專利名稱：二吲哚甲烷及其衍生物在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎治療中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及應(yīng)用二吲哚甲垸及其衍生物治療類 風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎疾病。
二背景技術(shù)：
類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是最常見的結(jié)締組織疾病之一，是以累及周圍關(guān)節(jié)為主的多 發(fā)性炎癥性的自身免疫病，其特征為對稱性、周圍性多個關(guān)節(jié)慢性炎性病變，病 理為慢性滑膜炎，侵及下層的軟骨和骨，造成關(guān)節(jié)破壞，致使勞動力喪失，甚至 致殘。針對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療過去主要集中在非甾體抗炎藥，糖皮質(zhì)激素， 免疫抑制劑等。但是傳統(tǒng)的治療存在靶點(diǎn)不明確，副作用較大等缺點(diǎn)。類風(fēng)濕性 關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機(jī)制雖然并不清楚，但近年來的研究表明炎癥因子如腫瘤壞死因子 a (TNF-a)、白細(xì)胞介素-1|3 (IL-lp)、白細(xì)胞介素-6 (IL-6)、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞 集落刺激因子(GM-CSF)等在發(fā)病過程中起了主導(dǎo)作用。因此，針對炎癥因子 的耙點(diǎn)治療逐漸引起人們的注意。其中，發(fā)展尤為迅猛的是針對TNF-a為靶點(diǎn) 的治療，主要為蛋白質(zhì)藥物和基因藥物。但是，在臨床試驗過程中，基因藥物因 致死性感染等巨大的毒副作用一直未能有效解決而被停止，蛋白質(zhì)藥物如TNF —a可溶性受體，恩利(Etanercept)， TNF—a的抗體，英非單抗(Infliximab) 同樣存在著副作用較大，價格昂貴等缺點(diǎn)，也未能被廣泛使用。
干擾素-Y (IFN-Y)用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療由來己久，上世紀(jì)八十年代 人們發(fā)現(xiàn)IFN-Y可用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療，但是，在后期的臨床試驗中，干 擾素-Y并沒有表現(xiàn)出比安慰劑更好的療效，同時，由于IFN-Y在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中 的作用機(jī)理不清楚，這一計劃就被暫時擱置了。近年來越來越多的研究表明， IFN-Y —方面通過抑制多型核中性粒細(xì)胞遷移至發(fā)病關(guān)節(jié)，從而阻止疾病發(fā)展； 另一方面，IFN-Y通過抑制破骨細(xì)胞形成減輕關(guān)節(jié)損害。這一發(fā)現(xiàn)給類風(fēng)濕性關(guān) 節(jié)炎的治療帶來了新的希望。但是，研究表明IFN-Y系統(tǒng)給藥并不能完全阻斷類 風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病，關(guān)節(jié)腔局部給藥效果更加明顯，同時，因IFN-y在體內(nèi)的 代謝半衰期極短，只有半小時，這些局限性給IFN-Y用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療 帶來了困難。 三
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明需要解決的問題是公開了一類能夠有效提高機(jī)體IFN-Y濃度，從而阻斷類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎疾病發(fā)展的小分子藥物，具體涉及應(yīng)用二u引哚甲烷及其衍生物 治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎疾病以及3， 3'-二吲哚甲垸及其衍生物水溶液(以下簡稱3， 3'-二B引哚甲烷或DIM)制劑的制備及其應(yīng)用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療。
本發(fā)明涉及有效提高機(jī)體IFN-Y濃度有機(jī)小分子藥物為3, 3'-二吲哚甲烷 (DIM)的可選擇取代物，具有如下結(jié)構(gòu)式
其中R1 ,R2,R4,R5,R6，R7,R8， Rl',R2',R4'，R5'，R6',R7'，R8'相互獨(dú)立，可以是氫原子 或者選之以下取代基鹵素，羥基，硝基，-OR9,-CN，-NR9R10，-NR9R10Rll+， -COR9, -CF3, .S(0)nR9 (n=0-2), -SO2NR9R10, -CONR9R10, -NR9COR10, ^119(:(0^11101^1,- (0)(0119)11(11=1-2)，可選擇的取代基有烷基，鹵乙烯基，
鏈烯基，炔基，芳香基，雜烷基，雜芳香基，環(huán)烷基，環(huán)烯基，并且所有從一號 到十號碳原子中可以有一到三個原子為其他雜原子如氧或者氮取代，其中
R9，R10,R11的取代基可以是一到十個碳原子的烷基，鹵乙烯基，鏈烯基，炔基， 芳香基，雜烷基取代，而R8和R8'也可以是酮基。在一個具體的實例中，除R1，R1' 位置之外均包含有一個位置的取代基，而每個取代基為包含有一到五個碳原子的 直鏈或支鏈烷基或是垸氧基，或是碘，溴，氯，氟等鹵素。在一個特定的實例中， 具體化合物可以是單吲哚，雙n引哚，三n引哚，或是更多個B引哚的取代物。
本發(fā)明涉及3， 3'-二吲哚甲烷及其衍生物為商業(yè)購買所得(南京銳馬精細(xì)化 工有限公司)或依據(jù)文獻(xiàn)報道方法合成。本發(fā)明的技術(shù)方案如下
1. 合成不同的取代基吲哚基團(tuán)。
2. 通過排列組合的方式產(chǎn)生一個3， 3'-二吲哚甲垸的衍生物庫，H引哚環(huán)上
的取代基相互獨(dú)立，二吲哚或是三吲哚環(huán)之間的取代基相互獨(dú)立，產(chǎn)生 如R2,4,5，6或7， R2', 4', 5'， 6'或7' 二-F,-CI,或-Br-3，3'-二卩引哚甲烷;R2，4,5,6或7， R2'，4'，5'，6'或7' 二-甲基-,乙基-，丙基-，丁基_，或戊基-3,3' -二卩引哚甲垸；R2，4，5，6或7，R2'，4'，5',6'或7'二-甲氧基-，乙氧基-，丙氧基 -，丁氧基-，或戊氧基-3,3'-二吲哚甲烷；R2，4,5,6或7， R2',4',5'，6'或7'二-羥 基,氨基-，甲胺基-，磺酸基-，或硝基-3,3' 二吲哚甲烷； R2，4,5,6,7,R2',4'，5',6',7'十-氟代(全氟)-3,3'-二吲哚甲垸等。 3.通過高通量篩選的方式篩選免疫調(diào)節(jié)活性合適的3， 3'-二H引哚甲烷衍生 物
本發(fā)明所述3， 3'-二吲哚甲垸及其衍生物的水溶液注射制劑的制備過程.
1. 配置適量的環(huán)糊精溶液，將3， 3'-二吲哚甲垸用環(huán)糊精溶液溶解，選擇 適當(dāng)配比，并攪拌過夜至澄清透明溶液為止。
2. 在雙蒸水中透析凍干，即得3， 3'-二吲哚甲烷水溶液注射制劑的干粉制劑。
3. 將稱取上述干粉制劑溶于一定量的生理鹽水，制備3， 3'-二吲哚甲垸生 理鹽水注射液備用。
本發(fā)明所述3， 3'-二吲哚甲垸及其衍生物水溶液注射制劑在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 治療中的應(yīng)用
1. 使用完全弗氏佐劑0. lml于SD大鼠右足跖部皮下注射，建立佐劑型關(guān)節(jié) 炎模型。
2. 將上述3， 3'-二吲哚甲烷注射液于建立佐劑型關(guān)節(jié)炎模型同時進(jìn)行腹腔 注射，進(jìn)行關(guān)節(jié)炎的干預(yù)性治療，或者與佐劑注射2-3周后腹腔注射， 對佐劑性關(guān)節(jié)炎進(jìn)行治療。
3. 治療后每天測量大鼠腳踝腫脹程度，并進(jìn)行評分，定期抽取血液用于測 量血清炎癥因子，定期進(jìn)行X放射性影像學(xué)檢查并進(jìn)行評分.在治療2 周后處死大鼠，取右足做關(guān)節(jié)組織切片，評價治療效果。
本發(fā)明的有益效果是提供了一種新的治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的方法，通過給予 3， 3'-二吲哚甲烷適當(dāng)提高機(jī)體及局部的IFN-Y濃度，從而阻斷和抑制疾病的發(fā) 展，并通過全新的方法，有效提高了3， 3'-二吲哚甲烷的溶解性，增加了3， 3'-二吲哚甲垸的使用途徑。同時，本發(fā)明中使用的材料易于獲取，價格低廉，制備 條件全部為常規(guī)條件下物理復(fù)合，不改變藥物性質(zhì)，并增加了3， 3'-二吲哚甲烷的穩(wěn)定性，制備設(shè)備要求較低，制備過程簡易，制備成本低。另外，本法制備二 吲哚甲烷新劑型包封率高，性質(zhì)穩(wěn)定，便于保存和運(yùn)輸。本發(fā)明可作為治療類風(fēng) 濕性關(guān)節(jié)炎，雌激素、雄激素依賴性腫瘤，其他腫瘤，病毒感染，痤瘡藥物。 四

圖1: DIM衍生物刺激脾細(xì)胞懸液的IFN- Y的酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)結(jié)果 從左往右依次為l.空白對照組，2. 3,3'-二吲哚甲垸組，3. 5,5'-二氯-二吲哚 甲垸組，4.5，5'-二氟-二吲哚甲烷組，5.5，5'-二甲基-二吲哚甲烷組，6.5，5'-二丙基 -二吲哚甲烷組，7. 5，5'-二戊基-二吲哚甲烷組，8.5，5'-二乙氧基-二吲哚甲烷組， 9. 5，5'-二丁氧基-二吲哚甲烷組，10. N，N'- 二甲基-二吲哚甲垸組，ll.N,N'-二丙 基-二吲哚甲烷組，12.N,N'-二戊基-二吲哚甲烷組，13. 2，2'-二乙基-二吲哚甲垸組， 14.2,2'-二丁基-二吲哚甲烷組，15.2,2'-二羥基-二吲哚甲烷組，16.2，4-二羥基-二 吲哚甲垸組，17.2，5-二羥基-二吲哚甲烷組，18.5,5'-二溴-二吲哚甲烷組，19.全 氟-3,3'-二吲哚甲烷組，20. 5,5'-二乙基-二吲哚甲垸組，21. 5,5'-二丁基-二吲哚甲 垸組，22. 5,5'-二甲氧基-二吲哚甲烷組，23. 5,5'-二丙氧基-二吲哚甲烷組，24. 5,5'-二戊氧基-二吲哚甲烷組，25. N，N'-二乙基-二吲哚甲烷組，26. N，N'-二丁基-二吲 哚甲烷組，27. 2,2'-二甲基-二吲哚甲烷組，28.2,2'-二丙基-二吲哚甲烷組，29. 2,2'-二戊基-二吲哚甲垸組，30.2-羥基二吲哚甲烷組，31.2，2'-二羥基-二吲哚甲烷組， 32. 2，4'-二羥基-二吲哚甲垸組。
圖2:不同劑量的DIM干預(yù)治療佐劑性關(guān)節(jié)炎兩周的臨床評分結(jié)果。
圖3:小鼠腹腔給予DIM后血清IFN-Y的酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)結(jié)果1未
給藥，2給藥后12小時，3給藥后24小時。
圖4: DIM治療后一周大鼠血清IL-ie的ELISA結(jié)果1佐劑性關(guān)節(jié)炎模型組， 2正常對照組，3DIM治療組。
圖5: DIM治療后一周大鼠血清IL-8的ELISA結(jié)果1佐劑性關(guān)節(jié)炎模型組，2 正常對照組，3DIM治療組。
圖6: DIM治療后一周大鼠血清TNF-a的ELISA結(jié)果1佐劑性關(guān)節(jié)炎模型組， 2正常對照組，3DIM治療組。
圖7: DIM用于干預(yù)治療大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎的臨床評分結(jié)果參DIM治療組， ■佐劑性關(guān)節(jié)炎模型陽性對照組。圖8:不同劑量DIM治療佐劑性關(guān)節(jié)炎三周后大鼠患足照片圖1陽性對照組，
2 2mg/kg體重治療組，3 4mg/kg體重治療組，4 8mg/kg體重治療組，5 16mg/kg 體重治療組，6空白對照組. 五具體實施例方式
本發(fā)明所述3， 3'-二吲哚甲烷應(yīng)用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療以及通過環(huán)糊精助溶 后，制得生理鹽水注射劑的制備。在具體實施過程中，使用的環(huán)糊精包括a-環(huán) 糊精，e-環(huán)糊精和Y-環(huán)糊精。 1. DIM應(yīng)用脾細(xì)胞懸液進(jìn)行活性篩選
將不同的DIM衍生物溶于二甲亞砜(DMSO)配置成1000X測試儲液。斷 頸處死ICR小鼠，在無菌條件下取出小鼠脾臟，用眼科剪剪碎脾臟，在八目網(wǎng) 篩中研碎脾臟碎片，用無菌生理鹽水反復(fù)沖洗，收集網(wǎng)篩濾過脾細(xì)胞懸液。將粗 制脾細(xì)胞懸液以1000轉(zhuǎn)/分轉(zhuǎn)速離心五分鐘，得粗制脾細(xì)胞沉淀。將粗制脾細(xì)胞 沉淀重新懸浮在生理鹽水中，用5倍體積的紅細(xì)胞裂解液裂解紅細(xì)胞10分鐘， 1000轉(zhuǎn)/分轉(zhuǎn)速離心五分鐘，然后將沉淀用1XPBS洗滌兩次，即得所需的脾細(xì) 胞，使用1640培養(yǎng)液(10%血清+雙抗)懸浮上述脾細(xì)胞，控制細(xì)胞密度為106 細(xì)胞/ml培養(yǎng)液。加入10-100 u g/ml上述DIM儲液，同時設(shè)置空白對照組加入 等量的DMSO，于37t:孵箱培養(yǎng)24小時，800-1200轉(zhuǎn)/分離心，收集上清液， 使用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定細(xì)胞懸液中IFN-gamma的濃度。具體結(jié)果 見圖l，可見3， 3-二吲哚甲垸衍生物均具有一定的免疫調(diào)節(jié)功能。圖l實例中 的測試衍生物有5,5'-二氯-二吲哚甲垸、5,5'-二氟-二吲哚甲垸、5，5'-二甲基-二吲 哚甲垸、5,5'-二丙基-二吲哚甲烷、5,5'-二戊基-二吲哚甲烷、5,5'-二乙氧基-二吲 哚甲烷、5，5'-二丁氧基-二吲哚甲烷、N，N'- 二甲基-二吲哚甲烷、N,N'-二丙基-二 吲哚甲烷、N,N'-二戊基-二吲哚甲垸、2,2'-二乙基-二吲哚甲烷、2,2'-二丁基-二吲 哚甲烷、2，2'-二羥基-二吲哚甲烷、2，4-二羥基-二吲哚甲烷、2，5-二羥基-二吲哚甲 烷、5，5'-二溴-二吲哚甲烷、全氟-3，3'-二吲哚甲垸、5，5'-二乙基-二吲哚甲烷、5，5'陽 二丁基-二吲哚甲垸、5,5'-二甲氧基-二吲哚甲垸、5,5'-二丙氧基-二吲哚甲烷、5,5'-二戊氧基-二吲哚甲垸、N,N'-二乙基-二吲哚甲烷、N,N'-二丁基-二吲哚甲垸、2,2'-二甲基-二吲哚甲垸、2,2'-二丙基-二吲哚甲烷、2，2'-二戊基-二吲哚甲垸、2-羥基 二吲哚甲垸、2,2'-二羥基-二吲哚甲烷、2,4'-二羥基-二吲哚甲烷，但具體測試實例不限于上述化合物。
2. 以a -環(huán)糊精為助溶劑的DIM生理鹽水注射劑的制備
稱取a-環(huán)糊精，配置濃度為200mg/ml的a-環(huán)糊精生理鹽水溶液。向a-環(huán) 糊精生理鹽水溶液加入DIM,使得MDIM/Ma., =l/3-10，攪拌過夜，并適當(dāng)加熱， 得到DIM的澄清透明溶液。雙蒸水透析，每天換水3次，透析三天。凍干，即得 a -環(huán)糊精為助溶劑的DIM注射劑的干粉劑，其中DIM含量為9.091 %-25.000% 。
3. 以e-環(huán)糊精為助溶劑的DIM生理鹽水注射劑的制備 稱取e-環(huán)糊精，配置濃度為200mg/ml的e-環(huán)糊精生理鹽水溶液。向P-環(huán)
糊精生理鹽水溶液加入DIM，使得MD麗Mp^鵬4/4-12，攪拌過夜，并適當(dāng)加熱， 得到DIM的澄清透明溶液。雙蒸水透析，每天換水3次，透析三天。凍干，即得 0 -環(huán)糊精為助溶劑的DIM注射劑的干粉劑，其中DIM含量為7.692%-20.000% 。
4. 以y-環(huán)糊精為助溶劑的DIM生理鹽水注射劑的制備
稱取y -環(huán)糊精，配置濃度為200mg/ml的P -環(huán)糊精生理鹽水溶液。向y -環(huán) 糊精生理鹽水溶液加入DIM，使得MDIM/MY4,ffi=l/3-15，攪拌過夜，并適當(dāng)加熱， 得到DIM的澄清透明溶液。雙蒸水透析，每天換水3次，透析三天。凍干，即 得y-環(huán)糊精為助溶劑的D頂注射劑的干粉劑，其中DIM含量為0.625%-25.000 % 。
5. DIM生理鹽水注射劑的藥效評估
稱取上述DIM注射劑的干粉劑，用生理鹽水配成DIM濃度為lmg/ml的生 理鹽水溶液。給予18—22克ICR小鼠按16mg/kg劑量腹腔給藥，分別于給藥后 12小時，24小時隨機(jī)選取若干小鼠，眼球取血，ELISA法測定血清IFN- y濃度。
如圖2所示，DIM給藥后，12小時血清IFN-Y濃度即開始升高，并在24小 時還在持續(xù)升高。而文獻(xiàn)報道一般的DIM只有口服給藥才能取得良好的效果， 腹腔或者靜脈給藥并不能明顯提高機(jī)體IFN-Y濃度，可見通過本法制得DIM注 射同樣有很好的提高機(jī)體IFN-"/濃度的效果。
6. DIM治療佐劑性關(guān)節(jié)炎的研究 按文獻(xiàn)報道方法建立大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎模型，即完全弗氏佐劑O.lml于SD
大鼠右足跖部皮下注務(wù)」'，2-3周后建成佐劑型關(guān)節(jié)炎模型。稱取上述DIM注射 劑的干粉劑，用生理鹽水配成DIM濃度為10mg/ml的生理鹽水溶液。建模成功后，將關(guān)節(jié)炎大鼠隨機(jī)分成5組，分別給予16mg/kg， 8 mg/kg， 4 mg/kg， 2 mg/kg， lmg/kg， 0mg/kg治療。每天給藥一次，并測量右足厚度，并作疾病嚴(yán)重程度評
分，評分標(biāo)準(zhǔn)為各關(guān)節(jié)病變按0 4共五級評分法0級無紅腫；1級關(guān)節(jié)稍紅 腫；2級關(guān)節(jié)輕度紅、腫、熱；3級關(guān)節(jié)中度紅、腫、熱、輕度功能障礙；4級 關(guān)節(jié)重度紅、腫、熱、嚴(yán)重功能障礙。關(guān)節(jié)炎分?jǐn)?shù)(AS)為每只鼠各關(guān)節(jié)病變 分?jǐn)?shù)的總和。并于治療后第7天和第14天，通過心臟取血，獲得大鼠血清，用 于炎癥因子的測定。其中，Omg/ml治療組實施過程實際使用環(huán)糊精生理鹽水溶 液作為對照。
如圖1和圖7所示，DIM能顯著控制關(guān)節(jié)炎的發(fā)病，并呈明顯的劑量依賴性。 IL-ie是在關(guān)節(jié)炎發(fā)病過程中的一個重要的炎癥因子，在關(guān)節(jié)炎發(fā)病過程能活化 多種炎癥細(xì)胞，造成嚴(yán)重的組織損傷。圖3是DIM治療一周后大鼠血清IL-ie 的ELISA結(jié)果，其中DIM治療組為16mg/kg劑量治療組。從圖中可見，經(jīng)DIM 治療，DIM治療組大鼠血清IL-1 e濃度顯著低于模型組。IL-8也是關(guān)節(jié)炎發(fā)病 過程中一種重要的炎癥因子，其主要作用是和血液中的多型核中性粒細(xì)胞結(jié)合， 促進(jìn)多型核中性粒細(xì)胞向關(guān)節(jié)部位趨化，造成關(guān)節(jié)損害。圖4是DIM治療兩周 后大鼠血清IL-8的ELISA結(jié)果，同圖3，其中DIM治療組為16mg/kg劑量治療 組。從圖中可見，經(jīng)DIM治療，DIM治療組大鼠血清IL-8濃度顯著低于模型組。 由此可見，DIM能夠提高血清中IFN-Y濃度，并有效降低血清中的炎癥因子如 IL-1P， IL-8等，從而有效控制關(guān)節(jié)炎的發(fā)展，減輕疾病損害 7. DIM用于干預(yù)治療佐劑性關(guān)節(jié)炎的研究
按文獻(xiàn)報道方法建立大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎模型，即完全弗氏佐劑0. lml于SD 大鼠右足跖部皮下注射。稱取上述DIM注射劑的干粉劑，用生理鹽水配成DIM 濃度為10mg/ml的生理鹽水溶液。并于建模當(dāng)日，將大鼠隨機(jī)分成2組，分別 給予16mg/kg, 0 mg/kg作干預(yù)治療研究。每天給藥一次，并測量右足厚度，并 作疾病嚴(yán)重程度評分，評分標(biāo)準(zhǔn)為同實例5。并于治療后第7天，通過心臟取血， 獲得大鼠血清，用于炎癥因子的測定。其中，Omg/ml治療組實施過程實際使用 環(huán)糊精生理鹽水溶液作為對照。
如圖6所示，經(jīng)DIM干預(yù)治療，關(guān)節(jié)炎癥狀明顯減輕，部分大鼠未能正常發(fā) 病，說明DIM不僅能有效治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，并能有效阻斷發(fā)病，即DIM能夠阻斷類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)生發(fā)展。TNF-ci作為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎發(fā)病過程中最 重要的炎癥因子之一，已經(jīng)被關(guān)注多年。如圖5所示，在干預(yù)治療研究中，DIM 治療組的血清TNF- a顯著低于模型組。
權(quán)利要求
1. 3，3′-二吲哚甲烷及其衍生物在制備治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎疾病藥物中的應(yīng)用。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述3， 3'-二吲哚甲垸及其衍生物的水溶液制劑，其特征是 應(yīng)用環(huán)糊精作為助溶劑，制備3， 3'-二吲哚甲烷及其衍生物的水溶液制劑。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述3，3'-二吲哚甲垸及其衍生物的水溶液制劑的制備方法， 其特征是由以下步驟構(gòu)成(1) 配置環(huán)糊精溶液，配置濃度為200mg/ml，將3， 3'-二吲哚甲烷用環(huán)糊 精溶液溶解，3， 3'-二吲哚甲烷與環(huán)糊精的質(zhì)量比為1/3-15，并攪拌過夜至澄 清透明溶液為止。(2) 在雙蒸水中透析凍干，即得3， 3'-二吲哚甲垸水溶液注射制劑的干粉制劑。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述3， 3'-二吲哚甲烷及其衍生物的水溶液制劑，其特征是 助溶劑環(huán)糊精為a -環(huán)糊精及其衍生物或e -環(huán)糊精及其衍生物或y -環(huán)糊精 及其衍生物。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述3， 3'-二吲哚甲烷及其衍生物的水溶液制劑，其特征是 a-環(huán)糊精及其衍生物為a-環(huán)糊精，或丁基-a-環(huán)糊精，或六-(2，3，6-三-0-乙酰 基)-a-環(huán)糊精，或六-(2,3，6-三-0-甲基)-a-環(huán)糊精，或(2-羥丙基)-a-環(huán)糊精， 或琥珀酰-a-環(huán)糊精，或六-(2，3,6-三-0-辛基)-a-環(huán)糊精，或六-(6-0-叔丁基-二 甲基硅烷)-a-環(huán)糊精；e-環(huán)糊精及其衍生物為(3-環(huán)糊精，或6-0-麥芽糖基-環(huán)糊精，或七-(2,3-二-0-乙酰基-6-0-磺基)-P-環(huán)糊精，或七-(3-0-乙酰基-2,6-二-O-甲基)-P-環(huán)糊精，或七-(2,3,6-三-0-苯甲酰基)-P-環(huán)糊精，或七-(2，3,6-三 -O-乙基)-p-環(huán)糊精，或七-(2,6-二-0-乙基)-p-環(huán)糊精，或p-環(huán)糊精聚合物，或 七-(2，3，6-三-0-苯甲酰基)-P-環(huán)糊精，或琥珀酰-(2-羥丙基)-P-環(huán)糊精，或三乙 ?；?P-環(huán)糊精，或(2,6-二-0-)乙基-p-環(huán)糊精，或(2-羧乙基)-p-環(huán)糊精，或(2-羥乙基)-(3-環(huán)糊精，或(2-羥丙基)-P-環(huán)糊精，或乙?；?(3-環(huán)糊精，或丁基-p-環(huán)糊精，或羧甲基-P-環(huán)糊精或七-(2,3，6-三-0-甲基)-li-環(huán)糊精，或七-(2,6-二-0-甲基)-(i-環(huán)糊精，或甲基-P-環(huán)糊精，或季銨化P-環(huán)糊精，或琥珀酰-p-環(huán)糊精， 或磺丙基-p-環(huán)糊精，或6-單脫氧-6-單氨基-卩-環(huán)糊精，或6-0-a-D-葡萄糖苷-卩-環(huán)糊精，或6-0-a-麥芽糖基-P-環(huán)糊精，或七-(2,3,6-三-0-乙基)-|3-環(huán)糊精，或硅烷基[(6-0-叔丁基-二甲基)-2，3,-二-0-乙?；?-p-環(huán)糊精；Y -環(huán)糊精及其衍 生物為Y-環(huán)糊精，或Y-環(huán)糊精聚合物，或八-(2,3,6-三0-甲基)-Y-環(huán)糊精，或 八-(2，6-二-0-戊垸基)卞環(huán)糊精，或八-(6-0-叔丁基二甲基硅烷基)個環(huán)糊精，或羥丙基-Y-環(huán)糊精，或丁基-Y-環(huán)糊精。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述以環(huán)糊精為助溶劑的3， 3'-二吲哚甲烷及其衍生物水溶 液制劑在制備治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，雌激素、雄激素依賴性腫瘤，腫瘤，病 毒感染，痤瘡疾病藥中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及二吲哚甲烷及其衍生物在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎疾病中的應(yīng)用以及二吲哚甲烷及其衍生物一種新的水溶液制劑的制備。二吲哚甲烷及其衍生物在體外和體內(nèi)都能有效提高干擾素-γ的水平，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫，從而阻斷疾病的發(fā)生發(fā)展，減輕疾病造成的損害。另外，本品水溶液制劑主要涉及中間媒介為環(huán)糊精。本品的水溶液制劑能夠有效提高水溶性，方便使用。本品水溶液制劑的使用不僅僅局限于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療的應(yīng)用，還包括在二吲哚甲烷及其衍生物在其他疾病治療過程中的應(yīng)用，如腫瘤的治療，雄激素，雌激素相關(guān)疾病等。
文檔編號A61P29/00GK101428016SQ20081024355
公開日2009年5月13日 申請日期2008年12月23日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月23日
發(fā)明者夏蘇華, 張峻峰, 磊 董, 陳江寧 申請人:南京大學(xué)