一種達(dá)肝素鈉的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種達(dá)肝素鈉的制備方法，該制備方法包括制備肝素鈉溶液、制備肝素鈉降解液、制備還原液、制備還原沉淀物、制備達(dá)肝素鈉粗品、制備達(dá)肝素鈉精品、凍干等步驟，其具備較低異物引入可能性、較高的產(chǎn)品穩(wěn)定性、消除了難以分離的二氧化錳等優(yōu)點(diǎn)。
【專利說明】
一種達(dá)肝素鈉的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及一種肝素及其衍生物的制備方法，特別地涉及一種達(dá)肝素鈉的制備方法
【背景技術(shù)】
[0002]肝素是一種葡萄糖胺聚糖，其廣泛存在于動物器官中，例如小腸粘膜和肺，具有抗凝、抗炎、抗過敏、抗病毒、抗癌等多種藥理活性。肝素是由糠醛酸和氨基葡萄糖以1-4糖苷鍵連起來的重復(fù)二糖單元組成的線性粘多糖，其廣泛分布于哺乳動物的組織中，由結(jié)締組織性肥大細(xì)胞表達(dá)產(chǎn)生。肝素在動物體內(nèi)大部分以肝素鈉-蛋白復(fù)合物的形式存在。由于肝素鈉解離不完全，肝素提取方法會殘留以共價(jià)鍵結(jié)合的蛋白質(zhì)和以靜電結(jié)合的帶正電蛋白質(zhì)。
[0003]低分子量肝素主要包括肝素鈉和肝素鈣，具有出血發(fā)生率較低的優(yōu)點(diǎn)，其平均分子量為5000。達(dá)肝素鈉是一種低分子量的肝素鈉，主要用于防治深層靜脈血栓形成。
[0004]目前，低分子肝素類產(chǎn)品生產(chǎn)方法主要包括高錳酸鉀與雙氧水的氧化降解法、過氧化氫降解法和酶降解法。過氧化氫降解法可能引入異物，導(dǎo)致病人的過敏反應(yīng)可能性較高；酶降解法的產(chǎn)品末端含有不飽和基團(tuán)，導(dǎo)致產(chǎn)品穩(wěn)定性差；高錳酸鉀與雙氧水的氧化降解法會產(chǎn)生二氧化錳，其較難分離，降低了生產(chǎn)效率。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]針對上述現(xiàn)有工藝的缺陷，本發(fā)明提供了一種達(dá)肝素鈉的制備方法，其具備較低的異物引入可能性、較高的產(chǎn)品穩(wěn)定性、消除了難以分離的二氧化錳等特點(diǎn)。
[0006]為了達(dá)到上述優(yōu)點(diǎn)，本發(fā)明具體采用了如下技術(shù)方案。
[0007]一種達(dá)肝素鈉的制備方法，其步驟包括:
[0008]I)制備肝素鈉溶液:在肝素鈉中加入6?7質(zhì)量倍的純化水，在常溫下攪拌3?5小時，肝素鈉溶解；
[0009]2)制備肝素鈉降解液:用鹽酸調(diào)節(jié)步驟I的肝素鈉溶液的pH值至9.5?10.5，加入相當(dāng)于1.5%?2.5%肝素鈉重量的亞硝酸鈉，在15?25°C下攪拌反應(yīng)2?5h，靜置20?24h,得到肝素降解液；
[0010]3)制備還原液:用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)所述肝素降解液的pH值至9.5?10.5，加入相當(dāng)于0.7%?0.9%肝素鈉重量的硼氫<化鈉，反應(yīng)11?15h,用氣氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.6?6.9,得到還原液；
[0011]4)制備還原沉淀物:向所述還原液加入2.5?3.5體積倍的乙醇，攪拌2?6h，收集，得到還原沉淀物；
[0012]5)制備達(dá)肝素鈉粗品:向所述還原沉淀物加入純凈水，攪拌至溶解，加入0.3%?
0.9%體積倍的雙氧水，在26?34°C下氧化11?23h，加入2.5?3.5體積倍量的乙醇，攪拌，收集，得到達(dá)肝素鈉粗品；
[0013]6)制備達(dá)肝素鈉精品:向所述達(dá)肝素鈉粗品沉淀加入純化水，溶解成1.1%?1.9% (w/w)的溶液，分別用分子量截留值為3100和7900的超濾膜進(jìn)行超濾，除菌過濾，得到達(dá)肝素鈉精品溶液；
[0014]7)凍干:在-26?_34°C凍干所述達(dá)肝素鈉溶液，得到達(dá)肝素鈉成品。
[0015]本發(fā)明具備如下優(yōu)點(diǎn):
[0016]I)較低的異物引入可能性；
[0017]2)較聞的廣品穩(wěn)定性；
[0018]3)消除了難以分離的二氧化錳。
【具體實(shí)施方式】
[0019]下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】對本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說明。
[0020]實(shí)施例1
[0021]一種達(dá)肝素鈉的制備方法，其步驟包括:
[0022]I)制備肝素鈉溶液:在肝素鈉中加入6質(zhì)量倍的純化水，在常溫下攪拌3小時，肝素鈉溶解；
[0023]2)制備肝素鈉降解液:用鹽酸調(diào)節(jié)步驟I的肝素鈉溶液的pH值至9.5，加入相當(dāng)于1.5%肝素鈉重量的亞硝酸鈉，在15°C下攪拌反應(yīng)2h，靜置20h，得到肝素降解液；
[0024]3)制備還原液:用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)所述肝素降解液的pH值至9.5，加入相當(dāng)于
0.7%肝素鈉重量的硼氫化鈉，反應(yīng)llh，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.6，得到還原液；
[0025]4)制備還原沉淀物:向所述還原液加入2.5體積倍的乙醇，攪拌2h，收集，得到還原沉淀物；
[0026]5)制備達(dá)肝素鈉粗品:向所述還原沉淀物加入純凈水，攪拌至溶解，加入0.3%體積倍的雙氧水，在26°C下氧化llh，加入2.5體積倍量的乙醇，攪拌，收集，得到達(dá)肝素鈉粗品;
[0027]6)制備達(dá)肝素鈉精品:向所述達(dá)肝素鈉粗品沉淀加入純化水，溶解成1.1 % (w/w)的溶液，分別用分子量截留值為3100和7900的超濾膜進(jìn)行超濾，除菌，過濾，得到達(dá)肝素鈉精品溶液；
[0028]7)凍干:在_26°C凍干所述達(dá)肝素鈉溶液，得到達(dá)肝素鈉成品。
[0029]實(shí)施例2
[0030]I)制備肝素鈉溶液:在肝素鈉中加入7質(zhì)量倍的純化水，在常溫下攪拌5小時，肝素鈉溶解；
[0031]2)制備肝素鈉降解液:用鹽酸調(diào)節(jié)步驟I的肝素鈉溶液的PH值至10.5，加入相當(dāng)于2.5%肝素鈉重量的亞硝酸鈉，在25°C下攪拌反應(yīng)5h，靜置24h，得到肝素降解液；
[0032]3)制備還原液:用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)所述肝素降解液的pH值至10.5，加入相當(dāng)于
0.9%肝素鈉重量的硼氫化鈉，反應(yīng)15h，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.9，得到還原液；
[0033]4)制備還原沉淀物:向所述還原液加入3.5體積倍的乙醇，攪拌6h，收集，得到還原沉淀物；
[0034]5)制備達(dá)肝素鈉粗品:向所述還原沉淀物加入純凈水，攪拌至溶解，加入0.9%體積倍的雙氧水，在34°C下氧化23h，加入3.5體積倍量的乙醇，攪拌，收集，得到達(dá)肝素鈉粗品;
[0035]6)制備達(dá)肝素鈉精品:向所述達(dá)肝素鈉粗品沉淀加入純化水，溶解成1.9% (w/w)的溶液，分別用分子量截留值為3100和7900的超濾膜進(jìn)行超濾，除菌，過濾，得到達(dá)肝素鈉精品溶液；
[0036]7)凍干:在_34°C凍干所述達(dá)肝素鈉溶液，得到達(dá)肝素鈉成品。
[0037]實(shí)施例3
[0038]一種達(dá)肝素鈉的制備方法，其步驟包括:
[0039]I)制備肝素鈉溶液:在肝素鈉中加入6.1質(zhì)量倍的純化水，在常溫下攪拌3.3小時，肝素鈉溶解；
[0040]2)制備肝素鈉降解液:用鹽酸調(diào)節(jié)步驟I的肝素鈉溶液的pH值至9.6，加入相當(dāng)于1.6%肝素鈉重量的亞硝酸鈉，在16°C下攪拌反應(yīng)3h，靜置21h，得到肝素降解液；
[0041]3)制備還原液:用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)所述肝素降解液的pH值至9.6，加入相當(dāng)于
0.8%肝素鈉重量的硼氫化鈉，反應(yīng)12h，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.7，得到還原液；
[0042]4)制備還原沉淀物:向所述還原液加入2.6體積倍的乙醇，攪拌3h，收集，得到還原沉淀物；
[0043]5)制備達(dá)肝素鈉粗品:向所述還原沉淀物加入純凈水，攪拌至溶解，加入0.4%體積倍的雙氧水，在27°C下氧化12h，加入2.6體積倍量的乙醇，攪拌，收集，得到達(dá)肝素鈉粗品;
[0044]6)制備達(dá)肝素鈉精品:向所述達(dá)肝素鈉粗品沉淀加入純化水，溶解成1.2% (w/w)的溶液，分別用分子量截留值為3100和7900的超濾膜進(jìn)行超濾，除菌，過濾，得到達(dá)肝素鈉精品溶液；
[0045]7)凍干:在_27°C凍干所述達(dá)肝素鈉溶液，得到達(dá)肝素鈉成品。
[0046]實(shí)施例4
[0047]一種達(dá)肝素鈉的制備方法，其步驟包括:
[0048]I)制備肝素鈉溶液:在肝素鈉中加入6.2質(zhì)量倍的純化水，在常溫下攪拌3.5小時，肝素鈉溶解；
[0049]2)制備肝素鈉降解液:用鹽酸調(diào)節(jié)步驟I的肝素鈉溶液的pH值至9.8，加入相當(dāng)于1.8%肝素鈉重量的亞硝酸鈉，在18°C下攪拌反應(yīng)4h，靜置22h，得到肝素降解液；
[0050]3)制備還原液:用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)所述肝素降解液的pH值至9.8，加入相當(dāng)于
0.72%肝素鈉重量的硼氫化鈉，反應(yīng)13h，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.8，得到還原液；
[0051]4)制備還原沉淀物:向所述還原液加入2.7體積倍的乙醇，攪拌4h，收集，得到還原沉淀物；
[0052]5)制備達(dá)肝素鈉粗品:向所述還原沉淀物加入純凈水，攪拌至溶解，加入0.5%體積倍的雙氧水，在28°C下氧化13h，加入2.7體積倍量的乙醇，攪拌，收集，得到達(dá)肝素鈉粗品;
[0053]6)制備達(dá)肝素鈉精品:向所述達(dá)肝素鈉粗品沉淀加入純化水，溶解成1.3% (w/w)的溶液，分別用分子量截留值為3100和7900的超濾膜進(jìn)行超濾，除菌，過濾，得到達(dá)肝素鈉精品溶液；
[0054]7)凍干:在_28°C凍干所述達(dá)肝素鈉溶液，得到達(dá)肝素鈉成品。
[0055]實(shí)施例5
[0056]一種達(dá)肝素鈉的制備方法，其步驟包括:
[0057]I)制備肝素鈉溶液:在肝素鈉中加入6.3質(zhì)量倍的純化水，在常溫下攪拌3.7小時，肝素鈉溶解；
[0058]2)制備肝素鈉降解液:用鹽酸調(diào)節(jié)步驟I的肝素鈉溶液的PH值至10.0，加入相當(dāng)于2.0%肝素鈉重量的亞硝酸鈉，在20°C下攪拌反應(yīng)3.2h，靜置23h，得到肝素降解液；
[0059]3)制備還原液:用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)所述肝素降解液的pH值至9.9，加入相當(dāng)于
0.73%肝素鈉重量的硼氫化鈉，反應(yīng)14h，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.8，得到還原液；
[0060]4)制備還原沉淀物:向所述還原液加入2.8體積倍的乙醇，攪拌5h，收集，得到還原沉淀物；
[0061]5)制備達(dá)肝素鈉粗品:向所述還原沉淀物加入純凈水，攪拌至溶解，加入0.6%體積倍的雙氧水，在29°C下氧化14h，加入2.8體積倍量的乙醇，攪拌，收集，得到達(dá)肝素鈉粗品;
[0062]6)制備達(dá)肝素鈉精品:向所述達(dá)肝素鈉粗品沉淀加入純化水，溶解成1.4% (w/w)的溶液，分別用分子量截留值為3100和7900的超濾膜進(jìn)行超濾，除菌，過濾，得到達(dá)肝素鈉精品溶液；
[0063]7)凍干:在_29°C凍干所述達(dá)肝素鈉溶液，得到達(dá)肝素鈉成品。
[0064]實(shí)施例6
[0065]一種達(dá)肝素鈉的制備方法，其步驟包括:
[0066]I)制備肝素鈉溶液:在肝素鈉中加入6.4質(zhì)量倍的純化水，在常溫下攪拌3.9小時，肝素鈉溶解；
[0067]2)制備肝素鈉降解液:用鹽酸調(diào)節(jié)步驟I的肝素鈉溶液的PH值至10.1，加入相當(dāng)于2.1 %肝素鈉重量的亞硝酸鈉，在21°C下攪拌反應(yīng)3.4h，靜置23h，得到肝素降解液；
[0068]3)制備還原液:用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)所述肝素降解液的pH值至10.0，加入相當(dāng)于
0.75%肝素鈉重量的硼氫化鈉，反應(yīng)12h，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.9，得到還原液；
[0069]4)制備還原沉淀物:向所述還原液加入2.9體積倍的乙醇，攪拌3.5h，收集，得到還原沉淀物；
[0070]5)制備達(dá)肝素鈉粗品:向所述還原沉淀物加入純凈水，攪拌至溶解，加入0.7%體積倍的雙氧水，在30°C下氧化15h，加入2.9體積倍量的乙醇，攪拌，收集，得到達(dá)肝素鈉粗品;
[0071]6)制備達(dá)肝素鈉精品:向所述達(dá)肝素鈉粗品沉淀加入純化水，溶解成1.5% (w/w)的溶液，分別用分子量截留值為3100和7900的超濾膜進(jìn)行超濾，除菌，過濾，得到達(dá)肝素鈉精品溶液；
[0072]7)凍干:在-30°C凍干所述達(dá)肝素鈉溶液，得到達(dá)肝素鈉成品。
[0073]實(shí)施例7
[0074]一種達(dá)肝素鈉的制備方法，其步驟包括:
[0075]I)制備肝素鈉溶液:在肝素鈉中加入6.5質(zhì)量倍的純化水，在常溫下攪拌4小時，肝素鈉溶解；
[0076]2)制備肝素鈉降解液:用鹽酸調(diào)節(jié)步驟I的肝素鈉溶液的PH值至10.3，加入相當(dāng)于2.3%肝素鈉重量的亞硝酸鈉，在22°C下攪拌反應(yīng)4h，靜置23h，得到肝素降解液；
[0077]3)制備還原液:用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)所述肝素降解液的pH值至10.2，加入相當(dāng)于
0.85%肝素鈉重量的硼氫化鈉，反應(yīng)13h，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.9，得到還原液；
[0078]4)制備還原沉淀物:向所述還原液加入3.0體積倍的乙醇，攪拌5h，收集，得到還原沉淀物；
[0079]5)制備達(dá)肝素鈉粗品:向所述還原沉淀物加入純凈水，攪拌至溶解，加入0.8%體積倍的雙氧水，在31°C下氧化20h，加入3.1體積倍量的乙醇，攪拌，收集，得到達(dá)肝素鈉粗品;
[0080]6)制備達(dá)肝素鈉精品:向所述達(dá)肝素鈉粗品沉淀加入純化水，溶解成1.8% (w/w)的溶液，分別用分子量截留值為3100和7900的超濾膜進(jìn)行超濾，除菌，過濾，得到達(dá)肝素鈉精品溶液；
[0081]7)凍干:在_32°C凍干所述達(dá)肝素鈉溶液，得到達(dá)肝素鈉成品。
[0082]顯然，本發(fā)明的上述實(shí)施例僅僅是為清楚地說明本發(fā)明所作的舉例，而并非是對本發(fā)明實(shí)施方式的限定。對于所述領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，在上述說明的基礎(chǔ)上還可以做出其它不同形式的變化或變動。這里無需也無法對所有的實(shí)施方式予以窮舉。而這些屬于本發(fā)明的精神所引申出的顯而易見的變化或變動仍處于本發(fā)明的保護(hù)范圍之中。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種達(dá)肝素鈉的制備方法，其特征在于，其步驟包括: .1)制備肝素鈉溶液:在肝素鈉中加入6?7質(zhì)量倍的純化水，在常溫下攪拌3?5小時，肝素鈉溶解； .2)制備肝素鈉降解液:用鹽酸調(diào)節(jié)步驟I的肝素鈉溶液的pH值至9.5?10.5，加入相當(dāng)于1.5%?2.5%肝素鈉重量的亞硝酸鈉，在15?25°C下攪拌反應(yīng)2?5h，靜置20?.24h，得到肝素降解液； .3)制備還原液:用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)所述肝素降解液的pH值至9.5?10.5，加入相當(dāng)于0.7%?0.9%肝素鈉重量的硼氫< 化鈉，反應(yīng)11?15h,用氣氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至.6.6?6.9,得到還原液； .4)制備還原沉淀物:向所述還原液加入2.5?3.5體積倍的乙醇，攪拌2?6h，收集，得到還原沉淀物； .5)制備達(dá)肝素鈉粗品:向所述還原沉淀物加入純凈水，攪拌至溶解，加入0.3%?.0.9%體積倍的雙氧水，在26?34°C下氧化11?23h，加入2.5?3.5體積倍量的乙醇，攪拌，收集，得到達(dá)肝素鈉粗品； .6)制備達(dá)肝素鈉精品:向所述達(dá)肝素鈉粗品沉淀加入純化水，溶解成1.1 %?1.9%(w/w)的溶液，分別用分子量截留值為3100和7900的超濾膜進(jìn)行超濾，除菌，過濾，得到達(dá)肝素鈉精品溶液； .7)凍干:在-26?_34°C凍干所述達(dá)肝素鈉溶液，得到達(dá)肝素鈉成品。2.如權(quán)利要求1所述達(dá)肝素鈉的制備方法，其特征在于，其步驟包括: .1)制備肝素鈉溶液:在肝素鈉中加入5質(zhì)量倍的純化水，在常溫下攪拌4小時，肝素鈉溶解； .2)制備肝素鈉降解液:用鹽酸調(diào)節(jié)步驟I的肝素鈉溶液的pH值至10.0，加入相當(dāng)于.2.0%肝素鈉重量的亞硝酸鈉，在20°C下攪拌反應(yīng)3h，靜置22h，得到肝素降解液； .3)制備還原液:用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)所述肝素降解液的pH值至10.0，加入相當(dāng)于.0.8%肝素鈉重量的硼氫化鈉，反應(yīng)13h，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.8，得到還原液； .4)制備還原沉淀物:向所述還原液加入3.5體積倍的乙醇，攪拌5h，收集，得到還原沉淀物； .5)制備達(dá)肝素鈉粗品:向所述還原沉淀物加入純凈水，攪拌至溶解，加入0.5%體積倍的雙氧水，在29°C下氧化15h，加入3.5體積倍量的乙醇，攪拌，收集，得到達(dá)肝素鈉粗品； .6)制備達(dá)肝素鈉精品:向所述達(dá)肝素鈉粗品沉淀加入純化水，溶解成1.5% (w/w)的溶液，分別用分子量截留值為3100和7900的超濾膜進(jìn)行超濾，除菌，過濾，得到達(dá)肝素鈉精品溶液； .7)凍干:在_34°C凍干所述達(dá)肝素鈉溶液，得到達(dá)肝素鈉成品。
【文檔編號】C08B37/10GK105884934SQ201410550141
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2014年10月17日
【發(fā)明人】楊軍
【申請人】北京海吉星醫(yī)療科技有限公司