專利名稱：：毛細管的制作方法毛細管
技術領域：
和
背景技術：
：本領域技術人員了解對于容器為了實時聚合酶鏈反應(rtPCR)之用的最優(yōu)化，需要考慮幾個方面。對于像這樣的PCR，重要的是需要提供通過容器壁的快速和均勻的熱傳遞。這個熱傳遞參數與容器的壁厚度和表面積與體積比成比例。因此，薄的毛細管優(yōu)選作為PCR容器。這個后果的缺點是隨著PCR體積漸增，需要更長的毛細管，并且此種長毛細管對此種容器的材料和生產過程提出高要求。根據現(xiàn)有技術，用于rtPCR應用的塑料以及玻璃毛細管是已知的。本領域技術人員將認識到用于rtPCR應用的毛細管應具有高表面積與體積比和薄壁，以提供良好的熱傳遞性質，從而使得快速和準確的熱循環(huán)是可能的。對于更高的表面積與體積比，玻璃毛細管是優(yōu)選的，因為就容器的壁的厚度和長度而言，塑料設備的注射模塑限度在玻璃容器的限度之下。玻璃毛細管的缺點是與使用塑料的注射模塑相比較的高材料和生產成本。商購可得的玻璃毛細管具有例如20iU的反應體積，其基于長度約17mm的反應單元，外徑1.55mm和壁厚度0.175mm(RocheDiagnosticsGmbH，Cat.Nr.04929292001)。此外，具有100ill反應體積的玻璃毛細管也是可用的(RocheDiagnosticsGmbH，Cat.Nr.03337090001)。如果此種毛細管尺度預期使用注射模塑技術產生，那么人們將面對幾個基本問題。在模塑技術(本申請自始至終指定為1步模塑)現(xiàn)有技術中，在高壓下將熔化的塑料塊注射在核和模之間形成的腔內，以獲得在一個末端處封閉的腔(WO2004/054715)。如果預期具有薄壁和小直徑的較長毛細管，那么需要對付至少下述基本障礙由于熔化塊的高壓和模的小不準確性，在模的薄核處發(fā)生大剪切力，從而導致所述核的偏斜和模腔的不均勻填充(壁位移)。模的這種不均勻填充導致核力的不均衡增加(由于熔化塊前進流的自供能作用)。對于rtPCR所需的透明材料(例如COC或PC)，脫氣是重要的，以避免氣泡的包埋，并且隨著毛細管的漸增長度，所述脫氣變得成問題。這個基本障礙的后果是至少下述模腔的不均勻填充導致毛細管的不均勻壁厚度分布，并且這在PCR的溫度循環(huán)過程中提供不均勻的熱膨脹。對于rtPCR，容器的這種變形將影響容器熒光的光學讀數，并且此種容器不再合適。在PCR循環(huán)升高的溫度的過程中，在模塑的毛細管內的冷凍張力預期將松弛，從而引起偏斜且因此影響光學讀數。通過具有壁厚度分布的壁的熱輸入將是不均勻的，從而影響混合物的反應動力學。包埋的氣泡將影響用于rtPCR應用的光學信息的檢測。概括來說，由于核的不足穩(wěn)定性，具有足夠質量用于rtPCR應用的在一個末端處封閉的薄壁設備的1步模塑產生就長度和直徑而言受限制。WO2004/054715描述了具有薄至0.01mm的壁厚度、小至0.02mm的內徑和長至50mm的長度的1步模塑塑料毛細管，但未提供可產生所述最小值的實驗數據，任何所述塑料毛細管也不適合于rtPCR應用。商購可得的是具有下述尺度的塑料毛細管RocheDiagnostics提供了具有20反應體積的塑料毛細管(Id.nr.04924738001)。所述毛細管對于20y1反應體積具有0.3mm的壁厚度，1.7mm內徑和約8mm的反應單元長度。從OsmetechMolecularDiagnostics也可獲得具有20u1反應體積的塑料毛細管(SensiTube)。所述毛細管對于20反應體積具有0.3mm壁厚度、1.5mm內徑和約llmm的反應單元長度。其他塑料毛細管可從Eurogentech、Eliod和Genaxxon獲得?；诂F(xiàn)有技術的缺點，本發(fā)明的目的是提供新模塑技術，以產生高質量毛細管用于靈敏的rtPCR應用，所述模塑技術使得能夠生產適合于rtPCR應用的更薄和更長的塑料毛細管。
發(fā)明內容本發(fā)明提供了適合于rtPCR應用的具有最優(yōu)化體積與表面積比的塑料毛細管。此外，本發(fā)明提供了用于生產所述rtPCR塑料毛細管的新方法。本發(fā)明的一個方面是由塑料材料制成的用于實時核酸擴增的反應容器，其包括a)在一個末端處封閉的毛細管部件，b)在兩個末端處開放的管形部件，禾口c)在所述毛細管部件和所述管形部件之間的連接，其中所述連接是設計為使所述毛細管部件的開放末端和所述管形部件的所述開放末端之一永久連接的融合接頭，從而形成具有一個開口的反應容器，所述融合接頭在光照后產生光散射。本發(fā)明的另一個方面是生產根據本發(fā)明的反應容器的注射模塑方法，所述方法包括a)提供具有核的第一個模，b)執(zhí)行第一個注射步驟，以產生所述反應容器的管形部件，所述管形部件部分圍繞所述核，c)將由所述管形部件部分圍繞的所述核放置在第二個模中，禾口d)執(zhí)行第二個注射步驟，以產生所述反應容器的毛細管部件，其中在所述第二個注射步驟過程中，所述毛細管部件變得與所述管形部件永久連接，以形成具有一個開口的所述反應容器。在根據本發(fā)明的生產方法的第一個步驟過程中，核最初由在核的2個側面上的導板穩(wěn)定，同時用熔化塑料部分包被?；诤说?個側面上的所述導板，核在第一個注射步驟過程中抵抗熔化塊的壓力，并且在周圍腔內保持同心。由塑料部分圍繞的核隨后放置到第二個腔內，從而使得在第一個注射步驟過程中粘在導板中的核的尖端在第二個注射步驟過程中變得由熔化塑料圍繞?；谶@種2步生產方法，可以獲得具有均勻厚度分布的薄壁的在一個末端處封閉的毛細管，其在rtPCR領域中具有重要性(無壁位移，在溫度循環(huán)過程中無變形，無包埋的氣泡)。此外，2步生產方法使得模能夠在2個注射步驟過程中容易脫氣，從而使得可以避免在塑料材料中形成氣泡。根據本發(fā)明的2步生產方法不僅提供生產具有薄壁的長毛細管的可能性，而且還以高精確度生產它們，所述精確度足以使它們應用于高靈敏度的rtPCR應用。對于rtPCR應用，最重要的是毛細管在溫度循環(huán)過程中不變形，通過毛細管壁的熱傳遞是均勻的，并且無氣泡包埋在毛細管壁中。關于溫度變形的需求對于這樣的毛細管甚至更高，所述毛細管應在應用毛細管的旋轉運動的rtPCR機器中使用，以使它們放置在檢測位置內(例如RocheDiagnosticsGmbH的LightCycler⑧裝置)。此處，除熱應力外，還需要平衡離心力。如果不可避免毛細管的此種變形，那么就檢測光學器件而言的位置在不同毛細管之間將不同，并且所述毛細管的可比性不再得到保證。發(fā)明詳述本發(fā)明的一個方面是由塑料材料制成的用于實時核酸擴增的反應容器，其包括a)在一個末端處封閉的毛細管部件，b)在兩個末端處開放的管形部件，禾口c)在所述毛細管部件和所述管形部件之間的連接，其中所述連接是設計為使所述毛細管部件的開放末端和所述管形部件的所述開放末端之一永久連接的融合接頭，從而形成具有一個開口的反應容器，所述融合接頭在光照后產生光散射。根據本發(fā)明的反應容器經由連接由2個部件裝配，其中在2個部件之間的所述連接通過熱確立，所述熱足以熔化在界面處的所述部件，并且連接在所述界面的后續(xù)冷卻過程中形成。在界面的后續(xù)冷卻過程中形成的所述連接在本發(fā)明自始至終稱為融合接頭。從毛細管部件、管形部件和作為2個部件之間的連接的融合接頭裝配反應容器具有下述優(yōu)點所述反應容器的生產可以分成子步驟。這提供生產具有特定幾何尺寸和/或特定質量的反應容器的機會，所述反應容器無法通過1步生產獲得，因為對于作為最終反應容器的部分的每個部件，所需尺寸和/或質量更容易滿足。換言之，作為反應容器的2個部件之間的連接的融合接頭提供了例如增強質量、減少壁厚度和/或增加容器長度的可能性。在根據本發(fā)明的優(yōu)選反應容器中，所述連接、所述毛細管部件和所述管形部件由相同塑料材料制成。優(yōu)選2個部件和連接由相同材料制備，從而使得整個反應容器的光學性質盡可能均勻。然而，即使用相同材料，也將存在在部件之間的界面處具有不同光學性質的特定區(qū)域(參見圖5的照片)，在界面處在光學性質中的所述差異基于連接材料的不同形態(tài)學結構。如前文提及的，本發(fā)明自始至終的連接通過熱形成，以局部熔化在2個部件之間的界面。如本領域技術人員將認識到的，塑料的分子結構高度依賴生產程序。本發(fā)明自始至終的短語分子結構用作描述分子排列以形成三維結構(換言之，材料的形態(tài)學或物理結構)的術語，且因此，具有相同分子組成的材料仍可以形成不同分子結構。因此，就其分子排列而言，連接的塑料將不同于反應容器的其余部件，因為界面的短暫、局部熔化產生融合接頭將導致與例如基于來自均勻模的受控冷卻的結構相比較不同的形態(tài)學結構。在根據本發(fā)明的反應容器的優(yōu)選配置中，毛細管部件以及管形部件是注射模塑的物品。為了生產作為連接的融合接頭，允許在第二個生產步驟中形成所述毛細管部件所需的熔化塑料接觸預形成的管形部件，從而短暫熔化管形部件的邊界且在模冷卻過程中產生2個部件之間的融合接頭。在根據本發(fā)明的另一個優(yōu)選反應容器中，所述連接的材料具有與所述毛細管部件和所述管形部件的材料不同的分子結構。塑料材料的分子結構內的此種變化構成將產生光散射的光學界面。因此，優(yōu)選反應容器的所述連接在對核酸擴增的實時檢測具有最低限度作用的位置處提供。圖5中根據本發(fā)明的反應容器的照片(用標準數碼相機獲得)顯示沿著容器的融合接頭的光散射，并且因此，這是使毛細管部件與管形部件永久連接的融合接頭的固有性質，以在光照后產生光散射。在根據本發(fā)明的另外一個優(yōu)選反應容器中，所述毛細管部件和所述管形部件是注射模塑的物品。用于毛細管部件和管形部件的注射模塑的物品是優(yōu)選的，主要是因為在2個部件之間形成連接是生產過程的直接結果。如果反應容器的2個部件相繼產生，并且第二個部件與第一個部件接觸直接模塑，那么第二個部件的熔化塑料將局部熔化第一個部件的塑料且在冷卻后形成連接。在根據本發(fā)明的更優(yōu)選的反應容器中，所述毛細管部件具有0.2-0.4mm的壁厚度。在根據本發(fā)明的另一個更優(yōu)選的反應容器中，所述毛細管部件具有0.7-2mm的內徑。主要地，存在需要最優(yōu)化以獲得適合于實時核酸擴增的反應容器的2個幾何參數，即壁厚度和表面積與體積比。核酸擴增要求在靶溶液內精確的溫度線圖，并且因此，必須通過反應容器的壁以2個方向快速傳遞熱。因此，顯而易見的是壁厚度對于設計所述反應容器具有重要性。此外，熱傳遞與界面的表面積成比例，并且用于反應容器內的熱平衡的時間與反應體積成比例增加。因此，本領域技術人員將認識到反應容器應具有大表面積與體積比。就用于PCR的反應容器而言，理想的幾何學是長且薄的毛細管。在根據本發(fā)明的另外一個優(yōu)選反應容器中，在與所述毛細管部件的開放末端永久連接的開口處，所述管形部件具有與所述毛細管部件相同的壁厚度和相同的內徑。盡管根據本發(fā)明的反應容器包含永久連接在一起的2個部件，但反應容器盡可能均勻是必要的。因此，優(yōu)選調整2個部件的壁厚度，從而使得反應容器至少在反應單元內不顯示梯級，其中此種梯級將產生另外的光散射。在本發(fā)明自始至終，反應單元定義為將用預期用于反應容器的試劑填充的反應容器部分。此外，在本發(fā)明自始至終，該反應單元的幾何學與反應容器的性能相關，并且因此對于容器的這個部分計算表面積與體積(S/V)比。就毛細管而言反應容器的表面積與體積比僅依賴于容器的內和外半徑(!^和6r。ut)，并且不依賴于其長度1(S/V=2r。utl/rin2l=2r。ut/rin2;忽略毛細管底部的小表面積)。因此，如果應增加毛細管的體積而不影響S/V比，那么必須增加毛細管的長度而不改變其半徑。在根據本發(fā)明的另外一個優(yōu)選反應容器中，所述管形部件具有有不同直徑的部分。在根據本發(fā)明的另一個優(yōu)選反應容器中，所述毛細管部件具有有不同直徑的部分。在根據本發(fā)明的另外一個優(yōu)選反應容器中，在不與所述毛細管部件連接的開口處所述管形部件的直徑大于在與所述毛細管部件永久連接的開口處的直徑。在根據本發(fā)明的另外一個優(yōu)選反應容器中，在與所述管形部件連接的開口處所述毛細管部件的直徑大于朝向所述毛細管部件的封閉末端的直徑。提供具有大開口和朝向其封閉末端漸減的直徑的反應容器具有幾個優(yōu)點。首先，這個幾何學簡化反應容器由試劑的裝載。此外，在使用模塑技術用于生產反應容器的情況下，這個幾何學使得能夠從模的核處容易取出容器。在根據本發(fā)明的另一個優(yōu)選反應容器中，在不與毛細管部件連接的開口處所述管形部件的內徑是2-10mm。在反應容器的開口處的所述內徑需要對于預期應用進行調整。例如，如果所述反應容器設計為用于自動化實時PCR擴增的容器，那么這個內徑需要關于預期使用的PCR機器的容納裝置進行調整。在根據本發(fā)明的另外一個優(yōu)選反應容器中，這樣設計不與所述毛細管部件連接的所述管形部件的所述開口，從而使得可獲得具有關閉工具的氣密密封。在本發(fā)明自始至終，優(yōu)選反應容器具有僅構成整個反應容器的部分的反應單元。所述反應單元放置在反應容器的封閉末端處，并且優(yōu)選所述反應單元由整個毛細管部件，和需要時管形部件的部分組成。依賴于毛細管的設計，毛細管部件和管形部件之間的連接可以是反應單元的部分。如前文提及的，反應容器的連接具有與容器的毛細管以及管形部件不同的分子結構，并且因此，所述連接將產生特定量的光散射?；谶@個推理，將優(yōu)選這樣設計反應容器，從而使得連接不在反應單元內。但是，如后文就根據本發(fā)明的方法而言討論的，毛細管部件的質量在一定程度上也依賴于其長度。概括來說，可以優(yōu)選設計具有短毛細管部件的反應容器，即使連接隨后在反應單元內。在根據本發(fā)明的另外一個優(yōu)選反應容器中，所述管形部件具有有不同壁厚度的部分。與毛細管部件的壁厚度形成對照，無需使管形部件的壁厚度在其整個程度上降到最低，因為僅管形部件的至少部分也是反應單元的部分，并且僅反應單元的壁厚度影響容器性能。因此，可以擴大并非反應單元部分的管形部件的壁厚度，以對反應容器提供穩(wěn)定性，以提供使得能夠氣密密封的合適的開口，或提供在分析設備內的安全固定。類似于就壁厚度而言的上述討論，反應容器涉及長度和體積的要求可以分為對于容器性能關鍵或不關鍵的要求。反應單元的長度和體積對于反應容器的性能是重要的，因為這些參數定義表面積與體積比。另一方面，整個反應容器的總體體積和長度不影響性能，但對于諸如穩(wěn)定性、用于特定分析儀的適合性或用試劑填充方面具有關聯(lián)性。在根據本發(fā)明的另外一個優(yōu)選反應容器中，所述反應容器具有30-55mm的長度。在根據本發(fā)明的另外一個優(yōu)選反應容器中，所述反應容器在其封閉末端處具有有恒定壁厚度的反應單元，所述反應單元具有10-30ill的體積。在根據本發(fā)明的更優(yōu)選的反應容器中，所述反應單元具有10-30mm的長度。如前文提及的，反應單元的長度是反應容器優(yōu)選的幾何參數，以限定容器體積而不影響S/V比。在根據本發(fā)明的反應容器的另一個優(yōu)選實施方案中，至少反應單元不是圓柱狀的。但即使在這個實施方案中，也優(yōu)選壁厚度對于整個反應單元是恒定的。在根據本發(fā)明的優(yōu)選反應容器中，所述反應單元是圓錐形反應單元。在根據本發(fā)明的更優(yōu)選的反應容器中，所述圓錐形反應單元具有0.5。-2°的錐角。如前文就反應容器而言提及的，如果容器使用模塑技術產生，那么反應單元的圓錐形狀是特別優(yōu)選的，因為這個特別形狀增強容器從模的核處的取出。在根據本發(fā)明的另一個優(yōu)選反應容器中，所述反應單元具有l(wèi)-15mm1的表面積與體積比。在根據本發(fā)明的另外一個優(yōu)選反應容器中，所述塑料材料是環(huán)烯烴共聚物(COC)、環(huán)烯烴聚合物(COP)或聚碳酸酯(PC)?！愣?，適合于根據本發(fā)明的反應容器的塑料材料必須使非常高水平的光透射與在PCR循環(huán)的熱條件下良好的熱穩(wěn)定性組合。就上文提及的優(yōu)選材料而言，COC和COP提供非常好的穩(wěn)定性。此外，COC顯示低水平的自身熒光，而所述自身熒光當然是對于基于熒光檢測的rtPCR關鍵的參數。特定COP材料在加工過程中需要氮作為覆蓋氣體，以避免材料的脫色。PC具有便宜的材料價格，并且因此，它在經濟上是有利的。COP具有非常好的技術性質，但它相對高定價。合適的材料是例如COC材料Topas5013S、PC材料MakrolonCD2005或COP材料Zeonex690R。本發(fā)明的另一個方面是生產根據本發(fā)明的反應容器的注射模塑方法，所述方法包括a)提供具有核的第一個模，b)執(zhí)行第一個注射步驟，以產生所述反應容器的管形部件，所述管形部件部分圍繞所述核，c)將由所述管形部件部分圍繞的所述核放置在第二個模中，禾口d)執(zhí)行第二個注射步驟，以產生所述反應容器的毛細管部件，其中在所述第二個注射步驟過程中，所述毛細管部件變得與所述管形部件永久連接，以形成具有一個開口的所述反應容器。在第一個注射步驟過程中，熔化塑料的流動方向優(yōu)選與核平行。這個流動方向推動與核平行的在模內的空氣朝向脫氣點且避免氣泡的封入。在根據本發(fā)明的優(yōu)選方法中，所述核在所述第一個注射步驟b)過程中在兩個末8端處固定。在根據本發(fā)明方法的這個優(yōu)選實施方案中，所述核這樣排列，從而使得核的2個部分固定，以確保核在熔化塊的流動場內的穩(wěn)定定位。核的這種固定使得能夠增加可生產的反應容器長度。在根據本發(fā)明的更優(yōu)選的方法中，所述核在其第一個末端處懸浮，并且所述核的第二個末端形狀上配合(form-fits)到所述第一個模的凹進內，從而使得具有2個開放末端的管形部件在所述核周圍形成。優(yōu)選熔化塑料在形成反應容器開口的懸浮部分處開始在形成反應容器的毛細管部件的核固定部分的方向上沿著核流動。因此，脫氣在核和所述核的凹進固定之間的界面處發(fā)生。在根據本發(fā)明的另外一個優(yōu)選方法中，所述第一個注射步驟使用至少2個注射口來執(zhí)行。由于用于第一個注射步驟的2個注射口的使用，可以達到在毛細管長度中的另外增加。這基于通過2個注射口產生的熔化塊的2個不同流動場及其剪切力的至少部分平衡。這與僅基于一個注射口的注射技術現(xiàn)有技術形成對照，其中負剪切力的平衡僅可以通過模溫度和注射壓力進行嘗試。優(yōu)選通過2個注射口的塊流動是相等的，從而使得在反應容器內的張力降到最低，并且提供與核平行的均勻流動場。對于后續(xù)加工步驟，仍由管形部件圍繞的第一個注射步驟的核用作用于第二個注射步驟的模的核。在根據本發(fā)明的更優(yōu)選的方法中，在步驟d)中，從步驟b)中形成的管形部件伸出的所述核的所述第二個末端放置在所述第二個模內，以在所述第二個注射步驟過程中形成毛細管部件，所述毛細管部件由于所述管形部件的局部熔化與所述管形部件連接。在第二個注射步驟過程中，熔化塑料的流動方向優(yōu)選與核垂直，并且脫氣再次在第一個注射步驟過程中產生的核和管形部件之間的界面處發(fā)生。這個脫氣程序圍繞核推動空氣，并且基于最優(yōu)化流動概況可能避免在毛細管部件的光學敏感區(qū)域中的脫氣。在根據本發(fā)明的另外一個優(yōu)選方法中，所述第二個注射步驟使用一個注射口來執(zhí)行。對于產生反應容器的毛細管部件的第二個注射步驟，由于幾個方面僅用一個注射口執(zhí)行模塑是合適的。對于毛細管部件的生產，不再可能如對于第一個注射步驟那樣固定核的2側。因此，優(yōu)選設計具有小毛細管部件的反應容器，因為對于長的毛細管部件，核的自由末端易受在流動場中變形的影響，從而使遭受產生不均勻容器的危險。因為至少與管形部件相比較，毛細管部件是小的，僅需要少量熔化塑料，所以即使用一個注射口也可以滿足關于這個注射步驟的要求。此外，整個毛細管部件在反應單元內，并且因此，同質性是容器的光學性質所必需的。因此，優(yōu)選僅具有一個注射口，因為每個注射口將產生在最終產品內具有不均勻性的區(qū)域。這個陳述還適用于脫氣口，并且因此，優(yōu)選使脫氣安排在毛細管和管形部件之間的界面處，所述界面給容器的連接提供無法避免的不均勻性。在根據本發(fā)明的優(yōu)選方法中，具有240-290°C溫度的熔化塑料用于所述第一個注射步驟。就注射溫度而言，需要考慮2個方面。一方面，高溫減少熔化塑料的粘性并且促進填充，但另一方面，在更高的溫度下，材料可能變成黃色，這影響光透射。因此，熔化塑料在注射前的溫度不應超過290°C。此外，過熱的材料可能變脆。在根據本發(fā)明的另一個優(yōu)選方法中，熔化塑料以600-1000巴的壓力注射用于所述第一個注射步驟。在本發(fā)明自始至終，高注射壓力是優(yōu)選的，以快速填充腔，從而使得所述核的偏斜可以降到最低。在根據本發(fā)明的更優(yōu)選的方法中，用于所述第一次注射的壓力是800巴。在根據本發(fā)明的另外一個優(yōu)選方法中，具有240-290°C的溫度的熔化塑料用于所述第二個注射步驟。在根據本發(fā)明的另外一個優(yōu)選方法中，熔化塑料以200-400巴的壓力注射用于所述第二個注射步驟。在根據本發(fā)明的更優(yōu)選的方法中，用于所述第一次注射的壓力是300巴。提供下述實施例和圖以幫助理解本發(fā)明，本發(fā)明的真實范圍在附加權利要求中闡述。應當理解可以在所述程序中進行修飾而不背離本發(fā)明的精神。圖1舉例說明2步塑料毛細管的一個實施方案的示意圖。圖2舉例說明2步塑料毛細管的生產方法的橫斷面視圖。圖3用于HybProbeCycA擴增的rtPCR曲線(a:640nm塑料;b:640nm玻璃;c:MO/MOnm塑料；d:640/530nm玻璃)。圖4用于SYBRGreenIPBGD擴增的rtPCR曲線和解鏈曲線(a:塑料rtPCR;b:塑料TM;c:玻璃rtPCR;d:玻璃TM)。圖5包含在毛細管部件和管形部件之間的連接的毛細管部分的照片。具體實施例方式用于下述實施例的根據本發(fā)明的塑料毛細管具有下述特征毛細管部件的壁厚度0.3mm毛細管部件的內徑1.09mm反應容器長度42mm在不與毛細管部件連接的開口處的管形部件內徑3.98mm反應單元體積20ill反應單元長度19.26mm圓錐形反應單元的錐角1°實施例1:具有HybProbe-形式的CycA在這個實驗中，根據本發(fā)明的塑料毛細管(20iU)與玻璃毛細管(20iU，Id.Nr.ll909339001，批次3529565-00，Roche)就CycA的rtPCR擴增進行比較，其中使用用于RNA的HybProbe形式，使用LightCycler(Roche，Software-Version:LCS44.0.5.415)。塑料毛細管使用C0CTopas5013進行生產。PCR根據下述程序執(zhí)行試劑盒:LightCyclerRNAAmplificationKitHybProbe，IdNr.12015145001，批次13419720引物/探針正向引物CycA:SEQIDNO:1反向引物CycA:SEQIDNO:23'熒光素探針CycA:GGCCATGGAGCGCTTTGGGT-熒光素(SEQIDNO:3)5'Red640探針CycA:Red640—AATGGCAAGACCAGCAAGAAGATCAC(SEQIDNO:4)模板-UniversalHumanReferenceRNA(Stratagene目錄號740000-41，具有濃度20、2ng/iil、200、20、2pg/ii1的批次1139623)主混合物<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>運行規(guī)程18ill主混合物/毛細管加2illRNA(3倍)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>玻璃毛細管相比較，關于塑料毛細管的PCR曲線看起來相似，并且標準差甚至更低。實施例2:具有SYBRGreenI形式的PBGD在這個實驗中，根據本發(fā)明的塑料毛細管(20iU)與玻璃毛細管(20iU，Id.Nr.11909339001，批次3529565-00，Roche)就PBGD的rtPCR擴增進行比較，其中使用用于DNA的SYBRGreenI形式，使用LightCycler(Roche，Software-Version:LCS44.0.5.415)。塑料毛細管使用C0CTopas5013進行生產。PCR根據下述程序執(zhí)行試劑盒LightCycler-FastStartDNAMasterPLUSSYBRGreenI，IdNr.03515885001，批次13828500引物根據'LightCyclerh-PBGDHouseke印ingGeneSet，(目錄號03146073001，Roche)模板cDNA合成使用RT-PCR的第1鏈cDNA合成試劑盒('lststrandcDNASynthesisKitforRT-PCR，)(目錄號11483188001，Roche)來執(zhí)行主混合物20xH20240PBGDfor/rev[各5uM]40SGIMaster，5x80總計360u1運行規(guī)程18ill主混合物/毛細管加2illRNA(3倍)循環(huán)分析溫度時間速率采集變性lx95°C10分鐘2(TC/s用于玻璃毛細管rc/s用于塑料毛細管擴增45x定量95°C10秒2(TC/s用于玻璃毛細管rc/s用于塑料毛細管58°C10秒20°C/s72°C15秒20°C/s單次13<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>分析Cp值<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>分析解鏈曲線<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>SYBRGreenI作為檢測形式使用根據本發(fā)明的塑料毛細管工作非常好。PCR曲線是良好形成的，并且與玻璃毛細管相比較，塑料毛細管的Cp值甚至更低。2種毛細管的標準差是可比較的。解鏈曲線是相似的，具有良好的標準差。序列表〈110>F.Hoffmann_LaRocheAG〈120〉毛細管〈130>25478〈150>08020060.3〈151>2008-11-18:0172]<160>4:0173]〈170>PatentInversion3.5:0174]〈210〉1:0175]〈211〉18:0176]〈212〉DNA:0177]〈213>人工的:0178]〈220〉:0179]〈223〉人工DNA，正向引物CycA:0180]〈400〉1:0181]ggccgcgtctcctttgag18:0182]〈210>2:0183]〈211>23:0184]〈212〉DNA:0185]〈213〉人工的:0186]<220>:0187]〈223〉人工DNA，反向引物CycA:0188]〈400〉2:0189]cgagttgtccacagtcagcaatg23:0190]〈210〉3:0191]〈211>20:0192]〈212>DNA:0193]〈213〉人工的:0194]〈220〉:0195]〈223〉人工DNA，3'熒光素探針CycA:0196]〈400>3:0197]ggccatggagcgctttgggt20:0198]〈210〉4〈211〉26<212>DNA〈213〉人工的〈220〉〈223〉人工DNA，5'Red640探針CycA〈400〉4朋tggc朋g3ccagc朋g朋gatcac261權利要求一種由塑料材料制成的用于實時核酸擴增的反應容器，其包括a)在一個末端處封閉的毛細管部件，b)在兩個末端處開放的管形部件，和c)在所述毛細管部件和所述管形部件之間的連接，其中所述連接是設計為使所述毛細管部件的開放末端和所述管形部件的所述開放末端之一永久連接的融合接頭，從而形成具有一個開口的反應容器，所述融合接頭在光照后產生光散射。2.根據權利要求l的反應容器，其中所述連接、所述毛細管部件和所述管形部件由相同塑料材料制成。3.根據權利要求2的反應容器，其中所述連接的材料具有與所述毛細管部件和所述管形部件的材料不同的分子結構。4.根據權利要求1-3的反應容器，其中所述毛細管部件具有0.2-0.4mm的壁厚度。5.根據權利要求1-4的反應容器，其中所述毛細管部件具有0.7-2mm的內徑。6.根據權利要求1-5的反應容器，其中這樣設計不與所述毛細管部件連接的所述管形部件的開口，從而使得可獲得具有關閉工具的氣密密封。7.根據權利要求1-6的反應容器，其中所述反應容器在其封閉末端處具有有恒定壁厚度的反應單元，所述反應單元具有10-30ill的體積。8.根據權利要求7的反應容器，其中所述反應單元具有10-30mm的長度。9.根據權利要求7-8的反應容器，其中所述反應單元是圓錐形反應單元。10.根據權利要求1-9的反應容器，其中所述反應單元具有l(wèi)-15mm-l的表面積與體積比。11.根據權利要求i-io的反應容器，其中所述塑料材料是環(huán)烯烴共聚物(C0C)、環(huán)烯烴聚合物(COP)或聚碳酸酯(PC)。12.—種生產根據權利要求l-ll的反應容器的注射模塑方法，所述方法包括a)提供具有核的第一個模，b)執(zhí)行第一個注射步驟，以產生所述反應容器的管形部件，所述管形部件部分圍繞所述核，c)將由所述管形部件部分圍繞的所述核放置在第二個模中，禾口d)執(zhí)行第二個注射步驟，以產生所述反應容器的毛細管部件，其中在所述第二個注射步驟過程中，所述毛細管部件變得與所述管形部件永久連接，以形成具有一個開口的所述反應容器。13.根據權利要求12的方法，其中所述核在其第一個末端處懸浮，并且所述核的第二個末端形狀上配合到所述第一個模的凹進內，從而使得具有2個開放末端的管形部件在所述核周圍形成。14.根據權利要求13的方法，其中在步驟d)中，從步驟b)中形成的管形部件伸出的所述核的所述第二個末端放置在所述第二個模內，以在所述第二個注射步驟過程中形成毛細管部件，所述毛細管部件由于所述管形部件的局部熔化與所述管形部件連接。15.根據權利要求12-14的方法，其中所述第一個注射步驟使用至少2個注射口來執(zhí)行。全文摘要本發(fā)明涉及毛細管。本發(fā)明提供了適合于rtPCR應用的具有最優(yōu)化體積與表面積比的塑料毛細管。此外，本發(fā)明提供了用于生產所述rtPCR塑料毛細管的新方法。更詳細地，本發(fā)明提供了通過2步模塑方法生產的塑料毛細管。文檔編號B29L23/00GK101735944SQ20091022249公開日2010年6月16日申請日期2009年11月17日優(yōu)先權日2008年11月18日發(fā)明者A·斯圖茨,A·雷納申請人:霍夫曼-拉羅奇有限公司