專利名稱：一種依諾肝素鈉的制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及依諾肝素鈉的制備方法。
背景技術：
生物活性藥物肝素自被發(fā)現(xiàn)起在臨床應用已有近百年歷史，它是預防手術后血栓 形成和治療急性靜脈血栓的首選藥物。另外，肝素及其衍生物還廣泛用于調(diào)節(jié)血脂、抗炎、 抗過敏以及免疫調(diào)節(jié)等，到目前它仍是重要的生化藥物之一，也是我國主要出口創(chuàng)匯藥物之一。依諾肝素鈉是低分子肝素的一種，它主要用于抗血栓、抗凝血、治療急性心梗和不 穩(wěn)定性心絞痛等。其抗凝機理復雜，適應癥比較廣泛，對凝血的各個環(huán)節(jié)均有作用。包括 抑制凝血酶原轉(zhuǎn)變?yōu)槟?，抑制凝血酶活性，妨礙纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白，防止血小 板凝聚。依諾肝素鈉可通過降低LDL、VLDL和升高HDL，來改變血液粘稠度、保護血管內(nèi)皮 細胞、預防血栓和動脈粥樣硬化、改善冠狀動脈循環(huán)等作用。依諾肝素鈉具有臨床適應癥廣 (FDA批準了 9個適應癥)，生物利用度高，體內(nèi)半衰期長，副作用小等優(yōu)點，其市場占有率達 到肝素和低分子肝素的2/3以上。但是目前市場出售的低分子肝素大多是在無機溶媒中反 應制備，在制備過程中其化學結(jié)構(gòu)的改變影響到產(chǎn)品的生物活性及穩(wěn)定性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在采用親水液相反應和疏水液相反應以及固相反應相結(jié)合的技術，提供 一種以β -消除法制備低分子肝素鈉的生產(chǎn)工藝，以克服現(xiàn)有生產(chǎn)技術存在的不足。為實現(xiàn)本發(fā)明目的，依諾肝素鈉生產(chǎn)工藝其特征包括以下步驟a.按2000 4000、4800 10800重量份分別稱取肝素鈉和芐索氯銨后，在 20000 40000重量份的30 40°C的純化水中加入所稱取的肝素鈉，攪拌使之完全溶解； 在28800 64800重量份的45 50°C的純化水中加入所稱取的芐索氯銨攪拌使之完全溶 解；b.鹽化在攪拌狀態(tài)下將上述溶解的肝素鈉溶液緩慢加入已溶解的芐索氯銨溶 液中后，再繼續(xù)攪拌30 60分鐘后靜置；c.干燥將上述靜置液離心分離后得到的肝素鹽化物結(jié)晶加入純化水洗滌后，在 50 60°C條件下干燥；d.酯化當上述肝素鹽化物結(jié)晶含水量低于10%時，在30 35°C水浴溫度下，將 干燥的肝素鹽化物結(jié)晶加入30000 40000重量份的N，N- 二甲基甲酰胺中，當肝素鹽化物 結(jié)晶完全溶解后加入1000 4000重量份氯化芐，然后攪拌保溫酯化20 30小時；e.醇沉上述酯化結(jié)束后，在攪拌狀態(tài)下加入108000 144000重量份的2%乙酸 鈉乙醇溶液，繼續(xù)攪拌15 30分鐘后離心分離收集沉淀物，然后在攪拌狀態(tài)下于沉淀物中 加入M000 72000重量份的2%乙酸鈉乙醇溶液，繼續(xù)攪拌15 30分鐘后，離心分離收 集沉淀物，在沉淀物中加入2500 5000重量份的10%氯化鈉溶液攪拌使之完全溶解，然后在攪拌狀態(tài)下再加入10000 20000重量份的90 95%乙醇生成沉淀；f.氧化分離上清液后，將上述沉淀加入36000 72000重量份的純化水溶解，在 50 60°C水浴保溫下，緩慢加入5 IOM的氫氧化鈉溶液，然后保溫反應45 90分鐘后 迅速降溫至25 40°C ；g.調(diào)節(jié)上述反應液pH值至6.0 7.0后過濾，然后加入360 720重量份的乙酸 鈉攪拌溶解，在攪拌狀態(tài)下加入144000 觀8000重量份的90 95%乙醇；h.持續(xù)攪拌15 30分鐘后靜置8 10小時，分離出上清液后加入18000 36000重量份的純化水攪拌使沉淀物完全溶解，然后在pH10. 0 11. 0,20 30°C條件下加 入60 120重量份的雙氧水；i.醇沉上述氧化反應6 8小時后，調(diào)整反應液pH6. 5 7.0后過濾，然后加入 120 240重量份的氯化鈉攪拌溶解，再加入60000 120000重量份的90 95%乙醇攪 拌沉淀物，持續(xù)攪拌15 30分鐘后靜置8 10小時；j.精濾加入10 15倍量的純化水將上述沉淀物攪拌溶解后過濾，然后將濾液 用1000D超濾膜超濾濃縮；k.凍干將上述濃縮液用0. 1 μ m濾膜除菌過濾后，濾液入凍干機冷凍干燥，制得 依諾肝素鈉成品。本發(fā)明工藝產(chǎn)品與國家和進口標準有關比較數(shù)據(jù)項目本發(fā)明產(chǎn)品進口產(chǎn)品標準國內(nèi)其它企業(yè) 產(chǎn)品標準本發(fā)明產(chǎn)品優(yōu)勢抗 Xa/ II a3. 3 5· 32. 5 4. 0彡1.5抗栓活性增強分子量及 分子量分布重均分子量應為 3800-5000； 2000 以下含量應為 12.0% 20. 0%； 2000 8000含量 應為 68.0% 擬.0%。重均分子量應為 3600-5000 ； < 8000的級分含量 彡75%重均分子量小 于 8000； <8000的級分 含量彡60%有效成份含量增 多，分子量分布 更均一澄清度與顏色<黃色1號標準 比色液系黃色4號標準 比色液實黃色2號標 準比色液純度高雜質(zhì)少本發(fā)明取得的技術進步(1).本發(fā)明在特定條件下利用消除法將普通大分子肝素鈉降解為低分子量 肝素鈉，采用親水液相反應和疏水液相反應以及固相反應相結(jié)合，將大分子肝素鈉降解為 具有特定結(jié)構(gòu)的低分子肝素鈉，即在非還原端有一個4，5不飽和雙鍵，而在還原端有1， 6-脫水環(huán)結(jié)構(gòu)。并進一步采用超濾和納濾等工藝過程控制產(chǎn)物的分子量和分子量分布范 圍，制備出高純度的低分子肝素鈉。采用消除降解反應，該法不在肝素活性部位降解， 不發(fā)生脫硫，使導致出血危險的主要因素抗FIIa活性大幅降低，而發(fā)揮抗栓作用的抗FXa 活性相對提高，抗FXa/抗FIIa比值大于3. 3，使得產(chǎn)品的有效性和安全性具有明顯優(yōu)勢。(2).本發(fā)明制備的依諾肝素鈉與普通肝素相比，具有以下特點①分子量小，生物利用度高，血漿半衰期長，普通肝素的分子量在3000 30000之間而依諾肝素鈉的平均 分子量在3800 5000之間，小劑量皮下注射依諾肝素鈉，其抗Fxa活性回收近100%，而普 通肝素只有約30%，其血漿半衰期是普通肝素的2 4倍；②有更穩(wěn)定的量效關系，按體重 給藥，控制劑量，不需要進行實驗室監(jiān)測；③抗FXa因子強，抗FIIa因子弱，抗血栓作用強， 出血副作用??；④較少與血小板結(jié)合，不易引起血小板減少等優(yōu)點。臨床上目前已作為防治 深部靜脈血栓形成及相關疾病的首選藥物，同時該產(chǎn)品可有效預防普通外科、矯形外科的 術前和術后的血栓形成，在術后開始血栓預防，與華法林、安慰劑以及加壓襪對比，DVT的術 后發(fā)生率本發(fā)明依諾肝素鈉組為19% 45%，而對照組為43% 65% ；除此外，本發(fā)明依 諾肝素鈉還可有效預防缺血性中風患者的DVT，降低患風險約70%，能有效解決普通未分 級肝素長期使用后易出現(xiàn)的出血、骨質(zhì)疏松、誘導血小板減少等副作用，具有十分廣闊的發(fā) 展前景。


圖1為本發(fā)明工藝流程示意圖。
具體實施例方式實施例1 如圖1所示，本發(fā)明制備依諾肝素鈉工藝過程為a.稱取3kg肝素鈉(注射級去DS)、5kg芐索氯銨備用；b.向30升30 40°C的純化水中加入所稱取的肝素鈉，攪拌使之完全溶解；向30 升45 50°C的純化水中加入所稱取的芐索氯銨攪拌使之完全溶解；c.鹽化將上述溶解好的肝素鈉溶液緩慢加入到已溶解的芐索氯銨溶液中，邊攪 拌邊加入，加完后繼續(xù)攪拌30 60分鐘后靜置；d.干燥利用離心機將上述反應物離心，棄去上清液，得到肝素鹽化物結(jié)晶，加入 100升純化水洗滌肝素鹽化物結(jié)晶，洗滌后離心棄去上清液，重復操作3 4次后，開啟熱風 循環(huán)烘箱，在50 60°C條件下干燥18 M小時；e.酯化當上述肝素鹽化物結(jié)晶含水量低于10%時，設定水浴溫度30 35°C下， 將干燥好的肝素鹽化物結(jié)晶加入到5 7重量倍的N，N-二甲基甲酰胺中攪拌使之溶解，待 肝素鹽化物結(jié)晶完全溶解后加入9L氯化芐，開始攪拌保溫酯化20 30小時；f.醇沉上述酯化反應結(jié)束后，在攪拌狀態(tài)下加入3 4重量倍濃度為2% 3% 乙酸鈉乙醇溶液攪拌沉淀，加完后繼續(xù)攪拌15 30分鐘后離心分離收集沉淀物，然后在攪 拌狀態(tài)下于沉淀物中加入54000 72000重量份的2%乙酸鈉乙醇溶液，繼續(xù)攪拌15 30 分鐘后，離心分離收集沉淀物，按10%濃度在沉淀物中加入10%氯化鈉溶液攪拌使之完全 溶解，然后在攪拌狀態(tài)下再加入3 4重量倍的90 95%乙醇生成沉淀，用10%氯化鈉溶 液重復洗滌沉淀2次；g.氧化分離上清液后，加入15 18重量倍的純化水溶解沉淀物，在水浴保溫 50 60°C下，緩慢加入250ml 5 IOM氫氧化鈉溶液，然后保溫反應45 90分鐘后迅速 降溫至25 40°C ；h.調(diào)節(jié)上述溶液pH值至6.0 7.0后板框過濾，然后加入1000 2000克的乙酸 鈉攪拌溶解，在攪拌狀態(tài)下加入4 6重量倍的90 95%乙醇攪拌沉淀；5
i.繼續(xù)攪拌15 30分鐘后，沉淀靜置8 10小時，分離出上清液后，在沉淀中加 入8 10重量倍純化水攪拌使沉淀物完全溶解，然后在pH10. 0 11. 0,20 30°C條件下 加入200 300ml、30%的雙氧水反應6 8小時；j.醇沉上述反應結(jié)束后，調(diào)整反應液pH值6. 5 7. 0后板框過濾，然后加入 300 400克氯化鈉攪拌溶解后，再加入100000 150000ml的90 95%乙醇攪拌沉淀， 乙醇加完后繼續(xù)攪拌15 30分鐘，靜置8小時以上；k.精濾在控制區(qū)，加入10 15重量倍的純化水將上述沉淀物攪拌溶解后，依次 使用板框和0. 2 μ m濾膜過濾，然后將濾液用1000D超濾膜超濾濃縮；1.凍干在控制區(qū)，將上述濃縮液用0. Ιμπι濾膜除菌過濾后，濾液入凍干機進行 冷凍干燥，制得依諾肝素鈉成品。實施例2 本實施例與實施例1不同之處是肝素鈉為^cg,氯化芐6L，氫氧化鈉 165g。實施例3 本實施例與實施例1不同之處是肝素鈉為4kg，氯化芐12L，氫氧化鈉 330g。
權(quán)利要求
1. 一種依諾肝素鈉的制備方法，其特征包括以下步驟a.按2000 4000、4800 10800重量份分別稱取肝素鈉和芐索氯銨后，在20000 40000重量份的30 40°C的純化水中加入所稱取的肝素鈉，攪拌使之完全溶解；在 28800 64800重量份的45 50°C的純化水中加入所稱取的芐索氯銨攪拌使之完全溶解；b.鹽化在攪拌狀態(tài)下將上述溶解的肝素鈉溶液緩慢加入已溶解的芐索氯銨溶液中 后，再繼續(xù)攪拌30 60分鐘后靜置；c.干燥將上述靜置液離心分離后得到的肝素鹽化物結(jié)晶加入純化水洗滌后，在50 60°C條件下干燥；d.酯化當上述肝素鹽化物結(jié)晶含水量低于10%時，在30 35°C水浴溫度下，將干燥 的肝素鹽化物結(jié)晶加入30000 40000重量份的N，N- 二甲基甲酰胺中，當肝素鹽化物結(jié)晶 完全溶解后加入1000 4000重量份氯化芐，然后攪拌保溫酯化20 30小時；e.醇沉上述酯化結(jié)束后，在攪拌狀態(tài)下加入108000 144000重量份的2%乙酸鈉乙 醇溶液，繼續(xù)攪拌15 30分鐘后離心分離收集沉淀物，然后在攪拌狀態(tài)下于沉淀物中加入 54000 72000重量份的2%乙酸鈉乙醇溶液，繼續(xù)攪拌15 30分鐘后，離心分離收集沉 淀物，在沉淀物中加入2500 5000重量份的10 %氯化鈉溶液攪拌使之完全溶解，然后在攪 拌狀態(tài)下再加入10000 20000重量份的90 95%乙醇生成沉淀；f.氧化分離上清液后，將上述沉淀加入36000 72000重量份的純化水溶解，在50 60°C水浴保溫下，緩慢加入5 IOM的氫氧化鈉溶液，然后保溫反應45 90分鐘后迅速降 溫至25 40°C ；g.調(diào)節(jié)上述反應液PH值至6.0 7. 0后過濾，然后加入360 720重量份的乙酸鈉攪 拌溶解，在攪拌狀態(tài)下加入144000 觀8000重量份的90 95%乙醇；h.持續(xù)攪拌15 30分鐘后靜置8 10小時，分離出上清液后加入18000 36000重 量份的純化水攪拌使沉淀物完全溶解，然后在pH10. 0 11. 0,20 30°C條件下加入60 120重量份的雙氧水；i.醇沉上述氧化反應6 8小時后，調(diào)整反應液pH6.5 7. 0后過濾，然后加入120 240重量份的氯化鈉攪拌溶解，再加入60000 120000重量份的90 95%乙醇攪拌沉淀 物，持續(xù)攪拌15 30分鐘后靜置8 10小時；j.精濾加入10 15倍量的純化水將上述沉淀物攪拌溶解后過濾，然后將濾液用 1000D超濾膜超濾濃縮；k.凍干將上述濃縮液用0. 1 μ m濾膜除菌過濾后，濾液入凍干機冷凍干燥，制得依諾 肝素鈉成品。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種依諾肝素鈉的制備方法，其步驟包括鹽化、干燥、酯化、醇沉、氧化、醇沉、精濾、凍干制得成品。本發(fā)明采用親水液相反應和疏水液相反應以及固相反應，將大分子肝素鈉降解為具有特定結(jié)構(gòu)的低分子肝素鈉，并控制產(chǎn)物分子量和分子量分布范圍，使導致出血危險的抗FIIa活性大幅降低，抗FXa活性相對提高，產(chǎn)品有效性和安全性優(yōu)勢明顯，可有效預防靜脈血栓栓塞癥和肺栓塞癥，可用于矯形外科、神經(jīng)外科術前和術后血栓形成，可大大降低患中風風險，能更有效減少不穩(wěn)定性冠狀動脈綜合癥患者的死亡、心力衰竭、復發(fā)性心絞痛等，并可降低高甘油三脂血癥，能有效解決普通未分級肝素及其衍生物長期使用后的出血、骨質(zhì)疏松、誘導血小板減少等副作用。
文檔編號C08B37/10GK102050888SQ20101058364
公開日2011年5月11日 申請日期2010年12月13日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月13日
發(fā)明者高樹華 申請人:河北常山生化藥業(yè)股份有限公司