專利名稱：一種從丹參中提取丹酚酸b的工藝方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種從丹參中提取丹酚酸B的新的工藝方法。
背景技術：
丹參始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》列為上品，是我國傳統(tǒng)醫(yī)學中的常用藥之一，有著悠久的臨床應用歷史；根據(jù)現(xiàn)代藥理研究表明，丹酚酸類化合物具有很強的抗氧化作用，可以清除體內(nèi)的超氧陰離子和羥基自由基，抑制脂質(zhì)過氧化反應，改善微循環(huán)；丹參臨床主要用于治療心、腦血管疾病和與之相關的各類疾病，有著廣泛的應用領域。
丹參水溶性成分中的丹酚酸B是主要有效成分之一，含量高且藥效強?，F(xiàn)有文獻報道的丹參中有效成分丹酚酸B的分離純化路線主要為提取——除雜——柱層析；這些提取分離方法主要區(qū)別在1、提取方法的不同，有水提，不同濃度乙醇水溶液提取等方法；2、除雜方法的不同，有醇沉，絮凝，過大孔樹脂，萃?。恢鶎游霾捎弥苽渖V柱進行分離，但是載樣量少只能得到微量的產(chǎn)品。
由于丹酚酸類化合物的結(jié)構和物理化學性質(zhì)非常相近，都具有鄰苯二酚及Ar-CH＝CH-COOR結(jié)構。丹酚酸B的分子結(jié)構為 由于其結(jié)構的共同點，要分離出高純度的丹酚酸B非常困難，至今還沒有報道分離得到其純品，現(xiàn)有的文獻報導中丹酚酸B含量最高的也只有70％左右，大部分為60％左右，甚至更低。

發(fā)明內(nèi)容
本專利發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術的缺陷，開發(fā)出一種簡單、適于工業(yè)化生產(chǎn)，并且成本低的提取純化丹參中有效成分丹酚酸B的新工藝。本發(fā)明的技術構思是著樣的本發(fā)明綜合運用幾種提取純化方法，將其進行有機組合，開發(fā)出了一套適合分離純化丹酚酸B的新工藝。先用水進行提取，然后用殼聚糖絮凝，接著進行醇沉，再用石油醚和乙酸乙酯分別萃取，最后采用硅膠柱層析得到較高純度的丹酚酸B。
本發(fā)明是通過如下技術方案實現(xiàn)的1、將丹參用3-15倍的水，最好是6倍量的水，水提1-5小時，最好2小時；再用1-10倍的水，最好是4倍量的水，水提1-5小時，最好1.5小時，提取溫度為30-100攝氏度，最好為65攝氏度；2、合并兩次提取液，加入0.5％-5％的殼聚糖最好為2％殼聚糖100ml，絮凝時間為0.5-5小時，最好為1小時，絮凝溫度為0-40攝氏度，最好為0攝氏度；3、過濾，將濾液濃縮至生藥的兩倍量，調(diào)節(jié)醇濃度為50％-90％，最好為75％，進行醇沉0.5-10小時，最好為2小時；醇沉溫度為0-40攝氏度，最好為0攝氏度；4、再過濾濃縮除去乙醇，用水定容到生藥的2倍量，用等體積石油醚萃取兩次；將水相用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至1-4，最好為2，再用等體積乙酸乙酯萃取兩次；5、將乙酸乙酯相蒸干，過100-120目硅膠柱層析(洗脫劑為乙酸乙酯、乙醇)，得到純度為50％-96％的酚酸B產(chǎn)品。
以本發(fā)明的方法從丹參中提取有效成分酚酸B，技術上具有以下顯著優(yōu)點和進步(1)采用合適的絮凝劑殼聚糖，將蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)絮凝出來；(2)根據(jù)丹酚酸B既溶于水又溶于乙醇的特點，采用合適乙醇濃度沉去提取出來的大部分糖類成分和其他各種大分子物質(zhì)；(3)采用石油醚萃取，除去脂類物質(zhì)，使進一步分離得以簡化；(4)丹酚酸B為弱酸性化合物，在水溶液中為離子型化合物，故將其水溶液調(diào)節(jié)pH值，丹酚酸B轉(zhuǎn)化成分子型化合物，用乙酸乙酯進行萃取，去除不溶于乙酸乙酯的其他成分；(5)采用硅膠柱層析，根據(jù)丹酚酸B的分子結(jié)構特點選擇乙酸乙酯、石油醚和乙醇做為洗脫劑進行純化，得到所需純度的丹酚酸B；(6)本工藝采用萃取層析耦合，使得硅膠載樣量大，能夠大量制備丹酚酸B；(7)可以提供各種含量的丹酚酸B產(chǎn)品(50％-96％)；


圖1、圖2、圖3是HPLC測試結(jié)果，圖4是IR光譜圖，圖5是HENMR譜，圖6是MS譜。
下面結(jié)合具體實施方式
和附圖對本發(fā)明進行進一步說明。
實施例1丹酚酸B含量為80％的產(chǎn)物丹參原料200克加6倍量的水提2小時，再用4倍量的水提1.5小時，t＝65攝氏度；合并兩次提取液，加入2％殼聚糖100ml絮凝1小時，t＝0攝氏度；過濾，將濾液減壓濃縮至生藥材的兩倍量，加入無水乙醇1200ml沉降2小時，t＝0攝氏度；過濾，濃縮除去乙醇，用水定容到生藥的2倍量，用等體積石油醚萃取兩次，將水相調(diào)pH到2，用乙酸乙酯萃取兩次，將乙酸乙酯相蒸干，得總酚酸類成分，淡黃色，HPLC測試結(jié)果見附圖1，保留時間8.697min，為丹酚酸B，含量為80％。
實施例2丹酚酸B含量為90％的產(chǎn)物將丹酚酸B含量為80％的淡黃色粉末，拌入適量硅膠，裝入柱中，用乙酸乙酯∶石油醚(1∶1)混合溶液1000ml洗脫，丟掉洗脫液，再用400ml乙醇洗脫，將洗脫液濃縮至干，得灰白色粉末，HPLC測試結(jié)果見附圖2，保留時間8.272min為丹酚酸B，含量0％。
實施例3丹酚酸B含量為96％的產(chǎn)物將丹酚酸B含量為80％的淡黃色粉末，拌入適量硅膠，裝入柱中，用乙酸乙酯∶石油醚(1∶1)混合溶液2000ml洗脫，丟掉洗脫液，再用400ml乙醇洗脫，將洗脫液濃縮至干，得墨綠色粉末，HPLC測試結(jié)果見圖3，保留時間8.328min，為丹酚酸B，含量為96％。
HPLC、HENMR、IR、MS分析IR、HENMR、MS檢測分析為丹酚酸B，將產(chǎn)物進行HPLC檢測，結(jié)果見附圖4、5、6。
權利要求
1.一種從丹參中提取丹酚酸B的工藝方法，其特征在于，包括如下步驟(1)將丹參用3-15倍的水，水提1-5小時；再用1-10倍的水，水提1-5小時，提取溫度為30-100攝氏度；(2)合并兩次提取液，加入0.5％-5％的殼聚糖100ml，絮凝時間為0.5-5小時，絮凝溫度為0-40攝氏度；(3)過濾，將濾液濃縮至生藥的兩倍量，調(diào)節(jié)醇濃度為50％-90％，進行醇沉0.5-10小時；醇沉溫度為0-40攝氏度；(4)再過濾濃縮除去乙醇，用水定容到生藥的2倍量，用等體積石油醚萃取兩次；將水相用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至1-4，再用等體積乙酸乙酯萃取兩次；(5)將乙酸乙酯相蒸干，過100-120目硅膠柱層析(洗脫劑為乙酸乙酯、乙醇)，得到純度為50％-96％的酚酸B產(chǎn)品。
2.如權利要求1所述的從丹參中提取丹酚酸B的工藝方法，其特征在于，用水提取時，第一次用6倍量的水，第二次用4倍量的水。
3.如權利要求2所述的從丹參中提取丹酚酸B的工藝方法，其特征在于，第一次水提時間為2小時，第二次提取為1.5小時。
4.如權利要求3所述的從丹參中提取丹酚酸B的工藝方法，其特征在于，提取溫度為65攝氏度。
5.如權利要求1所述的從丹參中提取丹酚酸B的工藝方法，其特征在于，用2％殼聚糖絮凝。
6.如權利要求5所述的從丹參中提取丹酚酸B的工藝方法，其特征在于，絮凝時間為1小時。
7.如權利要求6述的從丹參中提取丹酚酸B的工藝方法，其特征在于，絮凝溫度為0攝氏度。
8.如權利要求1所述的從丹參中提取丹酚酸B的工藝方法，其特征在于，醇沉濃度75％。
9.如權利要求8所述的從丹參中提取丹酚酸B的工藝方法，其特征在于，醇沉時間為2小時。
10.如權利要求9所述的從丹參中提取丹酚酸B的工藝方法，其特征在于，醇沉溫度為0攝氏度。
11.如權利要求1所述的從丹參中提取丹酚酸B的工藝方法，其特征在于，進行等體積石油醚萃取兩次，將水相用鹽酸調(diào)節(jié)pH到2，等體積乙酸乙酯萃取兩次。
全文摘要
本發(fā)明將幾種從丹參中提取丹酚酸B的方法進行有機組合，開發(fā)出了一套適合分離純化丹酚酸B的新工藝。即先用水進行提取，然后用殼聚糖絮凝，接著進行醇沉，再用石油醚和乙酸乙酯分別萃取，最后采用硅膠柱層析得到較高純度的丹酚酸B。本發(fā)明的新的工藝方法，成本低廉，適于工業(yè)化生產(chǎn)，能夠提取較高純度的丹酚酸B。
文檔編號C07D307/84GK1528756SQ0315147
公開日2004年9月15日 申請日期2003年9月29日 優(yōu)先權日2003年9月29日
發(fā)明者張立國, 倪力軍, 高秀蛟 申請人:華東理工大學