專利名稱：甲氨喋呤衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新型的甲氨喋呤衍生物，更詳細(xì)說(shuō)，是涉及用作抗風(fēng)濕病藥劑的新型甲氨喋呤衍生物。
甲氨喋呤從來(lái)都是作為白血病的治療藥在使用，但1951年Gubner等人提出有關(guān)將氨基喋呤用于慢性關(guān)節(jié)風(fēng)濕病(RA)是有效的報(bào)告后，作為RA的治療藥而受到注意，并主要在歐美使用。最近，對(duì)用法、用量進(jìn)行了詳細(xì)的研究，弄清楚了低用量甲氨喋呤療法的副作用少，而且能發(fā)揮優(yōu)良的有效性。然而，不能忽視由于服用甲氨喋呤而導(dǎo)致肝病和肺纖維化等副作用，因此仍然希望研究出進(jìn)一步減少副作用，而且效力優(yōu)良的藥物。
迄今，作為在N10上引入除甲基以外的烷基的甲氨喋呤衍生物，例如已知有下式表示的化合物，但這些化合物活性不夠。


圖1表示被驗(yàn)藥物在各種濃度下的細(xì)胞增殖率。
本發(fā)明的化合物雖然在WO92/9436公報(bào)中記載有其上位概念的通式，但它在實(shí)際制造中的例子都是已知文獻(xiàn)從未記載過(guò)的新型化合物，例如是按以下方法合成的化合物。
(J.Med.Chem.，22，862(1979))
(J.Med.Chem.，25，877(1982))本發(fā)明者為了在這種甲氨喋呤衍生物中，獲得作為抗風(fēng)濕病藥劑而其藥效好并且副作用少的更優(yōu)良的化合物，進(jìn)行了努力的研究，以致完成了本發(fā)明。
本發(fā)明涉及以下通式(Ⅰ)表示甲氨喋呤衍生物及其鹽類。本發(fā)明還提供含有這些化合物中至少一種作為有效成分的抗風(fēng)濕病藥劑。
(式中，R1、R2可相同或不相同，表示氫原子或碳原子數(shù)為1-4的低級(jí)烷基。)
(式中，R1、R2可相同或不相同，表示氫原子或碳原子數(shù)為1-4的低級(jí)烷基，A表示保護(hù)基，X表示鹵原子。)由通式(1)的化合物和通式(2)的化合物得到通式(3)的化合物的反應(yīng)是按照常用的酰胺結(jié)合生成反應(yīng)進(jìn)行，例如，將通式(1)的化合物懸浮在亞硫酰氯、草酰氯等?；u化劑中，在催化劑量的二甲基甲酰胺存在下，于室溫下攪拌，將所得的酰基鹵溶解在二氯甲烷等溶劑中的物質(zhì)，在冰冷或水冷卻下加到通式(2)化合物的水溶液中，在碳酸鉀、氫氧化鈉、碳酸氫鈉等無(wú)機(jī)鹽存在下，于室溫進(jìn)行攪拌。
式中，作為用A表示的保護(hù)基，可舉出酰基等氨基的保護(hù)基，優(yōu)選為芐酯基、對(duì)甲苯磺?；?、乙?；?。通式(1)的化合物，例如，可用國(guó)際公開(kāi)WO092/9434號(hào)公報(bào)記載的方法制得。
通式(3)的化合物可用通常的方法脫去保護(hù)基，變換成通式(4)的化合物。例如，當(dāng)保護(hù)基是芐酯基、對(duì)甲苯磺酰基時(shí)，將茴香醚和苯酚等溶解在溴化氫-乙酸溶液中，在該溶中添加通式(3)的化合物，在10℃-60℃，優(yōu)選在室溫下攪拌之。此外，當(dāng)保護(hù)基是芐酯基時(shí)，可將通式(3)的化合物溶解在甲醇、乙醇或乙酸等溶劑中，添加鈀-碳后，在氫氣氛中室溫下進(jìn)行攪拌。
由通式(4)的化合物和通式(5)的化合物得到通式(6)化合物的反應(yīng)，是將通式(4)的化合物和通式(5)的化合物放在二甲基乙酰胺或二甲基甲酰胺等溶劑中，在0℃-100℃，優(yōu)選是在50℃-70℃下進(jìn)行攪拌。特別是，當(dāng)R1、R2是氫原子時(shí)，進(jìn)一步在甲醇或乙醇等溶劑中添加1N氫氧化鈉水溶液等堿性水溶液，在0℃-60℃，優(yōu)選在15℃-35℃攪拌，從而獲得目的物。作為式中X表示的鹵原子，可舉出溴原子、氯原子。
本發(fā)明的化合物也可用以下方法合成。
(式中，R1、R2、R3可相同或不相同，表示氫原子或碳原子數(shù)為1-4的低級(jí)烷基，X表示鹵原子。)由通式(5)的化合物和通式(7)的化合物得到通式(8)化合物的反應(yīng)，是按照由通式(4)的化合物和通式(5)的化合物得到通式(6)化合物的反應(yīng)同樣的方法進(jìn)行。通式(7)的化合物，例如，可用國(guó)際公開(kāi)WO92/9436號(hào)公報(bào)記載的方法得到。
由通式(8)的化合物和通式(2)的化合物得到通式(6)化合物的反應(yīng)，是通過(guò)常用的酰胺結(jié)合生成反應(yīng)進(jìn)行。
本發(fā)明的化合物還可以用通常的方法作為鹽的形式獲得。作為使用的鹽，例如，可舉出鹽酸鹽、氫溴酸鹽。氫碘酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽等無(wú)機(jī)鹽，琥珀酸鹽、丙二酸鹽、乙酸鹽、馬來(lái)酸鹽、富馬酸鹽、檸檬酸鹽、葡糖酸鹽、扁桃酸鹽、安息香酸鹽、水楊酸鹽、甲磺酸鹽、苯磺酸鹽、對(duì)甲苯磺酸鹽等有機(jī)酸鹽、鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽等金屬鹽，優(yōu)選為無(wú)機(jī)酸鹽或有機(jī)酸鹽，最好是氫溴酸鹽和甲磺酸鹽。
含有本發(fā)明化合物的藥劑可以口服或非口服投與，最好是口服或向關(guān)節(jié)腔內(nèi)等局部投與。投與量根據(jù)患者的體重、癥狀而不同，通常最好是0.01-100mg/日/人。
含有本發(fā)明化合物的藥劑的形式，可以是注射劑形式的液劑、片劑、膠囊、粉劑等。
用通式(1)表示的本發(fā)明化合物，與甲氨喋呤和已有的甲氨喋呤衍生物相比較，在抗風(fēng)濕病的作用和毒性雙方平衡方面優(yōu)良，用作抗風(fēng)濕病藥劑是有效的。
以下，根據(jù)實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的化合物，但本發(fā)明并不受這些實(shí)施例的限制。
參考例1N-(4-芐酯基-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噻嗪-7-羰基)-L-α-氨基己二酸二甲酯的合成在4-芐酯基-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噻嗪-7-羧酸(2.0g)中添加亞硫酰氯(10ml)，于室溫?cái)嚢?小時(shí)，然后在減壓下濃縮干固反應(yīng)液。將所得固體溶解在二氯甲烷(25ml)中，在該溶液中順次添加L-α-氨基己二酸二甲酯鹽酸鹽(1.4g)的水溶液(25ml)，其次是碳酸鉀(3.4g)，攪拌一夜。將反應(yīng)液加到飽和碳酸氫鈉水溶液中，用氯仿萃取有機(jī)物。進(jìn)而用1N鹽酸洗滌氯仿層后，用硫酸鈉干燥，減壓下蒸餾除去溶劑。將所得殘?jiān)?jīng)過(guò)硅膠柱色譜提純，作為洗脫溶劑使用氯仿∶甲醇＝100∶1的混合液，獲得標(biāo)題化合物(2.35g)。
1HNMR(CDCl3、δ值)1.6-2.1(4H，m)、2.37(2H，t，J＝7.1Hz)、3.20(2H，m)、3.67(3H，s)、3.78(3H，s)、3.98(2H，m)、4.77(1H，m)、5.23(2H，s)、6.75(1H，d，J＝7.3Hz)、7.36(5H，m)、7.48(2H，m)、7.63(1H，d，J＝1.5Hz)參考例2N-(3，4-二氫-2H-1，4-苯并噻嗪-7-羰基)-L-α-氨基己二酸二甲酯的合成在茴香醚(15g)的30%溴化氫-乙酸溶液(200ml)中添加參考例1的化合物(14.8g)，于室溫?cái)嚢?小時(shí)。然后在反應(yīng)液中添加大量的醚后，沉淀出紅褐色的油狀物。除去大部分的醚層并將油狀物懸浮在氯仿中，用飽和碳酸氫鈉洗滌該懸浮液，用氯仿萃取。用硫酸鈉干燥氯仿層，減壓下蒸餾除去溶劑，獲得標(biāo)題化合物(7.6g)。
1HNMR(CDCl3-CD3OD，δ值)1.6-2.0(4H，m)、2.40(2H，t，J＝6.8Hz)、3.01(2H，m)、3.68(5H，m)、3.78(3H，s)、4.65(1H，m)、6.50(1H，d，J＝8.8Hz)、7.41(2H，m)、7.51(1H，d，J＝2.0Hz)
實(shí)施例1N-(1-((2，4-二氨基-6-喋啶基)甲基)-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噻嗪-7-羰基)-L-α-氨基己二酸二甲酯的合成將參考例2的化合物(7.6g)和6-溴代甲基-2，4-二氨基喋啶氫溴酸鹽異丙醇加成物(8.2g)懸浮在二甲基乙酰胺(120ml)中，于60℃攪拌13小時(shí)。冷卻后，將反應(yīng)液倒入飽和碳酸氫鈉水溶液中，用氯仿∶甲醇＝10∶1的混合溶劑萃取。用硫酸鈉干燥有機(jī)層后，減壓下蒸餾除去溶劑。將所得殘?jiān)?jīng)過(guò)硅膠柱色譜提純，作為洗脫溶劑使用氯仿∶甲醇＝10∶1的混合物，獲得標(biāo)題化合物(5.8g)。
1HNMR(CDCl3-CD3OD，δ值)1.6-2.0(4H，m)、2.39(2H，t，J＝7.1Hz)、3.17(2H，m)、3.68(3H，s)、3.76(3H，s)、3.94(2H，m)、4.66(1H，m)、4.79(2H，s)、6.70(1H，d，J＝8.8Hz)、7.42(2H，m)、7.62(1H，d，J＝2.4Hz)、8.67(1H，s)實(shí)施例2N-(1-((2，4-二氨基-6-喋啶基)甲基)-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噻嗪-7-羰基)-L-α-氨基己二酸的合成將實(shí)施例1的化合物(5.8g)溶解在甲醇(300ml)中，于35℃添加1N氫氧化鈉水溶液(32.2ml)，于室溫?cái)嚢枰灰?。然后在減壓下使反應(yīng)液干固。將所得固形物溶解在水(100ml)水中，使用1N鹽酸將pH調(diào)至3.7，于冷處放置2小時(shí)。濾取析出的沉淀，獲得標(biāo)題化合物(4.5g)。
1HNMR(DMSO-d6，δ值)1.5-1.9(4H，m)、2.21(2H，t，J＝7.1Hz)、3.15(2H，m)、3.96(2H，m)、4.30(1H，m)、4.76(2H，s)、6.78(1H，d，J＝8.8Hz)、7.44(1H，m)、7.60(1H，s)、8.17(1H，d，J＝7.8Hz)、8.65(1H，s)實(shí)施例3N-(1-((2，4-二氨基-6-喋啶基)甲基)-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噻嗪-7-羰基)-L-α-氨基己二酸氫溴酸鹽(2/3水合物)的合成將實(shí)施例2中獲得的化合物(100mg)懸浮在2.4%的氫溴酸(10ml)中，在熱水浴中加溫至60℃使之溶解。然后經(jīng)過(guò)棉條過(guò)濾，將濾液冷卻至室溫，放置一夜。濾取析出的針狀結(jié)晶，真空加熱干燥，獲得標(biāo)題化合物(92mg)。
1HNMR(DMSO-d6，δ值)1.42-1.90(4H，m)、2.21(2H，t，J＝7.3Hz)、3.19(2H，m)、3.97(2H，m)、4.26(1H，m)、4.84(2H，s)、6.76(1H，d，J＝8.9Hz)、7.44(1H，dd，J＝2.2Hz、8.8Hz)、7.62(1H，d，J＝1.97Hz)、8.23(1H，d，J＝8.2Hz)、8.80(1H，s)元素分析值C43.76 H4.31 N18.73S5.12 Br13.43計(jì)算值C43.73 H4.37 N18.54S5.31 Br13.22分子式C22H24N8O5S·HBr·2/3H2O試驗(yàn)例來(lái)自風(fēng)濕病患者的滑膜細(xì)胞的增殖抑制試驗(yàn)將來(lái)自RA患者的滑膜細(xì)胞2.5×103個(gè)和各種濃度的被檢驗(yàn)藥一起，用具有96個(gè)小井(Well)的培養(yǎng)板進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)開(kāi)始3天后，在各小井中添加1μCi3H-UdR，再培養(yǎng)2天。培養(yǎng)終止后，用閃爍計(jì)數(shù)器測(cè)定進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的3H-UdR。
使用的藥物如下所示。
將結(jié)果示于圖1。從圖1可清楚地看到，本發(fā)明化合物具有的滑膜細(xì)胞的增殖抑制作用比對(duì)照化合物優(yōu)良。
通式(1)表示的本發(fā)明化合物具有優(yōu)良的抗風(fēng)濕病作用，與甲氨喋呤相比較其毒性低，因此作為抗風(fēng)濕病藥劑是有效的。
權(quán)利要求
1.通式(1)表示的化合物及其鹽，
(式中，R1、R2可相同或不相同，代表氫原子或碳原子數(shù)為1-4的低級(jí)烷基。)
2.抗風(fēng)濕病藥劑，它含有將權(quán)利要求1所述通式(1)表示的化合物及其鹽中至少一種作為有效成分。
全文摘要
本發(fā)明涉及抗風(fēng)濕病藥劑，該藥劑含有以下通式表示的化合物及其鹽，并且將它們中的至少一種作為有效成分。(式中，R
文檔編號(hào)C07D475/08GK1093365SQ93121089
公開(kāi)日1994年10月12日 申請(qǐng)日期1993年12月24日 優(yōu)先權(quán)日1992年12月25日
發(fā)明者大井信広, 鈴木裕史 申請(qǐng)人:中外制藥株式會(huì)社