專利名稱：一種從淫羊藿屬植物中提取淫羊藿甙的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從淫羊藿植物中提取淫羊藿甙的方法。
背景技術(shù)：
淫羊藿是小檗科(Berberidaceae)淫羊藿屬(Epimedium)植物的地上部分，由于淫羊藿屬植物在我國有20多種，占全球資源的一半以上，并且其中的許多成分可以藥用，所以近年來國內(nèi)、外為綜合利用淫羊藿屬植物的藥用價(jià)值進(jìn)行了廣泛的研究。截至目前，已從該屬植物中分離出20多種單體化合物，其從結(jié)構(gòu)上大致可分為四種類型，即黃酮甙類、木脂素類、生物堿類和其它類。淫羊藿甙是由生藥中分離出來的一種8-異戊烯基黃酮醇甙類化合物，其分子式為C33H40O15，黃色針狀結(jié)晶，分子量676.67，熔點(diǎn)225-230℃。藥理研究表明，淫羊藿甙的生理活性主要表現(xiàn)在改善心腦血管系統(tǒng)功能、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、促進(jìn)DNA合成以及預(yù)防和治療性功能障礙等方面。其次，淫羊藿甙還具有抗衰老和抗腫瘤作用。
通常，都是采用從淫羊藿屬植物中提取淫羊藿甙。徐綏緒在其專利CN1283627中公開了從淫羊藿中提取淫羊藿甙的方法，包括采用加水浸泡、煎煮后濾渣取液，將提取液濃縮后經(jīng)大孔樹脂吸附，乙醇洗脫，用活性炭脫色等步驟。此法由于多步操作造成回收率低，成本高，而且不能得到高純度的淫羊藿甙。彭樹林在其專利CN1294132中公開了一種淫羊藿總黃酮的提取工藝，利用吸附-洗脫原理，先將淫羊藿甙從其水浸提液中吸附到大孔樹脂上，再用乙醇將其洗脫，得到含量大于50％的淫羊藿甙粗品。由于此法采用的是傳統(tǒng)的吸附工藝，分辨率難以保證，所以得到的產(chǎn)物純度低，不便于進(jìn)一步使用。綜上所述，在現(xiàn)有的提取方法中主要存在的問題是1、其技術(shù)關(guān)鍵是使用的傳統(tǒng)的吸附-解吸工藝，產(chǎn)品純度低；2、提純步驟多，目的組分的中間損失大，回收率低；3、有些方法由于使用了氯仿等有毒有害的有機(jī)溶劑，造成其在產(chǎn)品中殘留。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有工藝方法中存在的產(chǎn)品純度及回收率低、產(chǎn)品中殘留有害物質(zhì)的缺陷，從而提供一種利用層析技術(shù)，使用低毒的有機(jī)溶劑，高效分離提純淫羊藿甙的方法，以獲得高純度和高回收率的淫羊藿甙純品。
本發(fā)明的目的是通過以下的技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明提供一種從淫羊藿屬植物中提取淫羊藿甙的方法，其工藝步驟如下1)從淫羊藿屬植物中浸提淫羊藿甙將原料葉子粉碎后，用其重量15～20倍量的有機(jī)溶劑的水溶液(I)回流提??；然后過濾，用有機(jī)溶劑的水溶液(I)洗滌濾渣數(shù)次；合并濾液及洗滌液，減壓濃縮，得到淫羊藿甙粗品；所述有機(jī)溶劑的水溶液(I)中有機(jī)溶劑的含量為50～100v％；所述的有機(jī)溶劑包括甲醇、乙醇、異丙醇、正丁醇、丙酮、乙酸甲酯、乙酸乙酯；2)初分離淫羊藿甙將非離子型的極性或弱極性大孔網(wǎng)狀吸附樹脂置于乙醇中浸泡過夜，然后用乙醇、去離子水依次淋洗，以使得樹脂活化；將此活化后的樹脂用重力沉降法裝柱；用有機(jī)溶劑的水溶液(II)作為流動(dòng)相，平衡層析柱，將步驟1)得到的淫羊藿甙粗品用有機(jī)溶劑的水溶液(II)溶解后上樣；用有機(jī)溶劑的水溶液(III)洗脫；使用紫外監(jiān)測洗脫過程，在270nm檢測，收集第二個(gè)洗脫峰；減壓濃縮所收集的洗脫液，得到淫羊藿甙初分離產(chǎn)物；所述有機(jī)溶劑的水溶液(II)中有機(jī)溶劑的含量為5～25v％；所述有機(jī)溶劑的水溶液(III)中有機(jī)溶劑的含量為45～70v％；所述有機(jī)溶劑包括甲醇、乙醇、異丙醇和丙酮；3)提純淫羊藿甙初分離產(chǎn)物將以硅膠為基質(zhì)的反相介質(zhì)或以聚合物為基質(zhì)的反相介質(zhì)用重力沉降法裝柱；用有機(jī)溶劑的水溶液(IV)作為流動(dòng)相，平衡層析柱，將步驟2)得到的淫羊藿甙初分離產(chǎn)物用有機(jī)溶劑的水溶液(IV)溶解后上樣；用有機(jī)溶劑的水溶液(V)作為洗脫液，梯度洗脫；使用紫外監(jiān)測洗脫過程，在270nm檢測，收集第三個(gè)洗脫峰；減壓濃縮所收集的洗脫液，得到淫羊藿甙再分離產(chǎn)物；所述有機(jī)溶劑的水溶液(IV)中有機(jī)溶劑的含量為35～55v％；所述有機(jī)溶劑的水溶液(V)中有機(jī)溶劑的含量為40～80v％；所述有機(jī)溶劑包括甲醇、乙醇和異丙醇；4)重結(jié)晶用35～45v％的甲醇或乙醇將步驟3)得到的淫羊藿甙再分離產(chǎn)物進(jìn)行重結(jié)晶，得到淫羊藿甙純品。
所述步驟1)的淫羊藿屬植物包括大葉淫羊藿、心葉淫羊藿、箭葉淫羊藿、柔毛淫羊藿、朝鮮淫羊藿、大花淫羊藿以及巫山淫羊藿。
所述步驟1)中的回流提取的次數(shù)為1～4次；所述的回流提取的時(shí)間為0.5～2小時(shí)。
所述步驟2)中的樹脂包括聚苯乙烯、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酸酯、丙烯酰胺與苯乙烯的共聚物，或甲基丙烯酸酯與苯乙烯的共聚物。
所述步驟3)中的以硅膠為基質(zhì)的反相介質(zhì)為市售的C8和C18反相介質(zhì)；所述步驟3)中的以聚合物為基質(zhì)的反相介質(zhì)包括以聚苯乙烯、聚丙烯酸酯、苯乙烯-二乙烯基苯共聚物、烷基改性的聚苯乙烯醇為基質(zhì)的反相介質(zhì)。
本發(fā)明提供的從淫羊藿屬植物中提取淫羊藿甙的方法不同于傳統(tǒng)的吸附工藝，其利用層析技術(shù)，從而具有以下的優(yōu)點(diǎn)a)產(chǎn)品可以達(dá)到很高的純度和回收率；b)避免了產(chǎn)品中有毒有害的有機(jī)溶劑殘留；c)生產(chǎn)工藝簡捷可行，耗時(shí)較短，且所用資源可再生利用，大大降低了生產(chǎn)成本。


圖1為使用本發(fā)明提供的提取方法在步驟1)得到的淫羊藿甙粗品的HPLC圖譜；其中峰1對(duì)應(yīng)于淫羊藿甙；圖2為使用本發(fā)明提供的提取方法在步驟3)得到的淫羊藿甙再分離產(chǎn)物的HPLC圖譜；其中峰2對(duì)應(yīng)于淫羊藿甙。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1、以含淫羊藿甙0.56％的大葉淫羊藿草的地上部分為原料，分離提純制備含淫羊藿甙97％的淫羊藿甙純品1)將20g含淫羊藿甙0.56％的大葉淫羊藿草原料葉子粉碎后，放入1000ml蒸餾瓶中，加入300ml 50v％乙醇水溶液，回流1小時(shí)；傾出上層清液后，向殘余物再加入300ml 50v％乙醇水溶液，再回流1小時(shí)；過濾，用同樣的乙醇水溶液洗滌濾渣數(shù)次；合并濾液及洗滌液，減壓濃縮，得到淫羊藿甙粗品4.03g，經(jīng)HPLC測定其中的淫羊藿甙含量為2.78wt％，回收率為100％；2)將NKA-9樹脂(南開大學(xué)化工廠生產(chǎn)，組分為聚苯乙烯)置于乙醇中浸泡過夜，然后用乙醇、去離子水依次淋洗，以使得樹脂活化；將此活化后的樹脂用重力沉降法裝入15×200mm的層析柱；用25v％乙醇水溶液平衡此層析柱；將步驟1)得到的淫羊藿甙粗品4.0g用15ml 25v％乙醇充分溶解后上樣，用25v％乙醇水溶液充分淋洗后，用65v％乙醇水溶液洗脫；UV270nm檢測，收集第二個(gè)洗脫峰；減壓濃縮所收洗脫液，得到淫羊藿甙初分離產(chǎn)物363.3mg，經(jīng)HPLC測定其中淫羊藿甙含量為30wt％，回收率為98％；3)將Polyspher PST 10(MERCK公司生產(chǎn)，組分為苯乙烯-二乙烯基苯共聚物)反相介質(zhì)以重力沉降法裝入16×100mm的層析柱，用45v％乙醇水溶液平衡此層析柱；將步驟2)得到的淫羊藿甙初分離產(chǎn)物360mg用8ml 45％乙醇水溶液充分溶解后上樣，用50～80v％乙醇水溶液梯度洗脫；UV270nm檢測，收集第三個(gè)洗脫峰；減壓濃縮所收洗脫液，得到淫羊藿甙再分離產(chǎn)物122.7mg，經(jīng)HPLC測定其中淫羊藿甙含量為88wt％，回收率為100％；4)用40v％的甲醇水溶液將步驟3)得到的122.7mg淫羊藿甙再分離產(chǎn)物進(jìn)行重結(jié)晶，得到淫羊藿甙純品100.2mg，純度為97％，回收率為90％。
實(shí)施例2、以含淫羊藿甙0.44％的心葉淫羊藿草的地上部分為原料，分離提純制備含淫羊藿甙97.5％的淫羊藿甙純品1)將10g含淫羊藿甙0.44％的心葉淫羊藿草原料葉子粉碎后，放入500ml蒸餾瓶中，如實(shí)施例1中同樣方法，用乙酸乙酯回流提取，每次使用乙酸乙酯200ml，回流1.5小時(shí)，共回流提取3次；過濾，用乙酸乙酯洗滌濾渣數(shù)次；合并濾液及洗滌液，減壓濃縮，得到淫羊藿甙粗品1.7g，經(jīng)HPLC測定其中的淫羊藿甙含量為2.63wt％，回收率為100％；2)將X-5樹脂(南開大學(xué)化工廠生產(chǎn)，組分為丙烯酰胺與苯乙烯的共聚物)置于乙醇中浸泡過夜，然后用乙醇、去離子水依次淋洗，以使得樹脂活化；將此活化后的樹脂用重力沉降法裝入15×200mm的層析柱；用20v％乙醇水溶液平衡此層析柱；將步驟1)得到的淫羊藿甙粗品1.5g用10ml 20v％乙醇充分溶解后上樣，用20v％乙醇水溶液充分淋洗后，用60v％乙醇水溶液洗脫；UV270nm檢測，收集第二個(gè)洗脫峰；減壓濃縮所收洗脫液，得到淫羊藿甙初分離產(chǎn)物121.4mg，經(jīng)HPLC測定其中淫羊藿甙含量為32wt％，回收率為98.5％；3)將C18反相介質(zhì)以重力沉降法裝入16×100mm的層析柱，用35v％甲醇水溶液平衡此層析柱；將步驟2)得到的淫羊藿甙初分離產(chǎn)物120mg用5ml 35％甲醇水溶液充分溶解后上樣，用35v％甲醇水溶液充分淋洗后，用40～80v％甲醇水溶液梯度洗脫；UV270nm檢測，收集第三個(gè)洗脫峰；減壓濃縮所收洗脫液，得到淫羊藿甙再分離產(chǎn)物39.0mg，經(jīng)HPLC測定其中淫羊藿甙含量為88.5wt％，回收率為98％；4)用45v％的甲醇水溶液將步驟3)得到的42.5mg淫羊藿甙再分離產(chǎn)物進(jìn)行重結(jié)晶，得到淫羊藿甙純品35.5mg，純度為97.5％，回收率為92％。
實(shí)施例3、以含淫羊藿甙0.52％的箭葉淫羊藿草的地上部分為原料，分離提純制備含淫羊藿甙98％的淫羊藿甙純品1)將30g含淫羊藿甙0.52％的箭葉淫羊藿草原料葉子粉碎后，放入1000ml蒸餾瓶中，加入350ml 60v％的甲醇水溶液，回流2小時(shí)，過濾，用同樣的甲醇水溶液洗滌濾渣數(shù)次；合并濾液及洗滌液，減壓濃縮，得到淫羊藿甙粗品5.74g，經(jīng)HPLC測定其中的淫羊藿甙含量為2.72wt％，回收率為100％；2)將XAD-4(Rohm & Hass公司生產(chǎn)，組分為甲基丙烯酸酯與苯乙烯的共聚物)置于乙醇中浸泡過夜，然后用乙醇、去離子水依次淋洗，以使得樹脂活化；將此活化后的樹脂用重力沉降法裝入15×200mm的層析柱；用25v％異丙醇水溶液平衡此層析柱；將步驟1)得到的淫羊藿甙粗品5.0g用20ml 25v％異丙醇水溶液充分溶解后上樣，用25v％異丙醇水溶液充分淋洗后，用45v％異丙醇水溶液洗脫；UV270nm檢測，收集第二個(gè)洗脫峰；減壓濃縮所收洗脫液，得到淫羊藿甙初分離產(chǎn)物444.3mg，經(jīng)HPLC測定其中淫羊藿甙含量為31wt％，回收率為98.5％；3)將Oligo R3(PE Biosystems公司生產(chǎn)，組分為烷基改性的聚苯乙烯醇)反相介質(zhì)以重力沉降法裝入16×100mm的層析柱，用40v％甲醇水溶液平衡此層析柱；將步驟2)得到的淫羊藿甙初分離產(chǎn)物400mg用15ml 40％甲醇水溶液充分溶解后上樣，用40v％甲醇水溶液充分淋洗后，用45～70v％甲醇水溶液梯度洗脫；UV270nm檢測，收集第三個(gè)洗脫峰；減壓濃縮所收洗脫液，得到淫羊藿甙再分離產(chǎn)物134.7mg，經(jīng)HPLC測定其中淫羊藿甙含量為92wt％，回收率為100％；4)用40v％的乙醇水溶液將步驟3)得到的134.7mg淫羊藿甙再分離產(chǎn)物進(jìn)行重結(jié)晶，得到淫羊藿甙純品113.2mg，純度為98.5％，回收率為90％。
實(shí)施例4、以含淫羊藿甙0.44％的柔毛淫羊藿草的地上部分為原料，分離提純制備含淫羊藿甙97％的淫羊藿甙純品1)將20g含淫羊藿甙0.44％的柔毛淫羊藿草原料葉子粉碎后，放入500ml蒸餾瓶中，如實(shí)施例1中同樣方法，用乙酸甲酯回流提取，每次使用乙酸甲酯200ml，回流0.5小時(shí)，共回流提取4次；過濾，用乙酸甲酯洗滌濾渣數(shù)次；合并濾液及洗滌液，減壓濃縮，得到淫羊藿甙粗品3.52g，經(jīng)HPLC測定其中的淫羊藿甙含量為2.50wt％，回收率為100％；2)將XAD-10(Rohm & Hass公司生產(chǎn)，組分為聚丙烯酰胺)置于乙醇中浸泡過夜，然后用乙醇、去離子水依次淋洗，以使得樹脂活化；將此活化后的樹脂用重力沉降法裝入15×200mm的層析柱；用5v％甲醇水溶液平衡此層析柱；將步驟1)得到的淫羊藿甙粗品2.4g用25ml 5v％甲醇充分溶解后上樣，用5v％甲醇水溶液充分淋洗后，用35v％甲醇水溶液洗脫；UV270nm檢測，收集第二個(gè)洗脫峰；減壓濃縮所收洗脫液，得到淫羊藿甙初分離產(chǎn)物181.8mg，經(jīng)HPLC測定其中淫羊藿甙含量為32wt％，回收率為97％；3)將C8反相介質(zhì)以重力沉降法裝入16×100mm的層析柱，用35v％甲醇水溶液平衡此層析柱；將步驟2)得到的淫羊藿甙初分離產(chǎn)物180.0mg用8ml 35％甲醇水溶液充分溶解后上樣，用40～70v％甲醇水溶液梯度洗脫；UV270nm檢測，收集第三個(gè)洗脫峰；減壓濃縮洗脫液，得到淫羊藿甙再分離產(chǎn)物61.9mg，經(jīng)HPLC測定其中淫羊藿甙含量為89wt％，回收率為95.6％；4)用35v％的乙醇水溶液將步驟3)得到的61.9mg淫羊藿甙再分離產(chǎn)物進(jìn)行重結(jié)晶，得到淫羊藿甙純品52.5mg，純度為97.5％，回收率為92.9％。
實(shí)施例5、以含淫羊藿甙0.48％的朝鮮淫羊藿草的地上部分為原料，分離提純制備含淫羊藿甙98.5％的淫羊藿甙純品1)將30g含淫羊藿甙0.48％的朝鮮淫羊藿草原料葉子粉碎后，放入1000ml蒸餾瓶中，加入300ml 20v％正丁醇水溶液，回流2小時(shí)，過濾，用同樣的正丁醇水溶液洗滌濾渣數(shù)次；合并濾液及洗滌液，減壓濃縮，得到淫羊藿甙粗品5.41g，經(jīng)HPLC測定其中的淫羊藿甙含量為2.62wt％，回收率為98.5％；2)將XAD-7(Rohm & Hass公司生產(chǎn)，組分為聚甲基丙烯酸酯)置于乙醇中浸泡過夜，然后用乙醇、去離子水依次淋洗，以使得樹脂活化；將此活化后的樹脂用重力沉降法裝入15×200mm的層析柱；用25v％丙酮水溶液平衡此層析柱；將步驟1)得到的淫羊藿甙粗品5.4g用20ml 25v％丙酮水溶液充分溶解后上樣，用25v％丙酮水溶液充分淋洗后，50v％丙酮水溶液洗脫；UV270nm檢測，收集第二個(gè)洗脫峰；減壓濃縮所收洗脫液，得到淫羊藿甙初分離產(chǎn)物443.2mg，經(jīng)HPLC測定其中淫羊藿甙含量為31wt％，回收率為97.1％；3)將POROSR2(PE Biosystems公司生產(chǎn)，組分為聚苯乙烯)反相介質(zhì)以重力沉降法裝入16×100mm的層析柱，用40v％乙醇水溶液平衡此層析柱；將步驟2)得到的淫羊藿甙初分離產(chǎn)物440mg用8ml 40％乙醇水溶液充分溶解后上樣，用40v％乙醇水溶液充分淋洗后，用45～80v％乙醇水溶液梯度洗脫；UV270nm檢測，收集第三個(gè)洗脫峰；減壓濃縮所收洗脫液，得到淫羊藿甙再分離產(chǎn)物146.7mg，經(jīng)HPLC測定其中淫羊藿甙含量為93wt％，回收率為100％；4)用40v％的乙醇水溶液將步驟3)得到的146.7mg淫羊藿甙再分離產(chǎn)物進(jìn)行重結(jié)晶，得到淫羊藿甙純品124.6mg，純度為98.5％，回收率為90％。
實(shí)施例6、以含淫羊藿甙0.47％的大花淫羊藿草的地上部分為原料，分離提純制備含淫羊藿甙97.5％的淫羊藿甙純品1)10g含淫羊藿甙0.47％的大花淫羊藿草原料葉子粉碎后，放入500ml蒸餾瓶中，如實(shí)施例1中同樣方法，用150ml 50％的丙酮水溶液回流提取，回流1小時(shí)，共回流提取2次；過濾，用同樣濃度的丙酮水溶液洗滌濾渣數(shù)次；合并濾液及洗滌液，減壓濃縮，得到淫羊藿甙粗品1.8g，經(jīng)HPLC測定其中的淫羊藿甙含量為2.58wt％，回收率為99％；2)將HP-30(日本三菱公司生產(chǎn)，組分為聚苯乙烯)置于乙醇中浸泡過夜，然后用乙醇、去離子水依次淋洗，以使得樹脂活化；將此活化后的樹脂用重力沉降法裝入15×200mm的層析柱；用20v％異丙醇水溶液平衡此層析柱；將步驟1)得到的淫羊藿甙粗品1.8g用20ml 20v％異丙醇充分溶解后上樣，用20v％異丙醇水溶液充分淋洗后，用45v％異丙醇水溶液洗脫；UV270nm檢測，收集第二個(gè)洗脫峰；減壓濃縮所收洗脫液，得到淫羊藿甙初分離產(chǎn)物143.6mg，經(jīng)HPLC測定其中淫羊藿甙含量為32wt％，回收率為99％；3)將TSK gel Octadecyl-NPR(TOSOH公司生產(chǎn)，組分為聚丙烯酸酯)介質(zhì)以重力沉降法裝入16×100mm的層析柱，用25v％異丙醇水溶液平衡此層析柱；將步驟2)得到的淫羊藿甙初分離產(chǎn)物140mg用5ml 25v％異丙醇水溶液充分溶解后上樣，用25v％異丙醇水溶液充分淋洗層析柱，用30～60v％異丙醇水溶液梯度洗脫；UV270nm檢測，收集第三個(gè)洗脫峰；減壓濃縮所收洗脫液，得到淫羊藿甙再分離產(chǎn)物49.3mg，經(jīng)HPLC測定其中淫羊藿甙含量為89wt％，回收率為98％；4)用45v％的乙醇水溶液將步驟3)得到的49.3mg淫羊藿甙再分離產(chǎn)物進(jìn)行重結(jié)晶，得到淫羊藿甙純品42.3mg，純度為97.5％，回收率為94％。
實(shí)施例7、以含淫羊藿甙0.51％的巫山淫羊藿草的地上部分為原料，分離提純制備含淫羊藿甙97.5％的淫羊藿甙純品1)將10g含淫羊藿甙0.51％的巫山淫羊藿草原料葉子粉碎后，放入500ml蒸餾瓶中，如實(shí)施例1中同樣方法，用40ml 50v％異丙醇水溶液回流提取，每次回流1小時(shí)，共回流提取2次；過濾，用同樣濃度的異丙醇水溶液洗滌濾渣數(shù)次；合并濾液及洗滌液，減壓濃縮，得到淫羊藿甙粗品1.96g，經(jīng)HPLC測定其中的淫羊藿甙含量為2.60wt％，回收率為100％；2)將S-8樹脂(南開大學(xué)化工廠生產(chǎn)，組分為聚苯乙烯)置于乙醇中浸泡過夜，然后用乙醇、去離子水依次淋洗，以使得樹脂活化；將此活化后的樹脂用重力沉降法裝入15×200mm的層析柱；用35v％的乙醇水溶液平衡此層析柱；將步驟1)得到的淫羊藿甙粗品1.9g用20ml 35v％的乙醇水溶液充分溶解后上樣，用35v％的乙醇水溶液充分淋洗層析柱，用65v％的乙醇水溶液洗脫；UV270nm檢測，收集第二個(gè)洗脫峰；減壓濃縮洗脫液，得到淫羊藿甙初分離產(chǎn)物163mg，經(jīng)HPLC測定其中淫羊藿甙含量為30wt％，回收率為99％；3)將C18反相介質(zhì)以重力沉降法裝入16×100mm的層析柱，用35v％甲醇水溶液平衡此層析柱；將步驟2)得到的淫羊藿甙初分離產(chǎn)物160mg用10ml 35％甲醇水溶液充分溶解后上樣，用35v％甲醇水溶液充分淋洗后，用40～80v％甲醇水溶液梯度洗脫；UV270nm檢測，收集第三個(gè)洗脫峰；減壓濃縮所收洗脫液，得到淫羊藿甙再分離產(chǎn)物50.8mg，經(jīng)HPLC測定其中淫羊藿甙含量為85wt％，回收率為90％；4)用45v％的甲醇水溶液將步驟3)得到的50.8mg淫羊藿甙再分離產(chǎn)物進(jìn)行重結(jié)晶，得到淫羊藿甙純品40.3mg，純度為97.5％，回收率為91％。
本實(shí)施例中用到的有機(jī)溶劑都可以回收后再次循環(huán)使用。
權(quán)利要求
1.一種從淫羊藿屬植物中提取淫羊藿甙的方法，其工藝步驟如下1)從淫羊藿屬植物中浸提淫羊藿甙將原料葉子粉碎后，用其重量15～20倍量的有機(jī)溶劑的水溶液(I)回流提取；然后過濾，用有機(jī)溶劑的水溶液(I)洗滌濾渣數(shù)次；合并濾液及洗滌液，減壓濃縮，得到淫羊藿甙粗品；所述有機(jī)溶劑的水溶液(I)中有機(jī)溶劑的含量為50～100v％；所述的有機(jī)溶劑包括甲醇、乙醇、異丙醇、正丁醇、丙酮、乙酸甲酯、乙酸乙酯；2)初分離淫羊藿甙將非離子型的極性或弱極性大孔網(wǎng)狀吸附樹脂置于乙醇中浸泡過夜，然后用乙醇、去離子水依次淋洗，以使得樹脂活化；將此活化后的樹脂用重力沉降法裝柱；用有機(jī)溶劑的水溶液(II)作為流動(dòng)相，平衡層析柱，將步驟1)得到的淫羊藿甙粗品用有機(jī)溶劑的水溶液(II)溶解后上樣；用有機(jī)溶劑的水溶液(III)洗脫；使用紫外監(jiān)測洗脫過程，在270nm檢測，收集第二個(gè)洗脫峰；減壓濃縮所收集的洗脫液，得到淫羊藿甙初分離產(chǎn)物；所述有機(jī)溶劑的水溶液(II)中有機(jī)溶劑的含量為5～25v％；所述有機(jī)溶劑的水溶液(III)中有機(jī)溶劑的含量為45～70v％；所述有機(jī)溶劑包括甲醇、乙醇、異丙醇和丙酮；3)提純淫羊藿甙初分離產(chǎn)物將以硅膠為基質(zhì)的反相介質(zhì)或以聚合物為基質(zhì)的反相介質(zhì)用重力沉降法裝柱；用有機(jī)溶劑的水溶液(IV)作為流動(dòng)相，平衡層析柱，將步驟2)得到的淫羊藿甙初分離產(chǎn)物用有機(jī)溶劑的水溶液(IV)溶解后上樣；用有機(jī)溶劑的水溶液(V)作為洗脫液，梯度洗脫；使用紫外監(jiān)測洗脫過程，在270nm檢測，收集第三個(gè)洗脫峰；減壓濃縮所收集的洗脫液，得到淫羊藿甙再分離產(chǎn)物；所述有機(jī)溶劑的水溶液(IV)中有機(jī)溶劑的含量為35～55v％；所述有機(jī)溶劑的水溶液(V)中有機(jī)溶劑的含量為40～80v％；所述有機(jī)溶劑包括甲醇、乙醇和異丙醇；4)重結(jié)晶用35～45v％的甲醇或乙醇將步驟3)得到的淫羊藿甙再分離產(chǎn)物進(jìn)行重結(jié)晶，得到淫羊藿甙純品。
2.按權(quán)利要求1所述的從淫羊藿屬植物中提取淫羊藿甙的方法，其特征在于所述步驟1)的淫羊藿屬植物包括大葉淫羊藿、心葉淫羊藿、箭葉淫羊藿、柔毛淫羊藿、朝鮮淫羊藿、大花淫羊藿以及巫山淫羊藿。
3.按權(quán)利要求1所述的從淫羊藿屬植物中提取淫羊藿甙的方法，其特征在于所述步驟1)中的回流提取的次數(shù)為1～4次；所述的回流提取的時(shí)間為0.5～2小時(shí)。
4.按權(quán)利要求1所述的從淫羊藿屬植物中提取淫羊藿甙的方法，其特征在于所述步驟2)中的樹脂包括聚苯乙烯、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酸酯、丙烯酰胺與苯乙烯的共聚物，或甲基丙烯酸酯與苯乙烯的共聚物。
5.按權(quán)利要求1所述的從淫羊藿屬植物中提取淫羊藿甙的方法，其特征在于所述步驟3)中的以硅膠為基質(zhì)的反相介質(zhì)為市售的C8和C18反相介質(zhì)；所述步驟3)中的以聚合物為基質(zhì)的反相介質(zhì)包括以聚苯乙烯、聚丙烯酸酯、苯乙烯-二乙烯基苯共聚物、烷基改性的聚苯乙烯醇為基質(zhì)的反相介質(zhì)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從淫羊藿屬植物中提取淫羊藿甙的方法。該方法的技術(shù)關(guān)鍵在于在常壓條件下利用層析技術(shù)，將淫羊藿屬植物中浸提的淫羊藿甙粗品進(jìn)行分離和提純，最后進(jìn)行重結(jié)晶獲得淫羊藿甙純品。本發(fā)明提供的方法可以高效分離提純淫羊藿甙，從而獲得高純度和高回收率的淫羊藿甙純品；使用低毒的有機(jī)溶劑，避免了產(chǎn)品中有毒有害的有機(jī)溶劑殘留；并且其生產(chǎn)工藝簡捷可行，耗時(shí)較短，且所用資源可再生利用，大大降低了生產(chǎn)成本。
文檔編號(hào)C07H1/08GK1535976SQ0312182
公開日2004年10月13日 申請(qǐng)日期2003年4月11日 優(yōu)先權(quán)日2003年4月11日
發(fā)明者蘇志國, 孫海虹, 李秀男 申請(qǐng)人:中國科學(xué)院過程工程研究所