專利名稱：：一種抗鴿毛滴蟲病的中藥組合物及其口服液的制備方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一種中藥組合物及其制備方法，具體設計一種抗鴿毛滴蟲病的中藥組合物及其口服液的制備方法。
背景技術：
：鴿毛滴蟲病是鴿最常見的一種傳染性原蟲病，它主要寄生在鴿的消化道上，任何地方、品種、齡期的鴿子均會發(fā)病，是養(yǎng)鴿業(yè)威脅最大的常見病之一。該病于1878年由Rirolta首次在鵒的小腸中發(fā)現(xiàn)。根據(jù)國外資料和國內調査顯示，約有80%的鴿帶蟲，成年鵒的癥狀不明顯，青年鴿和幼鴿癥狀表現(xiàn)突出。青年鴿在育成過程中其死亡的鴿中70%以上是由此病引起。幼鴿通常因首次嘗食成年鴿嗉囊中"鴿乳"而被感染，并保持終生帶蟲。在形成足夠保護力的免疫之前，受強毒蟲株感染時，死亡率可高達50%。帶蟲乳鴿即使發(fā)病輕微也影響營養(yǎng)吸收，品質下降。此病雖然可用甲硝唑等藥物進行治療，但易出現(xiàn)藥物殘留，導致出品受阻、效益下降。鴿毛滴蟲病的病原是屬鞭毛亞門，動鞭毛綱，多鞭毛目，毛滴蟲科。毛滴蟲屬的禽毛滴蟲(Trichmonasgallinae)。禽毛滴蟲蟲體呈瓜子形或梨形，大小為59pmx29^m。蟲體前端有毛基體伸出4根鞭毛，使蟲體可迅速移動。蟲體中央有一根細長的軸柱自前向后伸延至蟲體后緣之外。在蟲體的一側有波動膜，其起始于蟲體的前端，終止于蟲體稍后方蟲體前部有l(wèi)橢圓形的核。蟲體前部與波動膜相對，一側有胞口。在姬姆薩染色標本中，蟲體原生質呈淡藍色，細胞核和毛基體呈紅色。鞭毛呈暗紅色或黑色，軸柱顏色淺于原生質。禽毛滴蟲寄生于肉鴿口腔、鼻腔、咽、食道和嗉囊的粘膜表層，以二分裂的方式進行繁殖，以粘液、粘膜碎片、微生物、紅細胞等為食物,經(jīng)胞口攝人體內，或以內滲方式吸收營養(yǎng)。蟲體在外界環(huán)境中抵抗力不強，2025°〇條件下，在采集的病料中可存活37d。蟲體對高溫和消毒藥抵抗力很弱，在48"C冰箱中可存活1418d，在55'C時經(jīng)2min死亡；常用消毒藥，如35%火堿液、石灰乳、來蘇兒等均能很快殺死蟲體。鴿毛滴蟲病的主要感染途徑是經(jīng)口感染。蟲體最常寄生和損害的部位是消化道。毛滴蟲首先感染上消化道，引起其潰瘍，然后從潰瘍處進入循環(huán)系統(tǒng)，引起肝臟等器官的病變。可以通過直接涂片鏡檢、人工培養(yǎng)檢査等病原的診斷方法對該病進行確認?；践O的口腔潰瘍灶是毛滴蟲的聚居點。唾液中也有大量的活蟲體，患鴿和帶蟲鴿都是感染源。蟲體通過飲水、詞料、傷口及未閉合的臍環(huán)等途徑都可感染鴿只。成鴿可通過互相接吻或通過"鴿乳"哺育幼鴿時，把蟲體直接傳遞給同伴或自己的后代。其他疾病的感染和應激因素可成為本病的誘因。鴿毛滴蟲病的潛伏期414d，常感染15周齡的幼鴿。病程一般320d不等。在生產(chǎn)中常見的類型主要有以下三種1、以咽型為主的表現(xiàn)吞咽與呼吸困難、精神不振、食欲減退，但飲欲增加，排黃綠色糞便，常因呼吸困難而急性死亡。剖檢可見口腔粘膜上有黃色干酪樣積聚物，鼻咽粘膜上形成一層平坦的針頭大小的病灶。2、以內臟型為主的表現(xiàn)精神不振、羽毛松亂無光，排黃綠色或淡黃色粘液性、糊狀糞便，進行性消瘦，最后衰竭死亡(據(jù)報道死亡率可達30%以上)。剖檢可見內臟器官有干酪樣壞死灶。3、以臍型為主的表現(xiàn)精神呆滯、食欲減少、消瘦、臍部發(fā)炎，不愿伏臥，嚴重者很快死亡。剖檢可見臍部皮下有干酪樣或潰瘍性病變。鴿毛滴蟲對硝唑類藥物敏感，但極易造成藥物在體內的殘留，且有致癌性，屬于在養(yǎng)殖業(yè)禁用的藥品。
發(fā)明內容本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種抗鴿毛滴蟲病的中藥組合物。本發(fā)明還要解決的一個技術問題是提供上述中藥組合物的口服液的制備方法。本發(fā)明還要解決的一個技術問題是提供上述中藥組合物在制備抗鴿毛滴蟲病藥物中的應用。為解決上述技術問題，本發(fā)明采用的技術方案如下一種抗鴿毛滴蟲病的中藥組合物，包含如下重量份數(shù)的組份魚腥草30-50份，炒黃薈30-50份，茜草25-40份，紫草25-40份，荊芥15-30份，柴胡15-30份。上述抗鴿毛滴蟲病的中藥組合物，優(yōu)選包含如下重量份數(shù)的組份魚腥草40-45份，炒黃芩40-45份，茜草30-35份，紫草30-35份，荊芥20-25份，柴胡20-25份。上述抗鴿毛滴蟲病的中藥組合物，其劑型為口服液。一種抗鴿毛滴蟲病的中藥組合物的口服液的制備方法，包括如下步驟(1)魚腥草30-50份，炒黃芩30-50份，茜草25-40份，紫草25-40份，荊芥15-30份，柴胡15-30份混合；(2)向步驟(1)得到的混合物料中，加入混合物重量的8~15倍的水，先武火加熱至沸騰，再文火煮沸2060min，濾出藥液；剩余藥渣加入藥渣重量的5~10倍量的水再煎2次；合并3次藥液；(3)將步驟(2)得到的藥液離心取上清，再文火煎煮濃縮至每毫升含生藥2g，離心取上清；(4)上清液經(jīng)100'C高壓滅菌2040min，4'C保存。上述抗鴿毛滴蟲病的中藥組合物在制備抗鴿毛滴蟲病的藥物中的應用。有益效果本發(fā)明的中藥方劑可替代西藥用于鴿子毛滴蟲感染可以減少或消除禽肉、蛋中藥物的殘留，從而有利于畜產(chǎn)品的無公害生產(chǎn)。具體實施例方式根據(jù)下述實施例，可以更好地理解本發(fā)明。然而，本領域的技術人員容易理解，實施例所描述的具體的物料配比、工藝條件及其結果僅用于說明本發(fā)明，而不應當也不會限制權利要求書中所詳細描述的本發(fā)明。實施例1:按組方魚腥草30份，炒黃芩30份，茜草25份，紫草25份，荊芥15份，柴胡15份將中藥飲片配成方劑，加10倍量水先武火加熱至沸騰，再文火煮沸30min，濾出藥液，藥渣加8倍量水再煎2次，合并3次藥液，離心，文火煎煮濃縮至每毫升含生藥2g，離心取上清，分裝。各藥液均10(TC高壓滅菌30min，4'C保存。實施例2:將魚腥草40份，炒黃芩40份，茜草35份，紫草35份，荊芥25份，柴胡20份配成方劑，加8倍量水先武火加熱至沸騰，再文火煮沸20min，濾出藥液，藥渣加6倍量水再煎2次。合并3次藥液，離心，文火煎煮濃縮至每毫升含生藥2g，離心取上清，分裝。各藥液均10(TC高壓滅菌30min，4'C保存。實施例3:將魚腥草50份，炒黃芩50份，茜草40份，紫草40份，荊芥30份，柴胡30份配成方劑，加12倍量水先武火加熱至沸騰，再文火煮沸50min，濾出藥液，藥渣加10倍量水再煎2次。合并3次藥液，離心，文火煎煮濃縮至每毫升含生藥2g，離心取上清，分裝。各藥液均10(TC高壓滅菌40min，4'C保存。實施例4:1、鵒毛滴蟲培養(yǎng)基的制備與鴿毛滴蟲的培養(yǎng)-取鵒肝臟15g，切碎呈小米粒大小，浸泡入100mL蒸餾水中，置4"C冰箱中過夜，隔天取出后，加熱煮沸30min，經(jīng)紗布過濾，補充蒸餾水至100mL。將蛋白胨2g，麥芽糖lg，氯化鈉0.5g，L一半胱氨酸鹽酸鹽0.2g與其混合，加熱促溶，經(jīng)細濾紙過濾，調節(jié)pH至5.65.8，分裝入試管，每管3.5mL，121。C高壓滅菌30min，冷卻后置37。C恒溫箱中24h，證明無菌后一4"C保存?zhèn)溆谩Ｓ靡淮涡葬樄軐Π子鹜貘?鴿子取自南京市六5合區(qū)東溝鎮(zhèn)養(yǎng)鴿場)進行翅靜脈采血，將采得的鴿血置于37。C恒溫箱中，放置23h后取出，用吸管吸取上層血清。將鴿血清置于5556X:水浴中加熱30min滅活，分裝后，冷凍保存?zhèn)溆谩？股剡x用青霉素80萬u/支，鏈霉素100萬u/支各一支，用8ml肝浸湯溶解稀釋，O'C以下保存?zhèn)溆?。每管培養(yǎng)液5mL，其組成是3.5mL肝浸湯+含有抗生素的肝浸湯0.5mL+無菌滅活鵒血清lmL。供試蟲株取自南京市某鴿場的1月齡確診為毛滴蟲感染的患鴿，品種為白羽王鴿，用消毒棉簽在口腔咽喉部取分泌物做生理鹽水涂片鏡檢，毛滴蟲呈梨形，有3-4根鞭毛。確診后，供分離、培養(yǎng)毛滴蟲用。取患鴿口腔咽喉部分泌物，接種于培養(yǎng)基中，置于37'C恒溫箱中培養(yǎng)，每3d傳代一次，經(jīng)過體外連續(xù)培養(yǎng)34代以后，然后從中取樣轉接于另外一瓶20ml的培養(yǎng)液中，待其大量繁殖之后，用于本實驗。鴿毛滴蟲培養(yǎng)、觀察結果鴿毛滴蟲在培養(yǎng)基內運動活躍，其形態(tài)結構均接近生理鹽水涂片的自然狀態(tài)，蟲體呈梨形、橢圓形或圓形，大小為610umx29um，體前端有4根前鞭毛，其中一根鞭毛向體后端折回附于波動膜上，末端有似尾巴樣的軸刺，在液體中作螺旋狀運動。肝浸湯培養(yǎng)毛滴蟲從第ld開始數(shù)量迅速增加，第3d達到生長高峰，在第4d后蟲體數(shù)量逐漸下降，一般在第5d時多數(shù)蟲體死亡。在體外進行盲傳時，第34代蟲體最為穩(wěn)定，傳至第6代時蟲體死亡。在蟲體繁殖的第三天開始計數(shù)，將培養(yǎng)管搖勻后，無菌條件下用吸管吸出20ul用血細胞計數(shù)板計數(shù)。本實驗培養(yǎng)液中的活蟲數(shù)約為2xl05個/ml。2、本發(fā)明的中藥組合物抗毛滴蟲效果測定(1)單味中藥對鴿毛滴蟲抑制試驗17種中藥均購買于南京市國盛連鎖藥店，分別是柴胡、蒙花、茜草、荊芥、蛇草、炒黃芩、一枝黃花、古精草、仙鶴草、徐長卿、劉寄奴、鹿銜草、升麻、蜀羊泉、葉下珠、魚腥草、紫草。對17種中草藥分別進行熬制，熬制的具體方法是用100mL水浸泡中藥30min，然后進行水煎，水煎lh后過濾藥渣取一次藥液，再將剩余藥渣加水進行熬制，lh后過濾取二次藥液，將兩次藥液混合后，加熱濃縮成10ml，置于4'C冰箱備用o取上述培養(yǎng)了3天的鴿毛滴蟲培養(yǎng)液，輕輕搖勻，分別取lmL加入到18支培養(yǎng)管中，前17管分別加入受試藥物，最后l管為對照管，加入藥物后，各培養(yǎng)管置37"C恒6溫箱中培養(yǎng)，于加藥后2h、6h分別計算各管活蟲數(shù)，并與不加藥物培養(yǎng)管的活蟲數(shù)做比較。結果在17味中藥的6小時抗蟲觀察試驗中，有13味具有抗蟲功效，有4味沒有抗蟲效果，分別是蒙花、古精草、仙鶴草、仙鶴草和徐長卿；蛇草、升麻、蜀羊泉在6小時之內尚不能完全殺死毛滴蟲；其余藥物均可在6小時內完全殺死毛滴蟲，結果詳見表l。表117種常見的中藥體外殺滅鵒毛滴蟲的藥敏實驗結果藥物中藥濃度藥物作用后2h藥物作用后6h(g/ml)活蟲數(shù)/xl()S個活蟲數(shù)/x105個柴胡0.500蒙花0.511茜草0.500荊芥0.500蛇草0.510炒黃芩0.500一枝黃花0.500古精草0.511仙鶴草0.50.50.5徐長卿0.50.50.5劉寄奴0.500鹿銜草0.500升麻0.510蜀羊泉0.521葉下珠0.500魚腥草0.500紫草0.500對照22根據(jù)表1的數(shù)據(jù)，可以看出柴胡、茜草、荊芥、炒黃芩、一枝黃花、紫草有明顯的殺滅鴿毛滴蟲的作用，在加藥2h后，絕大多數(shù)蟲體已經(jīng)崩解死亡，尚有個別的蟲體有很弱的活動能力，但鞭毛運動力己經(jīng)喪失，在加藥6h后，蟲體全部死亡崩解。魚腥草、蛇草等對鴿毛滴蟲有一定的作用，并且作用效果隨著時間的延長而變得顯著，在加藥2h后，蟲體的運動能力減弱，鞭毛幾乎喪失運動能力，部分蟲體崩解死亡。在加藥6h后，蟲體全部崩解死亡。而對照組的蟲體，在2h6h的時間段內，蟲體活動正常，鞭毛有很強的運動能力，形態(tài)正常。綜合上述的實驗結果，對17種中藥進行篩選，組成中藥復方。(2)本發(fā)明的復方中藥對鴿毛滴蟲抑制試驗將魚腥草50份，炒黃芩50份，茜草40份，紫草40份，荊芥30份，柴胡30份配成方劑，加10倍量水先武火加熱至沸騰，再文火煮沸30min，濾出藥液，藥渣加8倍量水再煎2次。合并3次藥液，離心，文火煎煮濃縮至每毫升含生藥2g，離心取上清，分裝。各藥液均10(TC高壓滅菌30min，4'C保存。將提取的中藥口服液用滅菌生理鹽水稀釋至每毫升含生藥0.5g/mL和1.0g/mL。各取lmL加入試管作為第l管及第2管，另加lmL滅菌生理鹽水于第3管作為對照。將毛滴蟲培養(yǎng)液輕輕搖勻，分別吸取lmL加入到3支培養(yǎng)管中，使第1管及第2管的藥物濃度分別為0.25g/mL和0.5g/mL。各培養(yǎng)管置37'C恒溫箱中培養(yǎng)，每半小時輕搖1次。于加藥后2h、4h、6h分別取樣觀察活蟲，計算各管活蟲數(shù)，并與不加藥物的培養(yǎng)管的活蟲數(shù)進行比較。結果該中藥口服液有明顯的抗鴿毛滴蟲的效果，并且隨著藥物濃度的增高和作用時間的增長，殺滅毛滴蟲的效果顯著增強。對于0.25g/mL的試驗組，在加藥2h后，蟲體活動較活躍，鞭毛運動力較強，蟲體生長良好，在加藥4h后，蟲體活動力減弱，部分變形膨脹，絕大多數(shù)蟲體失去活動能力，在加藥6h后，蟲體全部崩解；對于0.5g/mL的試驗組，在加藥2h后，絕大多數(shù)蟲體就已經(jīng)崩解死亡，僅有個別蟲體極弱活動，在加藥4h后，蟲體全部崩解。而對照組的蟲體在2h6h的時間段內形態(tài)結構正常，行為活躍，鞭毛運動正常。中藥復方制劑殺滅毛滴蟲的效果見表2。表2中藥方劑體外殺滅鴿毛滴蟲的藥敏實驗結果2h4h6h藥物活蟲數(shù)/xl()S個活蟲數(shù)~105個活蟲數(shù)/xl()S個0.25g/mL20.500.5g/mL000對照222實施例5:不同藥量組合對鴿毛滴蟲抑制試驗。將魚腥草30份，炒黃芩30份，茜草25份，紫草25份，荊芥15份，柴胡15份將中藥飲片配成方劑，加10倍量水先武火加熱至沸騰，再文火煮沸30min，濾出藥液，藥渣加8倍量水再煎2次。合并3次濾液，離心，文火煎煮濃縮至每毫升含生藥lg，離心取上清，分裝。各藥液均100'C高壓滅菌30min，4'C保存，得組方I。將魚腥草40份，炒黃芩40份，茜草35份，紫草35份，荊芥25份，柴胡20份配成方劑，加10倍量水先武火加熱至沸騰，再文火煮沸30min，濾出藥液，藥渣加8倍量水再煎2次。合并3次濾液，離心，文火煎煮濃縮至每毫升含生藥lg，離心取上清，分裝。各藥液均10(TC高壓滅菌30min，4'C保存，得組方II。將魚腥草50份，炒黃芩50份，茜草40份，紫草40份，荊芥30份，柴胡30份配成方劑，加10倍量水先武火加熱至沸騰，再文火煮沸30min，濾出藥液，藥渣加8倍量水再煎2次。合并3次濾液，離心，文火煎煮濃縮至每毫升含生藥lg，離心取上清，分裝。各藥液均10(TC高壓滅菌30min，4。C保存，得組方III。將上述3個組方的中藥濃縮液各取lmL，分裝3個試管，另加lmL滅菌生理鹽水于第4管作為對照。將培養(yǎng)的毛滴蟲培養(yǎng)液輕輕搖勻，分別吸取lmL加入到4支培養(yǎng)管中，搖勻，各培養(yǎng)管置37t:恒溫箱中培養(yǎng)，每半小時輕搖l次。于加藥后2h、4h、6h分別取樣觀察活蟲，計算各管活蟲數(shù)，并與不加藥物的培養(yǎng)管的活蟲數(shù)進行比較。結果除加生理鹽水管未見死亡外，第2至第3管二小時后毛滴蟲均已死亡，表明上述不同組合的方劑均可有效地抑制鴿毛滴蟲的生長。結果見表3。_表3不同藥量中藥方劑體外殺滅鴿毛滴蟲的藥敏實驗結果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>實施例6:按照實施例2的配方與方法，制備出足夠量的中藥口服液待用。選擇60只健康的1月齡白羽王鴿肉鴿，用分離的鴿毛滴蟲口腔接種，使其感染(以口腔棉拭子取樣鏡檢到毛滴蟲為準)，然后將它們分成四組，每組15只。第1組、第2組及第3組每只每天分別用含生藥量0.5g、lg及1.5g的中藥口服液混懸于清潔水中供鴿飲用，連服10天。第4組為對照組，不給藥。各組隔離飼養(yǎng)，在第5天及第10天分別觀察鴿口腔有無黃白色滲出物，同時做口腔毛滴蟲鏡檢。凡口腔見到黃白色滲出小點，且鏡檢出有毛滴蟲的列為無效；口腔未見黃白色滲出小點，且鏡檢未見有毛滴蟲的列為治愈；口腔未見黃白色滲出物但鏡檢出有毛滴蟲的，或者治愈者列為有效；分別統(tǒng)計有效率、治愈率(表4)。表4不同劑量中藥口服液對人工鴿毛滴蟲感染治愈試驗組別鴿數(shù)第5天第10天總有效率總治愈率無效有效治愈無效有效治愈%%第1組15784312118073.33第2組1531260151310086.67第3組1531270151410093.33對照組151500150000注無效口腔見到黃白色滲出小點，且鏡檢出有毛滴蟲；治愈口腔未見黃白色滲出小點，且鏡檢未見有毛滴蟲的列為治愈；有效口腔未見黃白色滲出物但鏡檢出有毛滴蟲的，治愈者也列為有效。經(jīng)觀察、統(tǒng)計，每只鴿每天劑量為lg的治療組經(jīng)10天的治療，病鴿毛滴蟲感染治療有效率100%，治愈13只，治愈率86.67%;每只鴿每天劑量為1.5g的治療組療效最好，病鴿毛滴蟲感染治療有效率100%，治愈14只，治愈率93.33%。每只每天劑量為0.5g的第1組治療有效率80%，治愈11只，治愈率73.33%。未經(jīng)治療的對照組無自愈。結果表明，要達滿意療效，治療劑量可按每天每只鴿lg生藥含量混懸飲服，療程需達10天以上。10權利要求1、一種抗鴿毛滴蟲病的中藥組合物，其特征在于該組合物包含如下重量份數(shù)的組份魚腥草30-50份，炒黃芩30-50份，茜草25-40份，紫草25-40份，荊芥15-30份，柴胡15-30份。2、根據(jù)權利要求1所述的抗鴿毛滴蟲病的中藥組合物，其特征在于該組合物包含如下重量份數(shù)的組份魚腥草40-45份，炒黃芩40-45份，茜草30-35份，紫草30-35份，荊芥20-25份，柴胡20-25份。3、根據(jù)權利要求1或2所述的抗鴿毛滴蟲病的中藥組合物，其特征在于該中藥組合物的劑型為口服液。4、一種抗鴿毛滴蟲病的中藥組合物的口服液的制備方法，其特征在于該方法包括如下步驟(1)魚腥草30-50份，炒黃芩30-50份，茜草25-40份，紫草25-40份，荊芥15-30份，柴胡15-30份混合；(2)向步驟(1)得到的混合物料中，加入混合物重量的8~15倍的水，先武火加熱至沸騰，再文火煮沸2060min，濾出藥液；剩余藥渣加入藥渣重量的5~10倍量的水再煎2次；合并3次藥液；(3)將步驟(2)得到的藥液離心取上清，再文火煎煮濃縮至每毫升含生藥2g，離心取上清；(4)上清液經(jīng)100。C高壓滅菌2040min，4"保存。5、權利要求1所述的抗鴿毛滴蟲病的中藥組合物在制備抗鴿毛滴蟲病的藥物中的應用。全文摘要本發(fā)明公開了一種抗鴿毛滴蟲病的中藥組合物，包含如下重量份數(shù)的組份魚腥草30-50份，炒黃芩30-50份，茜草25-40份，紫草25-40份，荊芥15-30份，柴胡15-30份。本發(fā)明還公開了該中藥組合物的口服液的制備方法。本發(fā)明以中藥方劑替代甲硝唑類禁用于畜產(chǎn)品的西藥，有利于無公害食品的生產(chǎn)。鴿子感染毛滴蟲后，用本產(chǎn)品可取得顯著療效，治愈率達93.33％，有效率100％。文檔編號A61K9/00GK101574430SQ20091003314公開日2009年11月11日申請日期2009年6月15日優(yōu)先權日2009年6月15日發(fā)明者姝張,戴鼎震,李志源,杜改梅,曉蔣,蔣加進,談亦奇申請人:金陵科技學院