置包含包含施加點、針對各所關(guān)注分析物的 樣本捕捉區(qū)、和控制捕捉區(qū)的膜；各樣本捕捉區(qū)具有吸附于其上的作為所 關(guān)注分析物的結(jié)合配對物的樣本捕捉劑，并且所述控制捕捉區(qū)具有吸附于 其上的控制捕捉劑；其中各樣本捕捉區(qū)和所述控制捕捉區(qū)與所述施加點大 致等距；b) 提供樣本收集裝置，所述裝置含有分析物涂覆顆粒群，其中各分析 物涂覆顆粒群上涂有所關(guān)注分析物或所關(guān)注分析物的類似物，使得對各所 關(guān)注分析物存在一個分析物涂覆顆粒群；c) i)將所述流體樣本引入所述樣本收集裝置中，產(chǎn)生混合流體樣本， 并且隨后將緩沖液引入所述混合流體樣本中；ii)將緩沖液引入所述樣本收 集裝置中，并且隨后引入所述流體樣本；或iii)通過將固體引入緩沖液中 來形成所述流體樣本，且隨后將所述流體樣本引入所述樣本收集裝置中， 借此產(chǎn)生包含分析物涂覆顆粒的緩沖混合流體樣本；d) 將所述緩沖混合流體樣本施加到所述膜的所述施加點；e) 將所述膜維持在一定條件下，以能使流體通過毛細作用將分析物涂 覆顆粒經(jīng)由所述膜帶輸送到并通過各樣本捕捉區(qū)，借此使分析物涂覆顆粒 與針對各所關(guān)注分析物的所述樣本捕捉區(qū)中的所述樣本捕捉劑結(jié)合；并且 同時能使所述樣本中的流體通過毛細作用將分析物涂覆顆粒經(jīng)由所述膜帶 輸送到并通過所述控制捕捉區(qū)，借此使分析物涂覆顆粒與所述控制捕捉劑 結(jié)合；f) 進一步將所述膜維持在一定條件下，以能使所述樣本中的流體通過 毛細作用將未與樣本捕捉劑或所述控制捕捉劑結(jié)合的任何分析物涂覆顆粒 輸送到所述樣本捕捉區(qū)之外或所述控制捕捉區(qū)之外；g) 測定各樣本捕捉區(qū)中分析物涂覆顆粒的量和所述控制捕捉區(qū)中分析 物涂覆顆粒的量；h) 由所述相應(yīng)樣本捕捉區(qū)中分析物涂覆顆粒的量和所述控制捕捉區(qū)中 分析物涂覆顆粒的量測定針對各所關(guān)注分析物的經(jīng)校正的分析物涂覆顆粒的量；其中所述流體樣本中所關(guān)注分析物的量與所述經(jīng)校正的分析物涂覆顆 粒的量成反比關(guān)系。
67、 根據(jù)權(quán)利要求66所述的方法，其中所述樣本捕捉區(qū)和所述控制捕 捉區(qū)呈放射狀分散在所述施加點周圍。
68、 根據(jù)權(quán)利要求66所述的方法，其中所述樣本捕捉區(qū)和所述控制捕 捉區(qū)彼此相鄰并且沿流體通過毛細作用流動的方向平4亍定位。
69、 一種定量測量流體樣本中多種所關(guān)注分析物的量的方法，其包含a) 提供固相裝置，所述裝置包含包含施加點、針對各所關(guān)注分析物的 樣本捕捉區(qū)、和控制捕捉區(qū)的膜；各樣本捕捉區(qū)具有吸附于其上的為所關(guān) 注分析物的結(jié)合配對物的樣本捕捉劑，并且所述控制捕捉區(qū)具有吸附于其 上的控制捕捉劑；其中各樣本捕捉區(qū)和所述控制捕捉區(qū)與所述施加點大致 等距；b) 提供樣本收集裝置，所述裝置含有分析物涂覆顆粒群，其中對于各 所關(guān)注分析物，所述分析物涂覆顆粒群上涂有所關(guān)注分析物或所關(guān)注分析 物的類似物，使得對各所關(guān)注分析物存在分析物或分析物類似物；c) i)將所述流體樣本引入所述樣本收集裝置中，產(chǎn)生混合流體樣本， 并且隨后將緩沖液引入所述混合流體樣本中；ii)將緩沖液引入所述樣本收 集裝置中，并且隨后引入所述流體樣本；或iii)通過將固體引入緩沖液中 來形成所述流體樣本，且隨后將所述流體樣本引入所述樣本收集裝置中， 借此產(chǎn)生包含分析物涂覆顆粒的緩沖混合流體樣本；d) 將所述緩沖混合流體樣本施加到所述膜的所述施加點；e) 將所述膜維持在一定條件下，以能使流體通過毛細作用將分析物涂 覆顆粒經(jīng)由所述膜帶輸送到并通過各樣本捕捉區(qū)，借此使分析物涂覆顆粒 與針對各所關(guān)注分析物的所述樣本捕捉區(qū)中的所述樣本捕捉劑結(jié)合；并且 同時能使所述樣本中的流體通過毛細作用將分析物涂覆顆粒經(jīng)由所述膜帶 輸送到并通過所述控制捕捉區(qū)，借此使分析物涂覆顆粒與所述控制捕捉劑 結(jié)合；f) 進一步將所述膜維持在一定條件下，以能使所述樣本中的流體通過 毛細作用將未與樣本捕捉劑或所述控制捕捉劑結(jié)合的任何分析物涂覆顆粒 輸送到所述樣本捕捉區(qū)之外或所述控制捕捉區(qū)之外；g) 測定各樣本捕捉區(qū)中分析物涂覆顆粒的量和所述控制捕捉區(qū)中分析 物涂覆顆粒的量；h) 由所述相應(yīng)樣本捕捉區(qū)中分析物涂覆顆粒的量和所述控制捕捉區(qū)中 分析物涂覆顆粒的量測定針對各所關(guān)注分析物的經(jīng)校正的分析物涂覆顆粒 的量；其中所述流體樣本中所關(guān)注分析物的量與所述經(jīng)校正的分析物結(jié)合顆 粒的量成反比關(guān)系。
70、 根據(jù)權(quán)利要求69所述的方法，其中所述樣本捕捉區(qū)和所述控制捕 捉區(qū)呈放射狀分散在所述施加點周圍。
71、 根據(jù)權(quán)利要求69所述的方法，其中所述樣本捕捉區(qū)和所述控制捕 捉區(qū)^皮此相鄰并且沿流體通過毛細作用流動的方向平行定位。
全文摘要
本發(fā)明揭示定量測量流體樣本中一種或一種以上所關(guān)注分析物的量的方法和適用于所述方法的套組。所述方法包括提供固相裝置，所述裝置包含具有施加點、樣本捕捉區(qū)、和控制捕捉區(qū)的膜，其中所述樣本捕捉區(qū)和所述控制捕捉區(qū)與所述施加點大致等距；和提供樣本收集裝置，所述裝置包含一個或一個以上分析物結(jié)合性顆粒群。在所述分析中，將流體樣本引入所述樣本收集裝置中，并且將所得混合物施加到所述膜施加點。所述流體能夠通過毛細作用將所述分析的組分輸送到并通過所述樣本捕捉區(qū)和所述控制捕捉區(qū)。所述流體樣本中各所關(guān)注分析物的量與經(jīng)校正的顆粒量相關(guān)(例如，直接相關(guān)或成反比)，所述經(jīng)校正的顆粒量可(例如)以相應(yīng)樣本捕捉區(qū)中的顆粒量與所述控制捕捉區(qū)中的顆粒量的比率測定。
文檔編號G01N33/558GK101300490SQ200680034491
公開日2008年11月5日 申請日期2006年8月17日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月23日
發(fā)明者保羅·C·哈利斯, 布萊恩·G·理查斯 申請人:反應(yīng)生醫(yī)公司