專利名稱：用于腫瘤淋巴靶向治療載體的功能化碳納米管的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬分子生物醫(yī)藥制造領(lǐng)域，涉及腫瘤淋巴靶向治療新載體，具體涉及一種 用于腫瘤淋巴治療的主動(dòng)靶向的新載體-功能化碳納米管及其制備方法。
技術(shù)背景腫瘤臨床研究顯示，多數(shù)上皮源性的惡性腫瘤早期即可發(fā)生淋巴道轉(zhuǎn)移，約60% 病人在初診時(shí)已有淋巴轉(zhuǎn)移，故防治腫瘤淋巴途徑轉(zhuǎn)移具有重要意義。淋巴道轉(zhuǎn)移與 淋巴管的特殊結(jié)構(gòu)有關(guān)。毛細(xì)淋巴管的管腔相對較大且不規(guī)則，管壁較薄，僅由單層 內(nèi)皮細(xì)胞和極薄的結(jié)締組織構(gòu)成，當(dāng)組織癌變時(shí)瘤細(xì)胞則黏附在內(nèi)皮外暴露的粘連蛋 白上而易于發(fā)生浸潤及轉(zhuǎn)移。淋巴化療(lymphatic chemo therapy)又稱淋巴結(jié)靶向化療(lymph node targeted chemotherapy).藥物性淋巴結(jié)清掃(medicinal lymph node dissection),是利用淋巴系統(tǒng) 具有吞噬人分子物質(zhì)和微粒的特性，將化療藥與載體共價(jià)結(jié)合、物理包裹或吸附，改 變藥物的藥代動(dòng)力學(xué)，保持化療藥物活性，構(gòu)成淋巴靶向給藥系統(tǒng)利用淋巴回流較慢 的特點(diǎn)，通過淋巴靶向給藥系統(tǒng)維持局部藥物濃度平衡的方式緩釋化療藥，使區(qū)域淋 巴結(jié)內(nèi)較長時(shí)間維持抗癌藥物濃度，從而有效殺傷淋巴系統(tǒng)內(nèi)的腫瘤細(xì)胞，還可重新 調(diào)整局部淋巴結(jié)內(nèi)的免疫活性，恢復(fù)淋巴細(xì)胞功能，消滅殘存的腫瘤細(xì)胞，減少腫瘤 經(jīng)淋巴途徑轉(zhuǎn)移。同時(shí)淋巴化療能控制藥物進(jìn)入血循環(huán)，降低化療副反應(yīng)的目的。消化道惡性腫瘤治療原則是以手術(shù)為主的綜合治療。術(shù)中盡管切斷淋巴管，切除 轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)，但腫瘤細(xì)胞遺漏到腹腔的可能仍然存在，可造成腫瘤復(fù)發(fā)。盡管新輔 助化療對降低術(shù)后復(fù)發(fā)具有重要意義，但由于血液流速是淋巴流速的200 500倍，故 靜脈化療、區(qū)域動(dòng)脈化療、局部植入化療使藥物在體內(nèi)分響:主要通過血一液轉(zhuǎn)運(yùn)，而局 部淋巴結(jié)中濃度極低。20世紀(jì)60年代起，有學(xué)者從淋巴管注射水溶劑型抗癌藥物治療 淋巴轉(zhuǎn)移灶，因淋巴管管壁薄而細(xì)小不易注射及藥物難以到達(dá)淋巴轉(zhuǎn)移灶，導(dǎo)致失敗。 70年代許多學(xué)者提出了利用藥物運(yùn)載系統(tǒng)將抗癌藥物連于親淋巴載體的新劑型AO， 此療法稱為"藥物淋巴清掃"。本世紀(jì)初研究提示最理想的給藥途徑應(yīng)為淋巴管灌注，使高濃度的化療藥物直接進(jìn)入淋巴系統(tǒng)，自接接觸殺傷經(jīng)淋巴轉(zhuǎn)移的癌細(xì)胞。本領(lǐng)域研究認(rèn)為，淋巴靶向給藥體系所選擇的藥物和結(jié)合物，應(yīng)具各以下幾點(diǎn)功 能(l)藥物易被包裹或偶聯(lián)，做成制劑后療效不降低；(2)藥物化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定；(3)具 有親淋巴性；(4)具有緩釋作用，釋放的藥物能在靶區(qū)提供治療所需濃度；(5)良好的生 物相容性，無抗原性，毒副反應(yīng)低；(6)局部刺激性小。理想的淋巴靶向體系還應(yīng)具有-(l)對腫瘤細(xì)胞特異靶向性，容易進(jìn)入腫瘤細(xì)胞內(nèi)；(2)兼可起到前哨淋巴結(jié)導(dǎo)航作用。 目前用于淋巴化療的藥物有絲裂霉素(MMC)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、甲氨蝶吟(MTX)、 環(huán)磷酰胺(CTX)、表柔比星(EDR)、博來霉素、順鉑等，還有造影劑、同位素顯影劑等。用于淋巴靶向的載體有話性炭、脂質(zhì)體、硅粒、多糖類、多膚類、單克隆抗體、 牛血清白蛋白(BSA)、 IgG及DNA，磁響應(yīng)物質(zhì)(Fe3CX0等。碳納米管(carbon nanotube, CNT)是日本科學(xué)家Iijima于1991年發(fā)現(xiàn)的，它是由 碳原子組成的石墨片巻成的無縫、中空的管體，是碳元素除金剛石和石墨外的第三種 穩(wěn)定存在的晶體結(jié)構(gòu)，其直徑為納米級(jí)，長度為納米至微米級(jí)。CNT有2種存在結(jié)構(gòu)， 即單壁碳納米管(Single -walled carbon nanotubes ， SWCNTs)和多壁碳納米管 (Multi-walled carbon nanotubes， MWCNTs)。由于CNT特殊的力學(xué)、電磁學(xué)和化學(xué)性能， 因而在物理、化學(xué)和材料科學(xué)中受到廣泛重視。但是在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，由于單純的碳 管不溶于任何溶劑，生物相容性差，沒有得到應(yīng)用。近年研究發(fā)現(xiàn)對碳管改性(將有 效化學(xué)基團(tuán)連于管壁)可顯著提高CNT的溶解度、穩(wěn)定性和生物相容性，使CNT在 生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的運(yùn)用成為可能。目前碳納米管在實(shí)驗(yàn)?zāi)[瘤學(xué)領(lǐng)域的研究未見公開報(bào)道， 不同理化特性的CNTs對腫瘤細(xì)胞的作用特點(diǎn)尚不知曉。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種用于腫瘤淋巴治療的主動(dòng)靶向的新載體，具體涉及一種 用于腫瘤淋巴靶向治療載體的功能化碳納米管。本發(fā)明功能化碳納米管能用于腫瘤淋 巴治療，提高抗腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移治療療效。本發(fā)明的另一目的是提供所述的功能化碳納米管的制備方法。本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)通過測定腫瘤的毛細(xì)淋巴管間隙和窗孔的大?。恢苽湎鄳?yīng)粒徑的功能化修飾碳納 米管；使用功能化碳納米管吸附特定的藥物，攜帶進(jìn)入腫瘤淋巴系統(tǒng)進(jìn)行釋放，達(dá)到殺傷腫瘤的有效濃度，實(shí)現(xiàn)實(shí)體腫瘤淋巴化療目的。碳納米管(carbonnanotube， CNT)是普通碳納米管在經(jīng)過偶氮二異丁腈(AIBN) 改性后，經(jīng)堿性條件制成的水溶性碳納米管，所述的功能化碳納米其粒徑與相應(yīng)腫瘤 毛細(xì)淋巴管間隙和窗孔的大小相應(yīng)，平均管長大于lPm，管徑在30 60nm之間，具備 特殊的淋巴趨向性。CNTs改性的方法有許多種，如酸氧化法、氟化法、氯化法等，修飾的部位主 要是在端口或側(cè)壁。改性后的CNTs對生物體毒性作用小，相容性好，無免疫原性，其 自身穩(wěn)定性強(qiáng)，具有獨(dú)特的管腔樣結(jié)構(gòu)和細(xì)胞穿透性，表面積大，吸附能力強(qiáng)，可以 與許多功能基團(tuán)相結(jié)合，如生物活性多肽、蛋白分子、DNA核酸和藥物等，具備理想 生物載體的潛質(zhì)。本發(fā)明通過下述步驟1. 利用透射或者掃描電鏡進(jìn)行觀察、檢測，進(jìn)而利用軟件測量、統(tǒng)計(jì)腫瘤毛細(xì)淋巴管 的裂隙、窗孔、破口的內(nèi)徑分布范圍；2. 應(yīng)用CVD方法制備與相應(yīng)腫瘤毛細(xì)淋巴管間隙和窗孔的大小相應(yīng)粒徑的多壁碳納 米管(MWNTs)，將多壁碳納米管與過氧化苯甲酰(BPO)及與偶氮二異丁腈(AIBN) 進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)生成AIBN改性的MWNTs，再在堿性條件下水解制備水溶性碳管；3. 在水域超聲器中將水溶性的、AIBN改性的MWNTs與化療藥物混合進(jìn)行物理吸附， 所述的化療藥物可選自5-氟尿嘧啶或吉西他賓；4. 通過體外B超、CT等輔助設(shè)備定位后進(jìn)行腫瘤穿刺，將已混合化療藥物且具特定 粒徑的MWNTs注入實(shí)體腫瘤內(nèi)，依托腫瘤自身的淋巴回流系統(tǒng)進(jìn)行藥物播散；攜 藥物MWNTs在外周淋巴管內(nèi)開始解附，并逐步達(dá)到殺傷腫瘤的有效濃度，起到淋 巴化療的作用。本發(fā)明經(jīng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，所述的功能化碳納米管吸附藥物后在淋巴系統(tǒng)及血漿內(nèi)解附， 解附能力良好，可攜帶藥物進(jìn)行淋巴化療，具有良好的淋巴趨向性，淋巴化療療效良 好。


圖l:胰腺癌毛細(xì)淋巴管通透性透射電鏡圖片，其中，l為血管內(nèi)皮細(xì)胞，2為基底膜，3為周細(xì)胞，疇為內(nèi)皮細(xì)胞間裂隙，》為 窗孔，標(biāo)尺為1微米；圖中可見內(nèi)皮細(xì)胞菲薄多孔，基底膜菲薄疏松，周細(xì)胞連接松散，裂隙明顯，窗孔多見，裂隙10-20納米，窗孔30-50納米。 圖2:多壁碳納米管透射電鏡圖片。 圖3:水溶性功能修飾后多壁碳納米管。 圖4:透射電鏡顯示碳納米管進(jìn)入Bx-PC3胰腺癌細(xì)胞內(nèi)。圖5:碳納米管對5-氟尿嘧啶吸附能力，顯示隨著給藥量的增加吸附量的變化關(guān)系。 圖6:碳納米管對吉西他賓吸附能力的測定，顯示隨著給藥量的增加吸附量的變化 關(guān)系。圖7:換液次數(shù)與累計(jì)釋放率之間的關(guān)系。 圖8:換液次數(shù)與累計(jì)釋放率之間的關(guān)系。圖9:水溶性功能化多壁碳納米管注入SD大鼠爪墊皮下效果圖。 圖10: 24小時(shí)后SD大鼠腦窩淋巴結(jié)解剖圖。圖ll:胭窩淋巴結(jié)病理切片，HE染色。 圖12:裸鼠胰腺癌淋巴道轉(zhuǎn)移模型。圖13:接種Bx-PC3胰腺癌細(xì)胞株5周后，LN內(nèi)可見腫瘤細(xì)胞。 圖14:碳納米管吸附吉西他濱局部皮下注射后，胭窩LN內(nèi)可見碳納米管以及壞死 的腫瘤細(xì)胞。圖15:功能化碳納米管淋巴化療療效評(píng)估試驗(yàn)結(jié)果。圖16:對照組凋亡示意圖。圖17:吉西他濱靜脈注射組凋亡示意圖。圖18:碳納米管-吉西他濱皮下注射組凋亡示意圖。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 測定腫瘤毛細(xì)淋巴管間隙和窗孔的大小1. 選取不同病理類型，本實(shí)施例以導(dǎo)管腺癌為例，選取不同病程胰腺癌病理標(biāo)本io例；2. 取樣固定每例標(biāo)本[A]腫瘤中心部位、[B]邊緣部位、[C]瘤旁組織、[D]正常胰 腺，各取5-8塊lmmi組織，固定液固定(4攝氏度)；3. 制片電鏡室包埋制作電鏡切片；4. 觀察記錄透射電鏡下觀察記錄胰腺腫瘤毛細(xì)淋巴管形態(tài)，血管內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)、厚度，內(nèi)皮細(xì)胞間隙、窗孔、破口等.拍攝不同放大倍數(shù)電鏡照片；5.觀察測量與統(tǒng)計(jì)采用Image pro plus 5.2圖像分析軟件分析測量電鏡照片，分析測量胰腺腫瘤毛細(xì)淋巴管形態(tài)，血管內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)、厚度，內(nèi)皮細(xì)胞間隙內(nèi)徑、窗孔內(nèi)徑、破口內(nèi)徑等。圖1顯示了 ABC三組各形成毛細(xì)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞列200條左右，內(nèi)皮細(xì)胞間隙測量300個(gè)以上，窗孔測量300個(gè)以上，破口20個(gè)以上，圖中可見內(nèi)皮細(xì)胞菲薄多孔，基底膜菲薄疏松，周細(xì)胞連接松散，裂隙明顯，窗孔多見，裂隙平均10-20nm，窗孔平均30-50nm。實(shí)施例2制備相應(yīng)粒徑的功能化修飾碳納米管 試劑與原料1. 多壁碳納米管(MWNTs):由CVD方法制備，購自深圳納米港。純度〉99%,平均管 長大于1 u m，管徑在30 60nm之間；2. 過氧化苯甲酰(BPO):化學(xué)純，北京金龍化學(xué)試劑有限公司，用氯仿重結(jié)晶3. 偶氮二異丁腈(AIBN):化學(xué)純，上海試四赫維化工有限公司BPO (AIBN)與MWNTs的溶液反應(yīng)典型反應(yīng)在100ml三頸瓶中加入20mg MWNTs和20ml甲苯，超聲5min，接通冷凝 水，通氮?dú)獍胄r(shí)，攪拌下升溫至90'C。另稱取一定量的BPO溶解于一定量的甲苯中， 除氧完畢后加入反應(yīng)體系，在9(TC反應(yīng)2小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，用甲苯洗去未反應(yīng)的BPO， 置入真空烘箱干燥過夜。最終產(chǎn)物為黑色固體。 反應(yīng)式如下(PhC00)2 Toluene 2Ph, + 2C02 卯。cn Ph'十MWNTs MWNTs-(Ph)n90oC同樣實(shí)驗(yàn)方法，將BPO換成AIBN進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)溫度降至75。C，最終得用AIBN改性 的碳管。反應(yīng)式如下CH3 CH3 CH3i i Toluene 'CH3— C — N =N — CCH3 -" 2 CH3— C+ N2I I 750C 1CN CN CNCH3 CH3I Toluene I CH3— C + MWNTs-> MWNTsi pCH3 )n1 750CCN CNAIBN改性的MWNTs在堿性條件下水解制備水溶性碳納米管反應(yīng)式如下CH3 CH3 KOH/ETOHMWNTs~e f>CH3 )n------ MWNTs"十「-CH3 )n1 850CCN COOH在100ml圓底燒瓶中，將0. 5g改性碳管(用naibn/nMWNTs-10改性的碳管)超聲 分散于50mlK0H的乙醇溶液，濃度為lmol/L，通冷凝水，攪拌下升溫至85并開始回流， 回流下反應(yīng)7小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，用乙醇洗去K0H，抽濾后得水解產(chǎn)物，置入真空烘箱 干燥過夜。同上述實(shí)驗(yàn)方法，將用naibn/nMWNTs=50改性的碳管進(jìn)行水解反應(yīng)。實(shí)施例3功能化碳納米管與抗腫瘤藥物吸附及解附能力的試驗(yàn) 1.碳納米管對5-氟尿嘧啶吸附能力的測定a) 分9個(gè)實(shí)驗(yàn)組，每個(gè)實(shí)驗(yàn)組6例樣本；b) 分別稱取5-氟尿嘧啶5mg、 10mg、 20mg、 30mg、 60mg、 90mg、 120 mg、 130mg、 140mg,將藥物放入試管中，加蒸餾水10ml，將試管置于水域超聲 器中5分鐘；c) 稱取碳納米管50mg/份，供54份；d) 待5-氟尿嘧啶藥物晶體完全溶解后，將稱取的50mg碳納米管加入試管中，蝸 旋l分鐘使之充分混勻后，將試管置于水域超聲器中，分別超聲震搖25分鐘， 試管超速離心，15000轉(zhuǎn)/分鐘，2(TC,離心30分鐘；e)取上清液分別進(jìn)行稀釋后，紫外分光光度計(jì)測定吸光度，計(jì)算上清液藥物濃度、游離藥物量及吸附量。表l是投藥量與吸附量數(shù)據(jù)。表l給藥量mg吸附量mg吸附百分率5.24. 50.86538461510. 17.90. 78217821820.413.50.66176470630.2 ，16. 050.53145695460. 524. 950.41239669489.927.910.310456062120.628.890.239552239130.629.40. 225114855140.529.90.2128113882.碳納米管對吉西他賓吸附能力的測定a) 分9個(gè)實(shí)驗(yàn)組，每個(gè)實(shí)驗(yàn)組6例樣本。b) 分另U稱取吉西他賓5mg、 10mg、 20mg、 30 mg、 60mg、 90 mg、 120 mg、 mg、 140mg、 150mg，將藥物放入試管中，加蒸餾水10ml，置于水域超聲器中5分 鐘。c) 其余步驟同5-氟尿嘧啶吸附能力的測定。表2是投藥量與吸附量數(shù)據(jù)。表2_給藥量mg_吸附量mg_吸附百分率5.1 4.8 0.94117647110.4 8.959 0.86144230830.6 18.15 0.59313725540.2 21.23 0.52810945360.8 23.27 0.38273026390.5 27.2 0.300552486120. 3 30.23 0.251288446140.6 31.4 0.223328592150.7 32.12 0.213138686結(jié)果表明1. 碳納米管對5-氟尿嘧啶吸附呈正相關(guān)關(guān)系，但隨著給藥量的不斷增大，其吸附量 逐漸達(dá)到飽和狀態(tài)。2. 碳納米管對吉西他賓吸附呈正相關(guān)關(guān)系，但隨著給藥量的不斷增大，其吸附量逐漸 達(dá)到飽和狀態(tài)。3. 吸附5-氟尿嘧啶的碳納米管解附能力的測定a) 實(shí)驗(yàn)分為6個(gè)實(shí)驗(yàn)組，每個(gè)實(shí)驗(yàn)組6例樣本；b) 稱取5-氟尿嘧啶30mg/份，共36份。將30 mg 5-氟尿嘧啶放入試管中，加蒸 餾水10ml，將試管置于水域超聲器中超聲5分鐘使藥物充分溶解；c) 稱取碳納米管50mg/份，共36份；d) 待5-氟尿嘧啶藥物晶體完全溶解后，將稱取的50mg碳納米管加入試管中，蝸 旋l分鐘使之充分混勻后，將試管置于水域超聲器中，分別超聲震搖25分鐘；e) 試管超速離心，15000轉(zhuǎn)/分鐘，20'C，離心30分鐘；f) 取上清液分別進(jìn)行稀釋后，紫外分光光度計(jì)測定吸光度，計(jì)算上清液藥物濃度、 游離藥物量(即本次解附量)、剩余吸附量，并計(jì)算本次解附百分比；g) 取上清液8.5ml，棄用，計(jì)算丟棄藥物量，剩余游離藥物量，剩余吸附藥物量。h) 試管中加入8.5ml蒸餾水，恢復(fù)原體積，蝸旋1分鐘使碳納米管與水充分混勻， 然后將試管重新置于水域超聲器中，分別超聲震搖25分鐘；i) 震搖后，試管超速離心，15000轉(zhuǎn)/分鐘，20°C，離心30分鐘；j)循環(huán)上述測定吸光度、換液、超聲震搖及離心等步驟，直到單次解附量小于 0.5mg為止。圖7顯示了換液次數(shù)與累計(jì)釋放率之間的關(guān)系，表明碳納米管吸附5-氟尿嘧啶后累 計(jì)釋放率與換液次數(shù)呈正相關(guān)關(guān)系，提示解附能力良好。4. 吸附吉西他賓的碳納米管解附能力的測定a) 實(shí)驗(yàn)分為6個(gè)實(shí)驗(yàn)組，每個(gè)實(shí)驗(yàn)組6例樣本；b) 稱取吉西他賓40mg/份，共36份，將40mg吉西他賓放入試管，加蒸餾水10ml， 將試管置于水域超聲器中超聲5分鐘使藥物充分溶解；c) 其余步驟同吸附5-氟尿嘧啶的碳納米管解附能力的測定。圖8顯示了換液次數(shù)與累計(jì)釋放率之間的關(guān)系，表明碳納米管吸附吉西他賓后累計(jì) 釋放率與換液次數(shù)呈正相關(guān)關(guān)系，提示解附能力良好。實(shí)施例4功能化碳納米管淋巴趨向性動(dòng)物試驗(yàn)a) 藥物水溶性功能化碳納米管，b) 動(dòng)物SD大鼠，5 6周齡，250g左右，c) 方法O.lml水溶性功能化碳納米管左足爪墊皮下注射，24h后解剖 結(jié)果顯示將水溶性功能化多壁碳納米管注入SD大鼠左足爪墊皮下，24小時(shí)后解剖SD大鼠左側(cè)胭窩淋巴結(jié)，可見部分淋巴結(jié)呈灰色，經(jīng)胭窩淋巴結(jié)病理切片證實(shí)碳納 米管存在于淋巴細(xì)胞內(nèi)，提示功能化碳納米管具有良好的淋巴趨向性。實(shí)施例5 建立胰腺癌淋巴道轉(zhuǎn)移動(dòng)物模型a) 藥物水溶性功能化碳納米管，b) 動(dòng)物SD大鼠，5 6周齡，250g左右，C)方法采用體內(nèi)連續(xù)接種法建立胰腺癌淋巴道轉(zhuǎn)移模型，d) O.lml水溶性功能化碳納米管左足爪墊皮下注射，24h后解剖。結(jié)果顯示裸鼠胰腺癌淋巴道轉(zhuǎn)移模型接種Bx-PC3胰腺癌細(xì)胞株5周后，淋巴結(jié) 內(nèi)可見腫瘤細(xì)胞，碳納米管吸附吉西他濱局部皮下注射后，胭窩淋巴結(jié)內(nèi)可見碳納米 管以及壞死的腫瘤細(xì)胞，提示水溶性功能化碳納米管攜帶藥物可進(jìn)行淋巴化療。實(shí)施例6功能化碳納米管淋巴化療療效評(píng)估試驗(yàn) 1.淋巴系統(tǒng)內(nèi)藥物濃度測定a) 藥物水溶性功能化碳納米管，b) 動(dòng)物SD大鼠，5 6周齡，250g左右，c) 方法采用HPLC法測定大鼠淋巴結(jié)和血漿內(nèi)吉西他濱的藥物濃度O.lml水溶性功能化碳納米管左足爪墊皮下注射，24h后解剖 注藥后分別于第l天、2天、至10天解剖大鼠，取淋巴結(jié)和靜脈血。 結(jié)果顯示能化碳納米管吸附藥物后在淋巴系統(tǒng)及血漿內(nèi)解附，其有效藥物濃度短 期內(nèi)高于對照組，功能化碳納米管淋巴化療療效良好。(見圖15) 2.淋巴系統(tǒng)內(nèi)腫瘤殺傷效果比較圖16-18分別顯示了對照組、吉西他濱靜脈注射組和碳納米管-吉西他濱皮下注射 組胭窩LN中腫瘤細(xì)胞不同的的凋亡情況，表明本發(fā)明碳納米管攜藥在淋巴系統(tǒng)內(nèi)殺傷腫瘤細(xì)胞效果明顯好。表3是三組胭窩LN中腫瘤細(xì)胞的凋亡率比較。表^_組別 凋亡率對照組 13.047±2.038吉西他濱靜注組 32.029±2.076碳納米管-吉西他濱皮下注射組 43.980±2.07權(quán)利要求
1. 用于腫瘤淋巴靶向治療載體的功能化碳納米管，其特征在于將普通碳納米管經(jīng)偶氮二異丁腈改性，在堿性條件下制成水溶性碳納米管，所述的功能化碳納米其粒徑與相應(yīng)腫瘤毛細(xì)淋巴管間隙和窗孔的大小相應(yīng)，平均管長大于1μm，管徑為30～60nm，具淋巴趨向性。
2、 權(quán)利要求1所述的用于腫瘤淋巴靶向治療載體的功能化碳納米管的制備 方法，其特征在于通過下述步驟1) 獲得腫瘤毛細(xì)淋巴管的裂隙、窗孔和破口的內(nèi)徑分布范圍； 利用透射或者掃描電鏡進(jìn)行觀察、檢測，進(jìn)而利用軟件測量、統(tǒng)計(jì)腫瘤毛細(xì)淋巴管的裂隙、窗孔、破口的內(nèi)徑分布范圍；2) 制備與相應(yīng)腫瘤毛細(xì)淋巴管間隙和窗孔的大小相應(yīng)粒徑的多壁碳納米管，將多壁碳納米管與過氧化苯甲酰及與偶氮二異丁腈反應(yīng)生成改性的多壁碳納米管后，在堿性條件下水解制成水溶性碳管；3) 在水域超聲器中將步驟2)的水溶性的、改性的多壁碳納米管與化療藥 物混合進(jìn)行物理吸附，制成具特定粒徑的多壁碳納米管。
3、 按權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于所述的步驟2的多壁碳納米 管與過氧化苯甲酰及與偶氮二異丁腈反應(yīng)生成改性的多壁碳納米管， 其反應(yīng)式是-<formula>formula see original document page 2</formula>及反應(yīng)式是<formula>formula see original document page 2</formula>i Toluene 1<formula>formula see original document page 3</formula>所述的在堿性條件下水解制備水溶性碳納米管，反應(yīng)式是<formula>formula see original document page 3</formula>
4、 按權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于所述的步驟3的化療藥物選 自5-氟尿嘧啶或吉西他賓。
5、 按權(quán)利要求1所述的用于腫瘤淋巴靶向治療載體的功能化碳納米管，其 特征在于所述的腫瘤是實(shí)體腫瘤。
全文摘要
本發(fā)明屬分子生物醫(yī)藥制造領(lǐng)域，涉及腫瘤淋巴靶向治療新載體，具體涉及一種用于腫瘤淋巴治療的主動(dòng)靶向的新載體-功能化碳納米管及其制備方法。本發(fā)明通過測定腫瘤的毛細(xì)淋巴管間隙和窗孔的大小，制備相應(yīng)粒徑的功能化修飾碳納米管，吸附特定的藥物，攜帶進(jìn)入腫瘤淋巴系統(tǒng)進(jìn)行釋放，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，所述的功能化碳納米管吸附藥物后在淋巴系統(tǒng)及血漿內(nèi)解附能力良好，具有良好的淋巴趨向性，達(dá)到殺傷腫瘤的有效濃度，淋巴化療療效良好。
文檔編號(hào)A61P35/00GK101239187SQ200710037418
公開日2008年8月13日 申請日期2007年2月9日 優(yōu)先權(quán)日2007年2月9日
發(fā)明者傅德良, 驥 李, 忱 金, 江 龍 申請人:復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院