專利名稱：用il－8和il－8受體的反義寡核苷酸抑制腫瘤生長的制作方法
I.發(fā)明領域本發(fā)明領域是寡核苷酸治療劑，更具體地是寡核苷酸在調節(jié)IL-8和/或IL-8受體的表達以控制腫瘤生長，轉移和/或血管生成中的用途。II.發(fā)明背景白介素-8(IL-8，嗜中性白細胞活化蛋白-1，或NAP-1)是廣泛與炎癥反應，組織損傷，生長調節(jié)和細胞粘連相關的細胞因子的C-X-C趨化因子家族的成員。Cerretti，D.P.，等人，人白介素-8受體的分子特征，GRO/黑素瘤生長刺激活性和嗜中性白細胞活化肽2(Molecular Characterization of Receptors for HumanInterleukin-8，GRO/Melanoma Growth-Stimulatory Activity andNeutrophil Activating Peptide-2)，《分子免疫學》(MolecularImmunology)，30(4)，359-367(1993)；和Koch，A.E.，等人，細胞因子和細胞粘著分子在系統(tǒng)性硬化癥患者皮膚上的現(xiàn)場表達(In situexpression of cytokines and cellular adhesion molecules in theskin of patients with systimic sclerosis)，《病理學》(Pathobiology)，61(5-6)，239-46(1993)。Streiker，R.M.等人，在《白細胞生物學雜志》(J.of Leukocyte Biology)57，752-762(1995)的C-X-C趨化因子作為肺癌血管生成的調節(jié)劑的作用(Role ofChemokines As Regulators Of Angiogenisis In Lung Cancer)中綜述了C-X-C家族。IL-8還顯示出具有有效調節(jié)血管生成的效果。參見，例如，Koch，A.E.，白介素-8作為血管生成的派生巨噬細胞調節(jié)劑(Interleukin-8 as a Macrophage-Derived Mediator ofAngiogenesis)，《科學》(Science)，258，1798-1800(1992)。
已知IL-8是通過多種正常人體細胞包括單核細胞/巨噬細胞，表皮成纖維細胞，血管內皮細胞，角質形成細胞，和腎小球膜細胞產生的。Yasumoto，K.等人，腫瘤壞死因子α和干擾素γ通過同時活化白介素8基因結合位點的AP-1和類NF-kB協(xié)同誘發(fā)人胃癌細胞系的白介素8的產生(Tumor Necrosis Factor Alpha and Interferon GammaSynergistically Induce Interleukin 8 Production in a humanGastric Cancer Cell Line Though Acting Concurrently on AP-1 andNF-kB-like Binding Sites of the Interleukin 8 Gene)，《生物化學雜志》(J.Biological Chemistry)，267(31)，22506-11(1992)。很明顯，這種細胞僅當應激時才產生IL-8，而在正常生長和體內平衡的條件下不產生。誘發(fā)IL-8產生的因素包括炎癥，IL-1，TNF，LPS和凝血酶。
還已知IL-8通常由腫瘤細胞分泌。這里定義的腫瘤指未控制和漸進繁殖的細胞，包括良性腫瘤和所有形式的腫瘤和癌癥。一項研究顯示，在研究的組織中，80％癌細胞系和83.3％癌組織中存在IL-8。研究結果還表明，IL-8是癌癥的生長因子，而且，抗-IL-8抗體和IL-8受體反義在體外稀釋的癌細胞生長中是有效的。I shoko，T.，等人，文獻同前(Supra)；Schadendorf，D.，等人，人惡性黑素瘤細胞體外產生的IL-8是主要的自分泌生長因子(IL-8 Produced by HumanMalignant Melanoma Cells in Vitro Is an Essential AutocrineGrowth Factor)，《免疫學雜志》(J.Immunol.)，151(5)，2667-2674(1993)。
由于其對生長的作用，人們懷疑IL-8在黑素瘤和其它癌癥廣泛轉移方面具有重要作用。Schadendorf，D.，等人，文獻同前。已經證明，例如，IL-8直接涉及黑素瘤(Singh，R.K.，等人，通過引入白介素8紫外線B照射對初期皮膚黑素瘤的腫瘤生成和轉移的促進性質(Ultraviolet B Irradiation Promotes Tumorigenic and MetastaticProperties in Primary Cutaneous Melanoma via Induction ofInterleukin 8)，《癌癥研究》(Cancer Res.)，55，3669-3674，1995)以及肺癌(Greenspoon，S.A.，等人，人類非小細胞肺癌/SCID鼠嵌合體模型中IL-8在腫瘤生成和轉移過程中的表達(The expression ofIL-8 during Tumorigenesis and Metastasis in a model of humannonsmall cell lung cancer/SCID mouse chimera)，《臨床研究》(Clinical Research)，42，404A，1994)的轉移機理。人們還發(fā)現(xiàn)，IL-8在腫瘤新血管形成方面，例如，對頭和頸部的鱗狀(上皮)細胞癌起作用。Cohen，R.F.，等人，《頭頸外科學-弓形耳鼻喉科學》(ArchOtolaryngol.Head Neck Surg.)，121，202-209，1995。因此，IL-8在腫瘤生長，轉移和血管生成方面起著重要作用。IL-8受體IL-8是細胞膜IL-8受體的配位體，而且，人們認為IL-8與IL-8受體之間的相互作用需要IL-8的作用。至今，人們已經確定了兩種IL-8受體基因A和B型IL-8受體。兩種受體都屬于所謂七(種)跨膜結構域G偶蛋白受體家族。已經表明，受體A由IL-8活化，受體B由IL-8及其它屬于C-X-C家族包括黑素瘤生長刺激活性(MGSA)的細胞因子活化。據說受體B以其“雜交性”，即與生長調節(jié)基因(GRO)(也稱為黑素瘤生長刺激活性(MGSA))，嗜中性白細胞活化肽-2(NAP-2)和嗜中性白細胞活化肽-1(CAP-1)結合，所有這些群集在人的染色體4q 13-q21上。Ahuja，S.K.，人類白介素8受體基因簇的分子演化(Molecular Evolution of HumanInterleukin-8 Receptor Gene Cluster)，《自然基因》(NatureGenics)，2，31-36(1992)；Cerretti等人，文獻同前。常見的由IL-8和MGSA對嗜中性白細胞引起的作用包括鈣的代謝作用，呼吸爆發(fā)的引入，分泌囊的脫粒和GTP酶活性及GTP結合力的增加。
人們不僅在嗜中性白細胞和其它造血系細胞中發(fā)現(xiàn)了IL-8受體B，在非造血細胞中也發(fā)現(xiàn)有IL-8受體B。例如，在對MGSA應答的細胞，腫瘤壞死因子和腫瘤啟動物包括胎盤和腎細胞系中已經發(fā)現(xiàn)了IL-8受體B。Mueller，S.G.，等人，黑素瘤生長刺激活性提高非造血細胞中二級白介素8受體的磷酸化作用(Melanoma Growth StimulatoryActivity Enhances the Phosphorylation of the Class IIInterleukin-8 Receptor in Non-hematopoietic Cells)，《生物化學雜志》(J.Biol.Chem.)，269，1973-1980(1994)；白介素8啟動因子的NF-kB亞元的特異性調節(jié)(NF-kB Subunit-SpecificRegulation of the Interleukin-8 Promoter)，《分子和細胞生物學》(Mol.& Cell Bio.)，13(10)，6137-6146(1993)。IL-8受體B在癌或其它腫瘤細胞中作用和功能還不能完全闡明，但是，有證據表明IL-8RB的活化作用(1)與黑素瘤和腫瘤生長纖維細胞的生長調節(jié)機理有關；(2)伴隨石棉造成的肺細胞轉化，及(3)與黑素瘤轉移潛勢相關。
對至少兩種IL-8受體的cDNA編碼已經分離，并記為染色體2q35。Morris，S.W.等人，對編碼為染色體2q35的1和2型人白介素8受體和白介素8受體假基因的基因編碼安排(Assignment of the GenesEncoding Human Interleukin-8 Receptor Types 1 and 2 and anInterleukin-8 Receptor Pseudogene to Chromosome 2q35)，《基因學》(Genomics)，14，685-691(1992)；Murphy，P.M.和Tiffany，H.L.，克隆互補DNA編碼功能性人白介素-8受體(Cloning ofComplementary DNA Encoding a Functional Human Interleukin-8Recepor)，《科學》(Science)，253，1280-1283(1991)。另外兩種IL-8受體也已經被生物化學確定，而且它們對應于以前確定的cDNA。Moser等人，人類吞噬細胞，淋巴細胞和黑素瘤細胞中兩種白介素受體的轉錄表達(Expression of Transcripts for Two InterleukinReceptors in Human Phagocytes，Lymphocytes and MelanomaCells)，《生物化學》(Biochem.)，294，285-292(1993)。
如果IL-8對于各種對腫瘤生長因子應答的細胞有生長刺激作用，則它具有提供調節(jié)體內癌中IL-8或IL-8受體表達的反義寡核苷酸的優(yōu)點，尤其是它具有提供有效抵御肺癌和黑素瘤的寡核苷酸的優(yōu)點，因為這些癌各個都能產生自己的生長因子。
至少有兩種主要的肺癌小細胞肺癌(SCLC)和非小細胞肺癌(NSCLC)。SCLC約占這兩種肺癌的四分之一，表現(xiàn)為神經內分泌標記，并且一般早就轉移到淋巴結，腦，骨，肺和肝。NSCLC占了其余肺腫瘤類型的絕大部分，并包括腺癌，鱗狀(上皮)細胞癌和巨細胞癌。NSCLC以類上皮生長因子和受體為特征，并且是局部侵入。
不同于正常黑素細胞，黑素瘤細胞可以在沒有外生生長因子的情況下增生。這種明顯的獨立性反映出生長因子和進行自分泌生長刺激的細胞因子的產生，包括TGF-，TGF-AE，衍生血小板的生長因子A和B鏈，基本纖維細胞生長因子，IL-8，IL-6，IL-1，粒細胞巨嗜細胞群刺激因子和MGSA。Guo Y等人，用抗CD44單克隆抗體抑制人體內黑素瘤生長和轉移(Inhibition of Human Melanoma Growth andMetastasis in Vivo by Anti-CD44 Monoclonal Antibody)，《癌癥研究》(Cancer Res.)，54，1561-1565(1994)。
到目前為止一些成功的范例已有報道，如用20M濃度反義寡核苷酸來降低IL-8受體表達和抑制肺癌細胞(Ishiko，T.等人，文獻同上)和惡性黑素瘤細胞(Schadendorf，D.等人，文獻同上)的生長。但是，這些報道只反映體外的研究結果，根本沒有闡明同樣的寡核苷酸在體內會有效果。即使對于體外的研究，至少有一個研究者的成功的報告也只是用改性硫代磷酸酯反義寡核苷酸。Bargou，R.C.，用抗IL-6和IL-8反義寡核苷酸調節(jié)新何杰金細胞系HD-MYZ的增生(Regulation of Proliferation In The New Hodgkin Cell Line HD-MYZby Antisense-Oligonucleotides Against IL-6 and IL-8)，《癌癥治療的分子基礎理論》(Molecular Basis of Cancer Therapy)。因此，仍然需要通過干擾IL-8和/或IL-8受體表達抑制體內黑素瘤和肺癌生長，轉移和/或血管生成的寡核苷酸。而且，由于IL-8和IL-8受體一般明顯與腫瘤生長，轉移和血管生成有關，這種現(xiàn)象是大多數類型癌癥的特征，因此在治療癌癥和其它腫瘤時一般要以(IL-8)其中之一或基因為(治療)目標。III.發(fā)明概述本發(fā)明提供了有效治療腫瘤，尤其是黑素瘤，肺癌，前列腺癌和乳腺癌的寡核苷酸，并提供了用這些寡核苷酸治療疾病的方法。IV.示圖簡述本發(fā)明新的特性和特征在所附權利要求書陳述并加以區(qū)分。本發(fā)明采用優(yōu)選和列舉的實施例，連同它們進一步的優(yōu)點將在下面具體描述中進行更詳盡的闡述，并伴有圖示說明，其中

圖1直方圖表示用0.1μM濃度寡核苷酸ICN-131，IL-8寡核苷酸ICN-70(SEQ ID NO2)和IL-8寡核苷酸ICN-133(SEQ ID NO3)對黑素瘤細胞(ATCC HTB 140)，肺癌(ATCC HTB 177)，前列腺癌(ATCC HTB 81)和乳腺癌細胞(T47D)進行72小時治療后的抑制生長效果對比。這些寡核苷酸命名如下ICN-131 CAC CGG AAG GAA CC (SEQ ID NO1)ICN-70GAA AGT TTG TGC CTT ATG GA (SEQ ID NO2)ICN-133 GGC GCA GTG TGG TCC (SEQ ID NO3)圖2直方圖表示用0.1μM濃度IL受體B寡核苷酸ICN-247(SEQ IDNO5)，ICN-107(SEQ ID NO4)和ICN-247(SEQ ID NO5)對黑素瘤細胞(ATCC HTB 140)，非小(細胞)肺癌(ATCC HTB 177)，前列腺癌(ATCC HTB 81)和乳腺癌細胞(T47D)進行72小時治療后的生長抑制效果。這些寡核苷酸命名如下ICN-107CTT CCT GTC TGA TGG CTT CT(SEQ ID NO4)ICN-247TGA AAA TTT AGA TCA TC(SEQ ID NO5)ICN-297AGT GTG CGT GTG G (SEQ ID NO6)圖3是表示balb/c nude/nude鼠皮下黑素瘤生長的動力學表，用對未處理的鼠和用ICN-131和ICN-70(SEQ ID NO2)處理后的鼠進行線性回歸分析后的斜率表示。
圖4是表示balb/c nude/nude鼠皮下肺癌生長的動力學表，用對未處理的鼠和用ICN-131和ICN-70(SEQ ID NO2)處理后的鼠進行線性回歸分析后的斜率表示。V.具體實施例詳述寡核苷酸的合成下面的討論描述了各種寡核苷酸序列的制備以及這些序列抵御肺和/或黑素瘤癌細胞有效性的試驗。所有試驗用序列在自動DNA合成器(Applied Biosystems model 394)中作為磷酸二酯寡核苷酸用標準磷酸二酯化學方法合成。所得寡核苷酸經過HPLC用反相半制備C8柱(ABI)，5％乙腈的0.1M三乙基乙酸銨和乙腈線性梯度洗脫進行純化。經過HPLC用分析C18柱(Beckman)檢查產物的純度。體外試驗對巨細胞肺癌系ATCC HTB 177，黑素瘤癌細胞ATCC HTB 140，前列腺癌ATCC HTB 81和乳腺癌細胞T47D進行寡核苷酸序列的試驗。將細胞按慣例在37℃和大氣壓下充有5％CO/95％空氣的潮濕孵化器中的培養(yǎng)基內繁殖。將兩種細胞系在粘連的裝有90％RPMI 1640并補充了10％胎牛血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)。以每孔2000粒細胞的量將細胞植于96孔微滴定板，然后用0.1μM濃度反義或對比寡核苷酸處理一次。培養(yǎng)72小時后所有細胞用1μCi/孔/200μL[3H]胸苷，再培養(yǎng)2小時，用自動收集器(Harvester) 96(Tomtec)收集，并在β計數器中測定[3H]胸苷的混合程度。為了保證結果的精度，將所有培養(yǎng)物分成三批并至少重復三次。結果示于圖1和圖2。體內試驗匯總于圖3和4中的體內實驗用缺少T淋巴細胞但不缺少B淋巴細胞或NK細胞的Balb/c Nude/Nude鼠進行。根據協(xié)議，將2.5百萬黑素瘤細胞(ATCC HBT 140)的Hanks平衡鹽溶液進行皮下注射。10天后測量腫瘤的尺寸，同一天將0.1μM寡核苷酸的100μL Hanks平衡鹽溶液注射到腫瘤內部。每天兩次的注射重復進行14天。治療的第7，10和14天測量腫瘤的尺寸(mm3)。治療的最后一天(第14天)將動物殺死以收集腫瘤組織，并對其病理組織學水平和基因/蛋白質表達水平進行分析。對于肺癌細胞，實驗是注射0.25百萬細胞(ATCC HBT 177)。隨后，動物如上所述用黑素瘤處理。寡核苷酸的藥物制備由于與其它寡核苷酸一起使用，本發(fā)明寡核苷酸可以采用適于所選給藥方法的多種途徑對患者給藥，包括口服，靜脈內，肌肉內，腹膜內，表面給藥等等。除了含有一種或多種不同的寡核苷酸外，所要藥物制劑可以含有一種或多種無生物活性的化合物，即賦形劑，如穩(wěn)定劑(以延長存儲時間)，乳化劑，粘合劑，增稠劑，鹽，防腐劑等等。
本文所述寡核苷酸的傳遞是現(xiàn)有技術中已知的，并適合于很多種動物，包括哺乳動物，尤其包括人類。例如，《反義寡核苷酸治療的傳遞策略》(Delivery Strategies for Antisense OligonucleotideTherapeutics)，CRC出版社(Saghir Akhtar，ed.1995)詳細敘述了多種這樣的傳遞路線和策略，該文全部在此引作參考。僅舉第5章為例(并不限制全書的實用性)，該章描述了傳統(tǒng)給藥方法，如靜脈內，腹膜內和皮下給藥，以及“非破壞途徑”給藥，如鼻內，眼，透皮和離子電滲法(出處同上，71-83頁)，所有這些方法均可用于本發(fā)明。本文第6章論述了進行寡核苷酸治療的變化方法，防核酸酶，這里所用術語核苷酸，寡核苷酸和核酸堿具體包括所說的變化方法和這些化合物天然形式的所有其它保守的改性變體(出處同上，85-104頁)。要求保護的寡核苷酸也可以與脂類或其它能主動輸送通過細胞膜的化合物結合，有或沒有連接者，并如美國專利5,411,947所述進行口服給藥，該文在此一并引作參考。更進一步，本發(fā)明寡核苷酸可以“赤裸”的形式，裝入膠囊，與小囊，脂質體，珠粒，微球一起作為螯合劑和氣溶膠直接給藥到肺部，例如用ICN生物醫(yī)學產品(編號SPAG2)。因此，本發(fā)明寡核苷酸可以基本上用所有已知的寡核苷酸給藥途徑給藥，用所有接受的變化方法制備核苷酸類似物和前藥，并包括所有適當的結合劑和賦形劑，劑型和治療方案。
寡核苷酸可以常用于生物活化化合物技術的劑量和數量使用，但用量要調整為使吸收，傳輸和細胞攝入更有效。所用劑量可以全部一次給藥，也可以分成幾個較小劑量以不同的時間間隔給藥。目前，本發(fā)明寡核苷酸最優(yōu)選的給藥方式是每公斤患者體重靜脈內注射約0.1-100mg寡核苷酸，每周1-14次持續(xù)約40天。這種方案是基于觀察到類似的寡核苷酸在體內的半衰期為幾分鐘到幾小時，并觀察到對蛋白合成的作用可持續(xù)48或72小時。當然，對每個患者的具體治療方案還將取決于醫(yī)生的經驗，并要權衡所涉及的疾病，患者的健康和反應情況，副作用，以及醫(yī)生已知的其它因素。例如，所用劑量是大還是小，治療方案延續(xù)的時間長短都將取決于醫(yī)生的判斷，還可能包括治療期間暫停使用寡核苷酸休息的時間。治療還可以結合其它適當的抗癌和緩解治療。所治療的疾病的進展/緩解情況可采用放射性分析和其它現(xiàn)有技術已知的方法通過測定腫瘤尺寸的變化，轉移的程度和其它因素來確定，副作用的存在與否和程度通過測定肝和/或腎功能確定，以及例如用EKG(本領域已知的技術)測定血液循環(huán)確定。
寡核苷酸可以常規(guī)方式如口服，靜脈內，腹膜內，肌肉內，皮下或其它本領域已知方式給藥。但是，對于這些方式中的大多數改性寡核苷酸，包括分別在美國專利申請08/333,895和08/333,545(此兩篇文獻在此引入作為參考)中所述的主鏈和/或糖改性核苷酸可以優(yōu)先用來提高寡核苷酸的存活能力。對于口服給藥，可將寡核苷酸與惰性稀釋劑或可吸收食用載體一起給藥，或將寡核苷酸直接與食物混合使用。口服給藥寡核苷酸可與賦形劑混合，制成可消化片劑，含片，糖錠，囊劑，酏劑，懸浮糖漿，干膠片等形式。
片劑，錠劑，丸劑，囊劑等也可以含有下列物質粘合劑，如黃蓍膠，阿拉伯膠，玉米淀粉或明膠；賦形劑，如磷酸二鈣；崩解劑，如玉米淀粉，馬鈴薯淀粉，藻酸等；潤滑劑，如硬脂酸鎂；甜味劑，如蔗糖，乳糖或糖精；調味劑，如薄荷，冬青油或櫻桃香料。如果劑量單位是膠囊，則除了上述各種類型的材料外，它還可以含有液體載體。各種其它材料也可以包衣或進一步改善劑量單位的物理形狀的形式存在。例如，片劑，丸劑或囊劑可以用蟲膠，糖或二者包衣。糖漿或酏劑可以含有蔗糖作為甜味劑，甲基和對羥苯甲酸丙酯作防腐劑，著色劑和矯味劑如櫻桃或各種味素。這些附加的材料應該在所用劑量內基本上是無毒的。而且，寡核苷酸可以被混合制成緩釋制劑。
非腸道給藥的制劑可以包括無菌水溶液或分散液，以及可當場制成無菌可注射溶液或分散液的無菌粉末。該溶液或分散液還可以含有緩沖劑，稀釋劑和其它適當的添加劑，并制成可促進組合物中寡核苷酸被細胞攝入的形式，例如，將寡核苷酸包在適當脂質體中。用于非腸道給藥的優(yōu)選溶液和分散液是無菌的，其流動性要能滿足給藥要求，制造和使用中要充分穩(wěn)定，并能防止微生物如細菌和真菌的污染。載體可以是溶劑或分散介質，例如，包括水，乙醇，多醇(如甘油，丙二醇和聚乙二醇液體等等)，它們的適當混合物，以及植物油。例如，可以通過使用包衣如卵磷脂，在分散液情況下保持所要的顆粒尺寸，以及通過使用表面活性劑來保持適當的流動性。
無菌注射液是將所需量的活性化合物在適當溶劑中與上述一種或多種其它成分混合，然后經過滅菌制成的。分散液一般是將多種滅菌后的活性成分混入含有基本分散介質和所需的上列其它成分的無菌載體中制成。對于用于制備無菌注射液的無菌粉末這種情況，優(yōu)選的制備方法是采用真空干燥和冷凍干燥技術，它能夠產生含有活性成分和事先經滅菌過濾溶液得到的其它所要成分的粉末。
表面給藥的藥物制劑主要采用含有用于局部處理的生物活性化合物。進行表面治療的制劑包括軟膏，噴劑，明膠，懸浮劑，洗液，乳膏等等。用于表面給藥的制劑除含有本寡核苷酸外，還可以含有已知的載體材料，如異丙醇，甘油，石蠟，十八烷醇，聚乙二醇等?？伤幱幂d體還包括已知的化學吸收助催化劑。這些吸收助催化劑的實例有，例如，二甲基乙酰胺(美國專利3,472,931)，三氯乙醇或三氟乙醇(美國專利3,891,757)，某些醇和它們的混合物(英國專利1,001,949)和英國專利說明書1,464,975。
寡核苷酸溶液可以游離堿或可藥用鹽形式貯存和/或給藥，而且，最好在水中適當與表面活性劑如羥基丙基纖維素混合制成。分散液可在甘油，液體聚乙二醇及其混合物，以及油中制備。這些組合物和制劑最好含有防腐劑以防止微生物生長。
為防止微生物活動可以采用多種抗菌劑和殺真菌劑，例如，對羥苯甲酸酯類，氯丁醇，苯酚，山梨酸，thmerosal等。在多數情況下，優(yōu)選含有等滲劑如氯化鈉。為延長注射用組合物壽命可以采用延遲吸收劑如單硬脂酸鋁和明膠。
上述組合物和制劑優(yōu)選含有至少0.1％活性寡核苷酸。當然，組合物和制劑的百分含量可以變化，也可以含有約2-60％重量藥量給藥。在用組合物和制劑進行的治療中活性化合物的含量是能夠得到所要劑量的量。
這里所用術語“可藥用載體”包括任何和所有溶劑，分散介質，包衣，抗菌劑和殺真菌劑，等滲劑和吸收延遲劑等。所用藥物活性物質的介質和化學劑是本領域已知的。除了任何常用的介質或活性劑在一定程度上與治療用活性成分不相容之外，它在治療用組合物和制劑中的用途是互補的。
本寡核苷酸除其治療用途之外，它們還可以用于實驗室作為研究吸收，分布，細胞攝入和效率的工具。所用參考文獻本文所摘錄的所有專利，專利申請和發(fā)表物在此一并引作參考。等價關系至此，本文已經公開了反義寡核苷酸在控制表達于非小細胞肺癌和黑素瘤細胞中的IL-8受體的功效，并公開了將這些寡核苷酸用于臨床實踐的方法。雖然已經用具體實例和說明書加以展示和描述，但對本領域技術人員來說顯然可以進行不脫離本發(fā)明概念的其它修改。因此，本發(fā)明對不超出所附權利要求書精神的變化沒有限制。
權利要求
1.具有5’CAC CGG AAG GAA CC3’(SEQ ID NO1)序列的寡核苷酸。
2.具有5’GAA AGT TTG TGC CTT ATG GA3’(SEQ ID NO2)序列的寡核苷酸。
3.權利要求1或2的寡核苷酸，其中至少一部分主鏈是從正常發(fā)生的磷酸二酯酶構型經過改性而來。
4.權利要求1，2或3的寡核苷酸，其中至少糖中的一個是從正常的核糖構型經過改性而來。
5.一種治療至少部分由IL-8受體誘導的疾病的方法，該方法包括給患者施用有效量的權利要求1或2寡核苷酸的步驟。
6.一種含有權利要求1或2寡核苷酸的藥物制劑。
全文摘要
本發(fā)明提供了有效抑制腫瘤,尤其是黑素瘤和/或肺癌的生長,轉移和/或血管生成的寡核苷酸,并提供了用這些寡核苷酸治療疾病的方法。
文檔編號C07H21/00GK1202900SQ9619845
公開日1998年12月23日 申請日期1996年11月16日 優(yōu)先權日1995年11月21日
發(fā)明者Z·皮德茲科斯基, D·斯斯拉克, G·奧比納 申請人:Icn藥品公司