蜈蚣三七提取物在制備痛風(fēng)藥物中的應(yīng)用及其藥物的制作方法
【專利摘要】本申請公開了蜈蚣三七提取物在制備治療痛風(fēng)藥物中的應(yīng)用及其藥物組合物。所述蜈蚣三七提取物包含蜈蚣三七總皂苷。所述蜈蚣三七提取物用水煎法制備。經(jīng)藥理試驗(yàn)和臨床試驗(yàn)證實(shí)其具有較好的治療痛風(fēng)作用，具備高效低毒的優(yōu)勢。蜈蚣三七提取物對高尿酸血癥大鼠具有降低血清尿酸水平作用，且不是通過抑制黃嘌呤氧化酶的表達(dá)發(fā)揮治療效果的。蜈蚣三七提取物對高尿酸血癥小鼠具有降低血清尿酸水平作用。
【專利說明】蜈蚣三七提取物在制備痛風(fēng)藥物中的應(yīng)用及其藥物
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及蜈蚣三七提取物的醫(yī)藥用途及其藥物組合物。
【背景技術(shù)】
[0002]痛風(fēng)(Gout)已成為嚴(yán)重威脅人類健康的代謝性疾病，近年的研究發(fā)現(xiàn)高尿酸血癥(Hyperuricemia)不僅是痛風(fēng)最重要的生化基礎(chǔ)，同時與代謝紊亂綜合征密切相關(guān),是心血管疾病、高血壓、腎臟疾病等獨(dú)立的危險因素，聯(lián)合國將其列為21世紀(jì)的20大頑癥之一。隨著世界范圍內(nèi)痛風(fēng)發(fā)病率的不斷升高，對高尿酸血癥及痛風(fēng)的發(fā)病機(jī)制和防治途徑的越來越受到關(guān)注。
[0003]高尿血酸癥是痛風(fēng)主要的生化標(biāo)志，而痛風(fēng)是一組異質(zhì)性疾病，它是因長期的嘌呤代謝障礙而引起的血尿酸(UA)增高而導(dǎo)致的組織損傷性的遺傳或獲得性的代謝性疾病。臨床醫(yī)學(xué)上一般認(rèn)為當(dāng)機(jī)體內(nèi)服的血尿酸量高于416ttmol / L時便為高尿酸血癥，痛風(fēng)患者必然伴有著高尿血酸癥，且據(jù)研究發(fā)現(xiàn)高尿血酸癥與糖尿病、肥胖癥、高血壓病、高脂血癥等疾病呈正相關(guān)。而其中大約有5%~12%的聞尿酸血癥患者會最終發(fā)展成為痛風(fēng)。近年來，高尿血酸癥和痛風(fēng)的發(fā)病率日益盛高，而且，已經(jīng)成為現(xiàn)在的主要疾病之一，給社會帶來了巨大的壓力，成為現(xiàn)在科研研究的重要方向。
[0004]高尿酸血癥按形成的原因可以分為原發(fā)性和繼發(fā)性高尿酸血癥兩類，由此痛風(fēng)被分為原發(fā)性痛風(fēng)和繼發(fā)性痛風(fēng)，這是目前臨床上廣泛采用的一種簡單而又實(shí)用的初步分類方法。人和猿類缺乏尿酸酶(可使尿酸分解成尿囊素)，據(jù)推測是由于在進(jìn)化過程中經(jīng)基因突變而造成的自然選擇，失去了編碼尿酸酶的功能基因，尿酸是嘌呤在機(jī)體內(nèi)代謝的終產(chǎn)物。嘌呤合成代謝增強(qiáng)和/或尿酸排泄減少是痛風(fēng)患者血清尿酸增高的原發(fā)機(jī)制，血液中尿酸的濃度取決于尿酸的生成和排泄之間的平衡。人體內(nèi)尿酸有兩個來源，體內(nèi)氨基酸、磷酸核糖及其他小分子化合物合成或核酸分解代謝產(chǎn)生(內(nèi)源性)，約占體內(nèi)總尿酸的80%;從富含嘌呤或核蛋白的食物中核昔酸分解而來(外源性)，約占體內(nèi)總尿酸的20%。雖然高嘌呤飲食并非痛風(fēng)的原發(fā)病因， 但大量吸收嘌呤可使細(xì)胞外液尿酸水平迅速發(fā)生變化，這常常是痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎急性發(fā)作的誘因。
[0005]尿酸的生成包括主要途徑和補(bǔ)救途徑兩部分。主要途徑即機(jī)體利用非嘌呤的前體物質(zhì)合成尿酸的途徑。具體來說，即先由5-磷酸核糖在磷酸核糖焦磷酸合成酶(PRPP合成酶)的作用下生成磷酸核糖焦磷酸(PRPP)，再與谷氨酞胺結(jié)合，通過谷氨酞胺轉(zhuǎn)移酶及腺嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(APRT)的作用生成1-氨基-5-磷酸核糖，然后陸續(xù)結(jié)合甘氨酸、天門冬氨酸等，經(jīng)過至少9個步驟，生成次黃嘌呤核苷酸(MP)。MP是一種重要的嘌呤核苷酸，它可以在酶的作用下繼續(xù)生成鳥嘌呤核苷酸(GMP)和腺嘌呤核苷酸(AMP)。最終均依靠黃嘌呤氧化酶(XOD)的作用生成尿酸。當(dāng)機(jī)體尿酸代謝的主要途徑受阻后，補(bǔ)救途徑就發(fā)揮主要作用，即依靠次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(HGPRT)和腺嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶的作用，將次黃嘌呤、鳥嘌呤、腺嘌呤分別生成MP、GMP、AMP，繼續(xù)維持機(jī)體正常的尿酸代謝。XOD調(diào)控尿酸生成的最終環(huán)節(jié)，因此在高尿酸血癥的發(fā)病中占有重要的地位。有研究發(fā)現(xiàn)，無論是脂代謝的異常，還是尿酸代謝的異常都會伴有XOD的水平異常，這提示我們，由于XOD參與人體的核酸代謝，并可作用于多種底物，如嘌呤、嘧啶、蝶啶、雜環(huán)堿、醛類、脂肪酸和磷脂，因此，可以從XOD的變化入手探討體內(nèi)尿酸水平變化的原因。
[0006]目前臨床上治療痛風(fēng)和高尿血酸癥的西藥，有通過抑制黃嘌呤氧化酶活性達(dá)到降低血尿酸的效果的別嘌呤醇等，也有促進(jìn)血尿酸代謝的丙磺舒等。但是，以上藥物常出現(xiàn)過敏反應(yīng)、肝炎損害等不良反應(yīng)。而痛風(fēng)患者除伴有著高尿血酸癥外，還伴隨著關(guān)節(jié)處的炎癥，紅腫疼痛，也有古書言:“痛如虎嚙”，“痛風(fēng)痛有常處，其痛處渾身壯熱或赤腫灼熱”。因此痛風(fēng)患者在長期服用具有降低血尿酸藥物的同時也需要鎮(zhèn)痛，但是目前有效、經(jīng)濟(jì)、安全的降低UA且鎮(zhèn)痛的藥物較少。我國在運(yùn)用中草藥醫(yī)治痛風(fēng)病的方面有著悠久地歷史，但目前為止在臨床上能有效降低血尿酸的中藥制劑貧乏。所以，研究尋找新型的降血尿酸的藥物，特別是降血尿酸的中草藥的制劑，具有著深遠(yuǎn)的意義。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)部分中草藥不僅具有良好的鎮(zhèn)痛消炎的作用，也可以較好地降低血尿酸達(dá)到治療的效果。
[0007]蜈蟻三七(Anemone fiaccida Fr.Schmidt),又稱林蔭銀蓮花,系屬毛茛科銀蓮花屬多年生的植物，多以根莖入藥，其藥理作用有抗炎鎮(zhèn)痛、解熱祛風(fēng)濕等作用，其有效成分為三萜皂苷類。因此，本研究中從蜈蚣三七根莖中提取分離出總皂苷，進(jìn)行藥理實(shí)驗(yàn)，觀察蜈蚣三七提取物對大鼠高尿酸血癥的影響，探究其治療意義和可能的作用機(jī)理。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明的目的旨在提供蜈蚣三七提取物在醫(yī)療領(lǐng)域的新應(yīng)用。
[0009]本發(fā)明的一個方面提供了蜈蚣三七提取物在制備預(yù)防或治療預(yù)防或治療痛風(fēng)藥物中的應(yīng)用。
[0010]本發(fā)明的另一個方面提供了一種預(yù)防或治療痛風(fēng)的藥物組合物，包含蜈蚣三七提取物或由蜈蚣三七提取物制得。
[0011]所述蜈蚣三七提取物包含蜈蚣三七總皂苷。
[0012]優(yōu)選地，所述蜈蚣三七提取物用水煎法制備，水煎法可提取足以預(yù)防或治療痛風(fēng)的成分。
[0013]優(yōu)選地，所述蜈蚣三七提取物的提取方法包括:加2~8倍質(zhì)量的水煎煮水蜈蚣三七藥材3~5次，每次I~4h ;然后過濾，濃縮濾液，放冷；加乙醇使含醇容量為40~80 %，攪勻后靜置；然后過濾，回收乙醇，揮發(fā)至無醇味，得浸膏；加水溶解所述浸膏，澄清；上非極性或弱極性大孔吸附樹脂柱，用水洗滌，再用50~80%乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，于真空下干燥，粉碎、過篩即得。
[0014]所述的預(yù)防或治療痛風(fēng)的藥物組合物的劑型可為口服制劑。
[0015]本發(fā)明所述蜈蚣三七提取物對高尿酸血癥大鼠具有降低血清尿酸水平作用，且不是通過抑制黃嘌呤氧化酶的表達(dá)發(fā)揮治療效果的。此外，本發(fā)明所述蜈蚣三七提取物顯著地減少高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平，而對正常小鼠的血清尿酸水平無顯著性影響。
【具體實(shí)施方式】
[0016]發(fā)明人意外地發(fā)現(xiàn)了蜈蚣三七提取物在預(yù)防或治療痛風(fēng)中的應(yīng)用效果。
[0017]為了更好的理解本發(fā)明的實(shí)質(zhì)，本發(fā)明通過實(shí)施例的方式說明本發(fā)明藥物對痛風(fēng)抑制作用的藥理試驗(yàn)和臨床試驗(yàn)結(jié)果。本發(fā)明的這些實(shí)施例是用于說明本發(fā)明而不是對本發(fā)明的限制。
[0018]一、蜈蚣三七提取物對大鼠高尿酸血癥的影響
[0019]痛風(fēng)在近年來隨著飲食水平的提高，環(huán)境質(zhì)量的降低等多種原因，逐漸成為一種常見的危害人們健康的一種代謝性疾病。高尿血酸癥是痛風(fēng)發(fā)病的重要的生化標(biāo)志，所以防治痛風(fēng)必須控制高尿血酸癥，在實(shí)驗(yàn)中建立高尿血酸動物模型是很重要的。本實(shí)驗(yàn)中采用大鼠來進(jìn)行高尿血酸癥的模型，雖然除了人類以外的哺乳動物，包括大鼠在內(nèi)體內(nèi)都存在著尿酸氧化酶(urateoxidase),尿酸在體內(nèi)進(jìn)一步分解為尿囊素,具有水溶性,不會在體內(nèi)蓄積產(chǎn)生結(jié)晶，不會造成高尿血酸癥，所以造模并不容易，可是大鼠是平時藥理實(shí)驗(yàn)最常用的實(shí)驗(yàn)動物，容易獲得，便于飼養(yǎng)，品種穩(wěn)定，所以用大鼠通過生化的方法建立高尿血酸癥的模型，目前在國內(nèi)外依舊是相當(dāng)普遍的，所以在本實(shí)驗(yàn)中采用大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。
[0020]I實(shí)驗(yàn)材料
[0021]1.1 動物
[0022]健康Wistar大鼠，雄性,體重150~180g,由山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司實(shí)驗(yàn)動物室提供，合格證號:SCXK(魯)2008-0002。在整個實(shí)驗(yàn)過程中，除實(shí)驗(yàn)中造模的特殊要求外，動物均處于自由飲水和飲食的狀態(tài)，飼養(yǎng)室溫22 ± I °C，飼養(yǎng)濕度55 ± 5°C。
[0023]1.2藥品和試劑
[0024]蜈蚣三七提取物(總皂苷含量約60% ):常規(guī)水煎法制備，取蜈蚣三七藥材，加2~8倍質(zhì)量的水煎煮3~5次，每次I~4h，濾過，合并濾液，將濾液濃縮成60°C相對密度1.04~~1.1的液體，放冷，加乙醇使含醇容量為40~80%，攪勻，靜置12h，濾過，回收乙醇，揮發(fā)至無醇味，得浸膏，加水溶解，澄清，上非極性或弱極性大孔吸附樹脂柱，用水洗滌，棄去,再用50~80 %乙醇洗脫， 收集洗脫液，回收乙醇，濃縮、于真空下干燥12h，粉碎、過60目篩，即得蜈蚣三七提取物。所述蜈蚣三七提取物為棕黃色粉末，用蒸餾水配成所需濃度。
[0025]羧甲基纖維素鈉(CMC-Na):分析純，由中國醫(yī)藥上?；瘜W(xué)試劑站提供。
[0026]別嘌呤醇(Allopurinol):批號11M1681V,由 Sigma-AIdrich 公司提供，用 0.5%CMC-Na配成所需濃度。
[0027]氧嗪酸鉀鹽(Oxonicacid potassium salt,純度 97%):批號:STBC1486V,由Sigma-Aldrich公司提供，用0.5% CMC-Na配成適當(dāng)濃度。
[0028]尿酸試劑盒(尿酸酶法):購自上海復(fù)星長征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司。
[0029]黃嘌呤氧化酶試劑盒(xanthine oxidase, X0D):購自南京建成生物工程研究所。
[0030]考馬斯亮藍(lán)蛋白定量測試盒:購自南京建成生物工程研究所。
[0031]1.3實(shí)驗(yàn)儀器
[0032]CJ-2F醫(yī)用凈化工作臺:蘇州市馮氏實(shí)驗(yàn)動物設(shè)備有限公司；
[0033]AU400全自動生化分析儀:日本奧林巴斯公司；
[0034]DY89-1型電動勻漿機(jī):寧波新之生物科技股份有限公司；
[0035]KDC-160HR型高速冷凍離心機(jī):科大創(chuàng)新股份有限公司；
[0036]分析天平，恒溫水浴鍋，分光光度計(jì)。
[0037]2實(shí)驗(yàn)方法
[0038]2.1蜈蚣三七提取物對高尿酸血癥大鼠尿酸的影響[0039]2.1.1分組與給藥
[0040]雄性大鼠41只，按體重隨機(jī)分組:正常組、模型組、蜈蚣三七提取物高、中、低劑量組(分別為288mg / kg、144mg / kg和72mg/kg)、陽性對照組(別嘌呤醇IOmg / kg),共6組,每組6-7只。灌胃給藥,每天I次,連續(xù)14天。給藥體積按20mL / kg,給藥前均稱量大鼠體重一次，正常組和模型組均給予等體積蒸餾水。
[0041]灌胃給藥10天后，各組大鼠開始每天腹腔注射氧嗪酸鉀鹽200mg / kg，正常組腹腔注射等體積的0.5% CMC-Na。末次給藥Ih后，除正常組外，各組大鼠腹腔注射氧嗪酸鉀鹽200mg / kg。注射后2h各組均摘眼球取血(取血前12h禁食不禁水)，室溫下靜置lh，在3000r / min離心10min，取血清置于4°C保存。取血后的大鼠脫頸椎處死，用眼科剪摘取部分心臟，稱重，在冰水浴的生理鹽水中漂洗除去血液，濾紙拭干，置于_20°C保存。
[0042]2.1.2測試指標(biāo)
[0043]2.1.2.1血清尿酸:取血清200ul，按尿酸試劑盒說明書操作，用奧林巴斯AU400全自動生化分析儀測定血尿酸水平。
[0044]2.1.2.2肝臟黃嘌呤氧化酶(XOD):取肝臟，稱量，在倒置玻璃勻漿器中，加入精確體積(15倍)的冰浴生理鹽水，在冰水浴中用電動勻漿機(jī)研磨勻漿，在低溫高速離心機(jī)中4000r / min離心15min,再取上清液,按蛋白定量試劑盒說明書操作，分光光度計(jì)595nm
處，測量計(jì)算出肝臟蛋白濃度，計(jì)算公式:
[0045]
【權(quán)利要求】
1.蜈蚣三七提取物在制備預(yù)防或治療痛風(fēng)的藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中，所述蜈蚣三七提取物包含蜈蚣三七總皂苷。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中，所述蜈蚣三七提取物用水煎法制備。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其中，所述蜈蚣三七提取物的提取方法包括:加2~8倍質(zhì)量的水煎煮水蜈蚣三七藥材3~5次，每次I~4h ;然后過濾，濃縮濾液，放冷；加乙醇使含醇容量為40~80%，攪勻后靜置；然后過濾，回收乙醇，揮發(fā)至無醇味，得浸膏；加水溶解所述浸膏，澄清；上非極性或弱極性大孔吸附樹脂柱，用水洗滌，再用50~80%乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，于真空下干燥，粉碎、過篩即得。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中，所述蜈蚣三七提取物的劑型為口服劑型。
6.一種預(yù)防或治療痛風(fēng)的藥物組合物，包含蜈蚣三七提取物或由蜈蚣三七提取物制得。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的預(yù)防或治療痛風(fēng)的藥物組合物，其中，所述蜈蚣三七提取物包含蜈蚣三七總皂苷。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的預(yù)防或治療痛風(fēng)的藥物組合物，其中，所述蜈蚣三七提取物用水煎法制備。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的預(yù)防或治療痛風(fēng)的藥物組合物，其中，所述蜈蚣三七提取物的提取方法包括:加2~8倍質(zhì)量的水煎煮水蜈蚣三七藥材3~5次，每次I~4h ;然后過濾，濃縮濾液，放冷；加乙醇使含醇容量為40~80%，攪勻后靜置；然后過濾，回收乙醇，揮發(fā)至無醇味，得浸膏；加水溶解所述浸膏，澄清；上非極性或弱極性大孔吸附樹脂柱，用水洗滌，再用50~80%乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，于真空下干燥，粉碎、過篩即得。`
10.根據(jù)權(quán)利要求6~9的任一項(xiàng)所述的預(yù)防或治療痛風(fēng)的藥物組合物，其特征在于劑型為口服制劑。
【文檔編號】A61P19/06GK103877177SQ201410084518
【公開日】2014年6月25日 申請日期:2014年3月10日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月10日
【發(fā)明者】邴飛虹, 廖一帆, 江哲遒, 李婧 申請人:武漢道一堂中醫(yī)醫(yī)院有限公司