專利名稱：一種雞傳染性支氣管炎二價活疫苗及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域獸用生物制品行業(yè)，涉及一種雞傳染性支氣管炎二價活疫苗及其制備方法。
背景技術(shù)：
雞傳染性支氣管炎(Avian Infectious Bronchitis, IB)是一種雞群急性、高度傳染性呼吸道疾病。目前疾病呈全球性分布，給各國及地區(qū)的養(yǎng)雞業(yè)帶來嚴重的危害。該疫病可引起呼吸困難、抵抗力減弱而導致雛雞大量死亡，也會引發(fā)育成雞和蛋雞的腎臟和/或生殖器官病變，從而導致生長滯緩、產(chǎn)蛋量蛋品質(zhì)下降。雞傳染性支氣管炎病毒 (Infectious Bronchitis Virus, IBV)可分為多種不同的血清型，目前已知的IBV血清型約有60余種，各個血清型之間不存在交叉免疫保護或僅存在微弱交叉免疫保護。不同血清型毒株間的交叉保護能力較差，因此單一血清型的IBV疫苗不能起到很好的預防作用，這已經(jīng)給我國養(yǎng)雞業(yè)產(chǎn)生了極大的危害。根據(jù)對我國多個地區(qū)進行流行病學調(diào)查和血清型的調(diào)查鑒定分析，現(xiàn)地目前主要流行的IBV血清型為Massachusetts和793/B血清型，國內(nèi)市場現(xiàn)僅有的Massachusetts血清型(H52、H120等)單價疫苗，但不能有效的抵抗IB流行毒株的攻擊，而經(jīng)常造成免疫失敗。

發(fā)明內(nèi)容
針對當前我國雞傳染性支氣管炎病毒流行毒株存在多種血清型，但以Massachusetts血清型和793/B血清型為主，本發(fā)明提供一種能夠同時有效預防雞傳染性支氣管炎Massachusetts血清型和793/B血清型的二價活疫苗，解決目前國內(nèi)現(xiàn)有IBV疫苗對上述兩種血清型IBV毒株只能提供部分預防或甚至無任何預防效果的問題，從而更大程度上預防避免雞傳染性支氣管炎的廣泛發(fā)生于流行。該二價活疫苗結(jié)合Massachusetts血清型IBV弱毒H120株與本發(fā)明人自我國分離、經(jīng)人工弱化處理獲得的具有良好免疫原性的793/B血清型FN0-E55株制備出具有對上述兩種血清型均有良好免疫原性的弱毒二價疫苗，對預防當前我國雞傳染性支氣管炎疾病起到更好、更廣譜的免疫保護作用，保護率可達80 100%。同時該二價疫苗在實際生產(chǎn)應(yīng)用中可以大幅度的降低對雞群反復免疫產(chǎn)生的應(yīng)激反應(yīng)，并且可以縮減對人力、物力等成本的消耗。本發(fā)明的另一個目的在于提供該雞傳染性支氣管炎二價活疫苗(FN0-E55株+H120株)的制備方法。本發(fā)明中有以下特點:1.本發(fā)明涉及的雞傳染性支氣管炎二價活疫苗含有雞傳染性支氣管炎病毒FN0-E55株和雞傳染性支氣管炎病毒H120株兩種活性成分。2.疫苗中的雞傳染性支氣管炎病毒FN0-E55株僅能夠被793/B血清型雞傳染性支氣管炎陽性血清中和而不能被Massachusetts血清型雞傳染性支氣管炎陽性血清充分中和；雞傳染性支氣管炎病毒H120株僅能夠被Massachusetts血清型雞傳染性支氣管炎陽性血清中和而不能被793/B血清型雞傳染性支氣管炎陽性血清充分中和；雞傳染性支氣管炎病毒(Infectious Bronchitis Virus)FN0_E55株病毒株已于2013年03月08日送交北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號，中國科學院微生物研究所，中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏編號為CGNCC N0.7310。3.雞傳染性支氣管炎二價活疫苗的制備方法如下:分別將雞傳染性支氣管炎病毒FN0-E55株和H120株接種于10.5日齡SPF雞胚，病毒復制后收獲含毒雞胚尿囊液作為半成品，將以上兩毒株半成品混合后，加入常用的凍干保護劑混勻、分裝后進行冷凍真空干燥，即制成雞傳染性支氣管炎二價活疫苗(FN0-E55株+H120 株)。4.用該疫苗接種7日齡SPF雞后不引起任何癥狀，并能夠誘導靶動物產(chǎn)生針對793/B血清型和Massachusetts血清型雞傳染性支氣管炎的特異性免疫應(yīng)答。
具體實施例方式一、菌毒種的來源及特性(一)雞傳染性支氣管炎病毒弱毒株(FN0-E55株)1.病毒分離與鑒定2009年，本申請人由浙江某雞場分離得到一株雞傳染性支氣管炎病毒，經(jīng)分子生物學試驗、血清學試驗等方法，鑒定為雞傳染性支氣管炎病毒793/B血清型，定名為FNO-E株。2.雞傳染性支氣管炎病毒(FNO-E株)的傳代致弱通過接種SPF雞胚 連續(xù)傳代，將分離得到的雞傳染性支氣管炎病毒FNO-E株進行了毒力弱化，實驗結(jié)果表明，傳代至第P25代時，病毒毒力開始下降，傳代至P50代之后對雛雞的感染率為0%。說明該病毒傳代至P50代及P60代后已經(jīng)致弱，對雛雞已無致病力。選取P55代作為疫苗研制的候選毒株，為一株雞傳染性支氣管炎弱化毒株，命名為雞傳染性支氣管炎病毒(Infectious Bronchitis Virus) FN0-E55 株,該毒株已于 2011 年 09 月 26日送交北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號，中國科學院微生物研究所，中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏編號為=CGMCC N0.7310。3.生產(chǎn)用雞傳染性支氣管炎病毒弱毒株(FN0-E55株)的純粹性檢驗3.1無菌檢驗按《中華人民共和國獸藥典》((中國獸藥典委員會.中華人民共和國獸藥典二〇一〇年版三部.中國農(nóng)業(yè)出版社，2011.，本發(fā)明以下簡稱《中國獸藥典》))規(guī)定的方法:對雞傳染性支氣管炎病毒弱毒株(FN0-E55株)第55 60代毒種進行無菌檢驗，分別接種T.G、G.P小管和G.A斜面培養(yǎng)基各2支，每支0.2mL, 一支置37°C培養(yǎng)；一支置于25°C培養(yǎng),觀察3日，移植后的病毒培養(yǎng)物接種的T.G、G.P和G.A斜面培養(yǎng)基,觀察五日均無細菌、霉菌生長，表明FN0-E55株毒種未受細菌與霉菌的污染。3.2支原體檢驗按《中國獸藥典》規(guī)定的方法對第55 60代毒種進行支原體檢驗，經(jīng)過5日、10日、15日培養(yǎng)，觀察液體培養(yǎng)基無顏色變化，再經(jīng)移植后培養(yǎng)14日觀察，支原體液體培養(yǎng)基仍然無顏色變化；接種毒種的瓊脂平板上均未出現(xiàn)支原體菌落。表明FN0-E55株毒種無支原體污染。3.3外源病毒檢驗按《中國獸藥典》要求，對第55 60代毒種進行了外源病毒的檢測，結(jié)果表明，F(xiàn)N0-E55株毒種無外源病毒污染。4.免疫原性將弱化出的毒株病毒含量稀釋到103_ 5EID5tlA).1mL,接種10只7日齡SPF雛雞，每只免疫IOOyL,免疫途徑為滴鼻點眼，并設(shè)空白對照組。3周后，連同條件相同的空白對照組，用雞傳染性支氣管炎病毒FNO-E株進行強毒攻擊,攻毒劑量為104_5TOCID5ci/只,攻毒后4 5天進行剖殺，取出氣管，分別在每只雞的氣管頭、中、尾部取3、4、3段氣管進行纖毛運動觀察并評分，評分標準如下:A)氣管環(huán)組織內(nèi)周邊無一個纖毛運動，計為4分。B)氣管環(huán)組織內(nèi)周邊約75%纖毛停止運動，計為3分。C)氣管環(huán)組織內(nèi)周邊約50%纖毛停止運動，計為2分。D)氣管環(huán)組織內(nèi)周邊約25%纖毛停止運動，計為I分。E)氣管環(huán)組織內(nèi)周邊無纖毛停止運動，計為O分。每只雞氣管纖毛評分低于20分，即纖毛損傷率低于50% (20/40)時，則判定為該只雞被保護或未感染；若氣管纖毛評分高于20分，即纖毛損傷率高于50% (20/40)時，則判定為該只雞未被保護或感染。根據(jù)以上判定標準所得，免疫組應(yīng)有8只以上的雞被保護；對照組應(yīng)至少有8只雞未被保護。5.雞傳染性支氣管炎病毒弱毒株(FN0-E55株)的穩(wěn)定性取FN0-E55株病毒，按103_ 5EID5tl劑量滴鼻接種SPF雞，將病毒在靶動物體內(nèi)連續(xù)傳代5代，期間未觀察到 任何可疑雞傳染性支氣管炎感染癥狀，證明該弱毒株在5代以內(nèi)保持毒力穩(wěn)定。(二)雞傳染性支氣管炎病毒弱毒株(H120株)1.毒種的來源雞傳染性支氣管炎病毒H120株(CVCCAV1514)是商品化疫苗的生產(chǎn)種毒，由中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所鑒定、保存和分發(fā)。本申請人自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所獲取。2.主要特性(I)純凈按《中國獸藥典》進行，IBVH120毒種應(yīng)無細菌、霉菌、支原體及外源病毒污染。(2)病毒含量IBVH120毒種經(jīng)尿囊腔內(nèi)注射10日齡SPF雞胚的感染劑量應(yīng)^ IO6 0EID50 / 0.1ml0接種后雞胚在24 144小時全部或部分死亡，存活的雞胚胎兒出現(xiàn)失水、蜷縮、發(fā)育小等特異性病痕判為感染。(3)安全性以105_qEID5q滴鼻I滴(約0.03ml)，對各種日齡SPF雞均應(yīng)安全。(4)免疫原性以5X102_°EID5(i的病毒液，對I 3日齡SPF雛雞滴鼻，14日后，連同條件相同的對照雞用M41株強毒滴鼻，對照雞至少80%發(fā)病，免疫雞至少80%保護。(5)特異性用生理鹽水將IBVH120株種毒稀釋至0.1羽份/ 0.1ml，與等量抗雞傳染性支氣管炎特異性血清混合，在20 25°C作用I小時，尿囊腔內(nèi)接種10日齡SPF雞胚10個，每胚0.2ml。置37°C觀察24 144小時，應(yīng)不引起特異死亡及雞胚病變，至少有8個雞胚健活。
二、疫苗的制備取雞傳染性支氣管炎病毒弱毒株(FN0-E55株)生產(chǎn)代次種毒接種9 11日齡SPF雞胚，每胚尿囊腔接種0.2mL。密封針口后，置于37°C，相對濕度60%繼續(xù)孵育。接種后24小時照胚，棄去死胚；將活胚置于2 8°C冷卻。將冷卻后的雞胚用碘酊消毒氣室部位，然后無菌剝除氣室部卵殼，吸取雞胚液，每若干個雞胚的胚液混合為一組。收獲后的胚液置于滅菌瓶中，留樣后凍存。取雞傳染性支氣管炎病毒弱毒株(H120株)生產(chǎn)用毒種，用滅菌生理鹽水稀釋至10_2 10_4，每胚尿囊腔接種0.1ml，接種后密封針孔，置37°C繼續(xù)培養(yǎng)孵育，不必翻蛋。雞胚接種后30小時前照蛋I次，棄去死胚，收取30 36小時的活胚，氣室向上直立，至于2 8°C中冷卻4 24小時。將冷卻后的雞胚取出，用碘酊消毒氣室部位，然后無菌手術(shù)剝除氣室部卵殼，揭去卵殼膜，剪破絨毛尿囊膜及羊膜(勿使卵黃破裂)，吸取雞胚液，每若干個胚的胚液混合為一組置滅菌瓶中，同時做無菌檢驗，然后冷凍保存。收獲胚液的同時，應(yīng)逐個檢查雞胚，如胎兒腐敗、胚液混濁及有任何污染可疑者棄去不用。然后將以上收獲的兩毒株病毒液(即為疫苗制備中的半成品)在經(jīng)檢驗合格后，將兩病毒株的半成品混合，使各個毒株在每羽份終產(chǎn)品中效價達到IO3 5EID5tl以上，再與保護劑混合進行分裝配苗，并進行冷凍真空干燥處理，即制成雞傳染性支氣管炎二價活疫苗(FNO-E55 株 +Hl2O 株)三、疫苗檢驗(I)物理性狀:制品為淡黃色海綿狀疏松團塊，易與瓶壁脫離，加稀釋液后迅速溶解。(2)純粹檢驗:按《中國獸藥典》中的規(guī)定進行檢驗，應(yīng)純粹。(3)鑒別檢驗:通過血清中和實驗進行，F(xiàn)N0-E55株毒種應(yīng)被抗雞傳染性支氣管炎病毒(793/B血清型)陽性血清中和，不應(yīng)被抗雞傳染性支氣管炎病毒(Massachusetts血清型)陽性血清中和。H120株毒種應(yīng)被抗雞傳染性支氣管炎病毒(Massachusetts血清型)陽性血清中和，不應(yīng)被抗雞傳染性支氣管炎病毒(793/B血清型)陽性血清中和。(4)安全檢驗:用7日齡SPF雞20只，10只各滴鼻接種過疫苗10羽份，另10只作對照。觀察14日，應(yīng)全部健活，且無呼吸異常及神經(jīng)癥狀。任何一組非特異性死亡雞應(yīng)不超過I只，否則可重檢I次。(5)效力檢驗:用I 3日齡SPF雛雞20只，每只滴鼻接種疫苗I羽份，接種后10日隨機分為兩組，連同對照雞10只隔離飼養(yǎng)。第一組用10倍稀釋的雞傳染性支氣管炎病毒強毒M41株(CVCC AV1511)滴鼻攻擊，每只I 2滴，連續(xù)觀察10日，以是否出現(xiàn)雞傳染性支氣管炎典型癥狀為判定標準。對照組應(yīng)至少8只雛雞出現(xiàn)雞傳染性支氣管炎典型癥狀，免疫組雛雞應(yīng)至少保護8只。第二組在免后14日用雞傳染性支氣管炎病毒FNO-E株進行強毒攻擊，攻毒劑量為IO4 5TOCID5ci/只，攻毒途徑為滴鼻，點眼。攻毒后5天進行剖殺，取出氣管，分別在每只雞的氣管頭、中、尾部取3、4、3段氣管環(huán)進行纖`毛運動觀察并評分，根據(jù)以上判定標準所得，免疫組應(yīng)有8只以上的雞被保護；對照組應(yīng)至少有8只雞未被保護。(6)剩余水分測定:遵照《中國獸藥典》規(guī)定每批凍干制品任抽4個樣品，各樣品剩余水分均不應(yīng)超過4%,如果有超過時,可重檢I次,重檢后如有I個樣品超過規(guī)定,該批制品應(yīng)判為不合格。(7)真空度測定:遵照《中國獸藥典》規(guī)定包裝前測定真空度，無真空的制品，應(yīng)予副除報廢。本發(fā)明涉及的微生物資源雞傳染性支氣管炎病毒弱毒株是由本發(fā)明人分離的雞傳染性支氣管炎病毒FNO-E株經(jīng)人工致弱而成，該毒株的血清型為雞傳染性支氣管炎病毒793/B血清型，命名為雞傳染性支氣管炎病毒(Infectious Bronchitis Virus) FN0-E55株,該弱毒株雞傳染性支氣管炎病毒已于2013年03月08日送交北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號，中國科學院微生物研究所，中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏編號為=CGMCCN0.7310。雞傳染性支氣管炎病毒H120株(CVCC AV1514)生產(chǎn)種毒和攻毒IBV強毒M41株(CVCC AV1511)是從中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所獲取。本發(fā)明的積極意義本發(fā)明涉及一種雞傳染性支氣管炎二價活疫苗及其制備方法。本發(fā)明是用本發(fā)明人分離并弱化的雞傳染性支氣管炎病毒FN0-E55株結(jié)合雞傳染性支氣管炎病毒H120株制備出安全、有效的雞傳染性支氣管炎二價活疫苗。本發(fā)明能夠有效的預防目前國內(nèi)流行的Massachusetts血清型和793B血清型IBV引發(fā)的雞傳染性支氣管炎的發(fā)生，可解決目前國內(nèi)原有疫苗對上述兩種血清型IBV不能提供有效保護的問題，與此同時能夠減少免疫過程中產(chǎn)生的過多的應(yīng)激反應(yīng)和成本的消耗。實施例

以下實施例為進一步對本發(fā)明進行闡述，但這些實施例不構(gòu)成對本發(fā)明的限制。實施例1——疫苗的制備取雞傳染性支氣管炎病毒弱毒株(FN0-E55株)生產(chǎn)代次種毒用滅菌生理鹽水稀釋后接種10.5日齡SPF雞胚，每胚尿囊腔接種0.2mL。密封針口后，置于37°C，相對濕度60%繼續(xù)孵育。接種后24小時照胚，棄去死胚；將活胚置于2 8°C冷卻。將冷卻后的雞胚用碘酊消毒氣室部位，然后以無菌剝除氣室部卵殼，吸取雞胚液，每若干個雞胚的胚液混合為一組。收獲后的胚液置于滅菌瓶中，留樣后凍存。取雞傳染性支氣管炎病毒弱毒株(H120株)生產(chǎn)用毒種，用滅菌生理鹽水稀釋至10_2 10_4，接種10.5日齡SPF雞胚，每胚尿囊腔接種0.1ml，接種后密封針孔，置37°C繼續(xù)培養(yǎng)孵育，不必翻蛋。雞胚接種后30小時前照蛋I次，棄去死胚，收取30 36小時的活胚，氣室向上直立，至于2 8°C中冷卻4 24小時。將冷卻取出，用碘酊消毒氣室部位，然后無菌手術(shù)剝除氣室部卵殼，揭去卵殼膜，剪破絨毛尿囊膜及羊膜(勿使卵黃破裂)，吸取雞胚液，每若干個胚的胚液混合為一組置滅菌瓶中，同時做無菌檢驗，然后冷凍保存。收獲胚液的同時，應(yīng)逐個檢查雞胚，如胎兒腐敗、胚液混濁及有任何污染可疑者棄去不用。兩株疫苗半成品在經(jīng)檢驗合格后，將兩株疫苗半成品混合，保證各個毒株在終廣品中每羽份效價達到IO3 5EID5tl以上，再與常規(guī)凍干保護劑混合進行配苗后分裝，在冷凍真空干燥設(shè)備中進行冷凍真空干燥后，即為雞傳染性支氣管炎二價活疫苗(FN0-E55株-H120株)。實施例2——疫苗檢驗(I)物理性狀:制品為淡黃色海綿狀疏松團塊，易與瓶壁脫離，加稀釋液后均迅速溶解。(2)純粹檢驗:按《中國獸藥典》中的規(guī)定進行檢驗，均純粹。(3)鑒別檢驗:按《中國獸藥典》中的規(guī)定進行檢驗血清中和試驗。將疫苗用滅菌生理鹽水稀釋至每1.0ml含I羽份,與等量的抗雞傳染性支氣管炎病毒Massachusetts型特異性血清(購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所)混合，置于20 25°C作用60分鐘。取部分中和后疫苗稀釋液通過尿囊腔途徑接種9 10日齡SPF雞胚10枚，每胚0.2ml，置37°C孵育24 144小時無特異性死亡，打開雞胚也無任何胎兒失水、蜷縮、發(fā)育小等特異性病痕，并且10只雞胚全部健活。 同時取其余中和后疫苗稀釋液分為兩組:第一組用無血清MEM稀釋到200個TOCID50,與等量的雞傳染性支氣管炎病毒793/B株陽性血清(由本發(fā)明人制作和保存)37°C中和30分鐘，然后接種到氣管環(huán)培養(yǎng)物中，每管200 μ L，接種5管，吸附30min后補液至ImL, 37°C旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)；第二組直接接種到氣管環(huán)培養(yǎng)物中，每管200 μ L，接種5管，吸附30min后補液至lmL，37°C旋轉(zhuǎn)繼續(xù)培養(yǎng)；同時設(shè)定氣管環(huán)培養(yǎng)物的空白對照組。連續(xù)觀察5日，根據(jù)氣管環(huán)纖毛運動情況判定。結(jié)果疫苗未中和的實驗組5管中的氣管環(huán)上皮纖毛全部失去活性，而空白對照組和中和抗雞傳染性支氣管炎病毒(793/B血清型)陽性血清的實驗組的氣管環(huán)上皮纖毛全部健活。(4)疫苗的安全性檢驗IBV 二價疫苗(FN0-E55株+H120株)進行了靶動物的多項安全性試驗。實驗結(jié)果見表1、2和3，由表中數(shù)據(jù)可以表明該疫苗對靶動物具有良好的安全性。I)單劑量重復接種安全性試驗將疫苗用無菌生理鹽水重溶，以單只I羽份劑量接種10只7日齡SPF雛雞，每只免疫100 μ L，免疫途徑為滴鼻點眼，連續(xù)觀察2周后再次以相同劑量相同途徑接種免疫，并設(shè)空白對照組。連續(xù)觀察10日，觀察是否有呼吸異常及神經(jīng)癥狀等臨床癥狀。表I單劑量重復接種安全性試驗結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種雞傳染性支氣管炎二價活疫苗，其特征在于該疫苗含有雞傳染性支氣管炎病毒FN0-E55株和雞傳染性支氣管炎病毒H120株兩種活性成分。
2.如權(quán)利要求1所述一種雞傳染性支氣管炎二價活疫苗，其特征在于雞傳染性支氣管炎病毒FN0-E55株僅能夠被793B血清型雞傳染性支氣管炎陽性血清中和而不能被Massachusetts血清型雞傳染性支氣管炎陽性血清充分中和；雞傳染性支氣管炎病毒H120株僅能夠被Massachusetts血清型雞傳染性支氣管炎陽性血清中和而不能被793B血清型雞傳染性支氣管炎陽性血清充分中和；雞傳染性支氣管炎病毒(Infectious BronchitisVirus)FN0-E55株病毒株已于2013年03月08日送交北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號，中國科學院微生物研究所，中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏編號為 CGNCCN0.7310。
3.權(quán)利要求1所述雞傳染性支氣管炎二價活疫苗的制備方法，其特征在于制備方法如下: 分別將雞傳染性支氣管炎病毒FN0-E55株和H120株接種于10.5日齡SPF雞胚，病毒復制后收獲含毒雞胚尿囊液作為半成品，將以上兩毒株半成品混合后，加入常用的凍干保護劑混勻、分裝后進行冷凍真空干燥，即制成雞傳染性支氣管炎二價活疫苗(FN0-E55株+H120 株)。
4.如權(quán)利要求1所述的一種雞傳染性支氣管炎二價活疫苗，其特征在于用該疫苗接種7日齡SPF雞后不引起任何癥狀，并能夠誘導靶動物產(chǎn)生針對793B血清型和Massachusetts血清型雞傳 染性支氣管炎的特異性免疫應(yīng)答。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種雞傳染性支氣管炎二價活疫苗及其制備方法。本發(fā)明是用本發(fā)明人分離并弱化的雞傳染性支氣管炎病毒FNO-E55株結(jié)合雞傳染性支氣管炎病毒H120株制備出安全、有效的雞傳染性支氣管炎二價活疫苗。本發(fā)明能夠有效的預防目前國內(nèi)流行的Massachusetts血清型和793B血清型IBV引發(fā)的雞傳染性支氣管炎的發(fā)生，可解決目前國內(nèi)原有疫苗對上述兩種血清型IBV不能提供有效保護的問題，與此同時能夠減少免疫過程中產(chǎn)生的過多的應(yīng)激反應(yīng)和成本的消耗。
文檔編號A61P31/14GK103182082SQ20131009718
公開日2013年7月3日 申請日期2013年3月25日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月25日
發(fā)明者沈元, 曹玉飛, 嵇康, 張鵬超, 林志曉 申請人:浙江諾倍威生物技術(shù)有限公司