一種新型水溶性納米粒子的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種新型水溶性納米粒子的制備方法，它是以果膠（PET）為載體，果膠的羧基與熊果酸（UA）的羥基酯化形成高分膠束，再自組裝形成納米粒子PET?UA·NPs，自組裝過程中通過包裹雙氫青蒿素疏水藥物或10?羥基喜樹堿，形成PET?UA(DHA)·NPs或PET?UA(HCPT)·NPs，形成具有核殼結(jié)構(gòu)的納米粒子。本發(fā)明的水溶性納米粒子的載藥量可調(diào)，靶向性強，較好的穩(wěn)定性，生物相容性好，毒性低，具有緩釋功能的納米藥物。本發(fā)明屬于生物制藥和納米技術(shù)領(lǐng)域，制備工藝簡單，操作方便，周期短。
【專利說明】
一種新型水溶性納米粒子的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于生物制藥和納米技術(shù)領(lǐng)域，涉及藥物遞送系統(tǒng)，具體涉及一種新型水 溶性納米粒子的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 熊果酸(Ursolic acid，簡稱UA)、雙氫青蒿素(Dihydroartemisinin，簡稱DHA)難 溶于水，直接口服對身體有一定程度的毒副作用，不能針對單一的癌癥進行治療，對癌細胞 無識別能力，殺死癌細胞的同時也殺死正常細胞，而且生物利用度較差，這些都限制了 UA在 藥學(xué)領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用，因此，解決其水溶性的問題、增加藥物穩(wěn)定性、提高對單一癌細胞緩 釋殺傷能力是UA臨床應(yīng)用的關(guān)鍵。
[0003] 果膠(Pectin)是存在于植物細胞壁中的多糖類大分子物質(zhì)。廣泛存在于蘋果、柑 橘等水果中，易于提取，與組織器官有很好的相容性，吸收好，無毒副作用，近年來，針對果 膠的巨大醫(yī)學(xué)潛力引起了國內(nèi)外很多學(xué)者對果膠的廣泛研究，大多是以輔料的形式攜載藥 物到達病灶或通過改性的方法遞送藥物，其大分子的擴散性差、易聚集等因素限制果膠的 生物醫(yī)藥利用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種新型水溶性納米粒子的制備方 法，PET-UA在水介質(zhì)中可自組裝形成納米粒子，解決UA的水溶相差，生物利用度低等問題， 自組裝過程同時包裹DHA或HCPT，形成PET-UA(DHA).NPs和PET-UA(HCPT).NPs，增大系統(tǒng)的 載藥量，包裹的藥物有很寬的選擇，大量的疏水性藥物都以實現(xiàn)自組裝的同時包裹藥物，包 裹的藥物前后對納米粒子的粒徑影響不大，使用果膠為藥物載體，靶向性好，載藥量高，避 免藥物的不完全釋放和突釋情況對患者帶來的毒副作用。
[0005] -種新型水溶性納米粒子的制備方法的技術(shù)方案如下： 一種新型水溶性納米粒子的制備方法，其特征在于，以果膠(PET)為載體，果膠的羧基 與熊果酸(UA)的羥基酯化形成高分膠束，再自組裝形成納米粒子PET-UA · NPs，自組裝過程 中通過包裹雙氫青蒿素疏水藥物或10-羥基喜樹堿，形成PET-UA(DHA) · NPs或PET-UA (HCPT)· NPs，形成具有核殼結(jié)構(gòu)的納米粒子。所述的新型水溶性納米粒子的具有如下式所 示的結(jié)構(gòu)：
式中，所述果膠酯化度50~75%。
[0006] 所述的一種新型水溶性納米粒子的制備方法，其納米粒子中UA的載藥量為0. 1%-12%，納米粒子的質(zhì)量百分比0.01%-90%，納米粒子半徑10-200nm。
[0007] 本發(fā)明所述的一種新型水溶性納米粒子的制備方法，包括以下步驟： (1) 取一定量的果膠，緩慢加入冰醋酸、乙酸酐和硫酸，冰浴下反應(yīng)一段時間，然后升溫 至50°C，攪拌至溶液澄清，混合物旋蒸，乙醇洗至中性，冷凍干燥，得到乙?；z粉末A; (2) 取一定量的步驟（1)中的粉末A溶于二甲基亞砜(DMS0)，果膠與DMS0的固液比1:20 ~l:50(g/ml)，加入激活劑1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)，催化劑4-二甲氨基吡啶(DMAP)，按照一定比例加入雙氫青蒿素，攪拌反應(yīng)30~50h，得到反應(yīng)混合液； (3 )對(2 )中反應(yīng)后的藥物進行純化，向反應(yīng)后的混合液中加入3V的乙醚/乙醇（1:1，v/ v)沉淀，4000rpm離心去上清液，乙醚/乙醇洗滌沉淀5次，離心除去上清液，45 °C下真空干燥 24h，收集粉末B; (4)取30mg(3)中的粉末B溶于5ml二甲基亞砜，溶解30min，逐滴滴入高速攪拌的100ml 去離子水中，攪拌5min，得到的納米粒子溶液在roS溶液中透析12h，每2h換一次透析液，透 析膜中的透析液冷凍干燥，得到粉末C，包裹過程是取25mg( 3)中冷干物，與5mgDHA或5mg HCPT混合，溶于攪拌的二甲基亞砜中，溶解30min，逐滴滴入高速攪拌的100ml去離子水中， 攪拌5min，得到的納米粒子溶液在PBS溶液中透析12h，每2h換一次透析液，透析膜中的透析 液冷凍干燥，分別得到粉末D和E。
[0008] 優(yōu)選地，步驟(2 )所述的UA與EDC、DMAP的摩爾比為1:0.8:0.2; 優(yōu)選地，步驟(4)所述的高聚物PET-UA與DHA和HCPT的摩爾比為1:0.5~1:1和1:0.1~ 1:2； 優(yōu)選地，步驟(4)所述的UA的載藥量為0.1%-12%，納米粒子的質(zhì)量百分比0.01%-90%，納 米粒子半徑1 〇_200nm; 相對現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有以下有益效果： 本發(fā)明的水溶性納米粒子的載藥量可調(diào)，靶向性強，較好的穩(wěn)定性，生物相容性好，毒 性低，具有緩釋功能的納米藥物。
【附圖說明】
[0009] 圖1為合成高分子化合物PET-UA的核磁圖 圖2為納米粒子的透射電鏡形貌圖。
【具體實施方式】
[0010]下面結(jié)合【具體實施方式】，對本發(fā)明作進一步說明。
[0011] 實施例1、一種新型水溶性納米粒子的制備方法： (l)PET的乙?；?取lg的PET(酯化度50%~80%)，緩慢加入25ml冰醋酸、15ml乙酸酐和0.6ml硫酸，冰浴下 反應(yīng)一段時間，然后升溫至50°C，攪拌至溶液澄清，混合物旋蒸，乙醇洗至中性，冷凍干燥， 得到乙?；z粉末A。
[0012] (2)PET-UA 的合成 ?。?)中PET O.lg，緩慢加入含4ml吡啶的25ml圓底燒瓶中，并超聲lOmin，攪拌溶解 20min，然后在溶液中加入O.lg激活劑1-(3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽 化0〇、0.028催化劑4-二甲氨基吡啶(0嫩?），攪拌301^11，加入0.18的1^，水浴反應(yīng)4811，得到 PET-DHA聚合物混合液。
[0013] (3)PET-UA 的純化 對(2 )中反應(yīng)后藥液進行純化，向反應(yīng)后的混合液中加入3V的乙醚/乙醇（1:1，v/v)沉 淀，4000rpm離心去上清液，乙醚/乙醇洗滌沉淀5次，離心除去上清液，45 °C下真空干燥24h， 收集粉末B; (4)PET-UA與DHA和HCPT的自組裝 取30mg(3沖的粉末B溶于5ml二甲基亞砜，溶解30min，逐滴滴入高速攪拌的100ml去離 子水中，攪拌5min，得到的納米粒子溶液在PBS溶液中透析12h，每2h換一次透析液，透析膜 中的透析液冷凍干燥，得到粉末C，包裹過程是取25mg (3 )中冷干物，與5mgDHA或5mg HCPT混 合，溶于攪拌的二甲基亞砜中，溶解30min，逐滴滴入高速攪拌的100ml去離子水中，攪拌 5min，得到的納米粒子溶液在PBS溶液中透析12h，每2h換一次透析液，透析膜中的透析液冷 凍干燥，分別得到粉末D和E粒徑大小為20~lOOnm。
[0014] 實施例2、一種新型水溶性納米粒子的制備方法： 在本實例中，通過與實施例1相同的合成方法及步驟，PET 0.1g，UA 0.5g，測得粒徑大 小為20~80nm〇
[0015] 實施例3、一種新型水溶性納米粒子的制備方法： 在本實例中，通過與實施例1相同的合成方法及步驟，PET 0.1g，UA 0.05g，測得粒徑大 小為30~130nm。
【主權(quán)項】
1. 一種新型水溶性納米粒子的制備方法，其特征在于，W果膠(PET)為載體，果膠的簇 基與熊果酸(UA)的徑基醋化形成高分膠束，再自組裝形成納米粒子陽T-UA ? NPs，自組裝過 程中通過包裹雙氨青葛素疏水藥物或10-徑基喜樹堿，形成PET-UA(DHA) ? NPs或PET-UA 化CPT )? NPs,形成具有核殼結(jié)構(gòu)的納米粒子。2. 所述的新型水溶性納米粒子的具有如式I所示的結(jié)構(gòu)：式中，所述果膠醋化度50~75%。3. 如權(quán)利要求1所述的一種新型水溶性納米粒子的制備方法，其特征在于，步驟如下： (1) 將一定量的果膠(PET)與冰醋酸、乙酸酢和硫酸在冰浴下反應(yīng)，然后升溫至50°C，攬 拌至溶液澄清，混合物旋蒸，乙醇洗至中性，冷凍干燥，得到乙酷化果膠粉末A; (2) 取一定量的步驟（1)中的粉末A溶于二甲基亞諷(DMSO)，果膠與DMSO的固液比1:20 ~l:50(g/ml)，加入激活劑1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)，催化劑4- 二甲氨基化晚(DMAP)，按照一定比例加入雙氨青葛素，攬拌反應(yīng)30~50h，得到反應(yīng)混合液； (3) 將步驟(2)中得到的反應(yīng)混合液加乙酸/乙醇（1:1，v/v)沉淀，離屯、，多次洗涂，沉淀 物透析，冷凍干燥，得到粉末B(PET-UA); (4) 將步驟(3)中粉末B和雙氨青葛素和10-徑基喜樹堿分別溶于二甲基亞諷，并滴入去 離子水中，所得納米粒子溶液透析，透析過程每化換一次PBS液，冷凍干燥，得到所述納米粒 子陽T-UA(DHA) ? NPs和陽T-UA化CPT )? NPs。4. 如權(quán)利要求1、2所述的一種新型水溶性納米粒子的制備方法，其特征在于，所述的UA 與邸C、DMAP的摩爾比為1:0.8:0.2,高聚物陽T-UA與DHA和肥PT的摩爾比為1:0.5~1:巧口 1: 0.1 ~1:2。5. 如權(quán)利要求1、2、3所述的一種新型水溶性納米粒子的制備方法，其特征在于，其納米 粒子中UA的載藥量為0.1%-12%，納米粒子的質(zhì)量百分比0.01%-90%，納米粒子半徑10- 200nm。6. 如權(quán)利要求1、2、3、4所述的一種新型水溶性納米粒子的制備方法，具有緩釋功能、癌 祀向性及穩(wěn)定的粒徑大小。
【文檔編號】A61K9/51GK105902518SQ201610384851
【公開日】2016年8月31日
【申請日】2016年6月2日
【發(fā)明人】雷建都, 劉彥雪, 劉靜, 何靜, 王璐瑩, 晉祿祿
【申請人】北京林業(yè)大學(xué)